Orientador: Fernando Rogério Pavan / Banca: Katiany Rizzieri Caleffi Ferraciolli / Banca: Tais Maria Bauab / Resumo: Tuberculose (TB) é a doença infecciosa que mais mata pessoas no mundo e é causada principalmente pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis. Em 2016, 10,4 milhões de pessoas desenvolveram a doença e 1,8 milhão morreu em sua decorrência. Atualmente o principal agravante deste cenário é a resistência do bacilo aos antimicrobianos disponíveis para o tratamento. Entre os principais mecanismos responsáveis pela resistência aos antimicrobianos, as mutações em genes que codificam dos alvos dos fármacos se destacam. Fluoroquinolonas e aminoglicosídeos são duas classes de antimicrobianos de 2ª linha utilizados no tratamento de TB e atuam na proteína DNA girase e no ribossomo bacteriano impedindo o processo de transcrição e síntese proteica respectivamente. Mutações nos genes gyrA e rrs que codificam estes alvos podem ser responsáveis por tal resistência. Para que medidas de saúde pública possam ser tomadas para otimizar o tratamento, é preciso conhecer a que os isolados clínicos são resistentes e qual o mecanismo envolvido neste processo. Para isso, uma biblioteca com 100 isolados clínicos coletados entre 2007 e 2009 no hospital de referência Clemente Ferreira da cidade de São Paulo foi avaliada em relação a resistência a fluoroquinolonas e aminoglicosídeos. A primeira etapa foi a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) de três antibióticos da classe das fluoroquinolonas (ofloxacino, moxifloxacino e gatifloxacino) e três da classe dos aminoglicosídeos (amicacina, canamicina e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tuberculosis (TB) is a most deadly infectious disease of people in the world and is mainly caused by the Mycobacterium tuberculosis bacillus. In 2016, 10.4 million people developed disease and 1.8 million died. Currently, the main aggravating factor of this scenario is the resistance of the bacillus to the antimicrobials available for treatment. Among the main mechanisms for resistance to antimicrobials, the mutations in genes that code the targets of the drugs stand out. Fluoroquinolones and aminoglycosides are two classes of antimicrobials of 2nd line for TB treatment and they act on protein DNA gyrase and on the bacterial ribosome impeding the process of transcription and protein synthesis respectively. Mutations in the gyrA and rrs genes encoding these targets may be explain the resistance. Public health guidelines are taken to optimize treatment and for this it is necessary to know what clinical isolates resistant and what mechanism are is involved in the process. For this, a library with 100 clinical isolates collected between 2007 and 2009 at a Clemente Ferreira reference hospital in the city of São Paulo was evaluated for resistance to fluoroquinolones and aminoglycosides. A first stage was the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of three fluoroquinolone antibiotics (ofloxacin, moxifloxacin and gatifloxacin) and three of the class of aminoglycosides (amikacin, kanamycin and streptomycin) against 100 clinical isolates using a microdilution assay in 96-well plates. According to the MIC, clinical isolates resistant to at least one antimicrobial were selected for the study of the possible mechanism of resistance. Mutations in the gyrA and rrs genes were scree ned using the GenoType MTBDRsl kit because it may explain the resistance... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A presente tese teve como objetivos analisar o padrão de resistência a antimicrobianos de bactérias isoladas de infecções endodônticas agudas por meio de uma revisão sistemática e meta-análise (capítulo 1); identificar e determinar a diversidade genotípica, a sensibilidade bacteriana e os fatores de virulência de anaeróbios facultativos isolados em casos de abscesso apical agudo (capítulo 2); e realizar, por meio de uma proposta de informativo, a difusão de informações geradas com orientações sobre o uso de agentes antibióticos em infecções endodônticas agudas para dentistas e pacientes (capítulo 3). A revisão sistemática foi realizada por meio de pesquisa em base de dados na internet e na literatura cinza até maio de 2015. As normas do PRISMA foram seguidas. Estudos clínicos em humanos que avaliaram o perfil de resistência a antimicrobianos de isolados de infecções endodônticas agudas primárias por meio de métodos laboratoriais foram incluídos. O efeito randômico da Meta-análise foi empregado, e o desfecho foi descrito reunindo as taxas de resistência para cada antibiótico testado. Os dados de sete estudos foram extraídos. A taxa de resistência para 15 diferentes agentes antibióticos foram avaliadas, variando entre 3,5% a 40%. Baixas taxas de resistência foram observadas para amoxicilina + clavulanato e amoxicilina, e altas taxas foram observadas para tetraciclina. No capítulo 2, amostras de canais radiculares foram coletadas de sete dentes com diagnóstico de abscesso apical agudo. Bactérias anaeróbias facultativas foram identificadas com o auxílio de métodos fenotípicos e MALDI-TOF MS. A sensibilidade antimicrobiana das cepas isoladas foi determinada para benzilpenicilina, eritromicina e clindamicina por meio da difusão em disco. Bactérias anaeróbias facultativas foram isoladas de 3 dentes. Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, e Actinomyces viscosus foram identificados. Streptococcus spp. e S. aureus foram sensíveis à benzilpenicilina. E. faecalis (24 cepas) isolados de um mesmo paciente tiveram a sensibilidade antimicrobiana determinada por meio da concentração inibitória mínima para benzilpenicilina, amoxicilina e amoxicilina + clavulanato utilizando-se o E-test. A diversidade genotípica e a presença de fatores de virulência (ace, asa, gelE, efaA, cylA, esp) nas cepas de E. faecalis foi analisada por meio do PFGE e PCR, respectivamente. A expressão da gelatinase e da hemolisina foi testada, e a produção de biofilme quantificada. E. faecalis foram sensíveis aos antibióticos beta-lactâmicos. O mesmo perfil cromossonal de DNA foi revelado para cepas de E. faecalis isoladas. Os genes gelE, ace e efaA foram detectados em 18 cepas. A expressão da gelatinase e a produção de biofilme foram observadas. Cepas de E. faecalis tiveram o mesmo perfil de DNA cromossomal, porém parecem apresentar diferentes perfis de virulência. No capítulo 3 foram apresentadas duas propostas de textos informativos. A primeira com o objetivo de orientar o dentista sobre o uso correto dos antibióticos sistêmicos em endodontia. A segunda visa informar os pacientes sobre a utilização dos antibióticos e esclarecer possíveis dúvidas. / The present thesis aimed to analyze the antimicrobial resistance profile of bacteria isolated from acute endodontic infections through a systematic review and meta-analysis (Chapter 1); to identify and determine the genotypic diversity, antimicrobial susceptibility and virulence factors of isolated facultative anaerobes in isolates from acute apical abscess (Chapter 2); and to provide information for dentist and patients generated from guidelines on the use of antibiotic agents in acute endodontic infections (Chapter 3). The electronic databases and the gray literature were searched up to May 2015 for systematic review. PRISMA guidelines were followed. The clinical studies in of humans that have evaluated the antimicrobial resistance of the isolates of primary acute endodontic infections through laboratorial methods were included. A random effect meta-analysis was employed, and the outcome was described as being the pooled resistance rates for each antimicrobial agent. The data from 7 studies were extracted. The resistance rates for 15 different antimicrobial agents were evaluated, ranging from 3.5% to 40.0%. Lower resistance rates were observed for amoxicillin+clavulanate and amoxicillin, and higher resistant rates were detected for tetracycline. In Chapter 2, root canal samples were collected from seven teeth. Facultative anaerobic bacteria were identified by phenotypic methods and MALDI-TOF MS. Antimicrobial susceptibility of strains was determined to benzylpenicillin, erythromycin and clindamycin by disk-diffusion. Facultative anaerobic bacteria were isolated from 3 teeth. Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, and Actinomyces viscosus were found. Streptococcus spp. and S. aureus were susceptible to benzylpenicillin. E. faecalis strains (n=24) isolated from the same patients had their susceptibility determined by minimum inhibitory concentration of benzylpenicillin, amoxicillin and amoxicillin + clavulanate using the E-test. The genotypic diversity and virulence factors (ace, asa, gelE, efaA, cylA, esp) were analyzed in E. faecalis strains by PFGE and PCR, respectively. Phenotypic expression of gelatinase and cytolysin were tested. Biofilm production was quantified. All the E. faecalis strains were susceptible to β-lactam antibiotics. The same chromosomal DNA fragmentation profile was revealed to E. faecalis strains isolated. The gelE, ace and efaA genes were detected in 18 E. faecalis strains. Gelatinase expression and biofilm production were observed. E. faecalis strains had the same chromosomal DNA profile, but showed virulence profiles different. In Chapter 3, two sugestion for information texts were presented. The first aims to guide dentists on the proper use of systemic antibiotics in endodontics. The second aims to inform patients about the use of antibiotics and clarify possible doubts.

