Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-04T17:34:36Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 672908 bytes, checksum: 52e2041013a80459525bc8ac9386c087 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T17:34:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 672908 bytes, checksum: 52e2041013a80459525bc8ac9386c087 (MD5) Previous issue date: 2005-03-31 / A ramulose é uma das principais doenças do algodoeiro no cerrado brasileiro, maior região produtora. Conduziram-se dois ensaios em campo visando selecionar plantas com resistência à ramulose em linhagens e em acessos sem características comerciais. As mesmas linhagens também foram avaliadas para resistência à mancha de ramulária, mancha angular, mosaico das nervuras e ao complexo Fusarium e nematóide. Foi possível distinguir entre resistência e suscetibilidade à ramulose em ambos os ensaios de campo (P< 0,0001 e P=0,002, ensaio de linhagens e acessos do banco de germoplasma, respectivamente). Para avaliar possível série diferenciadora de raças de Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides (Cgc), seis isolados do patógeno foram inoculados em 30 acessos de algodoeiro. Destes acessos, dois desenvolveram ou não sintomas dependendo do isolado usado. Esses acessos, em conjunto a outros dois resistentes e dois suscetíveis aos isolados empregados, foram selecionados para compor uma série diferenciadora para distinguir raças de Cgc. Com base em 133 isolados estudou-se a estrutura genética de populações de Cgc em três regiões com diferentes idades de cultivo. Foram analisados 23 locos AFLP e detectou-se baixa diversidade genética total (H t =0,139) e baixa diversidade genética dentro de subpopulações (H s =0,133). O número médio de migrantes foi estimado em 11,9 indivíduos a cada geração entre as três subpopulações. Não foi observada formação de estrutura sexuada (peritécio) in vitro após pareamento de 17 isolados em todas as combinações possíveis. Apenas um grupo de compatibilidade vegetativa foi identificado com base em testes de complementação usando 76 mutantes auxotróficos na rota de metabolismo do nitrato. Inferiu-se que a população brasileira de Cgc tem estrutura clonal, com ausência de grupos de compatibilidade vegetativa e sem aparente reprodução sexuada. Ocorre grande fluxo gênico e sementes infectadas desempenham importante papel nessa dispersão, principalmente para áreas novas. Isolados de Cgc foram também caracterizados quanto à sensibilidade aos fungicidas carbendazim, tebuconazole e azoxystrobin. Não houve evidências de resistência de Cgc aos fungicidas avaliados. Os valores de ED 50 para os fungicidas carbendazim, tebuconazole e azoxystrobin variaram, respectivamente, de 0,037 a 1,474, de 0,020 a 0,191 e de 0,019 a 0,068 μg i.a./mL. O controle químico em condições de campo reduziu o progresso da doença, todavia não evitou perdas significativas em produtividade. / “Ramulose” or “Witches’ broom” is caused by Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides (Cgc) and is one of the main cotton diseases in the savannah region of Brazil, the major producing area. Two field assays were conducted with breeding lines and active germplasm bank (AGB) accessions to select cotton resistant genotypes. The breeding lines were also evaluated to ramularia leaf spot, bacterial blight, mosaic vein virus, and nematode - fusarium complex resistance at field conditions. Resistant and susceptible genotypes were differentiated in both assays (P< 0.0001 and P=0.002 for breeding lines and AGB accessions assays, respectively). In order to establish a set of cotton differential series to detect Cgc pathotypes, six Cgc isolates were inoculated in 30 cotton genotypes. Reaction of two cotton accessions varied according to Cgc isolate. These two in addition to two resistant and two susceptible accessions were selected to form a cotton differential set to determine Cgc pathotypes.Pathogen population structure was investigated by analyzing 133 isolates collected from three major cotton producing areas. A total of 23 AFLP loci were analyzed. The total and within subpopulation genetic diversity were low, H t = 0.139 and 0.133, respectively. The estimated average number of migrants among the subpopulations, per generation, was 11.9. No sexual structure (perithecium) was formed in crosses established in vitro for 17 isolates in all possible combinations. A single vegetative compatibility group (VCG) was identified based on complementation tests using 76 auxotrophic mutants in nitrate metabolic pathway. One mutant did not form heterokarion and was self-incompatible. Genotypic diversity varied among subpopulations and one haplotype was found in high frequency in all subpopulations. There was no correlation between genetic and geographic distances. There is strong evidence that the population of Cgc has a clonal structure, with no VCG, and sexual reproduction does not seem to play an important role. Gene flow among subpopulations was high and infected seeds are important to pathogen introduction/dispersal into new areas. Sensitivity of Cgc isolates to carbendazim, tebuconazole, and azoxystrobin was assessed. Baseline population sensitivity was established with isolates collected where no fungicide was used. For in vitro assays, the ED 50 values of carbendazim (n=88 isolates) ranged from 0.037 to 1.474 μg a.i./mL, a 40-fold sensitivity factor. No resistance to carbendazim (ED 50 > 10 μg a.i./mL) was detected. Similarly, ED 50 values for tebuconazole (n=91) and azoxystrobin (n=82) were low and ranged from 0.020 to 0.191 and from 0.019 to 0.068 μg a.i./mL, respectively. In a field assay, disease progress was followed on the susceptible cultivar BRS Ipê. Plots artificially inoculated were treated twice with fungicides in several combinations. Fungicides were not effective in controlling ramulose, although differences (P=0.007) regarding area under