Orientadores: Jacqueline Mendonça Lopes de Faria, Jose Buttori Lopes de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosales_MarianaAparecidaBrunini_M.pdf: 16380865 bytes, checksum: 2583696b31144f3e138bf4910979d918 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A retinopatia diabética (RD) é a principal causa de cegueira adquirida em adultos em idade produtiva nos países desenvolvidos. A hipertensão (HA) é um importante fator de risco associado ao desenvolvimento da RD. O estresse oxidativo pode explicar como a hiperglicemia inicia os processos bioquímicos envolvidos na patogênese da RD. A retina possui vários mecanismos de defesa para minimizar o estresse oxidativo como "scavengers" de baixo peso molecular e sistemas enzimáticos. Sob condições do diabetes (DM), ocorre um aumento das espécies reativas, como o superóxido (O2·-) e óxido nítrico (NO·), conseqüentes da indução da reação da glicação. O produto desta reação, peroxinitrito (ONOO-), pode diretamente causar lesões em proteínas, lipídios e DNA. Embora muitos mecanismos patológicos da RD sejam focados nos danos vasculares, tem sido descrito que o DM também induza danos nas células de Müller da retina neural que pode anteceder as anormalidades vasculares. A neurodegeneração retiniana pode ser detectada pelo aumento da imunoreatividade da proteína ácidica fibrilar glial (GFAP) em astrócitos e em células de Muller. O acúmulo de matriz extracelular (ECM) é instrumental para a quebra de barreira hematoretiniana da retina presente precocemente na patogênese da RD. O objetivo deste estudo foi investigar a eficácia do antioxidante tempol, mimético da superóxido dismutase (SOD), na prevenção das alterações precoces na retina de um modelo de RD que combina hipertensão e diabetes. Foram utilizados neste estudo ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e seu controle normotenso (WKY) com 4 semanas de idade. O diabetes foi induzido experimentalmente através de injeção intravenosa de estreptozotocina. Após a confirmação da indução do DM, os ratos SHR (DM-SHR) foram randomizados para receber ou não tratamento com injeção de tempol intraperitonealmente (DM-SHR-tempol). Após 20 dias, os ratos foram eutanaziados e suas retinas foram coletadas para extração de proteínas, ensaios colorimétricos e imunohistoquímica. Os animais diabéticos apresentaram os marcadores precoces de RD: houve aumento da expressão do GFAP no grupo SHR e DM-SHR comparado ao grupo WKY e aumento da FN no grupo DM-SHR comparado ao SHR e WKY. O balanço oxidativo, avaliado pela produção de superóxido e pelos produtos finais do óxido nítrico, assim como a defesa antioxidante, estimada pela expressão e atividade da Cu/Zn SOD, revelou um desequilíbrio acentuado no grupo DM-SHR em relação ao grupo SHR e WKY. Como resultado, o produto peroxinitrito detectada por imuno-histoquímica para nitrotirosina (NT) foi maior no grupo DM-SHR. A atividade da enzima poli (ADPribose) polimerase (PARP) detectada pela ribosilação, e a super regulação da expressão da óxido nítrico sintase induzida (iNOS) foram exacerbadas neste grupo. A administração do TEMPOL impediu o dano oxidativo, reduziu a ativação exacerbada da PARP e diminuiu os níveis de i-NOS nos ratos DM-SHR. Como conseqüência, os marcadores estruturais precoce da RD, GFAP e FN, foram prevenidos pelo TEMPOL. Estes resultados fornecem uma base racional para o desenvolvimento com fins farmacológicos do TEMPOL na prevenção e tratamento da RD. / Abstract: Diabetic retinopathy (DR) is the leading cause of blindness among working-age adults in developed countries. Hypertension (HA) is an important risk factor associated with the development of DR. Oxidative stress may explain how the hyperglycemia initiates the biochemical processes involved in the pathogenesis of DR. The retina has several defense mechanisms to minimize oxidative stress as scavengers of low molecular weight and enzyme systems. Under conditions of diabetes (DM), there is an increase of reactive species such as superoxide (O2o -) and nitric oxide (NO o), induced by glycation reaction. The product of this reaction, peroxynitrite (ONOO-), can directly damage proteins, lipids and DNA. Although many pathologic mechanisms of DR have been focused on vascular damage, it has been reported that DM also induces damage in nonvascular retinal neurons of Müller cells occurred prior to vascular abnormalities. The retinal neurodegeneration can be detected by increased immunoreactivity of glial fibrillary acidic protein (GFAP) in astrocytes and Muller cells. The extracellular matrix accumulation (ECM)) is instrumental to blood retinal barrier breakdown present in early pathogenesis of DR. The objective of this study was to investigate the efficacy of the antioxidant TEMPOL, mimetic of superoxide dismutase (SOD) in the prevention of early changes in the retina in a model that combines hypertension and diabetes. Four-week-old spontaneously hypertensive rats (SHR) and their normotensive control (WKY) were used in this research. Diabetes was induced experimentally by intravenous injection of streptozotocin. SHR diabetic (DM-SHR) rats were andomized to receive or not treatment with intraperitoneal injection of tempol (DM-SHR-tempol). fter 20 days, the rats were euthanized and their retinas were collected for protein extraction, colorimetric assays and immunohistochemistry. The presence of exacerbated early markers of DR was detected by increased GFAP expression in SHR and SHR-DM group compared to WKY and FN in group DM-SHR compared to SHR and WKY. The oxidative balance, evaluated by superoxide production and nitric oxide end-product levels and the counterpart antioxidant defense, estimated by the expression and activity of Cu / Zn SOD showed a marked unbalance in DM-SHR group compared to SHR and WKY group. As a result, the product peroxynitrite detected by immunohistochemistry for nitrotyrosine (NT) was higher in the DM-SHR. The activity of the enzyme poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) detected by ribosylation, and the upregulation of inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression were exacerbated in this group. The administration of TEMPOL prevented the oxidative damage, reduced the exacerbated activation of PARP and decreased iNOS levels in DM-SHR rats. As a result, the structural markers of early RD, GFAP and FN, were prevented by tempol. These findings provide a rationale for the development with pharmacological purposes of tempol in the prevention and treatment of DR. