Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-11T17:46:44Z No. of bitstreams: 2 TESE Maria Cecília de Aguiar Remigio.pdf: 2865286 bytes, checksum: 5f99ffbbeb2db0af6e35771c351e1ba8 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T17:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Maria Cecília de Aguiar Remigio.pdf: 2865286 bytes, checksum: 5f99ffbbeb2db0af6e35771c351e1ba8 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-01-08 / Avaliar a espessura da mácula e da camada de fibras nervosas da retina em pacientes com cardiopatia congênita cianótica com a tomografia de coerência óptica de domínio espectral. Realizou-se estudo analítico e de corte transversal. Trinta pacientes com cardiopatia congênita cianótica (18 do gênero feminino e 12 do masculino; média de idade 10,9 anos) e 60 controles (35 do gênero feminino e 25 do masculino; média de idade 11,2 anos) foram submetidos a exame oftalmológico completo e obtidas, pela tomografia de coerência óptica (RTVue, Optovue Inc., Fremont, CA, USA), as medidas de espessura da região macular e peripapilar da camada de fibras nervosas da retina em todos os pacientes. O estudo demonstrou redução significante da espessura central da mácula, assim como das espessuras dos setores parafoveais e perifoveais no grupo dos cardiopatas congênitos cianóticos em relação ao grupo controle (p<0,001). Não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes na medida da espessura da camada de fibras nervosas da retina peripapilar entre ambos os grupos, com exceção do quadrante superior cuja espessura foi maior em pacientes com cardiopatia (p=0,021). Pacientes com cardiopatia congênita cianótica apresentaram uma diminuição significante da espessura macular e um aumento da espessura no quadrante superior da região peripapilar quando comparados com pacientes saudáveis. Isto pode representar o dano provocado pela hipóxia.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:24:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1428_1.pdf: 1530276 bytes, checksum: c003adb44a8919eb2c6bbe932bece3b8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Introdução: A proteína Go&#945;, envolvida com a transdução do sinal do receptor metabotrópico para glutamato, denominado mGluR6 é encontrada em células bipolares do tipo ON que são ativadas pelo estímulo luminoso. Um único estudo prévio indicou que podem ocorrer mudanças na expressão da proteína Go&#945; em um modelo experimental de retinose pigmentar, que cursa com uma perda progressiva de fotorreceptores. Objetivo: 1) O presente estudo visa testar a hipótese de que a expressão da proteína Go&#945; pode ser modificada após o descolamento de retina como um indicativo de remodelagem sináptica. 2) Analisar a eficácia do modelo experimental de descolamento em induzir proliferação intra-retiniana de células de Müller. Métodos: Foram estudadas 14 retinas de 7 ratos Wistar adultos, submetidos a descolamento de retina por 7 dias. As retinas controle e descoladas foram processadas por imunohistoquímica para visualização das proteínas Go&#945; e GFAP. A densidade óptica de cada camada após imunomarcação para Go&#945; foi aferida com o software Image J. Resultados: Observou-se proliferação das células de Müller em todas as retinas descoladas, evidenciando a eficácia do modelo experimental adotado em induzir alterações metabólicas na retina interna. Não foi observada diferença significante na marcação da proteína Go&#945; após o descolamento de retina. Discussão: A ausência de modificações na imunoreatividade da proteína Go&#945; na retina após 7 dias de descolamento sugere que as alterações metabólicas induzidas neste período não foram suficientes para alterar a remodelagem sináptica das células bipolares ON, envolvidas com a ativação do estímulo luminoso. Uma análise quantitativa usando técnicas de Western blotting será utilizada para corroborar os presentes achados