the disease progress curve among treatments were detected. Lack of disease control was attributed to heavy rain during the season as well as a delay in the first fungicide application. / Tese importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-06Bitstream added on 2014-06-13T20:45:47Z : No. of bitstreams: 1 linhares_ai_dr_botfca.pdf: 473592 bytes, checksum: c28606702a04fcfa23732c203ae197de (MD5) / O presente trabalho teve como objetivos comparar métodos de monitoramento de resistência de Sphaerotheca fuliginea, causador de oídio em cucurbitáceas, a fungicidas; avaliar a sensibilidade de isolados procedentes de vários locais a fungicidas e verificar a influência de doses de fungicidas na sensibilidade do patógeno. Foram comparados três variações de métodos de avaliação de resistência com discos cotiledonares: flutuando e imersos em solução aquosa do fungicida e retirados de plantas de pepino pulverizadas com fungicida. As culturas foram incubadas por 12 dias em sala de crescimento (222ºC e 12 h luz) e então avaliadas pela área foliar colonizada pelo patógeno. A sensibilidade de isolados, coletados na BA, no DF, em MG, RS e SP, foi verificada pelo método do disco foliar flutuando em solução do fungicida e a inoculação, as condições de crescimento e a avaliação conforme descrito acima. Determinou-se a concentração mínima inibitória (CMI) dos isolados para os fungicidas fenarimol (FE) e tebuconazole (TE) (nas concentrações de 0; 0,001; 0,01; 0,1 e 1 g.mL-1); benomyl (BE) e tiofanato metílico (TM) (0; 6,3; 12,5; 25 e 50 g.mL-1) e azoxystrobin (AZ) (0; 0,001; 0,003; 0,005; 0,01; 0,03; 0,05; 0,1; 0,3; 0,5 e 1 g.mL-1). Para verificar as mudanças na sensibilidade e comparar a eficiência dos fungicidas, foram realizados dois ensaios, com dois cultivos. Plantas de pepino foram cultivadas em vasos em casa de vegetação e inoculadas naturalmente com oídio. No primeiro ensaio, as plantas foram tratadas com água, FE, TE e BE nas doses recomendadas. Foram feitas quatro aplicações com intervalo de 15 dias. Isolados foram coletados de cada tratamento antes das aplicações e o método do disco foliar flutuando em solução do fungicida foi utilizado para verificar a sensibilidade através da CMI... / The aim of this work was to compare methods for monitoring fungicide resistance of Sphaerotheca fuliginea, causal agent of powdery mildew of cucurbits; evaluate the fungicide sensitivity of isolates from many locals and to study the influence of fungicide doses in the sensitivity of the pathogen. Three variations of resistance methods were compared by floating and dipping cotyledon leaf disks in fungicide aqueous solution and obtained from cucumber plants treated with fungicide. The cultures were incubated at growth room (22±2ºC with a 12 h photoperiod) for 12 days before the evaluation of colonized foliar area by the pathogen. The fungicide sensitivity of isolates collected in BA, in DF, in MG, RS and SP, Brazil, was tested on cotyledon leaf disks floating on solution of the fungicide and the inoculation, the growth conditions and the evaluation were as described above. It was determined the minimum inhibit concentration (MIC) of the isolates for the fungicides fenarimol (FE) and tebuconazole (TE) (at the concentrations of 0; 0,001; 0,01; 0,1 and 1 g.mL-1); benomyl (BE) and thiophanate methyl (TM) (0; 6,3; 12,5; 25 and 50 g.mL-1) and azoxystrobin (AZ) (0; 0,001; 0,003; 0,005; 0,01; 0,03; 0,05; 0,1; 0,3; 0,5 and 1 g.mL-1). To verify the changes in the sensitivity and to compare the efficiency of the fungicides two tests was carried out, repeated twice. Cucumber plants were growth in pots in a greenhouse and inoculated with powdery mildew. In the first test, the plants were treated with water, FE, TE and BE in the recommended...(Complete abstract, click electronic access below)

Orientador: Raquel Ghini / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos comparar métodos de monitoramento de resistência de Sphaerotheca fuliginea, causador de oídio em cucurbitáceas, a fungicidas; avaliar a sensibilidade de isolados procedentes de vários locais a fungicidas e verificar a influência de doses de fungicidas na sensibilidade do patógeno. Foram comparados três variações de métodos de avaliação de resistência com discos cotiledonares: flutuando e imersos em solução aquosa do fungicida e retirados de plantas de pepino pulverizadas com fungicida. As culturas foram incubadas por 12 dias em sala de crescimento (222ºC e 12 h luz) e então avaliadas pela área foliar colonizada pelo patógeno. A sensibilidade de isolados, coletados na BA, no DF, em MG, RS e SP, foi verificada pelo método do disco foliar flutuando em solução do fungicida e a inoculação, as condições de crescimento e a avaliação conforme descrito acima. Determinou-se a concentração mínima inibitória (CMI) dos isolados para os fungicidas fenarimol (FE) e tebuconazole (TE) (nas concentrações de 0; 0,001; 0,01; 0,1 e 1 g.mL-1); benomyl (BE) e tiofanato metílico (TM) (0; 6,3; 12,5; 25 e 50 g.mL-1) e azoxystrobin (AZ) (0; 0,001; 0,003; 0,005; 0,01; 0,03; 0,05; 0,1; 0,3; 0,5 e 1 g.mL-1). Para verificar as mudanças na sensibilidade e comparar a eficiência dos fungicidas, foram realizados dois ensaios, com dois cultivos. Plantas de pepino foram cultivadas em vasos em casa de vegetação e inoculadas naturalmente com oídio. No primeiro ensaio, as plantas foram tratadas com água, FE, TE e BE nas doses recomendadas. Foram feitas quatro aplicações com intervalo de 15 dias. Isolados foram coletados de cada tratamento antes das aplicações e o método do disco foliar flutuando em solução do fungicida foi utilizado para verificar a sensibilidade através da CMI...