Foi realizado um estudo em resistência bacteriana, com um enfoque especial para o Mycobacterium tuberculosis. Fez-se também uma apreciação das implicações clínicas do fenômeno à luz de levantamentos realizados no Brasil e no exterior. Discutiram-se os testes de sensibilidade, examinando-se seu posicionamento nos programas de saúde pública e em medicina individual. Par atestar a sensibilidade dos bacilos isolados a partir de amostras de escarro de tuberculosos não tratados previamente, empregou-se o método das proporções de Canetti, Rist e Grosset. As drogas utilizadas foram a estreptomicina, hidrazida, rifampicina, estambutol e PAS. A resistência a uma ou mais de uma droga encontrada foi e 12,80%, com predomínio de germes resistentes a uma droga somente. Os medicamentos que com maior freqüência selecionaram mutantes resistentes foram a estreptomicina (6,40%) e hidrazida (5,60%). Os resultados encontrados mostraram semelhanças aos apontados por outros levantamentos.

Introdução: o aumento gradativo da resistência dos microrganismos aos antimicrobianos usados na prática clínica tem contribuído efetivamente para que as infecções hospitalares sejam consideradas um problema de saúde pública. Assim, diminuir a disseminação destes microrganismos no ambiente hospitalar tem se tornado um desafio aos profissionais que atuam nos serviços de controle de infecção hospitalar. Objetivo: identificar a sensibilidade e especificidade dos critérios para isolamento de pacientes admitidos num hospital especializado em oncologia. Material e Método: trata-se de um estudo de corte transversal de caráter prospectivo, aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa de um hospital especializado em oncologia. A população do estudo foi composta por 61 pacientes admitidos no hospital, no período de 01 março a 31 de agosto de 2009, segundo o protocolo para isolamento de pacientes procedentes de outros hospitais. Os dados foram obtidos por meio de entrevista individual e consulta aos resultados de cultura provenientes de swab nasal e anal, coletados pela equipe de enfermagem no momento da admissão no hospital e disponibilizados no laboratório de microbiologia. Resultado: dos 61 pacientes admitidos no hospital, 56 preencheram os critérios para que as precauções de contato fossem instituídas. Destaca-se que 30(49,2%) pacientes tiveram culturas positivas para microrganismos multirresistentes, sendo o Staphylococcus aureus resistente à oxacilina o microrganismo mais freqüentemente isolado no swab nasal e anal. A sensibilidade dos critérios para isolamento de pacientes admitidos no referido hospital e procedentes de outros hospitais foi de 90%. Conclusão: foram altamente sensíveis os critérios utilizados para o isolamento de pacientes provenientes de outros hospitais, portanto a maioria dos pacientes colonizados por microrganismos multirresistentes foi isolada no momento da admissão. / Introduction: the gradual increase of microorganisms\' resistance to antimicrobials used in clinical practice has effectively contributed to hospital-acquired infections be considered a public health problem. Hence, reducing the dissemination of these microorganisms in the hospital setting has become a challenge for professionals working in hospital-acquired infection control services. Objective: to identify the sensitivity and specificity of criteria for isolation of patients admitted to a cancer specialized hospital. Material and method: this prospective cross-sectional study was approved by the Research Ethics Committee of a cancer specialized hospital. The study\'s population was composed of 61 patients, who were admitted to the hospital between March 1 and August 31 2009 according to the protocol for isolation of patients from other hospitals. Data were collected through individual interview and consultation of the results from nasal and anal swabs culture collected by the nursing team at the moment patients were admitted to the hospital and available in the microbiology laboratory. Results: 56 out of the 61 patients met the criteria establishing contact precautions. It is worthy noting that 30(49,2%) patients presented positive cultures for multi-resistant microorganisms, while the Staphylococcus aureus resistant to oxacillin was the microorganism most frequently isolated in nasal and anal swabs. The sensitivity of the criteria for isolation of patients from other hospitals admitted in the studied hospital was of 90%. Conclusions: criteria used for isolation of patients from other hospitals were highly sensitive, thereby the majority of patients colonized by multi-resistant microorganisms were isolated at the moment of admission.

