Made available in DSpace on 2014-08-20T14:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_luciane_soares_ribeiro.pdf: 649496 bytes, checksum: 2b9568824b4ab41d46496a2499f734b5 (MD5) Previous issue date: 2012-12-21 / Currently, the use of alternative products in disease control is a promising field mainly when associated with low cost technologies. This work comprises experiments designed to evaluate the reaction of common bean (Phaseolus vulgaris L.) seedlings under Biochemical Oxygen Demand (BOD) incubator conditions and the reaction of adult plants under field conditions to anthracnose (Colletotrichum lindemuthianum), when subjected to fermentation products treatment. At BOD were tested the effects of the fermented products vinegar, white wine and beer in concentrations of 0, 0.1, 1 and 10%, using the cultivars Carioca and BR-1 Ipagro Macanudo, according to the methodology described for the use of BOD incubator for anthracnose research. Fermented products were evaluated as anthracnose resistance inductors in seeds and seedlings, as well as a curative treatment for seedlings. Results obtained from BOD, revealed that only vinegar showed a linear significant response for concentrations tested and only for the experiment of induced resistance in seedlings. For field experiments, which followed those conducted under BOD conditions, it has been used five research-derived genotypes (TB 02-02, BRS Expedito, TB 98-20, BR IPAGRO 1 - Macanudo and TB 02-21) and five landrace genotypes (Guabiju, TB 02-26, 02-23, TB 02-25 and Amarelinho Iolanda) at the same vinegar concentrations for the BOD experiment, verifying the action of vinegar as anthracnose resistance induction agent. Regarding the field experiment, there were no interactions between vinegar and bean genotypes. There was no effect of inoculation with anthracnose, resulting in a similarity of response between control and inoculated plots. Significant vinegar concentration effects for number of plants per plot and grain yield were detected, with a cubic response, being negative the effects on grain yield. The observed trend for low anthracnose incidence on leaves and pods displayed by more susceptible genotypes when treated with vinegar at the higher concentration, may suggest that the vinegar treatment for susceptible cultivars under high anthracnose incidence might display more pronounced effects. The genotypes showed significant differences for all variables suggested by their distinct phenotypic characteristics, the availability of different market alternatives to farmers producing beans. / Atualmente, a utilização de produtos alternativos no controle de doenças é um campo promissor que vem sendo utilizado, principalmente quando associada a tecnologias de baixo custo. O presente trabalho compreende experimentos de avaliação da reação à antracnose (Colletotrichum lindemuthianum) de plântulas de feijão (Phaseolus vulgaris) sob condições de estufas incubadoras tipo BOD com fotoperíodo (BOD) e de plantas adultas em campo, objetivando o estudo da eficiência de produtos fermentados no controle desta doença. Em BOD foram testadas concentrações de 0; 0,1; 1 e 10% dos produtos vinagre, vinho e cerveja branca, utilizando as cultivares Carioca e BR-Ipagro 1 Macanudo, conforme metodologia para estufas incubadoras tipo BOD com fotoperíodo (BOD). Foi verificada a ação dos produtos como agentes indutores de resistência em sementes e em plântulas, e também como tratamento curativo em plântulas. Resultados obtidos em câmara BOD, revelaram que apenas vinagre apresentou resposta significativa linear para as concentrações testadas e apenas no experimento de indução de resistência em plântulas. No experimento em campo, que se seguiu àqueles conduzidos em BOD, foram utilizados cinco genótipos desenvolvidos em centros de pesquisa (TB 02-02, BRS Expedito, TB 98-20, BR IPAGRO 1 Macanudo e TB 02-21) e cinco genótipos de origem crioula (Guabiju, TB 02-26, TB 02-23, TB 02-25 e Amarelinho Iolanda) submetidos às mesmas concentrações do experimento em BOD verificando-se a ação do vinagre, que foi o produto fermentado que apresentou melhor desempenho nos testes em BOD, como agente indutor de resistência à antracnose. Em relação ao experimento de campo, não foram detectadas interações entre vinagre e genótipos de feijão. Não houve efeito da inoculação com antracnose, resultando em similaridade de resposta entre parcelas inoculadas e não inoculadas. Foi detectado efeito significativo das diferentes concentrações de vinagre sobre o número de plantas da parcela e sobre a produtividade de grãos, encontrando-se uma equação cúbica na explicação destes efeitos, sendo que a aplicação de vinagre apresentou efeitos negativos sobre a produtividade do feijão. A tendência de uma menor incidência de antracnose na folha e na vagem em genótipos mais suscetíveis para o tratamento com vinagre na sua maior concentração, pode sugerir que a ação do vinagre em cultivares suscetíveis sob condições de alta incidência de antracnose possa apresentar efeitos positivos mais pronunciados. Os genótipos apresentaram diferenças estatisticamente significativas para todas as variáveis sugerindo, pela suas distintas características fenotípicas, a disponibilidade de diferentes alternativas de mercado aos agricultores produtores de feijão.

Orientador: Sandra Helena Unêda-Trevisoli / Coorientador: Ignácio José de Godoy / Coorientador: Marcos Doniseti Michelotto / Banca: Ivana Marino Bárbaro Torneli / Banca: Gustavo Vitti Môro / Resumo: O amendoim (Arachis hypogaea L.) é uma cultura oleaginosa de grande importância para o agronegócio brasileiro. Um dos principais fatores que afetam sua produção é a incidência de pragas, com destaque para o tripes-do-prateamento, Enneothrips flavens, Moulton, 1941 (Thysanoptera: Thripidae). Têm-se sugerido que genes que condicionam a resistência genética a esta praga, podem ser encontrados em outras espécies do gênero Arachis L. Entretanto, a utilização de espécies silvestres no melhoramento, torna-se dificultada por barreiras de esterilidade, sendo a maioria devido às diferenças de constituição do genoma e de ploidia. Para contornar essa incompatibilidade, sugeriu-se a obtenção de anfidiploides, resultantes do cruzamento de espécies diploides, seguido da duplicação de seus cromossomos, para então cruzá-los com o amendoim cultivado. Mediante o exposto, este trabalho teve como objetivos estudar o potencial de resistência ao tripes-do-prateamento em populações segregantes iniciais do cruzamento envolvendo a cultivar comercial IAC 503 e o anfidiploide sintético (A. magna x A. cardenasii)4x, monitorar os caracteres indicadores de proximidade agronômica dos segregantes interespecíficos com genótipos da espécie cultivada, bem como a seleção de genótipos superiores por meio de análises uni e multivariadas. Os experimentos foram conduzidos no esquema de blocos aumentados de Federer com testemunhas intercalares em duas gerações: F3, conduzida no ano agrícola de 2013/14 e F4, conduzida... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The peanut (Arachis hypogaea L.) is an oilseed crop of great importance for Brazilian agribusiness. One of the main factors affecting its production is pests incidence, mainly thrips, Enneothrips flavens, Moulton, 1941 (Thysanoptera: Thripidae). There have suggested that genetic resistance to this pest can be found in other species of the genus Arachis L. However, the use of wild species in breeding was hampered by sterility barriers, mostly due to differences in the genome constitution and ploidy. To work around this incompatibility, it was suggested obtaining amphidiploid, resulting from the crossing of diploid species, followed by duplication its chromosomes, and then cross them with cultivated peanut. Through the above, this study aimed to study the potential for resistance to thrips in early segregating populations crossing involving commercial cultivar IAC 503 and synthetic amphidiploid (A. magna x A. cardenasii) 4x, monitor the agronomic traits proximity indicators of interspecific segregating with cultivated species, as well as the selection of superior genotypes using univariate and multivariate analyses. The experiments were conducted on the Federer augmented blocks with additional checks in two generations: F3, conducted in the agricultural year of 2013/14 and F4, conducted in 2014/15, under natural insect infestation. The thrips resistance was evaluated by its infestation, and the symptoms of injuries caused by insects. It was also evaluated, some production compo... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniele Tasior.pdf: 2815536 bytes, checksum: dc7cea7fc9b3fc00f6be08c2ce7825cd (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study aimed to characterize the resistance of F2:3 progenies of maize inoculated with Colletotrichum graminicola, genetic parameters and map genomic regions associated with quantitative resistance alleles to anthracnose stalk in tropical maize determining the effects of each locus on resistance/susceptibility C. graminicola. Individuals of the F2 generation were selfed to generate F2:3 progenies, which were evaluated phenotypically for resistance to anthracnose stalk in three experiments. The treatments were consisted of 121 F2:3progenies, parental lines (L04-2 and L99-4) and the F1 generation, which were used as control. The experimental plots were arranged in a randomized block design with three replications. Each plot consisted in one row of 3 m in length with rows spaced 0.90 m apart, with a total of 15 plants per plot. The plants were inoculated in the anthesis stage by injecting 1 mL of spore suspension into the first or second elongated internode above ground. The data was collected 30 days after inoculation by evaluating the internal lesion length (CINT), external lesion length (CEXT) in cm and the number of discolored internodes (INT). From the phenotypic evaluations of 121 F2:3 progenies genetic parameters were associated with resistance to all three forms of assessment (CINT, INT and CEXT) in each experiment. The association of microsatellites and AFLP markers to resistance alleles was performed using multiple regression. AFLP and SSR loci used to form the construction of the linkage map by MAPMAKER version 3.0. Detection of the QRL was performed by composite interval mapping method using QTLCartographer program. The experimental results showed the existence of high genetic variability among the F2:3 progenies for resistance/susceptibility to C. graminicola. The forms of assessment of anthracnose stalk (CINT, INT and CEXT) were equally effective in discriminating susceptible from resistant individuals. The high broad-sense heritability confirms the great contribution of genetic variance for resistance, which ensures genetic gain for artificial selection in this pathosystem. The AFLP marker E55534 individually explained the greatest proportion of the phenotypic variation for the internal length (- 28.43%), external lesion length (- 27.70%) and the number of discolored internodes (- 27.45%) in F2:3 progenies of maize. The composite interval mapping identified 31 QRLs to anthracnose stalk segregating in the mapping population, which were mapped across the 10 linkage groups. This is the first report of the QRL to anthracnose stalk mapped on chromosomes 2, 3 and 10. At large number of mapped QRL is suggested that the inheritance of resistance in this tropical germplasm is more complex, conditioned by a large number of genes, some large phenotypic effects and the vast majority with small effects for resistance in this pathosystem. / O trabalho objetivou caracterizar a resistência de progênies F2:3 de milho inoculados com Colletotrichum graminicola, estimar os parâmetros genéticos e mapear regiões genômicas associados à alelos de resistência quantitativa à antracnose do colmo em milho tropical determinando os efeitos de cada loco sobre a resistência/suscetibilidade a C. graminicola. Os indivíduos da geração F2 foram autofecundados para gerar as progênies F2:3, as quais foram avaliadas fenotipicamente para resistência à antracnose do colmo em três experimentos de campo. Os tratamentos foram constituídos de 121 progênies F2:3, linhagens parentais (L04-2 e L99-4) e da geração F1, os quais foram utilizados como tratamentos controle. O delineamento experimental foi o de blocos aleatorizados, com três repetições. Cada parcela foi constituída de 3 m de comprimento e 0,90 m na entrelinha, com aproximadamente 15 plantas por parcela. As plantas dos experimentos foram inoculadas no estádio de florescimento pleno da cultura, através da injeção de 1mL da suspensão de esporos, no meio do primeiro ou segundo internódio visível acima do solo. A avaliação dos sintomas foi realizado 30 dias após a inoculação, através da avaliação do comprimento interno de lesão (CINT), comprimento externo de lesão (CEXT) em cm e do número de internódios descoloridos (INT). A partir das avaliações fenotípicas das 121 progênies F2:3 foram estimados os parâmetros genéticos associados a resistência para as três características avaliadas (CINT, CEXT e INT) em cada experimento. A associação dos marcadores microssatélites e AFLPs a alelos de resistência foi realizada através da regressão linear múltipla. Locos SSR e AFLPs foram utilizados na construção do mapa de ligação através do MAPMAKER versão 3.0. A detecção dos QRLs foi realizada pelo método de mapeamento por intervalo composto utilizando o programa QTLCartographer. Os resultados experimentais evidenciaram existência de grande variabilidade genética entre as progênies F2:3 de milho para resistência/suscetibilidade à C. graminicola. As formas de avaliação da antracnose do colmo (CINT, CEXT e INT), foram igualmente eficientes em discriminar os indivíduos resistentes dos suscetíveis. Os elevados coeficientes de herdabilidade no sentido amplo confirmam a grande contribuição da variância genética para resistência, o que assegura ganhos genéticos com a seleção artificial neste patossistema. A regressão linear múltipla possibilitou identificar marcadores microssatélites e AFLPs altamente associados a alelos de resistência à C. graminicola. O marcador AFLP E55534 explicou individualmente a maior proporção da variação fenotípica para o comprimento interno (- 28,43%), comprimento externo de lesão (- 27,70%) e para o número de internódios descoloridos (- 27,45%) nas progênies F2:3 de milho. O mapeamento por intervalo composto identificou 31 QRLs à antracnose do colmo segregando na população de mapeamento, os quais foram mapeados entre os 10 grupos de ligação. Este é o primeiro relato de QRLs à antracnose do colmo mapeados nos cromossomos 2, 3 e 10. Pelo grande número de QRLs mapeados sugere-se que a herança da resistência neste germoplasma tropical seja mais complexa, condicionada por um grande número de genes, sendo alguns de grande efeito fenotípico e a grande maioria com pequenos efeitos para a resistência neste patossistema.