A infestação por carrapatos é uma das principais parasitoses que afetam a bovinocultura prejudicando a saúde do animal por meio de hábito hematófago, além de gerar perdas econômicas para o seu controle, sendo o uso de carrapaticidas o principal método utilizado. O uso negligenciado destes produtos induz a geração de resistência tornando necessário o desenvolvimento de métodos alternativos, como a imunização por vacinas e o uso de probióticos. Probióticos são alimentos funcionais, compostos de micro-organismos vivos, que quando ingeridos em doses adequadas e com frequência, conferem diversos efeitos benéficos à saúde do hospedeiro por meio de diferentes mecanismos de ação. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito imunomodulador e carrapaticida de micro-organismos probióticos em bovinos da raça Girolando. Para tanto, durante 154 dias, foram estudados 30 animais distribuídos em 06 grupos e submetidos a diferentes tratamentos, a saber: Grupo A (controle) os animais não receberam tratamento específico; Grupo B (efeito vacina) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram imunizados com a proteína rGST-Hl; Grupo C (efeito probiótico EEL) os animais receberam, durante 70 dias, uma dose diária de 10 mL, da preparação probiótica EEL; Grupo D (efeito vacina + probiótico EEL) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram vacinados e receberam durante 70 dias, 10 mL da preparação probiótica EEL; Grupo E (efeito probiótico PT) os animais receberam, durante 70 dias, uma dose de 10 mL da preparação probiótica ProbioTick e Grupo F (efeito vacina + probiótico PT) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram vacinados e receberam diariamente, durante 70 dias, 10 mL da preparação probiótica ProbioTick. A cada 14 dias foram realizadas coletas de sangue para avaliação da hemostasia, do estado de anemia e o desenvolvimento da resposta imune humoral. Os resultados demonstraram que os tratamentos não afetaram significativamente a hemostasia, bem como os parâmetros eritrocíticos dos animais. No tocante ao sistema imunológico, verificou-se que os animais tratados com as preparações probióticas apresentaram maior número de linfócitos quando comparado ao grupo controle diferindo estatisticamente no 70º dia, sendo que os percentuais encontrados para os grupos C, D, E e F foram respectivamente de 55,8%; 63,5%; 60,8% e 59,4%. Os animais que foram vacinados (grupo B) e tratados com as preparações probióticas (Grupos D e F), apresentaram níveis superiores de anticorpos totais IgG (72,769; 93,735 e 98,825 mg/dL) e quanto aos anticorpos IgG anti rGST-Hl, os animais dos Grupos D e F tiveram seus valores aumentados quando comparados aos do Grupo B por um período mais prolongado, onde no 98º dia, as densidades ópticas medidas foram de 0,868 e 0,915. Desta forma, conclui-se que as preparações probióticas foram capazes de modular a resposta imunológica dos animais. / Tick infestation is the main parasitic diseases that affect the cattle farming. In addition to impairing the health of the animal by means of a hematophagous habit, it also generates economic losses regarding its control, being the use of acaricides the main method used. Its neglected use has led to cases of resistance, which turn necessary the development of alternative methods such as the immunization with vaccines and the use of probiotics. Probiotics are functional food that contains live microorganisms that when ingested in appropriate amount bring benefits to the hosts through different mode of action. Thus, the present work aimed to evaluate the immunomodulatory and acaricide effect of probiotic microorganisms in Girolando cattle. Therefore, during 154 days, 30 animals were distributed in 6 groups, and submitted to different treatments: Group A (control), the animals did not received any treatment. Group B (vaccine effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were immunized with rGST-H1. Group C (probiotic effect EEL, the animals received, for 70 days, a daily dose of 10 mL of the probiotic EEL preparation. Group D (vaccine + probiotic EEL effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were vaccinated and received for 70 days, 10 mL probiotic preparation EEL. Group E (probiotic effect PT), the animals received, for 70 days, a dose of 10 mL of probiotic preparation ProbioTick and Group F (vaccine + PT probiotic effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were vaccinated and received daily for 70 days, 10 mL ProbioTick. In each 14 days blood samples were collected and exams were performed to evaluate hemostasis, anemia status and development of the immune response. The results showed that the different treatments did not affect hemostasis and the erythrocytic parameters of the animals. Regarding the immune system, the results showed that the animals treated with probiotic preparations presented a higher number of lymphocytes when compared to the control group, differing statistically on the 70th day, being that the percentages found for groups C, D, E and F were respectively 55.8%; 63.5%; 60.8% and 59.4%. In addition, animals treated with the probiotic (Groups D and F) and vaccinated (B) showed higher levels of total IgG antibodies (72.769, 93.735 and 98.825 mg/dL) and as for the IgG anti rGST-H1 antibodies, only the animals in Groups D and F had their values increased for a longer period, where on the 98th day, The optical densities measured were 0.868 and 0.915. Therefore, the probiotic preparations evaluated were able to modulate the imune response of animals.

