Resumo: Estratégias para reduzir o aquecimento da Terra e aumentar a produção animal requerem novos sistemas, onde devem ser consideradas as emissões de metano e de outros gases que possam provocar danos ao meio ambiente. O objetivo deste trabalho foi a mensuração da produção de metano por arquéias e aplicação da metagenômica para detecção destas na fração sólida do conteúdo ruminal. Para a análise da produção de metano foi colhido o conteúdo ruminal seguido do preparo da solução a ser fermentada e armazenamento dos gases. A amplificação da região 168 rDNA foi obtida por PCR e a seguir foram feitas clonagem, seqüenciamento e análise das seqüências pelos programas "Sequencing Analysis 3.4" e Phred/Phrap/Consed, submetendo-as ao programa BLA8T. Maiores produções de metano e relações acetato:propionato foram observadas nos tratamentos contendo 70% de volumoso. As análises do BLA8T permitiram identificar nos tratamentos com 70% e 30% de feno, 96 seqüências relacionadas à família Methanobacteriaceae, 47 seqüências a arquéias não cultiváveis e 60 seqüências foram de arquéias desconhecidas (T1), 125 seqüências relacionadas à família Methanobacteriaceae, 42 seqüências a arquéias não cultiváveis e 32 seqüências foram de arquéias não conhecidas (T2). Para os tratamentos feitos com 70% e 30% de silagem de milho, foram observadas 30 seqüências referentes à família Methanobacteriacea, 18 seqüências à família Methanomicrobiacea, 43 seqüências a arquéias não cultiváveis e 118 seqüências foram de arquéias desconhecidas (T3) e 173 seqüências referentes à família Methanobacteriacea, 31 seqüências a arquéias não cultiváveis e 25 seqüências foram de arquéias desconhecidas (T4). As análises deste experimento mostraram variação na produção de metano quanto às diferentes proporções V:C e a metagenômic... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Strategies to reduce the Earth worming and raise animal production require new systems, where it must be considered methane and other gases emission that might cause environmental damages. The aim of this work was to evaluate the archaea methane production and the metagenomic evaluation of these bacteria present on the solid phase of the bovine ruminal content. For methane production analysis the ruminar content was collected followed by the proper manipulation for the fermentation process to take place and produced gas storage. The ribosomal 16S rRNA region was obtained by PCR amplification which was followed by cloning and DNA sequencing. The data was later analyzed by the software Sequencing Analysis 3.4, Phred/Phrap/Consed and BLAST. The highest methane production and acetate:propionate ratios were observed for the treatments containing 70% of roughage. The BLAST analysis allowed to identify 96 DNA sequences related to the Methanobacteriaceae family, 47 DNA sequences related to unculturable archaea and 60 DNA sequences were related to unknown archaea (T1), 125 DNA sequences related to Methanobacteriaceae, 42 DNA sequences do unculturable archaea and 32 DNA sequences were considered related to unknown archaea (T2) for the treatments containing 70% and 30% of hay. For those containing 70% and 30% of com silage it was possible to detect 30 DNA sequences related to Methanobacteriaceae, 18 DNA sequences related to Methanomicrobiaceae, 43 sequences related to unculturable archaea, 118 DNA sequences related to unknown archaea (T3) and 173 DNA sequences related to Methanobacteriaceae, 31 sequences related to unculturable archaea, and 25 to unknown archaea (T4). The analysis carried out in this experiment have shown a variation of the methane production as different R:C ratio were used and metagenomic with the rDNA conserved region together with archaea taken from the ruminal content DNA... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Coorientadora: Jane Maria Bertocco Ezequiel / Banca: Maria Isabel da Silva / Banca: Raul Franzolin Neto / Banca: Janete Apparecida Desidério Sena / Banca: Mauro Dal Secco de Oliveira / Doutor