Orientador: Paola Castro Moraes / Coorientador: Andressa de Souza-Pollo / Banca: Alessandra Aparecida Medeiros-Ronchi / Banca: Janete Apparecida Desidério / Banca: José Geraldo Meirelles Palma Isola / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Resumo: Lesões na pele podem resultar em feridas que, dependendo do tempo de reparação tissular podem ser classificadas como agudas ou crônicas, sendo crônicas aquelas que não apresentaram cicatrização dentro do período de quatro semanas. A ferida é contaminada por diferentes espécies bacterianas, sendo o sistema imunológico da pele o responsável por impedir que tais contaminações evoluam para infecções. No entanto, muitas vezes o quadro infeccioso é instalado, havendo necessidade de tratamento com antimicrobianos. Tendo em vista que o mau uso de antimicrobianos provoca resistência a multidrogas em estirpes bacterianas potencialmente patogênicas, este trabalho teve como objetivo identificar as bactérias prevalentes em feridas agudas e crônicas de cães por meio de sequenciamento da região 16S rRNA e testar a sensibilidade dos isolados a diferentes antimicrobianos. Para tanto, foram amostradas 20 feridas, sendo cada uma de um cão atendido no Hospital Veterinário da UNESP, Câmpus de Jaboticabal. De cada ferida foram obtidos dez isolados, os quais foram selecionados para o sequenciamento de DNA por meio de comparação entre os perfis genéticos obtidos pelo emprego de marcador molecular randômico. Foram sequenciados 74 isolados identificados como pertencentes a oito gêneros de bactérias gram-negativas, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp., Acinetobacter baumannii, Klebsiella spp., Kluyvera georgiana e Providencia stuartii, e três de gram-positivas,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Skin lesions can result in cutaneous wounds that may be classified as acute or chronic depending on the period of time spent in tissue repairment. Wounds that have not healed within four weeks are generally classified as chronic. The wound is contaminated by different bacterial species and the immune system of the skin is responsible for preventing infections. Nonetheless, the infectious process is often developed and antimicrobial treatment become necessary. Considering that the misuse of antimicrobials provokes multidrug resistance in potentially pathogenic bacterial strains, this work aimed to identify prevalent bacteria in acute and chronic wounds of dogs by 16S rRNA sequencing and to test the sensitivity of the isolates to different antimicrobials. For that, 20 wounds were sampled, each one from a dog admitted at the Veterinary Hospital of UNESP, Jaboticabal, São Paulo, Brazil. From each wound ten isolates were obtained, which were selected for DNA sequencing through genetic profiles comparison by applying a random molecular marker. Seventy-five isolates were identified as belonging to eight Gram-negative bacteria genera, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp., Acinetobacter baumannii, Klebsiella spp., Kluyvera georgiana and Providencia stuartii, and to three gram-positive bacteria genera, Enterococcus sp., Staphylococcus spp. and Bacillus spp. Cases of dogs with acute or chronic wounds associated to more than one bacterial genus w... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Marianne Spalding / Banca: Vivian Cristina Costa Castilho Hyodo / Resumo: Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae são enterobactérias que acometem especialmente indivíduos imunologicamente comprometidos com grande importância por sua resistência a antibióticos, dessa forma, o objetivo do estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana de extratos de própolis (glicólico e aquoso) distribuídos comercialmente em cepas ATCC e clínicas multirresistentes das espécies. Inicialmente foram determinados os valores de Concentração Microbicida Mínima (CMM) sobre cultura planctônica por microdiluição em caldo, segundo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), seguido por semeadura em ágar. A concentração correspondente ao quádruplo da CMM foi utilizada para testes em biofilmes monotípicos (contato de 5 min). Foi usada como controle positivo a solução de clorexidina (0,12%) e como controle negativo caldo BHI. Após o tratamento foi verificada a viabilidade dos micro-organismos pelo teste MTT, com leitura em espectrofotômetro de microplacas. Os dados de densidade óptica foram convertidos em porcentagem de redução microbiana e foi realizada a análise estatística com 5% de significância em todos os testes. Os extratos apresentaram ação contra forma planctônica e biofilmes de cepas multirresistentes de ambas as espécies. Para culturas planctônicas, P. aeruginosa apresentou CMM de 6,25 e 12,5 mg/mL para o extrato glicólico e de 13,75 e 55 mg/mL para o extrato aquoso, enquanto K. pneumoniae apresentou CMM de 6,25 a 25 mg/mL para o extrato glicólico e de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae are enterobacteria that especially affect immunologically compromised individuals with great importance for their resistance to antibiotics. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity of propolis extracts (glycolic and aqueous) commercially distributed in ATCC and multiresistant clinics strains of these species. The values of Minimum Microbicidal Concentration (MMC) on plankton culture were determined by microdilution in broth, according to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), followed by sowing in agar. The concentration corresponding to the quadruple MMC was used for monotypic biofilm tests (5-minute contact). A positive control solution of chlorhexidine (0.12%) and as a negative control BHI broth were used. After the treatment, the viability of the microorganisms was verified by the MTT test, with microplate spectrophotometer reading. Optical density data were converted to microbial reduction percentage and statistical analysis was performed with 5% significance in all tests. The extracts showed action against planktonic form and biofilms of multiresistant strains of both species. For planktonic cultures, P. aeruginosa presented MMC of 6.25 and 12.5 mg / mL for the glycolic extract and 13.75 and 55 mg / mL for the aqueous extract, while K. pneumoniae had MMC of 6.25 to 25 mg / mL for the glycolic extract and 55 mg / mL for the aqueous extract. The reduction of viability in biofilms of P. aeruginosa reached 54.42% for the glycolic extract, and 64.66% for the aqueous extract. K. pneumoniae presented a maximum reduction of 64.24% with glycolic extract and 65.13% with aqueous extract, these reductions being statistically significant in relation to the negative control (p <0.05). Therefore, it can be concluded that propolis extracts present an important ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Medidas restritivas de controle de antimicrobianos têm sido propostas para controlar surtos epidêmicos de infecção por germes multirresistentes em hospitais, mas são escassas as publicações a respeito de sua eficácia. Em um estudo quaseexperimental com controles históricos, avaliou-se a efetividade de uma intervenção restritiva ao uso de antimicrobianos para controlar a emergência de germes multirresistentes em uma unidade de cuidados intensivos (UTI) de um hospital geral. Os Serviços de Controle de Infecção e Comissão de Medicamentos restringiu o uso de drogas antimicrobianas em pacientes hospitalizados na UTI a não mais que dois agentes simultaneamente, exceto em casos autorizados por aqueles serviços. A incidência de eventos clínicos e bacteriológicos foi comparada entre o ano que precedeu a intervenção e o ano que a seguiu. No total, 225 pacientes com idade igual ou maior de 15 anos , com infecção, internados na UTI por pelo menos 48 horas, foram estudados no ano precedente a intervenção e 263 no ano seguinte a ela. No ano seguinte à intervenção, um percentual menor de pacientes foi tratado simultaneamente com mais de dois antimicrobianos, mas não houve modificação no número total de antimicrobianos prescritos, na duração e no custo do tratamento. Mortalidade e tempo de internação foram similares nos dois períodos de observação. O número de culturas positivas aumentou depois da intervenção, tanto para germes Gram positivos, quanto para germes Gram negativos, principalmente devido ao aumento do número de isolados do trato respiratório. A maioria dos isolados foi Staphylococcus aureus dentre os Gram positivos e Acinetobacter sp dentre os germes Gram negativos. No ano seguinte à intervenção, a sensibilidade dos microorganismos Gram negativos para carbenicilina, ceftazidima e ceftriaxona aumentou, e para o imipenem diminuiu. A ausência de resposta dessa intervenção sobre desfechos clínicos pode ser em conseqüência da insuficiente aderência ou a sua relativa ineficácia. A melhora da sensibilidade microbiana de alguns germes, semaumento de custos ou a incidência de efeitos adversos, encoraja o uso de protocolos similares de restrição de drogas antimicrobianas para reduzir a taxa de resistência bacteriana na UTI. / Restrictive policies of the use of antimicrobial drugs have been proposed to prevent the occurrence of outbreaks of infection by multiresistant germs in hospitals, but assessments of their effectiveness have been scarcely reported. In a quasiexperimental study with historical controls, we evaluate the effectiveness of a policy of restriction in the use of antimicrobial drugs to control the emergence of multiresistant strains in an Intensive Care Unit of a general hospital. The Services of Infection Control and Intensive Care and of the Committee of Pharmacy restricted the use of antimicrobial drugs in patients hospitalized in the ICU a no more than two agents simultaneously, excepted in cases authorized by those Services. Clinical and bacteriological outcomes were compared in the year preceding the intervention with the year following the restriction. In the total, 225 patients with 15 years of age or more, with infection, hospitalized in the Intensive Care Unit for at least 48 hours, were studied in the year preceding the intervention and 263 in the year following it. In the year following the intervention fewer patients were treated simultaneously with more than two antimicrobial drugs, but the total number of drugs used, the duration of use and expenses with antimicrobial drugs did not change. Mortality rates and length of hospitalization in the Intensive Care Unit and in the Hospital were also similar in both periods of observation. The number of positive cultures increased after the intervention, both for Gram positive and Gram negative germs, mainly due to the increase of isolates from the respiratory tract. Most isolates were Staphylococcus aureus among Gram positive germs and Acinetobacter sp among Gram negative germs. In the year following the intervention the sensibility of Gram negative microorganisms to carbenecillin, ceftazidime and ceftriaxone increased and to imipenem decreased. The absence of efficacy of this intervention on clinical outcomes may be due to the insufficient adherence by the clinical staff it or to its inefficacy. The improvement in the antimicrobial sensitivity of some germs, without increasing in costs and in the incidence of adverse events, encourages the use of this or similar rules of restriction of antimicrobial drugs to reduce the resistance rates of bacterial strains in intensive care units.