O estabelecimento de isolados de Rhipicephalus (B.) microplus resistentes a drogas é um passo fundamental para pesquisas sobre mecanismos de ação das drogas e desenvolvimento de novos acaricidas. Diferentes tratamentos de pressão de seleção foram efetuados sobre uma população de campo com fator de resistência (FR) à ivermectina (IVM) 1,37 visando obter experimentalmente uma cepa resistente. O tratamento das larvas com IVM não resultou em infestações de bezerros. O tratamento das adultas, por duas gerações consecutivas não alterou o valor do FR da população. A este último procedimento foi associado o tratamento do hospedeiro com IVM, resultando em aumento significativo do FR. Infestações utilizando larvas provenientes de posturas de alta eclodibilidade parece ter contribuído ainda mais para o aumento do FR observado na última geração. Em resumo, foi possível estabelecer pela primeira vez, em laboratório, uma cepa resistente à IVM que apresentou um aumento estatisticamente significante do valor do FR da última geração analisada (F10) em relação à inicial (F1). / The establishment of drug resistant Rhipicephalus (B.) microplus isolates is a fundamental step on researches about drugs mechanisms of action and on the development of new acaricides. Different selection treatments were effectuated upon a field population with an ivermectin (IVM) resistant ratio (RR) 1,37 aiming to obtain experimentally a resistant strain. The larval treatments with IVM do not reach calf infestations. The adult treatments, in two consecutive generations do not changed the population RR. To this last protocol was added the IVM host treatment, increasing significantly the RR. Infestations using larvae obtained from the high-eclodibility oviposition seemed to have contributed much more to the RR increase observed on the last generation. Finally, it was possible to establish for the first time, on laboratory, an IVM resistant strain that showed a significantly higher RR value from the last generation (F10) in relation to the first one analyzed (F1).

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-09-09T11:45:13Z No. of bitstreams: 1 2011 - Vanessa de Almeida Raia.pdf: 1415435 bytes, checksum: 6553cdee2bd5a5f2a363cb3cd11f812d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T11:45:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011 - Vanessa de Almeida Raia.pdf: 1415435 bytes, checksum: 6553cdee2bd5a5f2a363cb3cd11f812d (MD5) Previous issue date: 2011-01-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / To fill some gaps about the intrinsic mechanisms of the biology of oviposition of R. (B.) microplus, we evaluated the concentration of lipids and carbohydrates, as well as the variability of lipid in eggs per day of posture. For this, engorged females weighing between 151 and 360 mg were placed in controlled environment (27 ? 1 ? C, 80 ? 5% RH, darkness), and after beginning of laying, three samples of the eggs pool were daily collected, packed and preserved at -20 ? C. Samples 1 and 2, weighing 50 mg each, were used to quantitate lipids and glucose, and to evaluate the lipid profile, respectively; and the third sample, containing 1 g of eggs, was used to quantitate glycogen. The determination of total lipids was performed using phospho-vanillin reagent, while the concentrations of cholesterol, triglycerides and glucose were obtained by colorimetric determination using endpoint enzymatic kit. The level of glycogen was performed using the acid 3,5 dinitrosalicylic reactive . The results were analyzed by nonparametric Kruskal-Wallis and the relationship between the concentrations of substrates and the days of laying was assessed by polynomial regression. There was no significant difference in the concentrations of these substrates in eggs from different days of oviposition, as there was no relationship of these concentrations with the days of laying. After lipid extraction, the samples were performed in thin layer chromatography, high-performance (HPTLC) for neutral lipids and phospholipids. Then, densitometry was performed using the Image Master Total Lab and the daily percentage of each lipid in the samples was calculated. Among the neutral lipids were identified the hydrocarbons, esterified cholesterol, triglycerides, fatty acids, free cholesterol and diacylglycerol. Of these, the cholesterol ester showed the highest variation, it was not detected in eggs at the fifth day of oviposition. Among the phospholipids were detected the phosphatidic acid, phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine and sphingomyelin fosfatidilinusitol. This latter was absent in eggs of the seventh day onwards. Thus, the different rates of hatchability of eggs from different laying days cannot be attributed to the concentrations of total lipids, although some specific lipids such as cholesterol ester and sphingomyelin might influence the difference in larval hatchability, more researches are needed for clarify the role of these substrates in embryogenesis / Objetivando preencher algumas lacunas sobre os mecanismos intr?nsecos da biologia da oviposi??o de R. (B.) microplus, foram avaliadas as concentra??es de lip?dios e carboidratos, assim como a variabilidade lip?dica dos ovos postos em diferentes dias de postura. Para isso, f?meas ingurgitadas pesando entre 151 e 360 mg foram colocadas em estufa biol?gica sob condi??es controladas (27 ? 