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Diabete Melito (DM) é uma endocrinopatia frequentemente diagnosticada na clínica de pequenos animais e desenvolve-se pela deficiência relativa ou absoluta de insulina, sendo caracterizada pela hiperglicemia crônica. Complicações associadas ao DM são frequentes, dentre elas podemos citar catarata e retinopatia. A catarata, que é a oftalmopatia mais frequente nos cães, impossibilita à fundoscopia e nestes casos a avaliação da função retiniana pode ser feita com o auxílio do eletrorretinograma de campo total. O objetivo deste estudo foi avaliar a progressão da retinopatia diabética por meio de eletrorretinograma (ERG) de campo total pré e pós-operatória (180 dias) em cães portadores de catarata madura e hipermadura submetidos à facoemulsificação. Vinte e quatro cães (Grupo Diabético (DM) = 12 cães; Grupo Não Diabético (NDM) = 12 cães) de raças diversas foram avaliados. Previamente ao ERG, todos os cães foram submetidos ao exame oftalmológico completo e ultrassom ocular. Todos os cães foram sedados seguindo o mesmo protocolo. ERG de campo total foi realizado com sistema eletrodiagnóstico Veris 2000 e cúpula de estimulação (Ganzfeld), segundo o protocolo da ISCEV contendo 5 respostas. Para obtenção dos registros utilizou-se eletrodo bipolar Burian Allen. Avaliou-se a amplitude pico a pico das 5 respostas e o tempo de culminação da onda-b na resposta de bastonetes, máxima resposta, cones e flicker para cada registro em condições escotópicas e fotópicas. As respostas obtidas em cada olho no momento basal e após 6 meses foram comparadas por meio do teste de Wilcoxon. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para comparação de respostas dos olhos operados (OP) com os olhos contralaterais (OC), assim como para comparação entre os grupos DM e NDM. O efeito da cirurgia e do tempo de DM foi ainda avaliado por meio do cálculo das diferenças entre as respostas no momento pré e pós 6 meses de cada olho (delta OP e delta OC). Observou-se diferenças entre OP e OC, no momento pré, nas respostas dos bastonetes e da máxima resposta (amplitude e tempo de culminação onda-b). No momento pós, foram observados diferenças entre OP e OC no tempo de culminação dos bastonetes e flicker, e nas amplitudes do potencial oscilatório, cones e flicker. No grupo NDM, não foram observados diferenças entre os momentos pré e pós assim como entre OP e OC. Quando comparadas as respostas dos grupos DM e NDM, observou-se valores significativamente maiores no grupo DM, no tempo de culminação da onda-b na máxima resposta do OP no momento pós, no tempo de culminação da onda-b na máxima resposta OC no momento pós e no tempo de culminação da onda-b da resposta de cones no momento pré cirurgia. Não foram observados diferenças entre delta OP e delta OC dentro de cada grupo e entre os grupos. Todos os pacientes que participaram do estudo recuperaram a visão após a cirurgia, sugerindo que a inflamação pós cirúrgica foi controlada com a medicação prescrita nos 2 grupos estudados. Conclui-se que a facoemulsificação representa mínimo impacto na evolução da retinopatia diabética em cães. A remoção cirúrgica da catarata não deve ser contraindicada nesta espécie, independentemente se o animal é ou não portador de DM, por resultar em melhoria da visão. / Diabetes mellitus (DM) is a common endocrinopathy in the small animals practice and it develops as a relative or absolute insulin deficiency characterized by a chronic hyperglycemia. There are frequent complications, such as cataracts, retinopathy, resulting in visual impairment. Cataracts are dogs most frequent ophthalmic affection and, since it prevents fundoscopic examination, full-field electroretinography is used for retinal functional evaluation. Therefore, to provide a better understanding of diabetic retinopathy (DR) progression in dogs with mature and hypermature cataracts undergoing phacoemulsification surgery, this study aims to analyze the full-field electroretinogram prior and 180 days post cataracts removal. Twenty four dogs (diabetic group (DM) = 12 dogs and non-diabetic group (NDM) = 12 dogs), from different breeds were evaluated. Before the ERG, all animals were submitted to a complete ophthalmic examination and ocular ultrasonography. All dogs were sedated following the same anesthetic protocol. The full-field ERG was recorded using 2000 VERIS system and a dome stimulator (ganzfeld) according to ISCEV five response standard. The recordings were obtained using bipolar Burian Allen electrodes. Peak to peak amplitude five response and b-wave culmination time in rod responses, maximum response, cone and flicker were evaluated in scotopic and photopic conditions. The responses obtained in each eye at baseline and after 6 months were compared using the Wilcoxon test. The Mann-Whitney test was used to compare the responses of the operated eyes (OP) and the contralateral eyes (OC) as well as for comparison between groups DM and NDMAs. The effect of surgery and duration of DM was assessed by calculating the differences between the responses prior and six months after surgery, of each eye (delta delta OP and OC). There were differences between OP and OC, in the baseline values, in rod responses and maximum response (amplitude values and b-wave implicit time). After phacoemulsification, differences were observed between OP and OC in b-wave implicit time of rods and flicker, and the amplitudes of the oscillatory potentials, cone and flicker. In the NDM group, no differences were observed between pre and post evaluations between OP and OC. Comparing the responses of DM and NDM groups, there were significantly higher values in the DM group, in b-wave implicit time and in maximum response of OP after caratact removal, and also, of the b-wave implicit time in the maximum response in OC after surgery and, finally, in the b-wave implicit time of cone response prior to the surgery. No differences were observed between delta OP and delta OC within each group and between groups. All patients recovered vision after surgery, suggesting that post-surgery inflammation was controlled by the prescribed medication in both groups. The phacoemulsification surgery did not appear to have a great impact on diabetic retinopathy evolution in dogs. Cataract surgery should not be contraindicated in this species, regardless of the presence of DM, as it can result in sight improvement.