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this work was to compare methods for monitoring fungicide resistance of Sphaerotheca fuliginea, causal agent of powdery mildew of cucurbits; evaluate the fungicide sensitivity of isolates from many locals and to study the influence of fungicide doses in the sensitivity of the pathogen. Three variations of resistance methods were compared by floating and dipping cotyledon leaf disks in fungicide aqueous solution and obtained from cucumber plants treated with fungicide. The cultures were incubated at growth room (22±2ºC with a 12 h photoperiod) for 12 days before the evaluation of colonized foliar area by the pathogen. The fungicide sensitivity of isolates collected in BA, in DF, in MG, RS and SP, Brazil, was tested on cotyledon leaf disks floating on solution of the fungicide and the inoculation, the growth conditions and the evaluation were as described above. It was determined the minimum inhibit concentration (MIC) of the isolates for the fungicides fenarimol (FE) and tebuconazole (TE) (at the concentrations of 0; 0,001; 0,01; 0,1 and 1 g.mL-1); benomyl (BE) and thiophanate methyl (TM) (0; 6,3; 12,5; 25 and 50 g.mL-1) and azoxystrobin (AZ) (0; 0,001; 0,003; 0,005; 0,01; 0,03; 0,05; 0,1; 0,3; 0,5 and 1 g.mL-1). To verify the changes in the sensitivity and to compare the efficiency of the fungicides two tests was carried out, repeated twice. Cucumber plants were growth in pots in a greenhouse and inoculated with powdery mildew. In the first test, the plants were treated with water, FE, TE and BE in the recommended...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Botrytis and Anthracnose fruit rots, caused by Botrytis cinerea and Colletotrichum spp., respectively, are major strawberry diseases. This study aimed to compare organic and conventional strawberry production systems by evaluating the sensitivity of B. cinerea and Colletotrichum spp. isolates to the main single-site fungicides used in Brazil and by characterizing the spatial and temporal dynamics of the diseases caused by these pathogens using epidemiological tools. Isolates were collected from conventional and organic fields in four different Brazilian states from 2013 to 2015. Resistance to azoxystrobin, iprodione and thiophanate-methyl was found in B. cinerea isolates with EC50 values higher than 71.9, 688 and 1.2 &mu;g/ml, respectively. Resistance to the aforementioned fungicides was observed in 87.5, 76.6 and 92.2 % of isolates from conventional fields, and 31.4, 22.9 and 51.4 % of isolates from organic fields, respectively. Moreover, frequencies of populations with multiple fungicide resistance to the three active ingredients were 75 and 8.6 %, with no resistance to any of the fungicides were 6.25 and 34.3 % for isolates collected from conventional and organic areas, respectively. Molecular analyses of the cytochrome b, beta-tubulin and bos1 genes revealed, respectively, the presence of G143A, E198A and I365N/S, Q369P or N373S mutations in resistant populations of B. cinerea. Fungicides sprayed preventively on strawberry fruit inoculated with B. cinerea failed to control resistant isolates. Isolates of C. acutatum resistant to azoxystrobin and difenoconazole were not observed. Mean EC50 values for isolates collected from organic fields were 0.44 and 0.95 &mu;g/ml, and from conventional areas were 0.629 and 0.107 &mu;g/ml for azoxystrobin and difenoconazole, respectively. Populations of C. acutatum showed insensitivity to thiophanate-methyl rather than resistance and EC50 values could not be determined. None of the isolates contained the most common mutations associated with fungicide resistance. The temporal and spatial dynamics of Botrytis and Anthracnose fruit rots were characterized in the 2015 strawberry season in conventional and organic farms. Temporal progress models were fitted to the cumulative incidence of diseased strawberry fruit or plants over time with non-linear regressions. The spatial pattern of the diseases was analyzed according to the index of dispersion (D), the index of aggregation (V/M), and the Taylor\'s power law. The incidence-diseased fruit density relationship was analyzed by fitting a linear model. Fruit with symptoms of Colletotrichum spp. were not observed in the organic area and were found in few assessment dates in the conventional area. Incidence of Botrytis fruit rot in symptomatic fruit and plants were generally well described by the logistic model. The organic area presented disease incidence and daily progress rate higher than the conventional area. The aggregation of diseased fruit on strawberry plants were observed for both areas. Botrytis fruit rot presented similar epidemiological patterns for both conventional and organic areas, however, disease intensity was greater for the organic area; this was likely due to differences in disease control management. This study reinforces the importance for the implementation of integrated management programs in strawberry nurseries and production fields. / Mofo cinzento e antracnose do fruto, causados por Botrytis cinerea e Colletotrichum spp., respectivamente, são as mais importantes doenças em morangueiro. Esse estudo objetivou comparar sistemas de produção orgânico e convencional em morangueiro através da avaliação da sensibilidade de isolados de B. cinerea e Colletotrichum spp. aos principais fungicidas sítio-específicos utilizados no Brasil, e da caracterização das dinâmicas espacial e temporal das doenças com o uso de ferramentas epidemiológicas. Isolados foram coletados em campos convencionais e orgânicos em quatro diferentes Estados brasileiros nos anos de 2013 a 2015. Resistência à azoxistrobina, iprodiona e tiofanato-metílico foi encontrada em isolados de B. cinerea com valores de CE50 maiores que 71,9, 688 and 1,2 &mu;g/ml, respectivamente. Resistência aos fungicidas acima mencionados foi observada em 87,5, 76,6 and 92,2 % dos isolados provenientes de campos convencionais e em 31,4, 22,9 and 51,4 % dos isolados oriundos de campos orgânicos, respectivamente. Além do mais, frequências de populações com resistência múltipla aos três