1oC, 80 ? 5% UR, escotofase), e ap?s in?cio da postura, tr?s amostras di?rias do ?pool? de ovos foram coletadas, acondicionadas e preservadas a ?20?C. As amostras 1 e 2, pesando 50 mg cada, foram utilizadas para dosar lip?dios e glicose, e avaliar o perfil de lip?dios, respectivamente; a amostra 3, contendo 1 g de ovos foi utilizada para dosar glicog?nio. A dosagem de lip?dios totais foi realizada atrav?s do reagente de fosfo-vanilina, enquanto as concentra??es de colesterol, triglicer?dios e glicose foram obtidas atrav?s de determina??o colorim?trica com a utiliza??o de kit enzim?tico de ponto final. A dosagem de glicog?nio foi realizada atrav?s do reativo ?cido 3,5 dinitrosalic?lico. Os resultados das dosagens foram analisados pelo teste n?o param?trico de Kruskal-Wallis e a rela??o entre as concentra??es dos substratos e os dias de postura foi avaliada atrav?s de Regress?o polinomial. N?o foram constatadas diferen?as significativas entre as concentra??es destes substratos nos ovos de diferentes dias de oviposi??o, assim como n?o houve rela??o dessas concentra??es com os dias de postura. Ap?s extra??o dos lip?dios das amostras, foram realizadas cromatografias em camada delgada de alto desempenho (HPTLC) para lip?dios neutros e fosfolip?dios. Em seguida, a densitometria foi realizada atrav?s do programa Image Master Total Lab e o percentual di?rio de cada lip?dio nas amostras foi calculado. Dentre os lip?dios neutros foram identificados hidrocarbonetos, colesterol esterificado, triglicer?dios, ?cidos graxos, colesterol livre e diacilglicerol. Destes, o colesterol esterificado foi o que apresentou maior varia??o, n?o sendo detectado nos ovos do quinto dia de oviposi??o. Dentre os fosfolip?dios foram detectados o ?cido fosfat?dico, fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina, fosfatidilinusitol e esfingomielina. Sendo este ?ltimo ausente nos ovos do s?timo dia de postura em diante. Assim, as diferentes taxas de eclodibilidade por dia de postura n?o podem ser atribu?das ?s concentra??es de lip?dios totais, embora alguns lip?dios espec?ficos como o colesterol esterificado e a esfingomielina possam ter influ?ncia na diferen?a de eclodibilidade larval, sendo necess?rios mais estudos para eclarecer o papel desses substratos na embriog?nese

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 504442 bytes, checksum: 85bbb3436f0253ff5e83a42cae5a4a22 (MD5) Previous issue date: 2008-02-22 / To evaluate the immune response of BALB/c mice immunized with the synthetic peptide anti-tick R. (B.) microplus SBm7462 by oral and nasal routes and to study the induction of AICD in memory T cells were used 80 BALB/c mice, divided in four experimental groups with 20 animals each (group I: oral immunization; group II: nasal immunization; group III: animals not immunized; and a group with animals givers of peritoneal macrophages. Two immunizations had been made with an interval of 21 days. At nine and 15 days after the first and the second immunization the collects were realized, separately for each group, and the T cells isolated had been cultivated with 5% CO2 at 37ºC, per 10 days in the presence of 1μg of SBm7462 and APCs. Later, the different agents, inductive (mithramycin and cycloheximide) or inhibiting (benzamide riboside and cyclosporin A) of apoptosis had been added, subdivided in distinct treatments. After the specific incubation period for each one of the treatments, it had been determined the percentage of cellular viability by the exclusion for Tripan Blue and the percentage of apoptotic cells with the dye Acridine Orange and by TUNEL technique. The specific nature of the T cells was confirmed by the increase in the number of cells after re-stimulation in vitro with SBm7462, which had held as memory T cells. The induction of AICD occurred by the inhibition of the expression of c-myc and by the increase of the expression of Fas and the induced AICD for the synthetic peptide SBm7462 was mediated by an independent way of the calcineurina and the kinetic of regulation of FasL. The mucosa routes, oral and nasal, can be considered alternative ways for the immunization with the synthetic peptide SBm7462 