O presente estudo avaliou diferentes aspectos funcionais da visão de diabéticos do tipo 2 com e sem retinopatia diabética. A visão desses pacientes foi avaliada em diferentes níveis do sistema visual por meio da aplicação de uma bateria de testes psicofísicos e eletrofisiológicos de grande sensibilidade. O objetivo foi caracterizar as alterações visuais provocadas pela doença antes do aparecimento de retinopatia, e avaliar o efeito da presença da retinopatia sobre as alterações funcionais precoces. Materiais e métodos: 31 pacientes diabéticos com retinopatia não proliferativa leve (15 , 16 ; idade = 59 ± 09; tempo de diabetes = 10 ± 06 anos); 36 pacientes diabéticos sem retinopatia (16 , 20 idade = 56 ± 11; tempo de diabetes = 06 ± 04 anos) e 30 sujeitos controle (13 , 17 ; idade = 44 ± 10 anos) foram submetidos a exames de (1) eletrorretinograma multifocal - mfERG; (2) sensibilidade ao contraste acromático segregada em componentes magno (MC) e parvocelulares (PC) Teste do pedestal; (3) perimetria visual computadorizada branco/branco e azul/amarelo e (4) teste quantitativo de visão de cores Teste de cores de Cambridge. A comparação dos dados de pacientes e controles foi feita com ANOVA e a comparação da capacidade de detecção do dano funcional entre os testes foi feita por meio da análise de curvas ROC. Resultados: ambos os grupos de pacientes manifestaram perdas significantes no mfERG, sensibilidade ao contraste e visão de cores. Em ambos os protocolos de perimetria apenas os pacientes com retinopatia tiveram perdas significativas. As respostas de pacientes com e sem retinopatia não foram significantemente diferentes na maior parte das medidas. Diferenças significativas foram encontradas entre os dois grupos em parte das latências do mfERG e na visão de cores, nos limiares do eixo tritan,. Na análise entre testes, o mfERG teve os maiores índices de sensibilidade e especificidade, seguido por visão de cores, sensibilidade ao contraste e perimetria, nesta ordem. Na comparação das áreas sob as curvas ROC não houve diferença significativa apenas entre os testes 1, 2 e 4. Conclusões: foram encontradas perdas funcionais estatisticamente significativas na avaliação psicofísica e eletrofisiológica da visão de pacientes diabéticos do tipo 2 sem e com retinopatia diabética. O presente trabalho confirma e amplia o crescente corpo de evidencias de perdas funcionais observadas precocemente no curso da diabetes, na ausência de alterações morfológicas (vasculares) detectáveis na retina. A interpretação dessas perdas precoces é de que tenham origem neural. Nossos achados indicam que a presença de retinopatia leve não teve efeito significativo sobre a maior parte dos aspectos funcionais analisados, corroborando a noção de origem neural das perdas. O efeito da diabetes sobre a função neural não parece ser específico a nenhuma das vias de processamento visual, como indicado pelos testes de sensibilidade ao contraste e de visão de cores. Os achados deste trabalho confirmam a hipótese de que, para o sistema visual, a diabetes seja uma doença neurodegenerativa da retina que pode estabelecer- se mesmo na ausência de retinopatia. Assim, a avaliação dos aspectos funcionais da visão deve ser melhor que a avaliação morfológica da retina para a identificação de pacientes diabéticos sob risco de perda visual. / The present study evaluated different aspects of visual function in type 2 diabetics both with and without retinopathy. The approach was to evaluate vision at several levels of the visual system by means of application of a battery of modern, sensitive psychophysical and electrophysiological tests. The goals were to characterize the changes in visual function underlying the disease prior to the onset of retinopathy, and to verify how the early losses are affected once retinopathy has occurred. Materials and methods: 31 diabetic patients with non-proliferative retinopathy (15 , 16 ; age = 59 ± 09 years; duration of diabetes = 10 ± 06 years); 36 diabetic patients without retinopathy (16 , 20 ; age = 56 ± 11 years; duration of diabetes = 06 ± 04 years) and 30 controls (13 , 17 ; age = 44 ± 10 years) were evaluated with: (1) multifocal electroretinogram - mfERG; (2) achromatic contrast sensitivity segregated into magno- (MC) and parvocellular (PC) pathways Pedestal test; (3) white-onwhite and blue-on-yellow computerized visual perimetry and (4) quantitative computerized color vision test Cambridge Colour Test (CCT). An ANOVA was performed for the statistical comparison among groups and ROC curve analysis was used to compare the diagnostic power of the different tests. Results: both diabetic patient groups manifested significant functional losses compared to controls in the mfERG, the Pedestal test and the CCT. In the mfERG, both patient groups had significantly smaller amplitudes and longer latencies than controls in one or more of the signature mfERG waveform components. For the Pedestal Test, both patient groups manifested losses in both the M-targeting and P-targeting paradigms. The CCT chromatic discrimination test found significant losses along all three color confusion axes (protan, deutan, tritan) in both patient groups. In the visual fields, only the patients with retinopathy exhibited significant losses compared to controls. In the comparison between patients with and without retinopathy, no statistical differences between results were found, except for some of the mfERG latencies and the color discrimination in the tritan axis. The ROC analysis showed that the mfERG had the higher combined sensitivity and specificity indexes, followed by the CCT, pedestal test and perimetry with decreasing indexes in this order. Conclusions: statistically significant losses were found in psychophysical and electrophysiological assessment of visual function of type 2 diabetic patients with and without diabetic retinopathy. The present work strongly confirms the growing body of evidence that functional losses with neural etiology occur in type 2 diabetes before any vascular changes are clinically detectable in the retina. In the majority of the measures, the presence of retinopathy increased the functional losses, but did not determine significant differences in relation to the losses observed in the diabetics with normal fundus. According to our results from the Pedestal Test and the Cambridge Colour Test, the neural damage is not selective to either of the visual processing pathways. The results are consistent with the hypothesis that diabetes is a neurodegenerative disease of the retina whose establishment may occur even in the presence of retinopathy. Thus, the assessment of functional status rather than morphological examination seems a better approach to identify diabetic patients under vision threat.