fungicidas foram 75 e 8,6 %; e com nenhuma resistência a qualquer dos produtos, 6,25 e 34,3 % para isolados coletados em campos convencionais e orgânicos, respectivamente. Análise molecular dos genes do citocromo b, beta-tubulina e bos1 revelaram, respectivamente, a presença das mutações G143A, E198A e I365N/S, Q369P ou N373S em populações resistentes. Fungicidas aplicados preventivamente em morangos inoculados com B. cinerea falharam em controlar isolados resistentes. Isolados de C. acutatum resistentes à azoxistrobina e ao difenoconazole não foram observados. Valores médios de CE50 para isolados coletados em campos orgânicos foram 0,44 e 0,95 &mu;g/ml; e para isolados de áreas convencionais, 0,629 e 0,107 &mu;g/ml para azoxistrobina e difenoconazole, respectivamente. Populações de C. acutatum demonstraram insensibilidade ao tiofanato-metílico e valores de CE50 não puderam ser determinados. Nenhum dos isolados analisados continha as mutações comumente associadas à resistência a fungicidas. As dinâmicas temporal e espacial das doenclas causadas por esses patógenos foram caracterizadas na safra de 2015 em campos de morangueiro convencional e orgânico. Modelos de progresso temporal foram ajustados à incidência cumulativa de frutos ou plantas doentes no tempo com regressões não-lineares. O padrão espacial das doenças foi analisado de acordo com o índice de dispersão (D), índice de agregação (V/M) e lei de Taylor. A relação incidência-densidade de frutos doentes foi analisada com o ajuste de um modelo linear. Frutos com sintomas de Colletotrichum spp. não foram observados na área orgânica e foram encontrados em poucos dias de avaliação na área convencional. Incidência de mofo cinzento em frutos e plantas foi bem descrita pelo modelo logístico. A área orgânica apresentou incidência de doença e taxa de progresso diária maiores que da área convencional. A agregação de frutos doentes em plantas foi observada para ambos os locais. O mofo cinzento apresentou padrões epidemiológicos semelhantes para as áreas convencional e orgância, porém com maior intensidade de doença no campo orgânico, provavelmente em decorrência do manejo adotado para controle de doenças. Esse estudo reforça a importância da implementação de programas de manejo integrado de doenças em viveiros de mudas e campos de produção de morangueiro.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-17T14:46:49Z No. of bitstreams: 1 Cicero Nicolini.pdf: 204101 bytes, checksum: 7157eb0dfbcf608b64b0ae9bbbaf5c05 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T14:46:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cicero Nicolini.pdf: 204101 bytes, checksum: 7157eb0dfbcf608b64b0ae9bbbaf5c05 (MD5) Previous issue date: 2008-03-03 / The Alternaria black spot is one of the most common and destructive diseases of brassica species. This disease can be caused by several species of Alternaria, although A. brassicicola is predominant species in both conventional and organic crops in Brazil. Since commercial cultivars of brassica with acceptable levels of disease resistance are not available, the disease control in conventional production system is based on the fungicide applications, while in the organic production system the disease control on relays on cultural methods. The objective of this study is to assess the sensitivity of 112 isolates of A. brassicicola to fungicide groups: benzimidazoles (carbendazim), dicarboximides (iprodione), triazoles (tebuconazole) and strobilurines (azoxystrobin). The isolates were evaluated in vitro to obtain the concentration capable of inhibiting 50% of the mycelial growth (CL50) and separated in four classes depending on the sensibility to the tested fungicides. All the isolated of A. brassicicola were sensitive the iprodione, with CL50 values below to 0.1 mg i.a./L. Most of the isolates originating from conventional (92.9%) and organic (96.4%) were middling resistant the azoxystrobin, while an isolated (CFM-576) was highly resistant. In relation to tebuconazole, only isolated sensitive (42.9%) and lightly resistant (57.1%) were observed. There was nosignificant difference between the isolates of A. brassicicola originated either from conventional or organic systems and brassica types regarding the levels of sensitivity to the fungicides. / A alternariose é uma das doenças foliares mais comuns e destrutivas das brássicas, podendo ser causada por várias espécies de Alternaria, embora A. brassicicola seja a espécie predominante em plantios convencionais e orgânicos no Brasil. Como inexistem cultivares comerciais de brássicas com níveis aceitáveis de resistência à doença, no sistema de produção convencional o controle da doença se baseia na aplicação de fungicidas, enquanto no sistema orgânico em métodos culturais. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a sensibilidade de 112 isolados de A. brassicicola oriundos de cultivos convencionais e orgânicos de brássicas a fungicidas dos grupos dicarboximidas (iprodione), triazóis (tebuconazole) e estrobilurinas (azoxystrobin). Os isolados foram avaliados in vitro visando obter a concentração capaz de inibir 50% do crescimento micelial (CL50) e separados em quatro classes dependendo da sua sensibilidade aos fungicidas testados. Todos os isolados de A. brassicicola foram sensíveis a iprodione, com valores de CL50 inferiores a 0,1 mg i.a./L. A maioria dos isolados oriundos de cultivos convencionais (92,9%) e orgânicos (96,4%) se comportou como medianamente resistente a azoxystrobin, enquanto um isolado (CFM-576) foi altamente resistente. Em relação a tebuconazole, foram constatados somente isolados sensíveis (42,9%) e ligeiramente resistentes (57,1%). Não foi encontrada diferença significativa quanto à sensibilidade aos fungicidas testados entre os isolados de A. brassicicola oriundos de cultivos convencionais e orgânicos, bem como, coletados de diferentes tipos de brássicas.