however they require a bigger number of doses to induce a response with high levels of immunoglobulins. / Com o objetivo avaliar a resposta imune de camundongos BALB/c imunizados por via oral e nasal com o peptídeo sintético anti-carrapato R. (B.) microplus SBm7462 e estudar a indução da AICD dos linfócitos T de memória dos animais imunizados, utilizou-se 80 camundongos BALB/c, divididos em quatro grupos experimentais com 20 animais cada (grupo I: imunização por via oral; grupo II: imunização por via nasal; grupo III: animais não imunizados; e um grupo de animais doadores de macrófagos peritoneais). Foram feitas duas imunizações, com intervalo de 21 dias. Aos nove e 15 dias após a primeira e segunda imunização realizou-se as coletas, separadamente para cada grupo, e os linfócitos T isolados foram cultivados em estufa, 5% de CO2 a 37ºC, por 10 dias na presença de 1μg de SBm7462 e APCs. Posteriormente, adicionou-se os diferentes agentes indutores (mitramicina e CHX) ou inibidores (DBR e CsA) de apoptose, subdivididos em tratamentos distintos. Após o período de incubação específico para cada um dos tratamentos, determinou-se a porcentagem de viabilidade celular pela exclusão pelo Azul de Tripan e a porcentagem de células apoptóticas pela coloração com Laranja de Acridina e pela técnica de TUNEL. A natureza específica dos linfócitos T foi confirmada pelo aumento no número de células após re-estimulação in vitro com SBm7462, os quais se comportaram como linfócitos T de memória. Ocorreu indução da AICD por inibição da expressão do c-myc e por aumento da expressão de Fas e a AICD induzida pelo peptídeo sintético SBm7462 foi mediada por uma via independente da calcineurina e da cinética de regulação do FasL. As vias de mucosa, oral e nasal, podem ser consideradas vias alternativas para a imunização com o peptídeo sintético SBm7462, porém requerem um maior número de doses para induzir uma resposta com altos níveis de imunoglobulinas.

A infestação por carrapatos é uma das principais parasitoses que afetam a bovinocultura prejudicando a saúde do animal por meio de hábito hematófago, além de gerar perdas econômicas para o seu controle, sendo o uso de carrapaticidas o principal método utilizado. O uso negligenciado destes produtos induz a geração de resistência tornando necessário o desenvolvimento de métodos alternativos, como a imunização por vacinas e o uso de probióticos. Probióticos são alimentos funcionais, compostos de micro-organismos vivos, que quando ingeridos em doses adequadas e com frequência, conferem diversos efeitos benéficos à saúde do hospedeiro por meio de diferentes mecanismos de ação. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito imunomodulador e carrapaticida de micro-organismos probióticos em bovinos da raça Girolando. Para tanto, durante 154 dias, foram estudados 30 animais distribuídos em 06 grupos e submetidos a diferentes tratamentos, a saber: Grupo A (controle) os animais não receberam tratamento específico; Grupo B (efeito vacina) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram imunizados com a proteína rGST-Hl; Grupo C (efeito probiótico EEL) os animais receberam, durante 70 dias, uma dose diária de 10 mL, da preparação probiótica EEL; Grupo D (efeito vacina + probiótico EEL) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram vacinados e receberam durante 70 dias, 10 mL da preparação probiótica EEL; Grupo E (efeito probiótico PT) os animais receberam, durante 70 dias, uma dose de 10 mL da preparação probiótica ProbioTick e Grupo F (efeito vacina + probiótico PT) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram vacinados e receberam diariamente, durante 70 dias, 10 mL da preparação probiótica ProbioTick. A cada 14 dias foram realizadas coletas de sangue para avaliação da hemostasia, do estado de anemia e o desenvolvimento da resposta imune humoral. Os resultados demonstraram que os tratamentos não afetaram significativamente a hemostasia, bem como os parâmetros eritrocíticos dos animais. No tocante ao sistema imunológico, verificou-se que os animais tratados com as preparações probióticas apresentaram maior número de linfócitos quando comparado ao grupo controle diferindo estatisticamente no 70º dia, sendo que os percentuais encontrados para os grupos C, D, E e F foram respectivamente de 55,8%; 63,5%; 60,8% e 59,4%. Os animais que foram vacinados (grupo B) e tratados com as preparações probióticas (Grupos D e F), apresentaram níveis superiores de anticorpos totais IgG (72,769; 93,735 e 98,825 mg/dL) e quanto aos anticorpos IgG anti rGST-Hl, os animais dos Grupos D e F tiveram seus valores aumentados quando comparados aos do Grupo B por um período mais prolongado, onde no 98º dia, as densidades ópticas medidas foram de 0,868 e 0,915. Desta forma, conclui-se