Orientador: Carlos Eduardo Steiner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T13:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_NilmaAlmeidade_M.pdf: 1405023 bytes, checksum: 12e3861c31dae0e759ab571d2d029476 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A retinopatia diabética é uma complicação freqüente no diabetes melito tipo 1, acometendo quase a totalidade de pacientes, em graus variados, após 20 anos de doença. A interferência de fatores ambientais como a manutenção de um estado hiperglicêmico na sua fisiopatologia já foi comprovada, mas ainda não foi esclarecido porque alguns pacientes desenvolvem essa complicação de maneira grave e precoce. Nos últimos anos, diversos estudos têm sugerido a participação de fatores genéticos nesse processo. O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), potente indutor da angiogênese, foi associado à retinopatia diabética por alguns autores, pelo aumento da sua expressão, em virtude de mutações em sua região promotora. Neste trabalho foi realizada uma avaliação clínico-laboratorial, a análise do SNP rs833061 (- 460) e a pequisa da deleção de 18 pares de bases em -2549, ambas na região promotora do gene VEGF em 114 pacientes com diabetes melito tipo 1, de três centros de referência em diabetes no Brasil ¿ Hospital das Clínicas da Unicamp, Instituto Estadual de Diabetes e Endocrinologia Luiz Capriglione (RJ) e Santa Casa da Misericórdia de São Paulo (SP). Houve associação entre retinopatia diabética proliferativa e nefropatia, porém nenhum paciente apresentou a deleção em -2549, nem o alelo -460 C em homozigose. Tais resultados sugerem que esses polimorfismos na região promotora do gene VEGF não interferem na predisposição à retinopatia diabética na população estudada e que outros agentes ambientais e/ou genéticos devem ser significativos / Abstract: Diabetic retinopathy is a frequent complication of diabetes mellitus type 1 and almost all patients develop it after twenty years of disease. The causes of these complications are not clear, but several environmental factors such as chronic hyperglicaemia may act in this predisposition, however, it is not clearly understood why some individuals develop it in a severe and precocious way. The participation of genetic factors as the vascular endothelial growth factor (VEGF), a potent angiogenic mediator, was already confirmed for some authors. In this study we investigate whether polymorphisms in VEGF gene are associated with proliferative diabetic retinopathy. One hundred-fourteen patients with diabetes mellitus type 1 underwent a clinical and laboratorial study, as well as the analysis of two polymorphisms: rs833061 and the deletion of 18 bp at -2549 both on the promoter region of the VEGF gene. There was an association between nephropathy and retinopathy in our patients but none of the individuals presented the deletion at -2549 or the allele C in rs833061 in homozygous state. These results suggest that such polymorphisms in the promoter region of the VEGF gene do not interfere in the predisposition to diabetic retinopathy in our population and that other environmental and/or genetic factor may be more relevant / Mestrado / Genetica Medica / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Jacqueline Mendonça Lópes de Faria, José Butori Lopes de Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T10:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosales_MarianaAparecidaBrunini_D.pdf: 28953374 bytes, checksum: e9a2824bad639c7cbd3628c24c4308ad (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A patogênese da retinopatia diabética (RD) está associada ao estresse nitrosativo. Alterações na barreira hemato-retiniana (BHR) externa, formada pelas células do epitélio pigmentar da retina (EPR), estão associadas às fases precoces da RD e podem acarretar no desequilíbrio da manutenção dos fotorreceptores e consequentemente promoverem mudanças nas células neuronais da retina. O estresse nitrosativo como conseqüência do aumento da produção de óxido nítrico (NO¿) produzido pela super expressão da óxido nítrico sintetase induzida (iNOS) esteve presente em todas as camadas da retina, inclusive no EPR em condições de RD experimental in vivo precoce ou na linhagem celular humana do EPR (ARPE-19) expostas à alta concentração de glicose. O tratamento com agentes químicos como a S-nitrosoglutationa (GSNO), ou naturais (cacau enriquecido com polifenol) atuaram em diferentes vias de inibição da iNOS, prevenindo o estresse nitrosativo. Para o estudo in vivo com o colírio de GSNO (artigo I) foram utilizados animais espontaneamente hipertensos (SHR) com 4 semanas de idade. O diabetes (DM) foi induzido por STZ. Após a confirmação do DM (48 horas), os animais foram divididos em 6 grupos: controles (CTs) veículo; GSNO 900nm e GSNO 10?m ou DMs veículo; GSNO 900nm e GSNO 10?m. O efeito do tratamento com colírio de GSNO foi dependente da presença ou ausência da condição do DM. Nos animais CT, o GSNO atuou como um agente nitrosativo e nos animais DM preveniu o aumento da expressão da iNOS, preservando a retina funcional. Os estudos in vitro, demonstraram que o efeito do GSNO foi deletério ou protetor dependente da concentração de glicose. Nas células ARPE-19 expostas a condições normais de glicose, o tratamento promoveu um aumento na produção de NO¿ sem aumentar a expressão de iNOS e nas células sob alta glicose induziu uma modificação pós-translacional de proteína, a S-glutationilação da iNOS prevenindo o estresse nitrosativo. No estudo do cacau (artigo II), foi avaliado in vitro (ARPE-19 exposta a alta concentração de glicose) o seu efeito protetor dependente da concentração de polifenóis. Para isso foram testadas duas formulações de cacau que diferiram somente na concentração de polifenol: 0,5% para o cacau com baixo teor de polifenol e 60,5% para o cacau com alto teor de polifenol. A epicatequina (EC), encontrada na concentração de 12% no cacau com alto teor de polifenol foi tão eficaz quanto o próprio e esteve envolvida no controle da expressão da iNOS através da estimulação do receptor ?