Orientador: Paulo Cezar Ceresini / Resumo: Na primeira etapa da nossa pesquisa propusemos e testamos a utilização de um método baseado em leitor automatizado de microplacas para detectar resistência a fungicidas em populações do fungo hemibiotrófico fitopatogênico Pyricularia graminis-tritici (Pygt) associado à brusone do trigo no Brasil. A disponibilidade de um método mais rápido, acurado e eficiente para detecção de resistência a fungicidas facilitaria a tomada de decisão sobre o manejo químico da brusone do trigo no país. Como há indícios da ineficácia de fungicidas triazóis (DMI) no controle da brusone do trigo e evidências da ocorrência generalizada de resistência a estrobilurinas (QoI) em populações de Pygt no Brasil, inicialmente, testou-se a aplicação do método de microplacas para detecção de resistência a estes dois grupos de fungicidas. O método de microplaca foi acurado em discriminar a variação fenotípica na sensibilidade entre isolados do patógeno aos fungicidas DMI tebuconazol e epoxiconazol e ao fungicida QoI azoxistrobina. Economicamente, ambos os métodos representam um alto investimento inicial. Portanto, é necessário analisar, de forma integral, as necessidades de cada laboratório ou grupo de pesquisa quanto à aquisição dos equipamentos necessários para a fenotipagem visando detecção de resistência a fungicidas em atividades de rotina. Na segunda etapa do nosso estudo buscou-se evidências de resistência ao fungicida SDHI fluxapiroxade em populações de Pygt. Para se estabelecer o baseline de populaçõe... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by PRISCILA SANTOS CASADO null (pri.casado@hotmail.com) on 2017-10-22T18:46:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final - Priscila Casado.pdf: 1866790 bytes, checksum: 8d4b39875813bd43bc592acd4b71faef (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-10-26T15:50:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 casado_ps_me_ilha.pdf: 1866790 bytes, checksum: 8d4b39875813bd43bc592acd4b71faef (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-26T15:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 casado_ps_me_ilha.pdf: 1866790 bytes, checksum: 8d4b39875813bd43bc592acd4b71faef (MD5) Previous issue date: 2017-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na primeira etapa da nossa pesquisa propusemos e testamos a utilização de um método baseado em leitor automatizado de microplacas para detectar resistência a fungicidas em populações do fungo hemibiotrófico fitopatogênico Pyricularia graminis-tritici (Pygt) associado à brusone do trigo no Brasil. A disponibilidade de um método mais rápido, acurado e eficiente para detecção de resistência a fungicidas facilitaria a tomada de decisão sobre o manejo químico da brusone do trigo no país. Como há indícios da ineficácia de fungicidas triazóis (DMI) no controle da brusone do trigo e evidências da ocorrência generalizada de resistência a estrobilurinas (QoI) em populações de Pygt no Brasil, inicialmente, testou-se a aplicação do método de microplacas para detecção de resistência a estes dois grupos de fungicidas. O método de microplaca foi acurado em discriminar a variação fenotípica na sensibilidade entre isolados do patógeno aos fungicidas DMI tebuconazol e epoxiconazol e ao fungicida QoI azoxistrobina. Economicamente, ambos os métodos representam um alto investimento inicial. Portanto, é necessário analisar, de forma integral, as necessidades de cada laboratório ou grupo de pesquisa quanto à aquisição dos equipamentos necessários para a fenotipagem visando detecção de resistência a fungicidas em atividades de rotina. Na segunda etapa do nosso estudo buscou-se evidências de resistência ao fungicida SDHI fluxapiroxade em populações de Pygt. Para se estabelecer o baseline de populações do patógeno da brusone do trigo ao fungicida fluxapiroxade, determinou-se a distribuição de frequência de padrões de sensibilidade, com base na EC50 (concentração suficiente para inibir 50% do crescimento micelial fúngico) de cada isolado. Fenótipos extremos de sensibilidade e resistência a fluxapiroxade foram detectados nas diferentes populações do patógeno. Considerando que os fungicidas da segunda geração de SDHI são de alto risco para desenvolvimento de resistência em populações de fipatógenos, é necessária a avaliação do registro e recomendação de uso contínuo do fluxapiroxade, como único princípio ativo numa formulação para o manejo da brusone e de outras doenças do trigo no Brasil. Como estratégia anti-emergência para evitar resistência a SDHI, esse fungicida só poderia ser registrado em co-formulações com outro princípio ativo de baixo risco para resistência. / In the first part of our study, we proposed and tested the use of an automated microplate reader to detect resistance to fungicides in populations of the plant pathogenic hemibiotrophic fungus Pyricularia graminis-tritici (Pygt) associated with the wheat blast disease in Brazil. The availability of a faster, more accurate and efficient method for detecting resistance to fungicies would facilitate the decision making on the chemical management of wheat blast in the country. Because there is indication of inefficacy of triazole fungicides (DMI) for wheat blast control and evidence of the widespread occurrence of strobilurin (QoI) resistance in pathogen populations in Brazil, initially, we tested the application of the microplate method for detecting resistance to these two fungicide groups. The microplate method was accurate in discriminating the phenotypic variation in sensitivity between isolates of the pathogen to the fungicides DMI tebuconazole and epoxiconazole and the fungicide QoI azoxystrobin. Economically, both methods require a high initial investment. Therefore, it is necessary to fully analyze the needs of each laboratory or research group regarding the acquisition of the equipments necessary for phenotyping to detect resistance to fungicides in routine activities. In the second part of our study, using the microplate method, we searched for evidence of resistance to the SDHI fungicide fluxapiroxade in populations of Pygt. To establish the baseline of populations of the wheat blast pathogen to fluxapiroxade, the frequency distribution of sensitivity patterns was determined based on the EC50 (concentration sufficient to inhibit 50% mycelial fungal growth) of each isolate. Extreme phenotypes of sensitivity and resistance to fluxapiroxade were detected in the different pathogen populations. Whereas the second generation of SDHI fungicides are at high risk for development of resistance in populations of plant pathogens, it is necessary to review the labeling and recommendation of continuous application of fluxapyroxad, as the sole active ingredient in any formulation for chemical management of wheat blast and other wheat diseases in Brazil. As an antiemergence strategy to avoid the resistance to SDHI, this fungicide could only be labeled in co-formulations with another active ingredient of low risk for resistance.