que as preparações probióticas foram capazes de modular a resposta imunológica dos animais. / Tick infestation is the main parasitic diseases that affect the cattle farming. In addition to impairing the health of the animal by means of a hematophagous habit, it also generates economic losses regarding its control, being the use of acaricides the main method used. Its neglected use has led to cases of resistance, which turn necessary the development of alternative methods such as the immunization with vaccines and the use of probiotics. Probiotics are functional food that contains live microorganisms that when ingested in appropriate amount bring benefits to the hosts through different mode of action. Thus, the present work aimed to evaluate the immunomodulatory and acaricide effect of probiotic microorganisms in Girolando cattle. Therefore, during 154 days, 30 animals were distributed in 6 groups, and submitted to different treatments: Group A (control), the animals did not received any treatment. Group B (vaccine effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were immunized with rGST-H1. Group C (probiotic effect EEL, the animals received, for 70 days, a daily dose of 10 mL of the probiotic EEL preparation. Group D (vaccine + probiotic EEL effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were vaccinated and received for 70 days, 10 mL probiotic preparation EEL. Group E (probiotic effect PT), the animals received, for 70 days, a dose of 10 mL of probiotic preparation ProbioTick and Group F (vaccine + PT probiotic effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were vaccinated and received daily for 70 days, 10 mL ProbioTick. In each 14 days blood samples were collected and exams were performed to evaluate hemostasis, anemia status and development of the immune response. The results showed that the different treatments did not affect hemostasis and the erythrocytic parameters of the animals. Regarding the immune system, the results showed that the animals treated with probiotic preparations presented a higher number of lymphocytes when compared to the control group, differing statistically on the 70th day, being that the percentages found for groups C, D, E and F were respectively 55.8%; 63.5%; 60.8% and 59.4%. In addition, animals treated with the probiotic (Groups D and F) and vaccinated (B) showed higher levels of total IgG antibodies (72.769, 93.735 and 98.825 mg/dL) and as for the IgG anti rGST-H1 antibodies, only the animals in Groups D and F had their values increased for a longer period, where on the 98th day, The optical densities measured were 0.868 and 0.915. Therefore, the probiotic preparations evaluated were able to modulate the imune response of animals.

O estabelecimento de isolados de Rhipicephalus (B.) microplus resistentes a drogas é um passo fundamental para pesquisas sobre mecanismos de ação das drogas e desenvolvimento de novos acaricidas. Diferentes tratamentos de pressão de seleção foram efetuados sobre uma população de campo com fator de resistência (FR) à ivermectina (IVM) 1,37 visando obter experimentalmente uma cepa resistente. O tratamento das larvas com IVM não resultou em infestações de bezerros. O tratamento das adultas, por duas gerações consecutivas não alterou o valor do FR da população. A este último procedimento foi associado o tratamento do hospedeiro com IVM, resultando em aumento significativo do FR. Infestações utilizando larvas provenientes de posturas de alta eclodibilidade parece ter contribuído ainda mais para o aumento do FR observado na última geração. Em resumo, foi possível estabelecer pela primeira vez, em laboratório, uma cepa resistente à IVM que apresentou um aumento estatisticamente significante do valor do FR da última geração analisada (F10) em relação à inicial (F1). / The establishment of drug resistant Rhipicephalus (B.) microplus isolates is a fundamental step on researches about drugs mechanisms of action and on the development of new acaricides. Different selection treatments were effectuated upon a field population with an ivermectin (IVM) resistant ratio (RR) 1,37 aiming to obtain experimentally a resistant strain. The larval treatments with IVM do not reach calf infestations. The adult treatments, in two consecutive generations do not changed the population RR. To this last protocol was added the IVM host treatment, increasing significantly the RR. Infestations using larvae obtained from the high-eclodibility oviposition seemed to have contributed much more to the RR increase observed on the last generation. Finally, it was possible to establish for the first time, on laboratory, an IVM resistant strain that showed a significantly higher RR value from the last generation (F10) in relation to the first one analyzed (F1).