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2268550 bytes, checksum: 5f78468c909c59e53cbe333b98286750 (MD5) Previous issue date: 2006-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Varias espécies de cigarrinha-das-pastagens (Hemiptera: Cercopidae) são pragas de importância nas pastagens do Brasil. Elas têm o potencial de ocasionar grandes perdas em milhões de hectares de pastagens melhoradas de Braquiária. Em culturas de baixo valor econômico como as pastagens, é necessário desenvolver métodos de controle de baixo custo, como a resistência de plantas a insetos. A introdução de germoplasma de Brachiaria pelo CIAT, tem estimulado a avaliação de genótipos com resistência a esta praga. Neste trabalho, conduzido no CTZM da EPAMIG, Viçosa-MG, avaliou-se o comportamento de 17 genótipos de Brachiaria ao ataque de ninfas de três das principais espécies de cigarrinha presentes no Brasil: Notozulia entreriana (Berg), Deois schach (Fabricius) y Deois flavopicta (Stal). Os experimentos conduziram-se em casa de vegetação (23.2o C; 71% RH). A resposta dos genótipos estúdio-se mediante a técnica de avaliação de resistência de Brachiaria às cigarrinhas, desenvolvida pelo programa de melhoramento genético do CIAT. Dois genótipos de resposta contrastante ao ataque das cigarrinhas usaram-se para comparar os níveis de resistência: BRA001058 (testemunha suscetível) e BRA000591 (testemunha resistente). De maneira complementaria, realizaram-se estúdios para caracterizar a antibiose e a tolerância como mecanismos de resistência no aceso de B. brizantha BRA004308, recentemente lançado como cv. Xaraés. Encontraram-se diferentes níveis de dano e sobrevivencia de ninfas nos genótipos de Brachiaria, sugerindo a expressão de antibiosis e/ou de tolerância como mecanismos de resistência às ninfas das cigarrinhas. O aceso BRA004308 mostrou alta antibioses a D. schach, antibioses moderada a D. flavopicta e tolerância a N. entreriana. Encontrou-se que os mecanismos e níveis de resistência em genótipos de Brachiaria podem de variar dependendo da espécie de cigarrinha. Para identificar genótipos superiores com resistência múltipla, é necessário conduzir ciclos de seleção baseadas na reação simultânea a varias espécies de cigarrinha. / Varias especies del salivazo de los pastos (Hemiptera: Cercopidae) son plagas de importancia económica en pasturas en el Brasil. Tienen el potencial de causar grandes pérdidas en millones de hectáreas de pasturas mejoradas de Braquiária. En cultivos de bajo valor económico como las pasturas, es necesario desarrollar medidas de control de bajo costo, como la resistencia de plantas a insectos. La introducción de germoplasma de Brachiaria por el CIAT, ha estimulado la búsqueda de genotipos resistentes a esta plaga. En este trabajo, conducido en el CTZM de EPAMIG, Viçosa-MG, se evaluó el comportamiento de 17 genotipos de Brachiaria frente a tres de las especies de salivazo de mayor importancia en el Brasil: Notozulia entreriana (Berg), Deois schach (Fabricius) y Deois flavopicta (Stal). Los experimentos se conducieron en invernadero (23.2o C; 71% RH). La respuesta de los genotipos se estudió mediante la técnica de evaluación de resistencia de Brachiaria al salivazo desarrollada en el programa de mejoramiento genético del CIAT. Dos genotipos de respuesta contrastante al ataque del salivazo, fueron usados para comparar los niveles de resistencia: BRA001058 (testigo susceptible) y BRA000591 (testigo resistente). Se realizaron además estudios para caracterizar la antibiosis y tolerancia como mecanismo de resistencia en la accesión BRA004308, recientemente liberada como cv. Xaraés. Diferentes niveles de daño y sobrevivencia de ninfas se encontraron en los genotipos de Brachiaria, sugiriendo la expresión de antibiosis y/o de tolerancia como mecanismos de resistencia a las ninfas de salivazo. La accesión BRA004308 mostró alta antibiosis a D. schach, antibiosis moderada a D. flavopicta y tolerancia a N. entreriana. Se encontró que los mecanismos y niveles de resistencia en genotipos de Brachiaria pueden variar dependiendo de la especie de salivazo evaluada. Para identificar genotipos superiores con resistencia antibiótica múltiple, es necesario conducir ciclos de selección basados en la reacción simultánea a varias especies de salivazo.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-18T13:09:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 540926 bytes, checksum: 35b46faeddd9262f0eafa5a9b415af69 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T13:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 540926 bytes, checksum: 35b46faeddd9262f0eafa5a9b415af69 (MD5) Previous issue date: 2005-02-03 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As interações entre plantas, herbívoros e inimigos naturais são complexas, mas um entendimento apropriado destas interações é importante para as dinâmicas das populações e ecossistemas. Diversas famílias de plantas apresentam adaptações morfológicas e químicas contra o ataque de herbívoros. Estas adaptações são constitutivas, ou podem ser induzidas após a alimentação dos herbívoros, e ambas podem ser diretas (tendo um efeito negativo na oviposição, crescimento ou sobrevivência de herbívoros) ou indiretas (tendo um efeito negativo nos herbívoros pelo efeito positivo nos inimigos naturais dos herbívoros). Tais defesas podem ainda ser induzidas pela aplicação de compostos químicos envolvidos na via bioquímica de defesa. Um tipo de defesa morfológica contra a herbivoria é a presença de domácias (pequenas cavidades ou tufos de pelos) no lado inferior das folhas. Estas estruturas promovem a presença de ácaros predadores e fungívoros e conseqüentemente reduzem a densidade de fungos patogênicos e herbívoros nas plantas e desta forma levando a redução dos danos à mesma. Ainda não se sabe se domácias somente são formadas constitutivamente ou se elas podem também ser induzidas. O objetivo deste trabalho foi verificar a possibilidade de indução de domácias e os efeitos desta indução sobre herbívoros. O sistema usado consistiu de plantas de café (Coffea arabica) e os ácaros fitófagos Oligonychus ilicis, uma importante praga de cafeeiros. Primeiro, as plantas de café foram infestadas durante um curto período com diferentes densidades de ácaros. Depois da indução da defesa prévia da planta, avaliou-se o efeito da infestação prévia na oviposição e sobrevivência de O. ilicis (efeito induzido direto) e na produção de domácias das plantas (efeito induzido indireto). No experimento seguinte, foi usado ácido jasmônico, um composto