Orientador: Mário De Beni Arrigoni / Banca: Rafael da Costa Cervieri / Banca: Flávio Augusto Portela Santos / Resumo: Esse estudo, conduzido no confinamento experimental da UNESP - Botucatu, foi realizado para testar anticorpos contra as bactérias ruminais S. bovis e F. necrophorum e várias cepas de bactérias proteolíticas sobre o desempenho e incidências de paraqueratose ruminal (IPR) e abscesso hepático em bovinos jovens com diferentes graus de sangue Zebu. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo fatorial 3X2 em parcelas subdivididas com três repetições (4 animais/baia), aonde três grupos genéticos (24 Tri-Cross (TC) - ½ Brangus, ¼ Angus, ¼ Nelore; 24 Canchim (CC) - ⅝ Charolais, ⅜ Nelore e 24 Nelores (NE)) e dois aditivos alimentares (anticorpos policlonais - 10 ml/cabeça/dia (AP) e monensina sódica - 30 mg/kg de dieta (MN)) foram as variáveis estudadas em três períodos de coleta de dados, correspondentes as três dietas com níveis crescentes de concentrado (73, 82 e 85%). Não houve interação (P>0,05) entre os grupos genéticos e os aditivos alimentares estudados. Animais suplementados com AP apresentaram similares (P>0,05) ganho de peso diário (GPD), ingestão de matéria seca em quilos (IMSKG), conversão alimentar (CA) e custo para ganhar um quilo de peso vivo que aqueles suplementados com MN. A ingestão de matéria seca em porcentagem do peso vivo (IMSPV) foi maior (P<0,05) para animais suplementados com AP que aqueles suplementados com MN. As IMSPV e IMSKG foram maiores na dieta de 73% de concentrado (P<0,05) para animais suplementados com AP e não diferiram entre os aditivos alimentares para as outras duas dietas (P>0,05). Conforme as dietas propostas, GPD e IMSPV diminuíram (P<0,05) e CA e IMSKG aumentaram, linearmente, durante o estudo (P<0,05). Animais suplementados com AP apresentarem menor (P=0,09) IPR que àqueles suplementados com MN. TC e CC apresentaram maiores (P<0,05) IMS e GDP e melhor (P<0,05) CA que NE. Rumens de NE mostraram, significativamente (P<0,05), maiores IPR que TC e CC. / Abstract: This study, conducted at the São Paulo State University feedlot, Botucatu Campus, Brazil, was designed to test antibodies against S. bovis, F. necrophorum, and several strains of proteolytic bacteria (RMT) on performance and parakeratosis and liver abscesses incidences of Bos indicus-based types (BIBT). The experiment was designed as a split plot 3X2 factorial scheme, replicated thrice (4 bulls/pen), in which 24 8-mo-old bulls (297 kg) of each of three BIBT: 3-way cross (½ Brangus, ¼ Angus, ¼ Nellore; TC), Canchim (⅝ Charolais, ⅜ Nellore; CC), or Nellore (NE) were fed one of two diets containing either monensin (MO) at 30 mg/kg of diet or RMT at 10 mL/head/d and evaluated in increasing levels of concentrate (73, 82 and 85%). There were no interactions (P>0.05) between breed type and feed additives. Bulls fed RMT had similar (P>0.05) average daily gain (ADG), dry matter intake in kilos (DMIKG), cost to gain one kilo of body weight and feed conversion (FC) as those fed MO. When analyzed as percentage of BW, bulls fed RMT consumed (P<0.05) more feed than those fed MO. DMIKG and DMIBW were higher in 73% concentrate but did not differ in the others two diets evaluated. According to diets offered, ADG and DMIBW were reduced (P<0.05) and DMIKG and FC (P<0.05) were increased as the level of concentrate in the diet got higher. Bulls fed RMT to have lesser (P=0.09) rumen parakeratosis scores than those fed MO. TC and CC had greater (P<0.05) DMI and ADG, and better (P<0.05) FC than NE. Rumens from NE bulls had greater (P<0.05) parakeratosis scores than CC and TC. Just one liver abscess was found in this study what led to conclude as no abscesses incidence. Feeding RMT enhanced intake of Bos indicus-based bulls fed 73% concentrate diet while maintaining rumen health, and permitting performance similar to that of bulls fed monensin. RMT could be an eventual substitute if monensin was really prohibited. / Mestre

Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Márjorie de Assis Golim / Banca: Rosimeire Aparecida Roela / Banca: Paulo Inácio da Costa / Banca: Rosimeire Aparecida Roela / Resumo: O sistema imunológico é dividido em imunidade natural e adquirido (humoral e celular). Os linfócitos B são os principais efetores da resposta humoral. Junto aos linfócitos T, mediam diversas reações imunológicas. Todos os leucócitos possuem antígenos de superfície (clusters of differentiation - CD) determinados que possuem as mais diferentes funções. As expressões destes CDs podem variar na maturação e na presença de patologias, sendo as de maior prevalência e gravidade as leucemias e linfomas, tornando-se marcadores importantes que podem ser avaliados por citometria de fluxo ou imunoquímica