Resumo: Em virtude da importância que os pequenos ruminantes desempenham no setor agropecuário e da necessidade de se encontrar alternativas de baixo custo para o controle das helmintoses, este trabalho objetivou avaliar a atividade anti-helmíntica dos extratos de Artemisia annua, Melia azedarach e Trichilia claussenii. Os extratos, aquoso, bicarbonato de sódio, diclorometano, etanólico de A. annua, hexânico de M. azedarach e o metanólico de T. claussenii, foram avaliados em testes in vitro de eclodibilidade larvar (TEL) e de desenvolvimento larvar (TDL) sobre nematódeos gastrintestinais de ovinos. O extrato de bicarbonato de sódio de A. annua e artemisinina (bioativo purificado) foram avaliados in vivo em ovinos Santa Inês infectados por nematódeos gastrintestinais com base na avaliação do hematócrito, na contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e coprocultura. Os princípios ativos dos extratos foram quantificados com base na cromatografia líquida de alta eficiência - índice de refração (CLAE-IR), ultravioleta (CLAE- UV) e líquido-líquido (CLAE- LL). A capacidade antioxidante do extrato de bicarbonato de sódio foi determinada pelo método ORAC (capacidade de absorção do radical oxigênio) e a artemisinina eliminada foi quantificada pela CLAE-UV. Analisados pelos testes probit e de Tukey. O extrato de bicarbonato de sódio de A. annua foi o mais eficiente in vitro com CL50(concentração letal) de 0, 0677 μg/mL e CL99 de 1,27 μg/mL no TEL e no TDL a CL50 foi de 1,67 μg/mL e a CL99 de 23,8 μg/mL. No teste in vivo, a redução máxima do OPG foi de 31,97% no 14º dia nos animais tratados com o extrato de bicarbonato de sódio de A. annua (2 g/kg pv) e de 41,37% no 15º nos animais que receberam artemisinina (100 mg/kg pv). Na coprocultura obteve-se 91,2% de H. contortus, 8,4% de Tricostrongylus sp. e 0,3% de Oesophagostomum sp. Os... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Given the importance that small ruminant plays in the livestock and the need to find alternatives of low-costs for the control of helminthes, the objectives of this study was to evaluate the anthelmintic activities of extracts from Artemisia annua, Melia azedarach and Trichilia claussenii. The extracts, aqueous, sodium bicarbonate, dichloromethane, ethanol of A. annua, hexane of M. azedarach and methanol of T. claussenii, were evaluated in vitro tests of larval hatchability (TEL) and larval development (TDL) on gastrointestinal nematodes in sheep. The extract of sodium bicarbonate A. annua and artemisinin (bioactive purified) were evaluated in vivo in Santa Ines sheep naturally infected with gastrointestinal nematodes based on the assessment of hematocrit, egg count per gram of feces (OPG) and stool culture. The active ingredients of the extracts were quantified based on liquid chromatography with high efficiency - an index of refraction (HPLC-IR), ultraviolet (HPLC-UV) and liquid-liquid (HPLC-LL). The antioxidant activity of sodium bicarbonate extract was determined by ORAC method (absorption capacity of the radical oxygen) and artemisinin in the feces was quantified by HPLC-UV. The results were analyzed by SAS probit and Tukey test. The extract of sodium bicarbonate A. annua, in vitro, was the most effective with LC50 of 0,0677 μg/mL and 1,27 μg/mL of CL99 in TEL, and in the TDL LC50 was 1,67μg/mL and CL99 of 23,8μg/mL. In vivo test, the maximum reduction in EPG was 31,97% on day 14 in animals treated with the extract of sodium bicarbonate A. annua (2g/ kg body weight) and 41.37% on day 15 in animals received artemisinin (100 mg/kg bw). In stool culture was obtained 91, 2% of H. contortus, 8, 4% Tricostrongylus sp. and 0, 3% of Oesophagostomum sp. The results show the need for more studies with higher doses of extracts, other alternatives of... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Gilson Pereira de Oliveira / Coorientadora: Ana Carolina de Souza Chagas / Banca: Alvimar José da Costa / Banca: Mario Roberto Hatayde / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Mestre

Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos dos anticorpos policlonais, preparados contra as bactérias ruminais Streptococcus bovis, Fusobacterium necrophorum, Lactobacillus e endotoxina, ou monensina sódica sobre perfil metabólico sanguíneo e variações na ingestão diária de matéria seca de bovinos jovens confinados com diferentes níveis de concentrado. Foram utilizados 72 animais Brangus, machos, não castrados, desmamados com nove meses de idade, com peso vivo médio inicial de 261,04 ± 34,73 kg divididos em 24 baias (3 animais/baia), com 6 repetições (baias) em cada tratamento. Todos os animais foram submetidos à mesma dieta (ad libitum), tipo de alojamento e manejo. As dietas apenas foram diferentes no tocante aos aditivos alimentares utilizados: controle (sem aditivo), monensina sódica - MON, anticorpos policlonais - PAP ou mistura de monensina sódica com anticorpos policlonais - MIX, estes, na forma de pó. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2 x 2 com medidas repetidas no tempo, sendo os fatores: inclusão ou não de monensina sódica e inclusão ou não de anticorpos policlonais. Medidas de tempo foram tomadas de acordo com o período: adaptação, crescimento e terminação. Os dados de gasometria foram avaliados após 21 dias do início de cada período. A ingestão e a variação diária de matéria seca (IDMS e VIDMS, respectivamente) foram obtidas nos quatro primeiros dias após mudança do período de adaptação para crescimento e de crescimento para terminação. Não houve efeito (P<0,05) de aditivos para IDMS e VIDMS, apenas interação entre período e os 4 dias para as duas variáveis, com maior IDMS no dia 3 seguido de queda no dia 4 durante o período de crescimento e VIDMS nos quatro dias após mudança de dieta. Durante a terminação houve menor IDMS no dia 2 mas não foi observado VIDMS nos quatro primeiros... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effects of polyclonal antibodies preparation (PAP) or monensin (MON) against rumen bacteria (Streptococcus bovis, Fusobacterium necrophorum, Lactobacillus and endotoxin) on blood metabolic profile and variations in daily dry matter intake (DM) of feedlot cattle fed high concentrate diets. Seventy-two 9-mo-old bullocks (261.04 ± 34.73 kg) were housed in 24 pens (3 bullocks/pen) and assigned to a completely randomized with 2 x 2 factorial arrangement with 6 replications per treatment. All animals received the same diet (ad libitum), type of accommodation and management. The diets treatments were different only about feed additives used: control (no additive), MON, PAP or MON + PAP (MIX). Factors were inclusion or not of PAP or MON, at a dose of 300 mg/kg DM or at 30 mg/ kg DM, respectively. Measures over time were taken according to the phase: adaptation, growing and finishing. Blood samples were collected and evaluated after 21 days of the beginning of each phase. The intake and daily variation of dry matter (IDMS and VIDMS, respectively) were obtained in the first four days of each phase. There was no effect (P < 0.05) additive for IDMS and VIDMS, only interaction between phase and four days for both variables, with higher IDMS on day 3 and then decreased on day 4 during the growth phase and VIDMS during four days after changing the diet. During the finishing, IDMS was lower on day 2, but was not observed VIDMS the first four days after change of diet. PAP and MON treatments had higher blood pH compared to MIX, but not different from control. In the finishing phase was observed lower blood pH compared with other phases... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Mário De Beni Arrigoni / Coorientador: Paulo Roberto Leme / Banca: Ricardo de Albuquerque / Banca: Paulo Henrique Mazza Rodrigues / Mestre

Resumo: Muitos fungos decompositores de materiais lignocelulósicos vêm sendo utilizados como produtores de enzimas em processos fermentativos nos quais são utilizados substratos de baixo valor comercial, como os resíduos agrícolas e agroindustriais. No entanto, apenas uma pequena parte destes resíduos são utilizados na alimentação de animais de produção. O presente trabalho visou: 1) a obtenção de preparado enzimático termoestável, com alta atividade de xilanase, pectinase e celulases, a partir do cultivo de fungos filamentosos termofílicos por fermentação em estado sólido; 2) uso de suplemento mineral comercial como meio de cultivo para os fungos na fermentação sólida; 3) avaliar a estabilidade das enzimas frente às características do rúmen; 4) hidrólise enzimática. Os fungos Thermomyces lanuginosus, Thermomucor indicae-seudaticae e Rhizomucor pussilus escolhidos para essa finalidade, foram cultivadas a 45°C por 360 horas em fermentação em estado sólido (FES), utilizando-se como substratos, suplemento comercial (B) (Bellpeso SV* - composto de sais minerais, farelo de algodão e polpa cítrica e para efeitos de comparação farelo de algodão e polpa