-opióide (DOR) diminuindo os níveis de TNF-?. A modulação da iNOS, preveniu a S-nitrosilação da caveolina-1 (CAV-1) e diminuição da expressão das junções intercelulares claudina-1 e ocludina através da prevenção da interação CAV-1?junções. Em ambos os estudos, o alvo terapêutico foi a iNOS em duas diferentes modalidades: modificação pós-translacional de proteína e modulação do TNF-? via DOR no EPR em modelos experimentais de RD. Os tratamentos apresentados neste trabalho demonstraram a iNOS como alvo terapêutico e mostraram-se eficaz em conter danos funcionais e morfológicos promovidas pela situação de mimetismo do DM no EPR demonstrando o importante papel da iNOS no desenvolvimento da RD / Abstract: The pathogenesis of diabetic retinopathy (DR) is associated with nitrosative stress. Changes in outer blood-retinal barrier (BRB), formed by retinal pigment epithelium cells (RPE) are associated in the early stages of DR and can cause imbalance in the maintenance of photoreceptors and thereby cause changes on retinal neuronal cells. The nitrosative stress as a result of increased production of nitric oxide (NO) produced by overexpression of nitric oxide synthase (iNOS) was present in all layers of the retina and mainly in RPE cells in early in vivo experimental DR or in human RPE cell line (ARPE-19) exposed to high glucose condition. Therapy with chemical agents such as S-Nitrosoglutathione (GSNO) or natural compounds (enriched cocoa polyphenol) acted in different pathways of iNOS inhibition, preventing nitrosative stress. For the in vivo study with GSNO eye drops (article I), it were used spontaneously hypertensive rats (SHR) rats with 4 week old. Diabetes (DM) was induced by streptozotocin (STZ). After DM confirmation (48 hours), the animals were divided into 6 groups: controls (CTs) vehicle; GSNO 900nm and GSNO 10?m or DMs vehicle; GSNO 900nm e GSNO 10?m. The effects of treatments were dependent on glucose concentration. In CT animals, GSNO acted as a nitrosative agent and in DM rats prevented iNOS overexpression, preserving the retina function. In vitro study showed that GSNO protective or deleterious effects were dependent on the glucose concentration. In ARPE-19 cells exposed to normal glucose, the treatment promoted an increase of NO¿ production without increase iNOS expression and in cells under high glucose (HG) condition induced post-translational protein modification, S-glutationylation of iNOS, preventing nitrosative stress. In the study with cocoa (article II), it was evaluated its protective effect dependent on concentration of polyphenols in ARPE-19 cells under HG condition. For this study, the composition of cocoa was the same in both preparations with the only difference in the amounts of polyphenol, 0.5% for low polyphenol cocoa (LPC) and 60.5% for high polyphenol cocoa (HPC). Epicatechin (EC), found in 12% of HPC was similarly protective compare to HPC and it was involved in controlling iNOS expression by stimulation of the delta opioid receptor decreasing TNF- ? levels. The modulation of iNOS prevented S-nitrosylation of caveolin-1 (CAV-1) and decreased expression of claudin-1 and occluding tight junctions by preventing CAV-1/junctions interactions. The treatments presented here showed iNOS as a therapeutic target containing functional and morphological changes promoted by DM milieu in RPE showing the important role of iNOS in the development of DR / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Alterações macro e microvasculares ocorrem no Diabetes Mellitus (DM). A Retinopatia Diabética (RD) é uma complicação bem prevalente do DM e resulta de microangiopatia generalizada no tecido retiniano que, em diferentes estágios da doença, se observa como edema local, exsudatos, formação de neovasos e hemorragias, sendo a principal causa de cegueira na faixa etária de 20 a 74 anos. Alguns fatores angiogênicos são apontados como possíveis mediadores no desenvolvimento das alterações microvasculares no DM. Dentre eles, a Eritropoietina (EPO), hormônio glicoproteico, possui expressão mediada por alelos específicos do gene EPO. Determinados perfis genéticos para três SNPs-single nucleotide polymorphisms do gene EPO (rs1617640, rs507392, rs551238) encontram-se associados com maiores concentrações de EPO no humor vítreo de pacientes diabéticos com RD, o que pode ser indicativo da relação entre determinado genótipo de risco (TTA) e o desenvolvimento de tal comorbidade. O presente trabalho pretendeu investigar a associação entre o genótipo considerado de risco para o desenvolvimento de RD e alterações funcionais na visão de cores de pessoas com diagnóstico de DM. Tal estudo contou com uma amostra de 95 diabéticos (49 mulheres e 46 homens, média de idade: 48,33 anos; DP: 16,90), com um total de 31 DM tipo 1 e 64 tipo 2 e 114 controles (73 mulheres e 41 homens, média de idade: 38,38 anos; DP: 12,81). Foi realizada avaliação através de teste psicofísico (Cambridge Colour Test CCT), que visou medir o limiar de discriminação nos três eixos de confusão de cores e sequenciamento genético, a partir de amostras de sangue. Para os diabéticos, no eixo de confusão protan, os resultados mostraram uma piora de desempenho para o genótipo TTA/GCC (p= 0,048), com relação aos controles. No eixo de confusão deutan, não houve diferença para qualquer dos genótipos (p= 0,0207), enquanto que para o eixo tritan, o genótipo TTA/GCC esteve associado a uma piora de desempenho (p=0,014). Para os controles, não houve diferença entre os genótipos. Assim, os resultados mostraram uma piora na visão de cores de pacientes DM, associada ao haplótipo TTA/GCC / Diabetic Retinopathy (DR), a prevalent complication of diabetes, is the leading cause of blindness among those aged 20-74 years. Micro and macrovascular changes occur in Diabetes Mellitus (DM) with DR being the most common among these vascular complications, resulting in generalized retinal microgangiopathy. At different stages of the disease, localized edema, exudates and hemorrhages occur. Several pro-angiogenic factors have been suggested as possible mediators in the development of these microvascular changes. Among them is erythropoietin (EPO), a glycoprotein hormone whose expression is mediated by specific alleles of the EPO gene. Specific genetic profiles for three single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the EPO gene (rs1617640, rs507392, rs551238) are associated with larger EPO concentrations in the vitreous humor of diabetic patients with RD. This association indicates a possible relationship between the identified genotypes (TTA) and the comorbidity´s development. This work aimed to investigate the association between genotypes considered at risk for the development of DR and functional changes in color vision among individuals diagnosed with DM. Thus, this study included a sample of 95 diabetic patients (49 women and 46 men, average age: 48.33 years; SD: 16.90), with a total of 31 DM type 1 and 64 type 2 and 114 controls (73 women and 41 men, average age: 38.38 years; SD: 12.81). Evaluation was performed using a psychophysical test (Cambridge Colour Test -CCT), to measure the discrimination threshold in three-color confusion axes in addition to genetic sequencing. In the protan axis of confusion color, performance among diabetics with the TTA/GCC genotype was significantly lower (p=0.048) than those in the control group. The results showed a poorer performance among those with the TTA / GCC genotype (p = 0.048), compared to controls. In deutan axis confusion, there was no difference among any of the genotypes (p = 0.0207), while for the tritan axis, the TTA / GCC genotype was associated with a poorer performance (p = 0.014). For the controls, there was no difference between genotypes. Thus, the results showed a worsening in color vision among DM patients associated with TTA / GCC haplotype