através do uso de anticorpos monoclonais murinos (AcMm). Após produção dos AcMm é necessário caracterizar e validá-los. Utilizou-se 11 clones que apresentaram especificidade somente contra linfócitos B. Pela técnica de Western Blotting, 5 anticorpos (3 do tipo IgM e 2 do tipo IgG) foram escolhidos de acordo com sua possível especificidade e importância clínica. A validação dos anticorpos tipo IgM foi realizada por citometria de fluxo utilizando anticorpo comercial para comparação de quantidade de células marcadas, sendo testados em 20 amostras de indivíduos normais e 20 de indivíduos portadores de neoplasias hematológicas diversas. O LINB B, que foi comparado com o anti-CD171 e anti-CD45RA, apresentando diferença estatística somente em relação ao anti-CD45RA, e identidade com o anti-CD171. O LINB C, que foi comparado com o anti-CD20 e anti-CD19, não apresentou diferença estatística significante quando frente a ambos anticorpos comerciais. No teste de regressão linear, houve maior correlação dos resultados com o anti-CD19. O LINB E foi comparado somente contra o anti-CD107b, havendo grande identidade entre os dois. Dos resultados apresentados, conclui-se que o LINBs B e E apresentam grandes chances de serem específicos contra... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The immunological system is divided into: natural immunity and acquired immunity (celular and humoral responses). The B lymphocytes are the main effectors of the humoral response. Together with the T lymphocytes, they make several immunological reactions. All leucocytes have antigens on the surface (clusters of differentiation - CD) that possess lot of functions. The expressions of these CDs may be altered during maturation and pathologies, like leukemia and lymphomas, becoming important markers that can be evaluated by flow cytometry or immunochemistry thought murine monoclonals antibodies (Mab). After production of Mabs it's necessary characterize and validated them. We used 11 clones that presented Mab against B lymphocytes only. By Western Blotting method 5 Mab (3 IgM and 2 IgG) were chosen according you possible especifity and clinical importance. The validation of IgM Mabs were made by flow cytometry using commercial antibody to compare the quantity of marked cells, being used 20 samples from normal people and 20 samples from person with hematological cancer. The LINB B, compared to anti-CD171 and anti-CD45RA, presented statistical difference from anti-CD45RA and identity to anti-CD171. The LINB C, compared to anti-CD19 and anti-CD20, didn't presented any statistical difference from both commercial antibodies, although it correlates better with anti-CD19. The LINB E was compared to anti-CD107b, where it appears great identity between then. By the present results, we conclude that LINB B and E need multicentre studies to expand validation, and LINB C, needs to increase the samples to have a statistical validation. The two IgGs LINB, possible anti-CD138, weren't test yet. / Mestre

Orientador: Mário de Beni Arrigoni / Banca: Paulo Roberto Leme / Banca: Rafael da Costa Cervieri / Resumo: O presente estudo teve por objetivo avaliar os possíveis impactos causados pela suplementação de anticorpos policlonais Y contra Streptococcus bovis, Fusobacterium necrophorum e algumas cepas de bacterias proteolíticas, ou monensina sódica na carcaça e qualidade de carne de bovinos jovens. Foram usados 72 animais, sendo 24 nelores puros, NE, 24 canchins (3/8 Nelore e 5/8 Charolês, CC) e 24 Tri-cross (½ sangue Brangus, ¼ Nelore e ¼ Angus, TC), desmamados com sete meses de idade. Os animais foram alimentados com dieta de alta proporção de concentrado duas vezes ao dia, no período da manhã e tarde e monitorados a cada 28 dias com ultra-som em tempo real. Não houve interação (P>0,05) aditivo x grupo genético. NE apresentaram menor (P<0,05) peso inicial, final, área de olho de lombo e quantidade de ácidos graxos saturados e maior CLA (P<0,01) quando comparados aos outros grupos genéticos. CC apresentou maior (P<0,05) área de olho de lombo e menor (P<0,05) espessura de gordura subcutânea, comparando TC e NE. TC obteve menor (P<0,05) rendimento de carcaça e força de cisalhamento. O grupo suplementado com anticorpos obteve menor rendimento de carcaça, enquanto não houve efeito de aditivo para os demais parâmetros avaliados. O uso de anticorpos não afetou negativamente os parâmetros estudados neste trabalho, salvo o rendimento de carcaça. / Abstract: The objective of this study was to evaluate effects of feed additive (300 mg monensin/hd, MO, vs 10 mL/hd of a polyclonal antibody preparation against lactateproducing bacteria, PAP ) or biotype (Nellore, NE, Canchim cross, 5/8 Charolais, 3/8 Nellore, CC, or a 3-way cross, ½ Brangus, ¼ Nellore and ¼ Angus, TC) on ultrasound (US)-assessed measures of fat and ribeye area, carcass characteristics, and longissimus dorsi tenderness (shear force, SF, and myofibrillar fragmentation index, MFI) of bullocks fed high-concentrate diets. 