conhecido da via bioquímica de defesa das plantas, na tentativa de indução das domácias de folhas. Novamente, a indução de defesa direta e indireta das plantas foi verificada pela oviposição e sobrevivência de O. ilicis e pela produção de domácias em plantas induzidas e não induzidas. A indução das plantas com O. ilicis resultou em uma menor oviposição e sobrevivência de O. ilicis, mas não aumentou a produção das domácias. Ao contrário, a indução com 1,0 mg de ácido jasmônico por planta, não afetou a oviposição e sobrevivência dos ácaros fitófagos, mas resultou no aumento do número de domácias em folhas emitidas posteriormente. A aplicação de 0,5 mg de ácido jasmônico por planta não afetou os ácaros e nem a produção de domácias. Isto sugere que a aplicação de ácido jasmônico e a infestação de O. ilicis induz mecanismos diferentes de defesa e esta é a primeira demonstração da indução de domácias. Mais pesquisas são necessárias para elucidar a via bioquímica de ambos os mecanismos de defesa e para quantificar os custos e benefícios de defesa induzida em plantas. / The interactions among plants, herbivores and natural enemies are complex, but a proper understanding of these interactions is important for dynamics of populations and ecosystem. Several plant families show morphological and chemical adaptations to herbivore attacks. These adaptations are either constitutive, or can be induced by herbivore feeding, and are either direct (i.e. having a negative effect on oviposition, growht or survival of herbivores) or indirect (i.e. having a negative effect on herbivores through a positive effect on the natural enemies of the herbivores). It has been shown that such defence can also be induced by application of chemical precursors of the biosynthetic pathways of induced defence. One type of morphological defence against herbivory is the presence of domatia (small cavities or tufts of hair) on the underside of plant leaves. Such domatia promote the presence of fungivorous and predatory mites, that subsequently reduce densities of plant pathogenic fungi and herbivores on the plant, thus leading to a reduction of plant damage. It is as yet unknown whether such domatia are only formed constitutively, or whether they can be induced. The aim of this thesis is to verify the possibility of induction of domatia, as well as the effect of domatia on herbivores. The system used consisted of coffee plants, and the phytophagous mite species Oligonychus ilicis, an important pest of coffee. First, coffee plants were infested for a short period with various numbers of phytophagous mites, where after the induction of defence was verified by measuring the effect of previous infestation on oviposition and survival of O. ilicis (induced direct effect) as well as the effect of previous infestation on the number of domatia on the plants (induced indirect effect). In a subsequent experiment, the induction of plants using Jasmonic Acid, a known precursor of the defence pathway of plants, was attempted. Again, the induction of direct and indirect defence of plants was verified by quantifying oviposition and survival of O. ilicis as well as the production of domatia on induced and uninduced plants. Induction of plants with O. ilicis resulted in lower survival and oviposition of O. ilicis, but not in production of more domatia. To the contrary, induction with 1.0 mg Jasmonic Acid per plant did not affect oviposition and survival of the phytophagous mite, but resulted in an increase of the numbers of domatia on newly formed leaves. Application of 0.5 mg of Jasmonic Acid did not affect the mites or the number of domatia. This suggests that Jasmonic Acid and by O. ilicis induce different defence mechanisms, and is the first demonstration of the induction of the production of domatia. Further research is needed to elucidate the biochemical pathways of both defence mechanisms as well as to quantify the costs and benefits of induced defence in plants.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-20T16:55:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 232626 bytes, checksum: 3d71a89873b7240693ecafd0c807a8fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T16:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 232626 bytes, checksum: 3d71a89873b7240693ecafd0c807a8fd (MD5) Previous issue date: 2002-06-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Cento e dezessete actinomicetos, sendo 96 obtidos de diferentes amostras de rizosfera e rizoplano de tomateiro e 21 culturas pré-selecionadas por Moura (1996), pela ação contra Ralstonia solanacearum, foram avaliados no controle biológico de Pseudomona syringae pv. tomato e Alternaria solani através microbiolização de sementes de tomateiro (Santa Cruz 'Kada'), seguindo-se o plantio em solo não-tratado e inoculação como os patógenos. A seleção massal, realizada em casa de vegetação, permitiu selecionar, pela contagem do número de lesões, o antagonista mais promissor (RD-01). Paralelamente, foram conduzidos teste de colonização de raízes de tomateiro em tubos contendo ágar- água, não inclinados, e testes de antibiose com os 117 antagonistas contra os patógenos Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria e Alternaria solani, pelo método da sobre-camada. Cerca de 88% dos antagonistas não tiveram nenhum efeito inibitório contra os patógenos testados apesar de 70% destes terem sido capazes de colonizar raízes em condições gnotobióticas. Em testes para o controle de Corynespora cassiicola, Stemphylium solani, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria e Ralstonia solanacearum em casa de vegetação, o isolado RD-01 demonstrou incapacidade em reduzir sintomas incitados pelo patógeno de solo, Ralstonia solanacearum, mas apresentou potencial como agente de biocontrole dos patógenos foliares. Através de um ensaio de promoção de crescimento, realizado em casa de vegetação com os cento e dezessete isolados, pode-se concluir a inexistência de uma relação entre o efeito de promoção de crescimento vegetal para os isolados testados com os resultados de biocontrole observados em experimento anterior. Em experimento de campo para o controle de Phytophthora infestans e Alternaria solani, dois actinomicetos pré-selecionados (RD-01 e SON-17) foram aplicados através da microbiolização de sementes de tomateiro e pela colonização do filoplano, respectivamente. Apesar de o controle químico ter sido mais efetivo que os actinomicetos, estes revelaram sua potencialidade como medida passível de utilização em procedimentos de manejo integrado, a qual precisa ser mais explorada. / One hundred and seventeen actinomycetes were used in the microbiolization of tomato seeds, followed by the sowing in non-treated soil. From these, 96 were isolated from samples of tomato rizosfere, and 21 cultures had been pre-selected by Moura (1996) for their action against Ralstonia solanacearum. At the same time, root colonization tests with tomato grown in test tubes containing water-agar and antibioses tests were conducted with the antagonists against the pathogens Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria and Alternaria solani. Nearly 88% of the antagonits