Submitted by Filipe dos Santos (fsantos@pucsp.br) on 2016-11-29T11:27:04Z No. of bitstreams: 1 Maurício Aguiar de Paula.pdf: 1738364 bytes, checksum: 310f918b6425fcb252dd0eefbda88d2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T11:27:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maurício Aguiar de Paula.pdf: 1738364 bytes, checksum: 310f918b6425fcb252dd0eefbda88d2c (MD5) Previous issue date: 2016-09-30 / Introduction: Diabetic retinopathy (DR), a frequent complication and one of the main preventable causes of blindness in Brazil and worldwide, it is asymptomatic in the early stages. The inappropriate metabolic and pressoric control is related to its onset and progression. Typically, diabetic patients seen in primary care of the Unified Health System (SUS) in Sorocaba and region are referred to the specialized service of ophthalmology (Ophthalmologic Hospital of Sorocaba - HOS) only when symptoms are already at an advanced stage of DR, which it requires ophthalmic intervention as laser or even surgery. For the accomplishment of these procedures is needed clinical setting that currently occurs in the primary care by generating counter-delay, low resolution and resulting social, economic and individual losses (even blindness). Objectives Create and offer multidisciplinary program of intensive clinical setting and diabetes education (DE) to patients with diabetic retinopathy (DR) treated at HOS; assess possible changes in the level of understanding and metabolic control of this population after attending the program; assess development in ophthalmologic table after the intervention referred to completion of the proposed procedures compared to similar people who did not undergo intervention; analyze the costs of treatment of DR forward the alternative of timely and intensive clinical setting, inserted in the specialized eye care process. Materials and Methods The program consisted of four individual medical care in consecutive weeks with support of groups of DE, with the aid of "Conversation Maps"™, in the first and third weeks. Therapeutic adjustments were based on clinical evaluation and structured blood glucose monitoring map analysis of seven measures of the three interleaved days preceding the next attendance. One group underwent clinical-educational intervention (n = 24) and another, control (n = 24) only assesseded the data obtained from medical records. Both had the same clinical characteristics. The intervention group was assessed before and after in terms of knowledge about DM, treatment adherence and attitudes in fighting the disease with appropriate questionnaires. It was compared the evolution of the ophthalmic conditions under the two groups on the achievement of specified procedures and costs involved in the activities of each clinical setting process: current (primary care) and proposed by the study. For economic analysis the activities of each clinical setting process were focused, defined its unit costs and compared alternatives through the cost-effective method. Results There were significant differences in the intervention group with improved of glycemic control, higher rate of accomplishment of scheduled procedures (96% vs. 48%; p = 0.00), lower performance time (1.2 month vs. 5 months) and better cost-effectiveness ratio. It proved to be a significant increase in knowledge about the disease, treatment adherence and improved attitude to the disease. Discussion Intensive clinical setting program with DE in support for patients with DR at an advanced stage offered in a specialized service as an alternative to currently practiced in primary care is more cost-effective, takes place in less time and can minimize personal losses, social and institutional arising from the development of DR related to inadequate clinical control / Introdução: A retinopatia diabética (RD), complicação frequente e uma das principais causas evitáveis de cegueira no Brasil e no mundo, é assintomática em estágios iniciais. O controle metabólico e pressórico inadequado está relacionado com sua instalação e progressão. Habitualmente, pacientes diabéticos atendidos na atenção primária em Sorocaba e região são encaminhados para o serviço especializado de oftalmologia (Hospital Oftalmológico de Sorocaba - HOS) apenas quando apresentam sintomas, já em estágio avançado da RD, o que exige intervenção oftalmológica, como o laser ou mesmo, cirurgia. Para a realização destes procedimentos há necessidade de ajuste clínico que, atualmente, ocorre na rede básica através de contrarreferência, gerando demora, baixa resolutividade e consequentes perdas sociais, econômicas e individuais (até cegueira). Objetivos Criar e oferecer programa multiprofissional de ajuste clínico intensivo e de educação em diabetes (ED) a pacientes com RD atendidos no HOS; avaliar possíveis mudanças no nível de entendimento e no controle metabólico desta população após a participação no programa; avaliar a evolução do quadro oftalmológico após a intervenção com relação a realização dos procedimentos propostos em comparação com população semelhante que não sofreu a intervenção; analisar os custos do tratamento da RD frente a alternativa de ajuste clínico oportuno e intensivo, inserido no processo de atendimento oftalmológico especializado. Material e Métodos O programa consistiu de quatro atendimentos médicos individuais em semanas consecutivas com suporte de ED, com auxílio de “Mapas de Conversação”™, na primeira e terceira semanas. Os ajustes terapêuticos basearam-se na avaliação clínica e análise da automonitorização glicêmica estruturada com sete medidas de três dias intercalados que antecediam o próximo atendimento. Um grupo sofreu intervenção clínico-educativa (n=24) e do outro, controle, (n=24) apenas avaliou-se os