cítrica (35% e 65%) (A). A amostra foi retirada em 24h e todas as outras de 48h em 48h. A produção máxima de pectinase produzida pelo fungo T. indicae-seudaticae foi obtida em 168h (421,31U/g) no substrato A, e a máxima atividade de xilanase produzida pelo T. lanuginosus TO-03 e ROB foram de 644,30Ug e 865,15 U/g em 168h, respectivemente. A amilase foi produzida por todos os fungos, porém CMCase e Avicelase tiveram uma baixa produção e ligninases não foram detectadas. A temperatura e pH ótimo de pectinase produzida pelo fungo T. indicae-seudaticae foi de 55ºC e pH 4,5 e para xilanase produzida pelas duas linhagens de T. lanuginosus, em ambos os substratos foram 70ºC e pH ótimo 6,5, com exceção... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Many rot fungi of lignocellulosics material are being utilized as producers of enzymes in fermentation processes, in which, substrates of very little commercial value such as agricultural and agroindustrial residues are used. However, only a small portion of these residues are utilized in the production of animal feed. The present project proposes: 1) the attainment of prepared enzymatic thermostable, with high activity of xylanase, pectinase and cellulases, from the cultivation of filamentous thermophylic fungi from solid state fermentation; 2) the use of commercial mineral supplementation as medium of cultivation for the fungi in solid fermentation; 3) to evaluate the enzymes stability when facing the characteristics of the rumen; 4) enzymatic hydrolysis. Thermomyces lanuginosus, Thermomucor indicae-seudaticae and Rhizomucor pusillus fungi chosen for this purpose, were cultivated at 45°C, for 360 hours in solid state fermentation (SSF), utilizing as substrates, commercial supplement (Bellpeso SV* - composed of mineral salt, cotton meal and citrus pulp) (B) and for comparison purpose cotton meal and citrus pulp at 35% and 65% (A). The first sample was taken in 24hrs and all the others every 48hrs. The maximum production of pectinase produced by the fungus T. indicae-seudaticae was obtained in 168hrs (421.31U/g) in the commercial substrate A, and to maximum activity of xylanase produced by the T. lanuginosus TO-03 and ROB was of 644.30 U/g and 865.15 U/g in 168hrs, respectively. Amylase was produced by all of the fungi, however CMCase and Avycelase had a low production and ligninases was not detected. The optimun temperature and pH of pectinase produced by the fungus T. indicae-seudaticae were of 55ºC and pH 4.5 and for xylanase produced by the two lineages of T. lanuginosus, in both substrates were 70ºC and optimun pH 6.5, with the exception to ROB in the substrate B that presented... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Érika Barbosa Neves Graminha / Coorientador: Eleni Gomes / Banca: Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli / Banca: Hamilton Cabral / Mestre

Orientador: Mário de Beni Arrigoni / Banca: Paulo Henrique Mazza Rodrigues / Banca: Rafael da Costa Cervieri / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de diferentes doses do preparado de anticorpos policlonais (PAP) produzido contra diferentes cepas de bactérias ruminais sobre parâmetros de fermentação ruminal (pH, AGCC, nitrogênio amoniacal e lactato) em bovinos recebendo dieta de alto concentrado. Foram utilizadas oito fêmeas bovinas, canuladas no rúmen, alimentadas (ad libitum) duas vezes ao dia com dieta de alto concentrado. O delineamento experimental utilizado foi o quadrado latino 4 x 4, replicado duas vezes. Os quatro tratamentos foram estruturados de acordo com as diferentes doses do produto (T1: 0,0 g/animal/dia, "controle"; T2: 1,5 g/animal/dia; T3: 3,0 g/animal/dia e T4: 4,5 g/animal/dia) e em diferentes períodos experimentais. Cada período experimental foi constituído de 21 dias, sendo que as colheitas de líquido ruminal foram realizadas a cada duas horas nos tempos de 0 a 12 horas, após a alimentação, no último dia de cada período e posteriormente analisadas. Não foi observado efeito de interação entre tempo e tratamento (p > 0,05) para os dados de pH. Independentemente do tempo de amostragem, não foi observado efeito linear ou quadrático dos níveis de administração do PAP sobre o pH ruminal. Não foram observados efeitos significativos (p > 0,05) sobre a concentração de AGCC total, nitrogênio