had no inhibitory effect against the tested pathogens despite 70% of these had been able to colonize the roots in gnotobiotic conditions. Mass selection, to control P. s. pv. tomato and A. solani, allowed the selection of the most promising antagonist (RD-01), though the reduction of the number of lesions. In a greenhouse test for the control of Corynespora cassiicola, Stemphylium solani, X. c. pv. vesicatoria e R. solanacearum, the isolate RD-01 was unable to reduce symptoms incited by the soilborne pathogen, R. solanacearum, but presented potential as biocontrol agent of the foliar pathogens. A greenhouse essay was conducted to evaluate the plant-growth promotion by the 117 rhizobacteria, and no correlation could be observed between the effect of growth promotion and the biocontrol effect observed in a previous experiment. In a field experiment to control Phytophthora infestans and A. solani, two pre- selected actinomyces (RD-01 e SON-17) were applied through tomato seed microbiolization and phylloplan colonization, respectively. Even though the chemical control was more effective than the actinomycetes, these showed their potential of use in integrated disease management, which needs to be more explored. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-09T11:58:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1604827 bytes, checksum: df8ba7a8a56ddaa2ff7ce5bb4491e896 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T11:58:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1604827 bytes, checksum: df8ba7a8a56ddaa2ff7ce5bb4491e896 (MD5) Previous issue date: 2003-10-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A caracterização e a avaliação dos acessos de abóbora conservados nos Bancos de Germoplasma devem ser prioritárias na estratégia de manejo dos recursos genéticos, pois proporcionam melhor conhecimento do germoplasma disponível, essencial para seu uso em etapas subseqüentes. Dentro deste contexto, o estudo teve como objetivos: (a) Avaliar parte da coleção dos acessos de abóbora pertencentes ao Banco de Germoplasma de Hortaliças da Universidade Federal de Viçosa (MG) e do Banco Ativo de Germoplasma de Cucurbitáceas da Embrapa Semi-Árido (PE) para identificar fontes de resistência ao Zucchini yellow mosaic virus; (b) Obter estimativas da divergência genética entre acessos e híbridos comerciais de abóbora, para promover o seu agrupamento, e (c) Caracterizar os ambientes de coleta de uma amostra de acessos de abóbora do BGH da UFV e do BAG de Cucurbitáceas para o Nordeste brasileiro aplicando descritores ecogeográficos. Cem acessos de abóbora foram inoculados, com o vírus ZYMV, na fase cotiledonar. As plantas que persistiram sem sintomas, após um período de 30 dias após a primeira inoculação, foram testadas para a presença do ZYMV por ELISA indireto. Para obtenção da estimativa da divergência genética entre 16 acessos de abóbora foram utilizados 17 descritores morfoagronômicos e um nutricional (teor de caroteno total). As plantas foram cultivadas em condições de campo na Universidade Federal de Viçosa (MG), utilizando-se o delineamento experimental em blocos ao acaso com três repetições. O desempenho dos acessos foi avaliado pela análise univariada e a divergência estimada mediante a análise multivariada, utilizando-se a distância generalizada de Mahalanobis (D 2 ) e o método Tocher como técnica de agrupamento. Para o levantamento exploratório da distribuição espacial de abóbora, fez-se a análise ecogeográfica com os mapas ambientais no Sistema de Informação Geográfica (SIG), cujos descritores ecogeográficos utilizados foram os mapas do Brasil, prontos para processamento em ambiente de SIG. Dentre os acessos avaliados, três mostraram-se imunes ao ZYMV (BGH-1943, BGH-1934 e BGH-1937) quando inoculados no mês de janeiro. Em relação ao estudo da divergência genética entre os acessos de abóbora houve considerável variabilidade em relação aos descritores qualitativos e quantitativos avaliados; por meio da análise univariada e multivariada, foi constatada a existência de variabilidade genética entre os acessos estudados. Todos os descritores avaliados contribuíram para a determinação da divergência genética entre os acessos, em maior ou menor proporção. Houve formação de um banco de dados digitalizados da coleção de germoplasma de abóbora pertencentes ao BGH-UFV e de 148 acessos do BAG-Embrapa Semi-Árido, como também a caracterização ecogeográfica dos acessos, permitindo assim, a intensificação do uso de recursos genéticos. / The characterization and evaluation of the accessions preserved by germplasm banks must be a priority in strategies of genetic resources management since they provide a better understanding of the germplasm available. Within this context, this study aimed to: (a) evaluate part of the Cucurbita moschata collections owned by the UFV Vegetable Germplasm Bank and the Embrapa SemiArido Germplasm Active Bank of Cucurbitaceae, to identify sources of resistance to the Zucchini Yellow Mosaic Virus (ZYMV); (b) obtain estimates of genetic divergence among accessions and commercial hybrids of Cucurbita moschata to promote its grouping, and (c) characterize the collection environments of 368 accessions from the UFV’ BAG and Embrapa BAG in Northeastern Brazil by applying ecogeographic descriptors. A total of 100 pumpkin accessions were inoculated with the ZYMV at the cotyledon phase. The plants which remained without symptoms for 30 days after the first inoculation were tested for ZYMV by indirect ELISA. To obtain genetic divergence estimate among 16 accessions, 22 morph agronomic descriptors and a nutritional one (total carotene content) were used. The plants were cultivated under field conditions at the Universidade Federal de Viçosa (MG), using an experimental randomized performance was design evaluated by with three univariate repetitions. analysis and Access divergence estimated by means of multivariate analysis, using the Mahalanobis (D 2 ) distance and the Tocher method as grouping technique. For the exploratory assessment of Cucurbita moschata special distribution, an eco- geographic analysis was performed using the Geographic Information System (GIS), with maps of Brazil as ecogeographic descriptors, ready to be processed under GIS. Among the accessions evaluated, three were found to be immune to ZYMV (BGH-1934, BGH-1937 and BGH-1943), when inoculated in January. Considerable variability was found in the qualitative and quantitative descriptors evaluated, regarding the study of genetic divergence among the pumpkin accessions; univariate and multivariate analyses confirmed the existence of genetic variability among the accessions studied. All the descriptors evaluated contributed for determining genetic divergence among the accessions, at a higher or lower proportion. A computerized data bank of the Cucurbita moschata germplasm collection owned by BAG-UFV and of 148 accessions owned by BAG-Embrapa was created, and an eco-geographic characterization of the accessions was made leading to an intensified use of the genetic resources. / Não foi localizado o cpf do autor