Botrytis and Anthracnose fruit rots, caused by Botrytis cinerea and Colletotrichum spp., respectively, are major strawberry diseases. This study aimed to compare organic and conventional strawberry production systems by evaluating the sensitivity of B. cinerea and Colletotrichum spp. isolates to the main single-site fungicides used in Brazil and by characterizing the spatial and temporal dynamics of the diseases caused by these pathogens using epidemiological tools. Isolates were collected from conventional and organic fields in four different Brazilian states from 2013 to 2015. Resistance to azoxystrobin, iprodione and thiophanate-methyl was found in B. cinerea isolates with EC50 values higher than 71.9, 688 and 1.2 &mu;g/ml, respectively. Resistance to the aforementioned fungicides was observed in 87.5, 76.6 and 92.2 % of isolates from conventional fields, and 31.4, 22.9 and 51.4 % of isolates from organic fields, respectively. Moreover, frequencies of populations with multiple fungicide resistance to the three active ingredients were 75 and 8.6 %, with no resistance to any of the fungicides were 6.25 and 34.3 % for isolates collected from conventional and organic areas, respectively. Molecular analyses of the cytochrome b, beta-tubulin and bos1 genes revealed, respectively, the presence of G143A, E198A and I365N/S, Q369P or N373S mutations in resistant populations of B. cinerea. Fungicides sprayed preventively on strawberry fruit inoculated with B. cinerea failed to control resistant isolates. Isolates of C. acutatum resistant to azoxystrobin and difenoconazole were not observed. Mean EC50 values for isolates collected from organic fields were 0.44 and 0.95 &mu;g/ml, and from conventional areas were 0.629 and 0.107 &mu;g/ml for azoxystrobin and difenoconazole, respectively. Populations of C. acutatum showed insensitivity to thiophanate-methyl rather than resistance and EC50 values could not be determined. None of the isolates contained the most common mutations associated with fungicide resistance. The temporal and spatial dynamics of Botrytis and Anthracnose fruit rots were characterized in the 2015 strawberry season in conventional and organic farms. Temporal progress models were fitted to the cumulative incidence of diseased strawberry fruit or plants over time with non-linear regressions. The spatial pattern of the diseases was analyzed according to the index of dispersion (D), the index of aggregation (V/M), and the Taylor\'s power law. The incidence-diseased fruit density relationship was analyzed by fitting a linear model. Fruit with symptoms of Colletotrichum spp. were not observed in the organic area and were found in few assessment dates in the conventional area. Incidence of Botrytis fruit rot in symptomatic fruit and plants were generally well described by the logistic model. The organic area presented disease incidence and daily progress rate higher than the conventional area. The aggregation of diseased fruit on strawberry plants were observed for both areas. Botrytis fruit rot presented similar epidemiological patterns for both conventional and organic areas, however, disease intensity was greater for the organic area; this was likely due to differences in disease control management. This study reinforces the importance for the implementation of integrated management programs in strawberry nurseries and production fields. / Mofo cinzento e antracnose do fruto, causados por Botrytis cinerea e Colletotrichum spp., respectivamente, são as mais importantes doenças em morangueiro. Esse estudo objetivou comparar sistemas de produção orgânico e convencional em morangueiro através da avaliação da sensibilidade de isolados de B. cinerea e Colletotrichum spp. aos principais fungicidas sítio-específicos utilizados no Brasil, e da caracterização das dinâmicas espacial e temporal das doenças com o uso de ferramentas epidemiológicas. Isolados foram coletados em campos convencionais e orgânicos em quatro diferentes Estados brasileiros nos anos de 2013 a 2015. Resistência à azoxistrobina, iprodiona e tiofanato-metílico foi encontrada em isolados de B. cinerea com valores de CE50 maiores que 71,9, 688 and 1,2 &mu;g/ml, respectivamente. Resistência aos fungicidas acima mencionados foi observada em 87,5, 76,6 and 92,2 % dos isolados provenientes de campos convencionais e em 31,4, 22,9 and 51,4 % dos isolados oriundos de campos orgânicos, respectivamente. Além do mais, frequências de populações com resistência múltipla aos três fungicidas foram 75 e 8,6 %; e com nenhuma resistência a qualquer dos produtos, 6,25 e 34,3 % para isolados coletados em campos convencionais e orgânicos, respectivamente. Análise molecular dos genes do citocromo b, beta-tubulina e bos1 revelaram, respectivamente, a presença das mutações G143A, E198A e I365N/S, Q369P ou N373S em populações resistentes. Fungicidas aplicados preventivamente em morangos inoculados com B. cinerea falharam em controlar isolados resistentes. Isolados de C. acutatum resistentes à azoxistrobina e ao difenoconazole não foram observados. Valores médios de CE50 para isolados coletados em campos orgânicos foram 0,44 e 0,95 &mu;g/ml; e para isolados de áreas convencionais, 0,629 e 0,107 &mu;g/ml para azoxistrobina e difenoconazole, respectivamente. Populações de C. acutatum demonstraram insensibilidade ao tiofanato-metílico e valores de CE50 não puderam ser determinados. Nenhum dos isolados analisados continha as mutações comumente associadas à resistência a fungicidas. As dinâmicas temporal e espacial das doenclas causadas por esses patógenos foram caracterizadas na safra de 2015 em campos de morangueiro convencional e orgânico. Modelos de progresso temporal foram ajustados à incidência cumulativa de frutos ou plantas doentes no tempo com regressões não-lineares. O padrão espacial das doenças foi analisado de acordo com o índice de dispersão (D), índice de agregação (V/M) e lei de Taylor. A relação incidência-densidade de frutos doentes foi analisada com o ajuste de um modelo linear. Frutos com sintomas de Colletotrichum spp. não foram observados na área orgânica e foram encontrados em poucos dias de avaliação na área convencional. Incidência de mofo cinzento em frutos e plantas foi bem descrita pelo modelo logístico. A área orgânica apresentou incidência de doença e taxa de progresso diária maiores que da área convencional. A agregação de frutos doentes em plantas foi observada para ambos os locais. O mofo cinzento apresentou padrões epidemiológicos semelhantes para as áreas convencional e orgância, porém com maior intensidade de doença no campo orgânico, provavelmente em decorrência do manejo adotado para controle de doenças. Esse estudo reforça a importância da implementação de programas de manejo integrado de doenças em viveiros de mudas e campos de produção de morangueiro.