dados de prontuário. Ambos apresentavam as mesmas características clínicas. O grupo intervenção foi avaliado antes e após quanto ao conhecimento sobre DM, adesão ao tratamento e atitudes no enfrentamento da doença com questionários apropriados. Comparou-se a evolução do quadro oftalmológico nos dois grupos quanto à realização dos procedimentos indicados e custos envolvidos nas atividades de cada processo de ajuste clínico: o usual (da rede básica) e o proposto pelo estudo. Para a análise econômica foram mapeadas as atividades de cada processo de ajuste clínico, definidos seus custos unitários e comparadas as alternativas através do método de custoefetividade. Resultados Constatou-se diferença significante no grupo intervenção com melhora do controle glicêmico, maior taxa de realização de procedimentos agendados (96% vs 48%; p=0,00), menor tempo de realização (1,2 mês vs 5 meses) e melhor índice custo-efetividade. Comprovou-se incremento significante no conhecimento sobre a doença, adesão ao tratamento e na melhora da atitude frente à doença. Discussão Programa de ajuste clínico intensivo com suporte em ED para pacientes com RD em estágio avançado oferecido em serviço especializado como alternativa ao atualmente praticado na atenção primária tem melhor relação custo-efetividade, transcorre em menor tempo e pode minimizar as perdas pessoais, sociais e institucionais decorrentes da evolução da RD relacionada ao controle clínico inadequado

Alterações macro e microvasculares ocorrem no Diabetes Mellitus (DM). A Retinopatia Diabética (RD) é uma complicação bem prevalente do DM e resulta de microangiopatia generalizada no tecido retiniano que, em diferentes estágios da doença, se observa como edema local, exsudatos, formação de neovasos e hemorragias, sendo a principal causa de cegueira na faixa etária de 20 a 74 anos. Alguns fatores angiogênicos são apontados como possíveis mediadores no desenvolvimento das alterações microvasculares no DM. Dentre eles, a Eritropoietina (EPO), hormônio glicoproteico, possui expressão mediada por alelos específicos do gene EPO. Determinados perfis genéticos para três SNPs-single nucleotide polymorphisms do gene EPO (rs1617640, rs507392, rs551238) encontram-se associados com maiores concentrações de EPO no humor vítreo de pacientes diabéticos com RD, o que pode ser indicativo da relação entre determinado genótipo de risco (TTA) e o desenvolvimento de tal comorbidade. O presente trabalho pretendeu investigar a associação entre o genótipo considerado de risco para o desenvolvimento de RD e alterações funcionais na visão de cores de pessoas com diagnóstico de DM. Tal estudo contou com uma amostra de 95 diabéticos (49 mulheres e 46 homens, média de idade: 48,33 anos; DP: 16,90), com um total de 31 DM tipo 1 e 64 tipo 2 e 114 controles (73 mulheres e 41 homens, média de idade: 38,38 anos; DP: 12,81). Foi realizada avaliação através de teste psicofísico (Cambridge Colour Test CCT), que visou medir o limiar de discriminação nos três eixos de confusão de cores e sequenciamento genético, a partir de amostras de sangue. Para os diabéticos, no eixo de confusão protan, os resultados mostraram uma piora de desempenho para o genótipo TTA/GCC (p= 0,048), com relação aos controles. No eixo de confusão deutan, não houve diferença para qualquer dos genótipos (p= 0,0207), enquanto que para o eixo tritan, o genótipo TTA/GCC esteve associado a uma piora de desempenho (p=0,014). Para os controles, não houve diferença entre os genótipos. Assim, os resultados mostraram uma piora na visão de cores de pacientes DM, associada ao haplótipo TTA/GCC / Diabetic Retinopathy (DR), a prevalent complication of diabetes, is the leading cause of blindness among those aged 20-74 years. Micro and macrovascular changes occur in Diabetes Mellitus (DM) with DR being the most common among these vascular complications, resulting in generalized retinal microgangiopathy. At different stages of the disease, localized edema, exudates and hemorrhages occur. Several pro-angiogenic factors have been suggested as possible mediators in the development of these microvascular changes. Among them is erythropoietin (EPO), a glycoprotein hormone whose expression is mediated by specific alleles of the EPO gene. Specific genetic profiles for three single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the EPO gene (rs1617640, rs507392, rs551238) are associated with larger EPO concentrations in the vitreous humor of diabetic patients with RD. This association indicates a possible relationship between the identified genotypes (TTA) and the comorbidity´s development. This work aimed to investigate the association between genotypes considered at risk for the development of DR and functional changes in color vision among individuals diagnosed with DM. Thus, this study included a sample of 95 diabetic patients (49 women and 46 men, average age: 48.33 years; SD: 16.90), with a total of 31 DM type 1 and 64 type 2 and 114 controls (73 women and 41 men, average age: 38.38 years; SD: 12.81). Evaluation was performed using a psychophysical test (Cambridge Colour Test -CCT), to measure the discrimination threshold in three-color confusion axes in addition to genetic sequencing. In the protan axis of confusion color, performance among diabetics with the TTA/GCC genotype was significantly lower (p=0.048) than those in the control group. The results showed a poorer performance among those with the TTA / GCC genotype (p = 0.048), compared to controls. In deutan axis confusion, there was no difference among any of the genotypes (p = 0.0207), while for the tritan axis, the TTA / GCC genotype was associated with a poorer performance (p = 0.014). For the controls, there was no difference between genotypes. Thus, the results showed a worsening in color vision among DM patients associated with TTA / GCC haplotype