Submitted by CLARISSA HELENA SANTANA null (santana.chs@gmail.com) on 2016-03-21T18:17:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Clarissa_Helena_Santana.pdf: 1159982 bytes, checksum: 1160868d6c0bff2c67119202847275c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-22T17:26:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santana_ch_me_jabo.pdf: 1159982 bytes, checksum: 1160868d6c0bff2c67119202847275c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T17:26:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santana_ch_me_jabo.pdf: 1159982 bytes, checksum: 1160868d6c0bff2c67119202847275c7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A bovinocultura é um setor com importante destaque no agronegócio brasileiro. O carrapato Ripicephalus (Boophilus) microplus é responsável por perdas econômicas significativas aos pecuaristas e é vetor de hemoparasitoses como Anaplasma spp e Babesia spp. Sabe-se que os bovinos Bos taurus taurus são mais susceptíveis à infestação por carrapatos do que Bos taurus indicus. Acredita-se que o mesmo ocorra para a infecção por Babesia bovis. Neste trabalho, foram avaliados, em duas colheitas, 355 bovinos da raça Angus, pertencentes a uma fazenda de Uruguaiana-RS, nos quais foram realizadas contagens de carrapatos e colheitas de amostras de sangue para quantificação de B. bovis, pela técnica de qPCR, e genotipagem com chip de 150.000 marcadores SNP. Para qPCR utilizaram-se sequências iniciadoras que flanqueiam um fragmento do gene do citocromo B (mt-cytB), como oligonucleotídeos iniciadores. Após genotipagem dos bovinos com o chip Gene Seek Genomic Profiler™ (GGP-HD) da Illumina Infinium®, foi realizado imputação de genótipos, para recuperação de genótipos faltantes, e controle de qualidade. Foi realizada análise de associação genômica ampla (GWAS), para cada uma das características, infecção por B. bovis e resistência a carrapatos, através do método denominado “Single Step Genomic BLUP” (ssGBLUP). Todos os animais apresentaram infestação por carrapatos e infecção por B. bovis, determinada pela qPCR, e altos valores médios para ambas as características. Algumas regiões cromossômicas foram identificadas como significativas para as características estudadas, sendo que, sete dos cromossomos identificados no presente estudo já haviam sido descritos em outros trabalhos. Neste sentido, o presente estudo corrobora com outros resultados indicando que a técnica de qPCR é um método sensível de detecção de B. bovis em animais Angus e que as regiões genômicas identificadas como significativas podem ser importantes para a variação das características estudadas. / The cattle industry is a sector with importance in the Brazilian agribusiness. The Ripicephalus (Boophilus) microplus is responsible for economic losses and is a vector for hemoparasitoses, such as Anaplasma spp and Babesia spp. It is known that the Bos tauros animals are more susceptible to infestation by ticks when compared with infestation in Bos indicus animals. It is believed that the same behavior keeps for infection by Babesia bovis. They were evaluated, in two collections, 355 Angus cattle, from a farm in Uruguaiana city, estate of Rio Grande do Sul, where were performed tick counts, quantification of B. bovis by qPCR and genotyping with a 150K chip. Were used as primers, in the qPCR, sequences that flanking the fragment of the cytochrome b gene. The technique was standardized and optimized using specimens of isolates of B. bovis. After genotyping, imputation was carried out, for recovery of missing genotypes, and quality control. Genome association analysis was performed (GWAS), to each of the characteristics, through the method called "Single Step Genomic BLUP" (ssGBLUP). All animals showed tick infestation and infection by B. bovis and high average values for both characteristics. Some regions on chromosomes were identified as significant to the characteristics tick infestation and infection by B. bovis, and seven chromosomes, identified in the present study, were already described in other studies. The present study agrees with other results indicating that the qPCR technique is a sensitive method to detecting B. bovis in Angus and genomic regions identified may be significant for the variation of these characteristics.