A presente tese teve como objetivos analisar o padrão de resistência a antimicrobianos de bactérias isoladas de infecções endodônticas agudas por meio de uma revisão sistemática e meta-análise (capítulo 1); identificar e determinar a diversidade genotípica, a sensibilidade bacteriana e os fatores de virulência de anaeróbios facultativos isolados em casos de abscesso apical agudo (capítulo 2); e realizar, por meio de uma proposta de informativo, a difusão de informações geradas com orientações sobre o uso de agentes antibióticos em infecções endodônticas agudas para dentistas e pacientes (capítulo 3). A revisão sistemática foi realizada por meio de pesquisa em base de dados na internet e na literatura cinza até maio de 2015. As normas do PRISMA foram seguidas. Estudos clínicos em humanos que avaliaram o perfil de resistência a antimicrobianos de isolados de infecções endodônticas agudas primárias por meio de métodos laboratoriais foram incluídos. O efeito randômico da Meta-análise foi empregado, e o desfecho foi descrito reunindo as taxas de resistência para cada antibiótico testado. Os dados de sete estudos foram extraídos. A taxa de resistência para 15 diferentes agentes antibióticos foram avaliadas, variando entre 3,5% a 40%. Baixas taxas de resistência foram observadas para amoxicilina + clavulanato e amoxicilina, e altas taxas foram observadas para tetraciclina. No capítulo 2, amostras de canais radiculares foram coletadas de sete dentes com diagnóstico de abscesso apical agudo. Bactérias anaeróbias facultativas foram identificadas com o auxílio de métodos fenotípicos e MALDI-TOF MS. A sensibilidade antimicrobiana das cepas isoladas foi determinada para benzilpenicilina, eritromicina e clindamicina por meio da difusão em disco. Bactérias anaeróbias facultativas foram isoladas de 3 dentes. Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, e Actinomyces viscosus foram identificados. Streptococcus spp. e S. aureus foram sensíveis à benzilpenicilina. E. faecalis (24 cepas) isolados de um mesmo paciente tiveram a sensibilidade antimicrobiana determinada por meio da concentração inibitória mínima para benzilpenicilina, amoxicilina e amoxicilina + clavulanato utilizando-se o E-test. A diversidade genotípica e a presença de fatores de virulência (ace, asa, gelE, efaA, cylA, esp) nas cepas de E. faecalis foi analisada por meio do PFGE e PCR, respectivamente. A expressão da gelatinase e da hemolisina foi testada, e a produção de biofilme quantificada. E. faecalis foram sensíveis aos antibióticos beta-lactâmicos. O mesmo perfil cromossonal de DNA foi revelado para cepas de E. faecalis isoladas. Os genes gelE, ace e efaA foram detectados em 18 cepas. A expressão da gelatinase e a produção de biofilme foram observadas. Cepas de E. faecalis tiveram o mesmo perfil de DNA cromossomal, porém parecem apresentar diferentes perfis de virulência. No capítulo 3 foram apresentadas duas propostas de textos informativos. A primeira com o objetivo de orientar o dentista sobre o uso correto dos antibióticos sistêmicos em endodontia. A segunda visa informar os pacientes sobre a utilização dos antibióticos e esclarecer possíveis dúvidas. / The present thesis aimed to analyze the antimicrobial resistance profile of bacteria isolated from acute endodontic infections through a systematic review and meta-analysis (Chapter 1); to identify and determine the genotypic diversity, antimicrobial susceptibility and virulence factors of isolated facultative anaerobes in isolates