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-16T12:50:27Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - José Mauricio Botto de Barros Garcia - 2016.pdf: 8123708 bytes, checksum: 41021cfcb75d07dae209731f1c85e1a6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-16T12:51:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - José Mauricio Botto de Barros Garcia - 2016.pdf: 8123708 bytes, checksum: 41021cfcb75d07dae209731f1c85e1a6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-16T12:51:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - José Mauricio Botto de Barros Garcia - 2016.pdf: 8123708 bytes, checksum: 41021cfcb75d07dae209731f1c85e1a6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / The purpose of this study is to compare fluorescein angiography and optical coherence tomography (OCT) angiography images of foveal avascular zone (FAZ) in patients with diabetic retinopathy (DR) with and without diabetic macular ischemia. Regarding our methods, the Wilcoxon signedrank test was used to compare area measurements and P values of < 0.05 were considered statistically significant. Fluorescein angiography and OCT angiography images were independently graded by 2 observers that reached agreement regarding quantitative diabetic macular ischemia according established protocols. The ischemic area was divided into “moderate” and ‘‘large’’ macular ischemia (with diabetic macular ischemia) and ‘‘small’’ (without diabetic macular ischemia) groups. Quantitative analyses of the FAZ were performed using custom software (ImageJ64; National Institute of Health - NIH; http://rsbweb.nih.gov/ij/; public domain). Considering our results, thirty-four eyes from 34 diabetic patients were enrolled. Subjects with diabetic macular ischemia presented a mean area on fluorescein angiography and OCT angiography of 0.68 + 0.53 mm2 and 0.58 + 0.35 mm2, respectively (p = 0.1374). Patients without diabetic macular ischemia presented a mean area on fluorescein angiography and OCT angiography of 0.19 + 0.67 mm2 and 0.20 + 0.79 mm2, respectively (p = 0.9594). The ICC for the FAZ measurements between the 2 observers on fluorescein angiography and OCT angiography was 0.96 and 0.92, respectively. Thereby, OCT angiography may represent a novel technique for the diagnosis of diabetic macular ischemia and could become an alternative to FA for this purpose. / O objetivo do presente estudo é comparar as imagens da zona avascular foveal (ZAF) obtidas por meio da angiografia fluorescente e da angiografia por OCT em pacientes com retinopatia diabética (RD), com e sem maculopatia isquêmica diabética. Na metodologia, o Wilcoxon signed-rank test foi usado para comparar as medidas de área e o P valor menor que 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. As imagens de angiografia fluorescente e angiografia por OCT foram classificadas de maneira independente por dois observadores. A área de isquemia foi dividida em isquemia macular “moderada” e “grande” (com maculopatia isquêmica diabética) e “pequena” (sem maculopatia isquêmica diabética). Análises quantitativas da ZAF foram realizadas usando software adequado (ImageJ64; (National Institute of Health - NIH; http://rsbweb.nih.gov/ij/ sob domínio público). De acordo com os nossos resultados, trinta e quatro olhos de 34 pacientes com retinopatia diabética foram avaliados. Indivíduos com maculopatia isquêmica diabética apresentaram uma área média na angiografia fluorescente e angiografia por OCT de 0,68 + 0,53 mm2 e 0,58 + 0,35 mm2, respectivamente (p = 0,1374). Pacientes sem maculopatia isquêmica diabética apresentaram uma área media na angiografia fluorescente e angiografia por OCT de 0,19 + 0,67 mm2 e 0,20 + 0,79 mm2 respectivamente (p = 0,9594). O ICC para as medidas de ZAF entre os dois examinadores usando angiografia fluorescente e angiografia por OCT foi de 0,96 e 0,92, respectivamente, demonstrando a concordância entre os examinadores nas medidas da ZAF. Concluiu-se que, a angiografia por OCT pode representar uma nova técnica para o diagnóstico de maculopatia isquêmica diabética, e pode vir a ser uma alternativa à angiografia fluorescente para este propósito.