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-17T14:52:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 520472 bytes, checksum: ca6b49db2464acf17c14f205573ca9f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-17T14:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 520472 bytes, checksum: ca6b49db2464acf17c14f205573ca9f2 (MD5) Previous issue date: 2002-04-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A alta incidência de doenças tem sido considerada um dos principais fatores responsáveis pela baixa produtividade do feijoeiro no Brasil. Dentre as doenças que ocorrem em Minas Gerais, a mancha-angular, tem sido apontada como a mais importante da parte aérea. A grande variabilidade genética do patógeno que causa a mancha-angular (Phaeoisariopsis griseola), motiva o constante desenvolvimento de novos cultivares resistentes. Visando dar subsídios a programas de m elhoramento, foram identificadas cinco fontes de resistência à mancha-angular: México 54, AND 277, MAR-2, Cornell 49-242 e BAT 332. Em trabalhos anteriores, foram conduzidos estudos independentes de caracterização genética das quatro primeiras variedades. No presente trabalho, foi estudada a herança da resistência de BAT 332, tendo sido encontrado um gene dominante responsável por essa característica. Para auxiliar programas de melhoramento, foram identificados dois marcadores moleculares do tipo RAPD, OPAA07 950 e OPAO12 950 , ligados em fase de acoplamento a esse gene a uma distância de 5,10 e 5,83 cM, respectivamente. Posteriormente, foram conduzidos testes de alelismo entre as cinco fontes de resistência com o objetivo de entender a relação entre os genes de resistência presentes nessas fontes. Os dados obtidos sugeriram maior complexidade que a encontrada demonstrado nos que estudos Cornell de 49-242 herança possui realizados apenas um anteriormente. gene Foi dominante, denominado de Phg-3, e México 54 três genes distintos, Phg-2, Phg-5 e Phg-6. Em MAR-2 foram encontrados dois genes, um independente denominado de Phg-4 e outro uma forma alélica de um dos genes de México 54, designado de Phg-5 2 . BAT 332 possui um gene dominante, Phg-6 2 , o qual é uma forma alélica de outro gene de México 54. AND 277 possui um alelo de México 54, Phg-2 2 , um de Cornell 49-242, Phg-3 2 , e um de MAR-2, Phg-4 2 . Esses resultados são de especial importância para programas de melhoramento cujo objetivo é a piramidação de genes de resistência. Conhecendo os genes de resistência presentes nas fontes e entendendo a relação entre eles, o melhorista tem a oportunidade de escolher os genitores de seu programa de forma a obter variedade com o maior número e melhor combinação possível de genes de resistência. A maioria dos marcadores moleculares disponíveis para os programas de melhoramento do feijoeiro é do tipo RAPD. A incorporação de marcadores que revelem um maior nível de polimorfismo permite que genótipos relacionados possam ser distinguidos, cruzamentos entre indivíduos aparentados possam ser analisados e marcadores mais próximos do gene de interesse sejam identificados. Os marcadores microssatélites apresentam esse alto polimorfismo e a facilidade típica de marcadores baseados em PCR, no entanto, não têm sido utilizados em feijão pela inexistência de primers microssatélites desenvolvidos para essa espécie. Propôs-se, portanto, na terceira parte deste trabalho, o desenvolvimento desses marcadores para o feijoeiro. Foram obtidos 21 pares de primers que amplificaram bandas únicas e bem definidas, sendo que 15 apresentaram bandas polimórficas e 7 monomórficas. O número de alelos por loco variou de um a seis. A disponibilidade de marcadores moleculares co-dominantes, altamente informativos e de fácil obtenção como os microssatélites será de grande utilidade para os melhoristas e geneticistas que se dedicam ao feijoeiro. / Diseases are among the major problems responsible for the low yield of common bean in Brazil. Angular leaf spot, caused by the fungus Phaeoisariopsis griseola, has been regarded as the most important disease in Brazil, especially in the State of Minas Gerais. The extensive pathogenic variability of this fungus requires the continuous development of new resistant cultivars. To assist breeding programs, five resistance sources for angular leaf spot were identified, México 54, AND 277, MAR-2, Cornell 49-242 and BAT 332. Genetic characterization of four of these sources was previously done. In the present work, the resistance inheritance of the fifth source, BAT 332, was carried out. The results demonstrate that a single dominant gene is responsible for angular leaf spot resistance in this genotype. Two RAPD markers, OPAA07 950 and OPAO12 950 , linked in coupling phase with this gene at 5.10 and 5.83 cM of distance, respectively, were identified. Alellism studies among the five resistance sources were conducted aiming to understand the relationship among these genes involved. Our data suggested a higher complexity than previously found by other authors. It was demonstrated that Cornell 49-242 has just one dominant gene, Phg-3, and Mexico 54 possesses three distinct genes, Phg-2, Phg-5 e Phg-6. For MAR-2, two genes were found, one was independent, Phg-4, and the other was allelic to one of the genes present in México 54, Phg-5 2 . The allele of the Mexico 54 gene was found in BAT 332, Phg-6 2 . AND 277 has one allele of México 54, Phg-2 2 , one of Cornell 49-242, Phg-3 2 , and another of MAR-2, Phg-4 2 . These results are especially important for breeding programs aiming at piramiding resistance genes. With the knowledge of the resistance genes present in the resistance sources and the understanding of the relationship among these genes, the breeder has opportunity to choose the parent for programs aiming to develop varieties with the largest number and the best combination of resistance genes. Most molecular markers developed to be used in bean breeding programs are RAPD markers. The incorporation of maker that shows a higher polymorphisms allows the distinction of closely related genotypes, the analysis of related plants crosses and the identification of molecular marker closer to the interested gene. Microsatellite markers have both high polymorphism and the easy to perform of PCR markers, however, they were not used in common beans due to the lack of primers for this species. In the third and last part of this study, it was to developed microsatellites for common beans. It was identify 21 primers that amplify single discrete band. From these primers, 15 amplified polymorphic bands and 7 monorphic bands. The number of alleles per locus varied from one to six. The existence of codominant, highly informative and easy to work molecular markers may facilitate the use of this tool for common bean breeders and geneticists.