from acute apical abscess (Chapter 2); and to provide information for dentist and patients generated from guidelines on the use of antibiotic agents in acute endodontic infections (Chapter 3). The electronic databases and the gray literature were searched up to May 2015 for systematic review. PRISMA guidelines were followed. The clinical studies in of humans that have evaluated the antimicrobial resistance of the isolates of primary acute endodontic infections through laboratorial methods were included. A random effect meta-analysis was employed, and the outcome was described as being the pooled resistance rates for each antimicrobial agent. The data from 7 studies were extracted. The resistance rates for 15 different antimicrobial agents were evaluated, ranging from 3.5% to 40.0%. Lower resistance rates were observed for amoxicillin+clavulanate and amoxicillin, and higher resistant rates were detected for tetracycline. In Chapter 2, root canal samples were collected from seven teeth. Facultative anaerobic bacteria were identified by phenotypic methods and MALDI-TOF MS. Antimicrobial susceptibility of strains was determined to benzylpenicillin, erythromycin and clindamycin by disk-diffusion. Facultative anaerobic bacteria were isolated from 3 teeth. Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, and Actinomyces viscosus were found. Streptococcus spp. and S. aureus were susceptible to benzylpenicillin. E. faecalis strains (n=24) isolated from the same patients had their susceptibility determined by minimum inhibitory concentration of benzylpenicillin, amoxicillin and amoxicillin + clavulanate using the E-test. The genotypic diversity and virulence factors (ace, asa, gelE, efaA, cylA, esp) were analyzed in E. faecalis strains by PFGE and PCR, respectively. Phenotypic expression of gelatinase and cytolysin were tested. Biofilm production was quantified. All the E. faecalis strains were susceptible to β-lactam antibiotics. The same chromosomal DNA fragmentation profile was revealed to E. faecalis strains isolated. The gelE, ace and efaA genes were detected in 18 E. faecalis strains. Gelatinase expression and biofilm production were observed. E. faecalis strains had the same chromosomal DNA profile, but showed virulence profiles different. In Chapter 3, two sugestion for information texts were presented. The first aims to guide dentists on the proper use of systemic antibiotics in endodontics. The second aims to inform patients about the use of antibiotics and clarify possible doubts.

Foi realizado um estudo em resistência bacteriana, com um enfoque especial para o Mycobacterium tuberculosis. Fez-se também uma apreciação das implicações clínicas do fenômeno à luz de levantamentos realizados no Brasil e no exterior. Discutiram-se os testes de sensibilidade, examinando-se seu posicionamento nos programas de saúde pública e em medicina individual. Par atestar a sensibilidade dos bacilos isolados a partir de amostras de escarro de tuberculosos não tratados previamente, empregou-se o método das proporções de Canetti, Rist e Grosset. As drogas utilizadas foram a estreptomicina, hidrazida, rifampicina, estambutol e PAS. A resistência a uma ou mais de uma droga encontrada foi e 12,80%, com predomínio de germes resistentes a uma droga somente. Os medicamentos que com maior freqüência selecionaram mutantes resistentes foram a estreptomicina (6,40%) e hidrazida (5,60%). Os resultados encontrados mostraram semelhanças aos apontados por outros levantamentos.