Sabe-se que a hemoglobina é uma rica fonte de peptídeos antimicrobianos (hemocidinas). A primeira hemocidina derivada da hemoglobina bovina caracterizada em carrapatos foi o peptídeo Hb33-61, que é ativo contra bactérias gram-positivas e fungos. Acredita-se que tais hemocidinas sejam geradas proteoliticamente no intestino do carrapato. Neste trabalho nós caracterizamos bioquimicamente uma catepsina D, designada BmAP. A análise da expressão gênica por qPCR mostrou que ela é expressa predominantemente no intestino. Através de LC-MS/MS, determinamos a especificidade de clivagem da BmAP utilizando Hb bovina, e verificamos que resíduos hidrofóbicos foram preferencialmente clivados nos subsítios P1 e P1. Também investigamos a especificidade de clivagem da catepsina L intestinal BmCL1, utilizando uma biblioteca combinatória de tetrapeptídeos e através de hemoglobinólise in vitro. A BmCL1 preferiu resíduos alifáticos no P2 e polares no P1 e P1. Além disso, hidrolisou a cadeia da Hb bovina entre A63/A64, gerando peptídeos com estrutura primária similar ao Hb 33-61. A hemoglobinólise com a BmAP e/ou BmCL1 resultou na formação de algumas hemocidinas, corroborando a hipótese do seu envolvimento na geração endógena de peptídeos antimicrobianos. / It is known that hemoglobin is a rich source of antimicrobial peptides (hemocidins). The first hemoglobin-derived hemocidin characterized in ticks was the peptide Hb33-61, which is active against Gram-positive bacteria and fungi. It is believed that hemocidins are endogenously generated in the tick gut. In this work we biochemically characterized a cathepsin D, designated BmAP. Expression analysis by qRT-PCR showed that it is expressed predominantly in the gut. Through LC-MS/MS, we determined the cleavage specificity of BmAP using bovine hemoglobin, and we verified that hydrophobic residues were preferentially cleaved at the subsites P1 and P1. We also investigated the cleavage specificity of the intestinal cathepsin L BmCL1, using a positional scanning synthetic combinatorial library and through in vitro hemoglobinolysis. BmCL1 preferred aliphatic residues at P2 and polar residues at P1 and P1. Also, it hydrolysed the subunit of bovine hemoglobin at A63/A64, generating peptides with a primary structure similar to Hb 33-61. Hemoglobinolysis with BmAP and/or BmCL1 resulted in the formation of some hemocidins, corroborating the hypothesis that these proteinases are involved in the endogenous generation of antimicrobial peptides

A hemoglobina possuí um grande potencial antimicrobiano, sendo os peptídeos antimicrobianos (AMPs) derivados de proteínas contêm o grupamento heme denominados hemocidinas. O carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus é capaz de adquirir e processar grandes quantidades de sangue para seu metabolismo. Neste trabalho, purificamos hemocidinas produzidas no tubo digestório do carrapato. Identificamos 10 fragmentos da hemoglobina bovina que possuem atividade contra Candida albicans (Hb 1-94, 3-94, 1-87, 93-141, 102-141, 103-141, 107-141, 104-141 e 98-114 e Hb\"beta\" 127-145). Determinamos que todos os peptídeos apresentam um alto conteúdo de aminoácidos básicos, além de uma estrutura secundária em \"alfa\"-hélice, características encontradas em outros AMPs. Verificamos também que as duas principais proteases que atuam na produção das hemocidinas são uma cisteíno- e uma aspártico-proteinase. A identificação de diversas hemocidinas, no tubo digestório de R. (Boophilus) microplus, indica uma possível participação das hemocidinas na proteção contra microorganismos / The hemoglobin posses a great potential as an antimicrobial, being denominated hemocidins the antimicrobial peptides (AMPs) derived from heme containing proteins. The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is capable of processing large amounts of blood to its own metabolism. In this work we purified the hemocidins that are produced in the tick gut. We identified 10 fragments from bovine hemoglobin that presents activity towards Candida albicans (Hb 1-94, 3-94, 1-87, 93-141, 102-141, 103-141, 107-141, 104-141 e 98-114 e Hb\"beta\" 127-145). We determined that all the peptides presents a high content of basic amino acids, besides a secondary structure in \"alfa\"-helix conformation, characteristics found in other AMPs. We also verified that a cistein- and an aspartic-protease are the two main proteases involved on the production of these hemocids. The identification of several hemocidins in the gut of R. (Boophilus) microplus, suggests that these AMPs may play a role in the defense of the tick against microorganisms