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mancozeb has been the protective fungicide with a multi-site mechanism widely used associated with fungicide programs in soybean cultivation. This compound has provided significant increases in the systemic fungicides performance in the soybean rust control. Besides the obvious fungicide effect, mancozeb has provided also effects on physiological parameters in plants promoting benefits such as fungicide phytotoxicity reduction and increases in plant vigor. The studies aimed to understand the interaction of mancozeb associated to systemic fungicides against the soybean rust control, in addition to determine the physiological plants responses from the product versus plant relation. The experiments were conducted in greenhouse and field, divided in four chapters in manuscript format. The first study investigates the effect of the mancozeb interaction with commercial mixtures of QoI + DMI based on two methodologies. From this, it was possible to verify that mancozeb increases significantly the control efficiency when associated with less efficient mixtures. In such interactions was obtained a control synergistic response. However it is expected at least an additive response, when associated to mixtures with high efficiency, the increase in control is lower. The second study consisted of the enzymes activity linked to the antioxidant response, the photosynthetic pigments concentration and lipid peroxidation investigation in plants exposed to the fungicide trifloxystrobin + prothioconazole, with potential to cause phytotoxicity, associated or not with mancozeb. Antioxidant enzymes activity increase, reduction in pigment concentration and cell damage due to increased lipid peroxidation were observed in plants exposed to systemic fungicide. These damages were attenuated when the systemic fungicide was associated with mancozeb. Moreover, photosynthesis and chlorophyll a fluorescence parameters were analyzed in plants exposed to mancozeb and trifloxystrobin + prothioconazole, constituting the third study. Decreased in the photosynthetic efficiency was verified in plants treated with systemic fungicide characterizing a significant phytotoxic effect. The parameters evaluated elucidate a beneficial effect of mancozeb reducing the damages caused by the systemic fungicide. The fourth study aimed to evaluate changes in the leaves soybean nutritional status exposed to mancozeb. Macro and micronutrients concentration were determined on 4th and 8th days exposure. Significant changes in concentration of S, Mn and Zn were observed. Such changes were related to “green effect” on plants after mancozeb exposure. All data provide new information regarding the recent use of the mancozeb molecule in soybean. The contribution is original and presents data that can contribute to the definition of strategies in anti-resistance management and increase site-specific systemic fungicides effective life commonly used in soybean. In addition, the results present important physiological responses on plants induced Figure 1by mancozeb that can aggregate on development, vigor and productivity. / Mancozebe tem sido o fungicida protetor com mecanismo multi-sítio amplamente utilizado associado aos programas fungicidas na cultura da soja. Este composto tem proporcionado incrementos significativos no desempenho de fungicidas sistêmicos no controle da ferrugem da soja. Além do efeito evidente como fungicida, tem sido relatado efeitos sobre parâmetros fisiológicos nas plantas conferindo benefícios como redução de fitotoxicidade de outros fungicidas e incrementos no vigor de plantas. Nossos estudos objetivaram compreender a interação de mancozebe associado a fungicidas sistêmicos frente ao controle da ferrugem da soja, além de determinar respostas fisiológicas das plantas oriundas da relação produto versus planta. Foram conduzidos ensaios em casa de vegetação e a campo, aqui divididos em quatro capítulos no formato de manuscritos. Em um primeiro estudo o efeito da interação de mancozebe com misturas comerciais de IQo + IDM foi investigado com base em duas metodologias. A partir disso foi possível verificar que mancozebe agrega mais significativamente a eficácia de controle quando associado a misturas menos eficientes. Em tais interações obteve-se uma resposta sinérgica de controle. Quando associado a misturas com alta eficácia o incremento no controle foi menor, entretanto no mínimo uma resposta aditiva é esperada. Em um segundo estudo a atividade de enzimas ligadas à resposta antioxidante, a concentração de pigmentos fotossintetizantes e a peroxidação lipídica foi investigada em plantas expostas ao fungicida trifloxistrobina + protioconazol, com potencial de causar fitotoxidade, estando este associado ou não ao mancozebe. Aumento na atividade de enzimas antioxidantes, redução no conteúdo de pigmentos e danos celulares evidenciadas pela maior peroxidação de lipídios foram verificadas em plantas expostas ao fungicida sistêmico. Tais danos foram atenuados quando o fungicida sistêmico foi associado ao mancozebe. Nesse mesmo sentido, parâmetros de fotossíntese e fluorescência da clorofila a foram analisados em plantas expostas a mancozebe e trifloxistrobina + protioconazol, sendo este o terceiro estudo aqui apresentado. Decréscimo na eficiência fotossintética foi verificado em plantas tratadas com o fungicida sistêmico caracterizando um efeito fitotóxico significativo. Os parâmetros avaliados elucidam um efeito benéfico de mancozebe reduzindo os danos causados pelo fungicida sistêmico. Um quarto e último estudo visou avaliar alterações no estado nutricional de folhas de soja expostas a mancozebe. Concentração de macro e micronutrientes foram determinadas aos 4 e 8 dias após exposição. Alterações significativas na concentração de S, Mn e Zn foram observadas. Tais alterações foram relacionadas a incrementos na coloração verde da cultura após exposição à mancozebe. Os dados trazem informações novas em relação ao recente uso da molécula mancozebe em soja. A contribuição é original e apresenta dados que podem contribuir na definição de estratégias no manejo anti-resistência e aumento da vida efetiva dos fungicidas sistêmicos sítio-específico comumente utilizados em soja. Além disso, os resultados apresentam uma série de respostas fisiológicas importantes de mancozebe sobre as plantas que podem agregar em termos de desenvolvimento, vigor e produtividade.