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-10-02T12:28:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1361538 bytes, checksum: 2107064ec9fd0a3e1e0676e0c9e8c6d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-02T12:28:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1361538 bytes, checksum: 2107064ec9fd0a3e1e0676e0c9e8c6d3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cultura do café no Brasil tem muita importância econômica e relevância no setor social, gerando divisas e empregos diretos e indiretos. Por tanto, qualquer fator que diminua a sua produtividade refletirá na economia do país. Uma das possíveis causas da redução de sua produtividade é devido às injurias que os insetos podem causar. Entre estes insetos têm-se Coccus viridis (Green) (Hemiptera: Sternorrhyncha: Coccidae). As plantas ao serem injuriadas são capazes de aumentarem a síntese de inibidores de proteases (IPs) no local da lesão e, também, por toda a sua extensão. Estudos demonstraram que insetos alimentados com plantas previamente pulverizadas com inibidores sintéticos têm seu desenvolvimento prejudicado. Assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos dos inibidores de proteases sintéticos, benzamidina e berenil, sobre a atividade proteolítica intestinal de C. viridis e constatar quais foram as alterações na resposta bioquímica em plantas de Coffea arabica. Além disso, avaliar os efeitos destes inibidores nos aspectos biológicos desta praga. Plantas de C. arabica foram infestadas com ninfas de C. viridis e pulverizadas com benzamidina e berenil, em quatro diferentes concentrações: 0; 0,25; 0,5 e 0,75% (p/v). A resposta bioquímica do inseto e do cafeeiro foi realizada após 24 horas da pulverização, coletando-se os insetos e as folhas. A avaliação biológica foi realizada até o aparecimento de novas ninfas de o primeiro instar, sinal de que as cochonilhas chegaram à fase adulta. A atividade das serinoproteases, tripsina-like (amidásica e esterásica) e quimotripsina-like esterásica, foi reduzida devido à presença dos inibidores. O mesmo se obteve em relação à atividade das cisteino-proteases. Nos tratamentos avaliados a atividade de lipoxigenases não apresentou diferença. Entretanto, houve um incremento da produção dos IPs nas plantas com a infestação da cochonilha- verde e na ausência dos inibidores sintéticos. Já nas plantas com o inseto e pulverizadas com os inibidores sintéticos observou-se o contrário, ou seja, uma redução na produção dos IPs. Na avaliação da atividade biológica, os IPs sintéticos usados provocaram diferenças significativas no peso dos insetos, no entanto o comprimento desses insetos não foi afetado. A presença de benzamidina e berenil causou alta taxa de mortalidade, sendo o berenil mais eficiente e não apresentando diferença significativa entre as concentrações. Isto posto, os IPs sintéticos benzamidina e berenil têm potencial uso para controlar a praga cochonilha-verde. / The coffee culture is of an enormous relevance in the Brazil economics and social areas generating many currencies as direct and indirect employees. Such any factor, which decreases its productivity, will directly reflect in country economy. Being insect injuries one of the main causes of lost productivity the scale insect Coccus viridis (Green) (Hemiptera: Sternorrhyncha: Coccidae) is a relevant pest in coffee crops. Plants when attacked increase the synthesis of protease inhibitors (PI ́s) locally or systematically. The use of pulverized synthetic proteases inhibitors prejudice insects’ development. Thus, this work aimed to evaluate the effects of synthetic proteases inhibitors benzamidine and berenil on the gut proteolytic activity of Coccus viridis and to corroborate disrupts in biochemical response of Coffea arabica plants. Furthermore, effects on C. viridis fitness were evaluated. C. Arabica plants were infested with C. Viridis nymphs then benzamidine and berenil were pulverized in concentrations: 0; 0.25; 0.5 e 0.75% (p/v). Evaluations were performed 24 hours after pulverization, insects and leaves were collected for analisys. Biological evaluation was performed until the appearance of young nymphs of the first instar, a sign that the mealybugs reached the adult stage. Serine-proteinases, trypsin-like (amida and ester), ester quimotrypsin-like, and cysteine-proteinases activities, were reduced due to inhibitors presence. There was none differences in plant lipoxygenases between treatments. While there were PI ́s increments in plants infested with C. viridis and absence of synthetic inhibitors. Opposite to plants infested with scale insects and pulverized with synthetic inhibitors in which PI’s production were reduced. Synthetic inhibitors caused significant differences in insect weight; however, the length were not affected. The presence of benzamidine and berenil caused high rates of mortality being berenil more efficient but no matter the concentrations. These results demonstrate the high potential of benzamidine and berenil for use as biological control tools.

Made available in DSpace on 2015-03-26T12:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1536759 bytes, checksum: edfc663b086d5a927204773326c9803e (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Coffee leaf rust, caused by the biotrophic fungus Hemileia vastatrix, is the main phytosanitary problem of the coffee plant. The disease may cause yield losses ranging from 35 to 50% if control measures are not implemented. During the interaction with the host plant, rust fungi secrete a variety of effector proteins that modify the structure and function of the host cell allowing the biotrophic interaction. Some of these effector proteins, known as avirulence proteins (Avr), are recognized by plant proteins encoded by resistance genes, which triggers a defense response against pathogen infection. At least nine dominant genes (SH1 to SH9) that confer resistance to coffee leaf rust have been genetically identified, but despite many years of research on this pathosystem, the complementary Avr genes of H. vastatrix have not yet been identified or characterized. One approach that can be used for this purpose is to conduct an transcriptome and bioinformatics analyses in order to identify candidate genes of H. vastatrix that fulfill a set of specific criteria common to effector proteins, and their validation by conducting functional assays for effector activities. Therefore, the objectives of this study were: (i) to identify genes of H. vastatrix that encode proteins secreted during the germination of urediniospores as well as during the biotrophic interaction with the coffee plant, (ii) to express the effector gene candidates from H. vastatrix in the yeast secretion trap system (YST) in order to obtain biological confirmation of the secretion prediction made by bioinformatics tools, (iii) to analyze the genomic structure of a select group of effector gene candidates, (iv) to perform expression analysis of the identified candidates during different stages of infection; and (v) to establish a protocol for transient expression of H. vastatrix secreted proteins in coffee leaves based on the Type III Secretion System of Pseudomonas syringae pv. garcae. Initially, the secretome of germinated urediniospores of H. vastatrix was characterized by constructing a cDNA library from mRNA isolated from urediniospores germinated in vitro during 16 hours. After analysis of the ESTs using bioinformatics tools, 146 ORFs that encode secreted proteins were selected. Annotation of these proteins showed that 20% of the secretome from germinated urediniospores consists of