Made available in DSpace on 2016-04-27T13:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Isabel Redondo de Campos.pdf: 3029986 bytes, checksum: 846f67976c76d8135c8f94c088696392 (MD5) Previous issue date: 2015-09-23 / Diabetic Retinopathy (DR) is one of the complications of Diabetes Mellitus (DM). It is the leading cause of adult blindness in working age in developed countries. The study aimed to analyze the profile of diabetic patients, treated at the retina ambulatory at Sorocaba´s Ophthalmology Hospital and to identify the knowledge of those patients on DM and DR. A questionnaire was developed and applied by the researcher to 46 patients (n=100%) from January to March 2015. The results showed that from the 46 subjects (all coming from Sorocaba or region, with DM confirmed by medical record data), 27 (58.7%) are male. The median age was 62.5 years (range: 41-79 years). Twenty-two patients (47.8%) were retired and 34 (73.9%) reported earning between one and three times the minimum wage. Most of the subjects said that they are overweight (n = 19; 41.3%) or obese (n = 13, 28.3%) and believed their diabetes control was regular. Regarding education, 41.3% attended between one to eight years of school and 10.9% reported to be illiterate. Regarding the type of DM, 23 (50%) did not know the type. The data records were incomplete in this classification. The most reported complication was DR, with the total of 23 (50%) patients, while 17 (36.9%) claimed to have no complication of DM. Only 21.8% could name ophthalmoscopy as indicated for ophthalmic evaluation. The most mentioned reason for seeking treatment was for partial loss of vision (50%). Only 35.0% of patients have participated in an education group in DM. The patients showed low levels of knowledge about their chronic disease as well as on the DR, on the examination required for early detection of this complication and on the measure needed to preserve eye health, even by those who reported prior participation in education groups in DM. It can be said that these programs, besides reaching a small proportion of patients, had poor results in the appropriation of knowledge about DM by this group. It was concluded that systematic education programs must be implemented in all health care levels, due to gaps in the patients previous knowledge to revert the appropriation of new knowledge and attitudes about the DM / A Retinopatia Diabética (RD) é uma das complicações do Diabetes Mellitus (DM). É a principal causa de cegueira dos adultos em idade ativa nos países desenvolvidos. O estudo teve como objetivos analisar o perfil de amostra de pacientes diabéticos, atendidos no ambulatório de retina do Hospital Oftalmológico de Sorocaba e identificar o conhecimento desses pacientes sobre DM e RD. Foi desenvolvido um questionário, aplicado pela pesquisadora a 46 pacientes atendidos de janeiro a março de 2015. Os resultados mostraram que dos 46 sujeitos (todos procedentes de Sorocaba ou região, com DM confirmado por dados do prontuário), 27 (58,7%) são homens. A mediana de idade foi de 62,5 anos (variação: 41 79 anos). Vinte e dois pacientes (47,8%) são aposentados e 34 (73,9%) declararam receber entre um e três salários mínimos. A maior parte referiu sobrepeso (n=19; 41,3%) ou obesidade (n=13, 28,3%) e apontam seu controle como regular. Em relação à escolaridade, 41,3% frequentou a escola entre um a oito anos e 10,9% referiram ser analfabetos. Sobre o tipo de DM, 23 (50%) não sabiam o tipo. Os dados de prontuários estavam incompletos nessa classificação. A complicação mais referida foi a RD, somando 23 (50%) pacientes, enquanto 17 (36,9%) alegaram não ter nenhuma complicação do DM. Somente 21,8% soube nomear o exame de fundoscopia como o indicado para avaliação oftalmológica. O motivo mais citado para procurar tratamento foi por perda parcial de visão (50%). Apenas 35,0% dos pacientes já participou em grupo de educação em DM. Os pacientes apresentaram baixos níveis de conhecimento sobre sua doença crônica, bem como quanto à RD, ao exame necessário para detecção precoce desta complicação e às medidas indicadas para preservação da saúde ocular, mesmo naqueles que referiram participação prévia em grupos de educação em DM. Pode-se dizer que estes programas, além de atingirem uma parcela pequena de pacientes, tiveram resultados pouco expressivos na apropriação do conhecimento sobre DM neste grupo. Concluiu-se então que deve-se implantar programas de educação sistemáticos em todos os níveis de atenção à saúde, voltados às lacunas do conhecimento prévio dos pacientes para se reverterem na apropriação de novos conhecimentos e atitudes sobre o DM

A retinopatia diabética (RD) é uma complicação microvascular do diabetes melito, sendo a principal causa de cegueira adquirida. Fatores angiogênicos como o vascular endothelial growth factor (VEGF) estão envolvidos na patogênese da RD. O VEGF-A é uma citocina potente e multifuncional que atua através dos receptores VEGFR-1 e VEGFR-2 expressados no endotélio vascular causando aumento da permeabilidade vascular e estímulo à neovascularização em processos fisiológicos e patológicos. A expressão do VEGFR-1 é acentuada por hipóxia e, apesar da afinidade, apresenta fraca resposta ao VEGF enquanto o VEGFR-2 é o principal mediador mitogênico, angiogênico e do aumento da permeabilidade vascular. Alguns polimorfismos do VEGF têm sido estudados na suscetibilidade e risco de progressão da RD. Importante associação entre o polimorfismo -634C/G e a presença de RD é relatada principalmente em relação ao alelo C. A homozigose CC estaria relacionada à RDP e níveis sérico e vítreo aumentados de VEGF sugerindo que a presença do alelo C seja um fator de risco independente para RD. Os conhecimentos sobre o VEGF levaram ao desenvolvimento de agentes anti-VEGF (pegaptanibe, ranibizumabe e bevacizumabe) com objetivo de inibir a neovascularização patológica. A terapia anti-VEGF é uma realidade cujos resultados são cada vez mais promissores na prática médica do tratamento da RD. / Diabetic retinopathy (DR), a DM microvascular complication, is the leading cause of blindness. Angiogenic factors such as vascular endothelial growth factor (VEGF) are involved in the pathogenesis of DR. VEGF-A is a potent, multifunctional cytokine that acts through the receptors VEGFR-1 and VEGFR-2 expressed in the vascular endothelium and causing increased vascular permeability and neovascularization stimulation in both physiological and pathological processes. The expression of VEGFR-1 is upregulated by hypoxia and is less responsive to VEGF compared to VEGFR-2 which is the main mediator mitogenic, angiogenic, and increased vascular permeability. VEGF polymorphisms have been studied in DR susceptibility and progression. Significant association between the polymorphism -634C/G and the presence of DR is reported mainly in relation to allele C. The homozygous CC is associated to proliferative DR and to increased vitreous and serum levels of VEGF suggesting that the presence of the C allele is an independent risk factor for RD. The knowledgement of VEGF lead to the development of anti-VEGF drugs (pegaptanib, ranibizumab and bevacizumab) aiming to prevent pathological neovascularization. The anti-VEGF therapy is a reality in practice medical treatment of DR.