amoniacal ou proporções molares dos ácidos acético, propiônico e butírico e lactato. Também não foram observados efeitos nos parâmetros de degradabilidade in situ para as três diferentes fontes alimentares utilizadas e para os valores de digestibilidade in vivo. Com isso, pode-se concluir que as diferentes doses do PAP não foram suficientes para alterar o ambiente ruminal sendo necessária à realização de mais testes que refutem ou não essa resposta. / Abstract: Due the prohibition of antibiotics in ruminants diets arouse the necessity to find new alternatives for ionophores utilization without hazard to human health. The objective of the present study was to evaluate the effects of different doses of polyclonal antibody preparation (PAP) on ruminal fermentation parameters (pH, short chain fatty acids, ammonia nitrogen and lactate) in cattle fed high concentrate diets. Eight rumen cannulated cows were used in a latin square 4x4, twice replicated. The treatments were T1: 0.0 g/animal/day, "control"; T2: 1.5 g/animal/day; T3: 3.0 g/animal/day; T4: 4.5 g/animal/day with four experimental periods with 21 days each. Sample collection was carried out at the last day of each period with two hours of interval between each collection. There was no interaction between time and treatment (p > 0.05) for pH data. Independently from time of sampling there was no linear or quadratic effect on total short chain fatty acids (tSCFA), ammonia nitrogen (NH3-N) or molar proportion of acetate, propionate and butirate. There were no significant differences to degradability and digestibility values in this trial. Thus, it can be concluded that different levels of PAP were not sufficient to alter rumen environment with the necessity of more studies to validate or not this observation. / Mestre

Orientador: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca: Paulo Sergio Patto dos Santos / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: Os objetivos deste estudo foram determinar os valores hemogasométricos e equilíbrio ácido-básico, parâmetros vitais, pontuação do sistema Apgar, proteinograma sérico, contagem total e diferencial de leucócitos, glicemia e cortisolemia em cabritos nascidos de partos eutócicos e avaliar a influencia do tipo de parto sobre essas variáveis, do nascimento até o final do primeiro dia de vida. Para tanto, determinaram-se os valores hemogasométricos, parâmetros vitais, concentração sérica de proteínas totais, glicemia, e cortisolemia nos momentos zero, cinco dez e 15 minutos e 24 horas pós-parto. A pontuação Apgar foi realizada apenas nos momentos zero, cinco, dez e 15 minutos pós-parto e a contagem total e diferencial de leucócitos nos momentos zero e 24 horas pós-parto. Os animais neonatos nascidos de partos eutócicos apresentavam, no pós-parto imediato, quadro de acidose respiratória e os animais nascidos através de cesarianas demonstraram quadro de acidose mista; contudo, em ambos os grupos, o equilíbrio ácido-básico se normalizou no decorrer do primeiro dia de vida. Os animais nascidos de cesarianas foram classificados, segundo o sistema Apgar, como deprimidos; já, os nascidos de partos eutócicos, foram classificados como possuidores de boa vitalidade. O proteinograma sérico e a contagem total e diferencial de leucócitos não foram influenciados pelo tipo de parto. Os níveis séricos de cortisol dos cabritos nascidos de partos normais, no pós-parto imediato, apresentavam-se bem elevados e decresceram significativamente até o final do primeiro dia de vida. Animais nascidos de partos gemelares possuíam concentrações séricas de cortisol, ao nascimento, menores que os cabritos nascidos de partos simples / Abstract: The aims of this study were to determine blood gas values and acid-base balance, vital parameters, the Apgar score, serum total proteins, WBC, glucose levels and cortisolemia in newborn goat kids born from normal deliveries and evaluate the influence of the type of delivery on these variables, between delivery and the end of the first day of life. For this, the blood gas values, vital parameters, serum total protein (refractometry), glucose levels, and cortisolemia were measured immediately after birth, and then at five, ten and 15 minutes and 24 hours postpartum. The Apgar score was calculated only at birth and then at five, ten and 