O sistema circadiano das aves é composto pela retina, a região homóloga aos núcleos supraquiasmáticos de mamíferos (NSQ) e a glândula pineal. A retina apresenta muitos eventos fisiológicos rítmicos, como por exemplo os movimentos das células fotorreceptoras em vertebrados não mamíferos, a expressão de opsinas, regeneração do cromóforo visual e produção e liberação de melatonina e dopamina. Todos estes eventos rítmicos são coordenados para prever alterações nas condições luminosas que ocorrem durante o dia, otimizando a função retiniana. Neste trabalho foi investigada a expressão de componentes chave de um sistema circadiano, incluindo os dois genes de melanopsina, Opn4x e Opn4m, os genes de relógio Clock e Per2, e os genes das enzimas chave da síntese de melatonina, N-Acetiltransferase, e de dopamina, Tirosina Hidroxilase, em células da retina de embriões de galinha. Culturas primárias de retina de embriões de galinha com 8 dias foram preparadas no ZT0 (quando as luz é acesa) e semeadas na densidade de 107 células por frasco de 25 cm2 . As células foram mantidas em ambiente úmido, com 5% CO2, a 40o C, em escuro constante, fotoperíodo 12C:12E, fotoperíodo 12C:12E seguido de escuro constante, ou em escuro constante na presença e na ausência de glutamato 100 &#956;M por 12 h. A extração de RNA total foi feita ao longo de 24 horas com intervalo de três horas tendo início no ZT0 do sexto dia. As amostras foram submetidas a RT-PCR seguido de PCR quantitativo para a quantificação de RNAm. Para confirmar a expressão da proteína OPN4x foi realizado ensaio imunohistoquímico com anticorpos anti-melanopsina de galinha desenvolvidos em coelho. Também foi feita a quantificação da concentração das proteínas OPN4x, CLOCK e TIROSINA HIDROXILASE através da técnica de Western Blot. A quantificação do RNAm em escuro constante não apresentou ritmos de transcrição para nenhum gene. Já as células mantidas em fotoperíodo 12C:12E apresentaram padrões rítmicos de transcrição para Clock, Per2, Opn4m, N-Acetiltransferase e Tirosina Hidroxilase. Glutamato 100 &#956;M foi eficaz em induzir ritmo em Clock, e inibiu drasticamente a expressão de Tirosina Hidroxilase e, apenas mais pontualmente, de Opn4x e Opn4m. Ensaios de viabilidade celular e fragmentação de DNA por citometria de fluxo demonstraram que essa inibição não foi resultante de ação tóxica ou apoptótica do glutamato. O neurotransmissor não teve qualquer efeito sobre a transcrição de Per2 e de N-Acetiltransferase. A quantificação protéica não indicou a presença de ritmo para CLOCK, OPN4x ou TIROSINA HIDROXILASE. A grande variabilidade inter-ensaios nos resultados de quantificação protéica sugere uma menor sensibilidade e precisão para esse método, quando comparado a PCR quantitativo. Nossos resultados indicam que as células de retina de embrião de 8 dias de galinha em cultura já contêm um relógio funcional, porém, este necessita do ciclo claro-escuro ou glutamato para sua sincronização. / The avian circadian system is composed by the retina, the mammalian homolog region of the supra-chiasmatic nucleus (SNC) and the pineal gland. The retina itself shows many rhythmic physiological events, such as movements of photoreceptor cells, opsin expression, retinaldehyde re-isomerization, melatonin and dopamine production and release. Altogether these rhythmic events are coordinated to predict environmental changes in light conditions during the day, optimizing retina function. In this work we investigated the expression of key components of a circadian system, including the two melanopsin genes, Opn4x, Opn4m, as well as the Clock, Per2, N-Acetyltransferase and Tyrosine Hidroxylase genes in chick embryo retinal cells. Primary cultures of chicken retina from 8-day-old embryos were prepared at ZT0 (lights on) and seeded at the density of 107 cells per 25 cm2 culture flask. The cells were kept in a humidified incubator in a 5% CO2 atmosphere at 40o C in constant dark, in 12L:12D, in 12L:12D followed by constant dark, or in constant dark in the absence or presence of 100 &#956;M glutamate for 12 h starting at ZT0 of the fifth day in vitro. Total RNA extraction was performed along 24 hours every three hours starting at ZT0 of the sixth day. The samples were submitted to RT-PCR followed by quantitative PCR for mRNA quantification. To analyze the Opn4x expression in these cells we performed an immunocytochemistry analysis with antibodies anti-chicken melanopsin developed in rabbit. We also quantified the protein levels of OPN4x, CLOCK AND TYROSINE HYDROXYLASE by Western Blot. The mRNA quantification showed no rhythm of transcription for any gene in cells kept in constant dark. However under a light-dark cycle, Clock, Per2, Opn4m, N-Acetyltransferase and Tyrosine Hydroxylase presented rhythm patterns of transcription. 100 &#956;M glutamate was able to induce rhythmic expression of Clock, and strongly inhibited the expression of Tyrosine Hydroxylase and, just punctually, of Opn4x and Opn4m. Assays of cell viability and DNA fragmentation using flow cytometry demonstrated that the inhibition did not result of glutamate toxic or apoptotic actions. The neurotransmitter had no effect on Per2 and N-Acetyltransferase transcription. Protein quantification by Western Blot showed no rhythmic oscillation of CLOCK, OPN4x or TYROSINE HYDROXYLASE. The great variability inter-assays seen in the results of protein quantification suggests that this method is less precise and sensitive than quantitative PCR. The present data show evidences that chicken embryonic retinal cells contain a functional circadian Clock. However light-dark cycle or glutamate stimuli are needed to its synchronization.

A síntese de melatonina na retina ocorre de maneira circadiana na camada fotorreceptora, e age localmente promovendo a adaptação fisiológica da retina ao escoto-período. Sabendo-se que o estresse oxidativo contribui com o desenvolvimento da retinopatia diabética e que a melatonina é um poderoso antioxidante natural, o objetivo deste trabalho foi avaliar na retina de animais diabéticos o conteúdo de melatonina e as enzimas envolvidas em sua via de síntese. Ratos Wistar (250-280g, 12h/12h claro/escuro) tiveram o quadro diabético induzido por STZ e foram tratados ou não com insulina. Os animais foram sacrificados 3 dias pós-indução. Os resultados mostraram que o diabetes causa a diminuição no conteúdo de melatonina retiniana devido à redução da atividade da AANAT causada pela queda no conteúdo de AMPc. O tratamento com insulina restabeleceu tanto o perfil de atividade da AANAT quanto à síntese de melatonina. Supõe-se que as retinas dos animais diabéticos estão mais vulneráveis aos danos decorrentes do quadro diabético, já que a síntese da melatonina está diminuída. / Melatonin controls several retinal physiologic rhythmic phenomena besides being the most powerful natural free radical scavenger. The aim of this work is evaluating the retinal melatonin diurnal profile of diabetic rats. Male Wistar rats were diabetic-induced by an injection of STZ and some of them were treated with insulin (6U/day). Retinas were obtained throughout the 24h light-dark cycle for retinal melatonin content, enzymes activity, cAMP content and gene expression analysis. Control animals showed a retinal melatonin daily rhythm with high levels at night while diabetic rats presented a reduction. The AANAT activity showed a daily rhythm with high levels at night in the control group. This daily fluctuation was vanished in STZ-induced diabetic rats and insulin-treatment restored both parameters. We suppose the AANAT activity reduction observed is due to the reduced cAMP content. As melatonin plays an important role modulating circadian functions, this impairment could compromise the retinal physiological homeostasis.

published_or_final_version / Physiology / Doctoral / Doctor of Philosophy

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