Carrapatos da espécie Rhipicephalus (Boophilus) microplus causam enormes prejuízos à saúde e à produção animal. Sendo um ectoparasita hematófago, o carrapato espolia seu hospedeiro e transmite doenças. Seu parasitismo é mediado por sua saliva, que inibe as reações homeostáticas do hospedeiro à injúria local causada por sua picada. Seus hospedeiros montam respostas imunes contra esse parasita, incluindo a resposta imune mediada por anticorpos, indicando que o controle imunobiológico é possível. Contudo, o complexo farmacológico da saliva do parasita é composto por proteínas solúveis que são sabidamente pouco ou nada imunogênicos se não forem introduzidos no hospedeiro com adjuvante ou na foram agregada. Assim, dificilmente induziriam imunidade nos hospedeiros. Bovinos apresentam fenótipos contrastantes e herdáveis quanto à intensidade de infestações com carrapatos. Carrapatos alimentados em bovinos resistentes não completam a refeição de sangue, apresentando menor eficiência reprodutiva. É possível que esse desfecho seja devido à capacidade do hospedeiro resistente, mas não do suscetível, de produzir anticorpos que neutralizam componentes salivares do carrapato cruciais para realize a hematofagia. É necessário, portanto, examinar essa possibilidade. Os resultados obtidos também podem ajudar a identificar antígenos úteis para formular uma vacina anti-carrapato. Para estabelecer quais componentes salivares são reconhecidos pelos dois fenótipos de hospedeiros empregamos uma soroteca composta por soros obtidos de bovinos resistentes e suscetíveis ao carrapato em diferentes estágios do ciclo do parasito (larva, ninfa e adulto) e após uma, duas ou três ciclos de infestações. Os soros foram empregados individualmente e em forma de pools para imunodetecção por western blot de proteínas presentes em extrato de larvas não-alimentadas, saliva e glândulas salivares de fêmeas de R. microplus e separadas em uma e duas dimensões. Os resultados obtidos nos western blots 1D de saliva e de extrato de larvas não alimentadas mostraram que houve um reconhecimento diferencial dos antígenos parasitários pelos soros dos animais resistentes e suscetíveis. Os soros dos animais resistentes quando ainda eram livres de infestações (i.e., naïve) ou quando infestados com a forma larval reconheceram com maior freqüência e/ou exclusivamente certas bandas de proteínas. Resultados semelhantes foram vistos nos western blots de géis 2D de saliva e glândulas salivares de fêmeas, onde os soros dos animais resistentes ainda não infestados (i.e., naïve) reconheceram vários spots presentes nessas amostras e soros de animais resistentes infestados reconhecerem spots de forma exclusiva. Também foi observado que, apesar dos hospedeiros suscetíveis estarem expostos a grande quantidade de saliva, os soros desses animais não reconhecem um número maior de spots que os hospedeiros infestados resistentes. Por outro lado, a maioria das proteínas salivares não é reconhecida pelos hospedeiros infestados, sejam resistentes ou suscetíveis. Esses resultados indicam que os hospedeiros bovinos resistentes reconhecem de forma mais precoce que os bovinos suscetíveis certos componentes parasitários. Essa capacidade pode estar relacionada ao fenótipo de resistência ao carrapato / The cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, causes enormous losses to animal health and production. Since it is a hematophagous parasite the tick expoliates its hosts and transmits diseases. Parasitism by the tick is mediated by its saliva, which inhibits the hosts local homeostatic reactions to its bite. Hosts mount immune responses against this parasite, including antibody-mediated responses, indicating that the immunobiological control of ticks is possible. However, the pharmacological complex of saliva is composed of soluble proteins, which are known to be incapable of eliciting antibody responses if they are not introduced into the host with adjuvant or in aggregated form. Thus, salivary proteins may not be able to induce immunity in hosts. Bovines present contrasting, heritable phenotypes for tick infestations. Ticks fed on resistant hosts are unable to complete a blood meal and present a decrease in reproductive immunity. It is possible that this outcome is caused by an ability of the resistant host to produce antibodies that neutralize salivary components that are crucial to blood feeding. It is necessary, therefore, to examine this possibility. The results will also assist in the identification of protective antigens to formulate an anti-tick vaccine. In order to establish which salivary components are recognized by the two types of host phenotypes, a collection of sera derived from resistant and susceptible bovines infested one, two and three times with different developmental stages of the parasite (larvae, nymphs and adults) was employed to detect which proteins were recognized in western blots of saliva and extracts of salivary glands and unfed larvae. Western blots of tick proteins (saliva and extracts of unfed larvae) separated in one dimension showed that antigens were differentially recognized by resistant and susceptible bovines. Sera from resistant bovines still naïve or infested with larvae recognized certain protein bands exclusively or more frequently than similar sera from susceptible bovines. Similar results were seen in western blots of proteins from saliva and extracts of salivary glands separated in two dimensions, where sera from naïve, resistant bovines recognized several spots and sera from infested, resistant bovines recognized several spots exclusively. In spite of the fac that susceptible hosts are exposed to greater amounts of tick saliva, sera from these animals did not recognize a greater amount of spots than those from resistant bovines. On the other hand, the great majority of spots is not recognized by any of the different sera, be they from resistant or susceptible hosts. These results indicate that resistant bovines are able to recognize parasitic proteins earlier than susceptible bovines. This ability may, in turn, affect expression of salivary components that are crucial for the tick and may explain the phenotypes of tick infestations in bovines.