15 minutes after delivery, and WBC were determined immediately after birth and 24 hours postpartum. The kids born from normal delivery presented respiratory acidosis in the immediate postpartum period, while animals born by caesarian section showed mixed acidosis; however, in both groups, the acid-base balance returned to normal during the first day of life. Animals born in assisted births were classified according to Apgar scoring as depressed; in contrast, the kids born from normal deliveries were classified as having good vitality. Serum protein and WBC were not influenced by type of delivery. The serum cortisol levels of the kids born of normal deliveries in the immediate postpartum period, were very high but decreased significantly by the end of the first day of life. Animals born of twin pregnancies had serum cortisol levels, at birth, lower than the kids from single births / Mestre

Orientador: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca: Raimundo de Souza Lopes / Banca: José Jurandir Fagliari / Resumo: Os objetivos deste estudo foram determinar o período de absorção intestinal de macromoléculas colostrais em cabritos alimentados com colostro bovino e caprino, e avaliar a variação dos parâmetros bioquímicos, hemogasométricos e imunológicos de cabras e cabritos no período até 75 dias pós-parto. Para tanto, determinaram-se as concentrações séricas de proteína total (refratometria), separação eletroforética das frações protéicas (eletroforese em acetato de celulose), imunoglobulina G (IgG) bovina e caprina (imunodifusão radial), as atividades séricas de aspartatoaminotransferase (AST), fosfatase alcalina (FA), gamaglutamiltransferase (GGT), os teores de creatinina e ureia, e os valores hemogasométricos e glicêmicos, nos momentos zero, dois, sete, 15, 30 e 75 dias pós-parto. Os cabritos que ingeriram colostro bovino até 12 horas pós-nascimento adquiriram títulos regulares de imunoglobulinas. Após 22 horas pós-parto, os cabritos não tiveram absorção adequada de macromoléculas colostrais, sendo classificados como portadores de falha de transferência de imunidade passiva. Aos 75 dias, todos os cabritos possuíam inadequadas concentrações de IgG. Os cabritos alimentados com colostro caprino tiveram concentrações mais elevadas de IgG quando comparados aos daqueles que ingeriram colostro bovino. Aos dois dias pósnascimento a concentração de GGT teve correlação significativa com a IgG, podendo, esta enzima, ser utilizada na avaliação da transferência de imunidade passiva. As cabras e os cabritos tiveram variações protéicas, bioquímicas e hemogasométricas até os 75 dias pós-parto, com pouca relevância clínica. / Abstract: The aims of this study was to determine the absorption period of colostrum macromolecules by intestinal wall of goat kids fed bovine or caprine colostrum, and evaluate the variation of biochemistry, blood gas and immunologic parameters of goats and kids at post-partum period until 75 days. To accomplish these objectives the serum concentrations of total protein (refractometry), electrophoretic proteins fractions separation (acetate cellulose electrophoresis), bovine and caprine immunoglobulin G (IgG) by radial immunodiffusion assay, biochemicals assays for aspartateaminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), gammaglutamyltransferase (GGT), creatinine and urea, hole blood assays for blood gas parameters and glycemia were determined at zero, two, seven, 15, 30 and 75 days postpartum. Kids which fed bovine colostrum until 12 hours after birth have acquired regular immunoglobulins titres. After 22 hours postpartum kids didn't presented adequate absorption of colostrum macromolecules, being classified as failure of passive immunity transference. Although all kids presented bovine IgG at 75 days after birth, their low concentrations doesn't provide adequate protection. Kids fed caprine colostrum presented higher concentrations of IgG compared to those fed bovine colostrum. At two days after birth GGT concentration correlated significantly with IgG, so it can be used as passive immunity predictor. Goats and kids had variations on protein, biochemical and blood gas variables until 75 days postpartum, but with physiological and/or nutritional causes, these findings had little clinical relevance for the animals. / Mestre