Enterococcus são associados à microbiota intestinal de mamíferos e aves. Além dos primatas apresentarem estreita relação evolutiva com seres humanos, é pouco conhecido o impacto da resistência antimicrobiana associada às bactérias comensais, como os enterococos. O trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar enterococos isolados de amostras fecais de macacos-prego (Sapajus nigritus) em relação a determinantes de resistência e virulência. As amostras foram coletadas de animais vivendo em cativeiro no Zoológico de Sapucaia do Sul (ZOO) e selvagens, nas cidades de São Sebastião do Caí (SSC) e Santa Cruz do Sul (SCS). As espécies isoladas foram identificadas utilizando a técnica de MALDI-TOF. Estas foram testadas frente a 12 antimicrobianos através do método disco difusão. Genes que conferem resistência à tetraciclina (tetM, tetL e tetS), fluoroquinolonas (gyrA), eritromicina (msrC e ermB) e virulência (agg, esp, cylA, ace e gelE) foram detectados por PCR. Foram identificados 296 isolados de Enterococcus sp. oriundos de 24 amostras fecais de macacos-prego. Destes, 137 eram oriundos de amostras de SSC, 86 de SCS e 73 do ZOO. A espécie mais encontrada foi E. faecalis (42,6 %), seguida de E. hirae (29,4 %) e E. faecium (15,5 %). Cento e noventa e nove amostras (67,2 %) apresentaram suscetibilidade reduzida a antimicrobianos. As amostras apresentaram menos suscetíveis para rifampicina (46,3 %), tetraciclina (26,0 %) e eritromicina (22,3 %). Entre os isolados, E. faecalis (69,0 %) apresentou as maiores frequências de suscetibilidade reduzida. Em relação ao local de coleta, 69,3 % dos isolados das amostras SSC apresentaram suscetibilidade reduzida a antimicrobianos, 69,7 % dos isolados das amostras SCS e 60,2 % dos isolados das amostras do ZOO, sendo atribuído perfil de múltipla resistência a 29 isolados de SSC, 6 isolados SCS e 8 de ZOO. As amostras ZOO apresentaram maiores índices para os genes de resistência msrC (81,8 %), gyrA (60,7 %) e tetL (44,4 %). Para o gene tetM os isolados de SCS apresentaram maior frequência (100 %). As amostras SSC e SCS apresentaram as maiores porcentagens para o gene gelE (100 %). Para esp (3,5 %), ace (93,0 %) e agg (10,5 %), as amostras SCS apresentaram as maiores porcentagens. As presenças de determinantes de resistência e virulência nas amostras foram atribuídas tanto à ação antropogênica encontrada no habitat dos macacos como através do próprio resistoma ambiental. Ainda, a proximidade dos animais com o ser humano demonstrou ser uma das principais fontes de disseminação de resistência bacteriana. / Enterococcus is associated with the intestinal microbiota of mammals and birds. In addition to primates having a close evolutionary relationship with humans, the impact of antimicrobial resistance associated with commensal bacteria, such as enterococci, is little known. The objective of this work was to identify and characterize isolates of enterococci from faecal samples of black capuchin monkey (Sapajus nigritus) in relation to determinants of resistance and virulence. The samples were collected from animals living in the Sapucaia do Sul Zoo (ZOO) and wild, in the cities São Sebastião do Caí (SSC) and Santa Cruz do Sul (SCS). The isolated species were identified using the MALDI-TOF technique. These were tested against 12 antimicrobials using the disc diffusion method. Genes that confer resistance to tetracycline (tetM, tetL and tetS), fluoroquinolones (gyrA), erythromycin (mrsC and ermB) and virulence (agg, esp, cylA, ace and gelE) were detected by PCR. It were identified 296 isolates of Enterococcus sp. from 24 faecal samples of S. nigritus. Of these, 137 were from SSC samples, 86 from SCS and 73 from ZOO. The most common species was E. faecalis (42.6 %), followed by E. hirae (29.4 %) and E. faecium (15.5 %). One hundred and ninety-nine samples (67.2%) presented reduced antimicrobial susceptibility. The samples were less susceptible to rifampicin (46.3%), tetracycline (26.0%) and erythromycin (22.0%). Among the isolates, E. faecalis (69.0%) had the highest frequencies of reduced susceptibility. Regarding the collection site, 69.3% of the SSC isolates presented reduced susceptibility to antimicrobials, 69.7% of the isolates from the SCS samples and 60.2% from the isolates from the ZOO samples, with a multiple resistance profile 29 SSC isolates, 6 SCS isolates and 8 ZOO isolates. The ZOO samples presented higher indices for the resistance genes msrC (81.8%), gyrA (60.7%) and tetL (44.4%). For the tetM gene the SCS isolates showed a higher frequency (100%). The SSC and SCS samples showed the highest percentages for the gelE gene (100%). For esp (3.5%), ace (93.0%) and agg (10.5%), the SCS samples presented the highest percentages. The presences of resistance and virulence determinants in the samples were attributed both to the anthropogenic action found in the monkey habitat and through the environmental resistance itself. Furthermore, the proximity of animals to humans has been shown to be one of the main sources of dissemination of bacterial resistance.