hydrolytic enzymes and that most (67%) of the identified secreted proteins have unknown function. From the latter group of sequences, 35 complete ORFs encoding proteins sharing features with effectors from filamentous fungi and named H. vastatrix effector candidates (HvECs) were selected for further analysed. The genomic sequences of 22 of these HvECs were characterized, confirming the ORFs predicted by bioinformatics. The secretion of eight selected HvECs was confirmed in yeast and their expression analysis revealed a differential expression, which possibly occurs in coordination with the morphological changes of the pathogen during the early stages of infection. The secretome of H. vastatrix during a compatible plant-rust interaction was also characterized by a combination of Sanger sequencing and 454 pyrosequencing. This integrated approach allowed the massive sequencing of a substantial number of sequence tags (ESTs) of genes expressed at four different times during the biotrophic interaction: 48 hours, 72 hours, 9 days and 12 days after inoculation of coffee leaves with H. vastatrix. After bioinformatics analyses of these ESTs, 75 HvECs were selected and an expression analyses based on RT- PCR confirmed the fungal origin for 62 of them. 22 of these HvECs are preferentially expressed during the interaction of the fungus with the coffee plant and show distinct patterns of expression along the progress of infection. Using the pEDV system and the Type III Secretion System of P. syringae pv. garcae it was established a protocol to express transiently secreted proteins from H. vastatrix in coffee leaves established. Transient expression of HvEC-016 inside the cytoplasm of coffee plants carrying the rust resistant gene SH1, triggered a plant defense response indicating that there may have occurred a recognition of the HvEC-016 effector protein mediated by the R protein encoded by SH1. The catalog of effector gene candidates for H. vastatrix expressed during both urediniospore germination and the interaction with the coffee plant and the transient assay established in this study is an important plataform to identify additional avirulence genes from Hemileia vastatrix. / A ferrugem do cafeeiro, causada pelo fungo biotrófico Hemileia vastatrix, é o principal problema fitossanitário da cafeicultura, podendo ocasionar perdas da ordem de 35 a 50% da produção se não forem implantadas medidas de controle. Durante a interação com a planta hospedeira, os fungos causadores de ferrugens secretam um arsenal de proteínas efetoras que modificam a estrutura e a função da célula hospedeira, permitindo o estabelecimento da interação biotrófica. Algumas dessas proteínas efetoras, denominadas proteínas de avirulência (Avr), são reconhecidas por proteínas codificadas por genes de resistência, o que desencadeia uma resposta de defesa da planta contra a infecção pelo patógeno. Já foram identificados geneticamente pelo menos nove genes dominantes (SH1 a SH9) que conferem resistência à ferrugem do cafeeiro, no entanto, apesar de muitos anos de pesquisa neste patossistema, os genes Avr complementares de H. vastatrix ainda não foram identificados ou caracterizados. Uma abordagem que pode ser realizada com esta finalidade é a análise do transcriptôma e de bioinformática para identificar genes candidatos de H. vastatrix que cumpram uma lista de critérios específicos em banco de dados de sequências, seguida da validação por meio de ensaios funcionais para atividades de efetores. Diante do exposto, os objetivos desse estudo foram: (i) identificar genes de H. vastatrix que codificam proteínas secretadas, expressas durante a germinação dos urediniósporos e também durante a fase biotrófica da interação com o cafeeiro; (ii) expressar genes candidatos a efetores de H. vastatrix, utilizando o sistema armadilha de secreção em levedura YST (Yeast Secretion Trap) para confirmação biológica da predição de secreção realizada por ferramentas de bioinformática; (iii) analisar a estrutura genômica dos genes candidatos a efetores selecionados; (iv) efetuar a análise da expressão temporal dos genes identificados durante as diferentes fases da patogênese; (v) estabelecer um protocolo de expressão transiente de proteínas secretadas de H. vastatrix em folhas de cafeeiro, com base no Sistema de Secreção Tipo III de Pseudomonas syringae pv. garcae. Inicialmente, caracterizou-se o secretoma de urediniósporos germinados de H. vastatrix por meio da construção de uma biblioteca de cDNA a partir de mRNA isolado de urediniósporos germinados in vitro por 16 horas. Após análises das sequências por ferramentas de bioinformática, foram selecionadas 146 ORFs que codificam proteínas secretadas. Durante a anotação dessas sequências constatou-se que 20% do secretoma de urediniósporos germinados são constituídos por enzimas hidrolíticas e que a maioria (67%) das proteínas secretadas identificadas possui função desconhecida. A partir dessas sequências foram selecionadas 35 ORFs completas que codificam proteínas com características comuns aos efetores de fungos filamentosos, denominados genes candidatos a efetores de H. vastatrix (HvECs H. vastatrix effector candidates). Desses, 22 HvECs tiveram suas sequências genômicas caracterizadas, confirmando as ORFs preditas por bioinformática. A secreção de oito HvECs selecionados foi comprovada em levedura, e sua expressão diferenciada, que possivelmente ocorre com as mudanças morfológicas do desenvolvimento do patógeno nos estágios inicias de infecção, foi comprovada por meio RT-qPCR. Posteriormente, caracterizou-se o secretoma de H. vastatrix expresso durante uma interação compatível com o cafeeiro, por meio da combinação de sequenciamento Sanger e pirossequenciamento 454. Esta abordagem integrada permitiu o sequenciamento massivo de um substancial número de etiquetas de sequências expressas (ESTs) em folhas de café infectadas com H. vastatrix, amostradas em quatro tempos diferentes durante a fase biotrófica da interação: 48 horas, 72 horas, 9 dias e 12 dias após a inoculação. Após análises de bioinformática foram selecionados 75 genes e as análises de RT-PCR confirmaram a origem fúngica de 62 genes HvECs. Desses, 22 HvECs são preferencialmente expressos durante a interação com o cafeeiro, apresentando padrões distintos de expressão durante a fase biotrófica da interação. Adicionalmente, desenvolveu-se um protocolo de expressão transiente de proteínas secretadas de H. vastatrix em folhas de cafeeiro, por meio do sistema pEDV e do Sistema de Secreção Tipo III de P. syrigae pv. garcae. A expressão transiente do gene HvEC-016 no citoplasma de cafeeiros resistentes à ferrugem, portadores do gene SH1, desencadeou uma resposta de defesa das plantas, indicando que pode ter ocorrido o reconhecimento da proteína efetora HvEC-016 mediada pela proteína R codificada pelo gene SH1. Esse sistema de expressão transiente e o catálogo de genes candidatos a efetores de H. vastatrix expressos tanto durante a germinação dos urediniósporos como na interação com o cafeeiro, disponibilizados por esse estudo, constituem uma importante plataforma para a identificação de outros genes de avirulência de Hemileia vastatrix.