A videira é uma das plantas mais antigas cultivadas pela humanidade, sendo que no Brasil a uva é a terceira fruta com maior volume de produção, atrás apenas do cultivo das bananas e das laranjas. Apesar da produção rentável, principalmente aos pequenos produtores, o parreiral é susceptível a várias doenças cujo manejo compromete até 59% dos gastos do produtor. No estado de São Paulo, dentre as doenças, três têm destaque: a antracnose (causada pelo Sphaceloma ampelinum), o míldio da videira (causado pelo Plasmopara viticola) e a ferrugem (causada pelo Phakopsora euvitis). Os produtores utilizam controle químico de forma intensa e preventiva, chegando a 100 aplicações de fungicidas em um ciclo de até 120 dias. Os principais fungicidas utilizados são os inibidores da quinona oxidase (QoI), que agem impedindo o transporte de elétrons do citocromo b ao citocromo c1 na cadeia respiratória da mitocôndria. Porém, existem relatos de resistência ao fungicida aplicado no campo em diversos países. As substituições G143A, G137R e F129L na sequência da proteína citocromo b impedem que o fungicida se ligue ao seu sítio alvo. As mutações que levam às substituições estão localizadas em uma das regiões chamada hotspot do gene citocromo b (cytB). Visto que, pela carência de estudos, a resistência genética a esses fungicidas nunca foi relatada no Brasil, o objetivo principal desse trabalho foi sequenciar e caracterizar a região hotspot em isolados de míldio, ferrugem e antracnose provenientes de parreirais do estado de São Paulo. Foram selecionados 35 isolados de 11 locais diferentes; desses, 11 isolados de míldio foram considerados geneticamente resistentes, pois apresentam a mutação para o resíduo alanina na posição 143, e 4 isolados foram considerados geneticamente sensíveis. Os dois isolados de ferrugem selecionados também foram considerados geneticamente sensíveis. Pela estratégia de Genome Walking foi possível sequenciar 65% do gene cytB de um dos isolados brasileiros de P. viticola; foram encontrados poucos polimorfismos e nenhum íntron na sequência analisada. Os resultados obtidos com esse estudo podem servir de suporte para a tomada de decisões de manejo mais adequadas para a realidade da viticultura brasileira; além disso, são importantes para futuros estudos sobre a evolução do patógeno com a pressão seletiva exercida pelos fungicidas. / Grapevine is one of the most ancient cultivated plants and its fruit, grape, is notably important in Brazil, since it is the third most produced, only behind banana and citrus. Although it is rentable especially to smallholders, the vineyard is often attacked by several pathogens and the damages induced by them can compromise up to 59% of the producers\' expenses in order to keep the diseases under control. In Sao Paulo state there are three important diseases that attack vineyards: anthracnose (caused by Sphaceloma ampelinum), downy mildew (caused by Plasmopara viticola) and rust (caused by Phakopsora euvitis). Pest management practices used by the producers relies on intensive and preventive use of fungicides, in which the culture is sprayed 100 times per vineyard\'s growth cycle (that last approximately 120 days). One of the most used fungicides are the quinone oxidase inhibitors (QoI), that act by blocking the electron transport chain at the mitochondria binding at the Qo site of the cytochrome b (cytB) complex. However, there are several reports of the presence of resistant strains in different countries. Resistance is caused by the aminoacids substitutions F129L, G137R and G143A in the cytochrome b protein sequence, that prevent the fungicide molecule binding to its target site. The mutations in the cytB gene that lead to these substitutions are harbored in a region called hotspot for fungicide resistance. Since this type of study was never reported in Brazil, the main purpose of this work was to sequence and characterize the hotspot region of different isolates from anthracnose, downy mildew and rust. Thirty five isolates from eleven different locations were choosen for the study. Eleven of them harbored the mutation that lead to the substitution G143A; these were then considered genetically resistant to the QoI fungicides. On the contrary, four downy mildew and the two rust isolates were considered sensitive to the QoI fungicides, since none of the aminoacids substitutions were observed. Also, by using a technique named Genome Walking it was possible to sequence 65% of cytB gene from a Brazilian downy mildew isolate. In this sequence were found few polymorphisms and none intron. These study findings are unique for Brazilian isolates and might be useful to provide reliable support for the pest management decisions regarding the reality that is found at the vineyards in Brazil. Furthermore, the results presented here are important to the comprehension of pathogen\'s evolution when suffering from a selective pressure caused by the intensive use of fungicides.