72 bullocks were allocated in a 2 X 3 factorial arrangement replicated thrice (4 bullocks/pen) of feed additive (FA) and biotype (GG), and monitored monthly for a 107-d (CC and TC) or 147-d (NE) feeding period. Analyses of variance included the initial measurement covariate when appropriate (P < 0.05). Final (BW) and hot carcass weight (HCW) were unaffected (P < 0.05) by FA, but were lower (P < 0.05) for NE than CC and TC. Dressing percentage (DP) was lower (P < 0.05) for TC than NE and CC bullocks. Monensin had greater (P < 0.05) DP than PAP. There was no effect (P > 0.05) of FA on monthly measurements of fat depth (BFT), rump fat (P8), visceral fat (VF), ribeye area (REA), or SF and MFI. Bullocks of CC biotype were leaner (P < 0.05; less BFT and P8) than those of TC and NE biotypes. Bullocks of NE biotype had smaller (P < 0.05) REA than those of CC and TC biotypes. Steaks of TC biotype had lower (P < 0.05) SF values than those of the other biotypes. There were no differences (P > 0.05) in MFI or VF due to biotypes. NE presented greater (P<0,01) concentrations of unsaturated fatty acids and CLA. Other than effects of PAP on DP, PAP did not affect carcass fat, REA or tenderness. / Mestre

Resumo: O presente estudo investigou a ocorrência de anticorpos contra o vírus da arterite eqüina, utilizando a técnica de soroneutralização viral em 1.400 eqüinos criados nas Mesorregiões Macro Metropolitana Paulista e Campinas, pertencentes a 42 municípios do estado de São Paulo (SP), Brasil entre os meses de janeiro de 2007 a dezembro de 2008. Do total das amostras, 80 (5,71%) apresentaram anticorpos para o vírus (títulos entre 4 e 4096). Dentre os 42 municípios amostrados, 15 (35,7%) apresentaram pelo menos um animal sororeagente. Foram analisadas 238 propriedades das quais 41 apresentaram ao menos um animal sororeagente. A ocorrência de animais reagentes foi maior em cavalos destinados ao esporte, particularmente das raças de Salto e Quarto de Milha e foi semelhante entre machos e fêmeas. A ocorrência também foi maior em animais acima de 24 meses de idade. Os resultados obtidos sugerem a circulação do vírus nos criatórios amostrados e alertam para o impacto econômico- sanitário da doença para a eqüideocultura do estado de São Paulo / Abstract: This study investigate the occurence of arteritis virus antibodies using virus neutralization teste in 1,400 equines from Campinas and Macro Metropolitan Paulista Mesoregions which belong to the 42 cities located on State of Sao Paulo, Brazil between january of 2007 until december of 2008. All the samples, 80 (5.71%) showed antibodies to equine arteritis virus (titers ranging from 4 to 4096). Among the 42 cities, 15 (35.7%) presented at least one positive animal to equine arteritis virus. Were studied 238 farms, and from these 41 showed at least one soropositive animal. The prevalence was higher in sport horses like Jumping Horses, Quarter Horses and was similar between females and males. The seropositive ocurrence was higher in animals above 24 months of age. These results suggest the circulation of virus among horse population in farms sampled and alert to sanitary and economical importance of this disease for the Sao Paulo State equine husbandry / Orientador: Alexandre Secorun Borges / Coorientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Wilson Roberto Fernandes / Banca: João Pessoa Araújo Junior / Mestre

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Aramis Augusto Pinto / Banca: José Antonio Jerez / Resumo: A pesquisa sorológica usando Imunodifusão em Gel de Ágar (IOGA) e ELISA Bloqueio de Fase Líquida (BFL-EUSA) foram aplicadas nesse estudo no período de 1996 a 1998, para detectar ou titular, respectivamente, anticorpos contra o antígeno VIA (Virus Infection Associated) e as estirpes de referência 01 Campos, A24 Cruzeiro e C3 Indaial, em algumas espécies silvestres e domésticas susceptíveis e não vacinadas. Do total de 383 amostras sanguíneas colhidas, 78 amostras eram de bovinos de vida livre; 39 de búfalos indianos; 139 de ovinos; 63 de suínos domésticos; 49 de porcos do mato e 15 de cervídeos. Todas as espécies investigadas, exceto os cervídeos, apresentaram anticorpos contra o Vírus da Febre Aftosa (VFA). O teste de IDGA detectou 47 (12,3%) amostras positivas ao antígeno VIA, principalmente em bovinos baguás e búfalos. O BFL-ELISA identificou 175 (45,7%) soros com presença de anticorpos a uma das três estirpes virais; Foi encontrado um maior número de amostras positivas contra a estirpe C3 Indaial bem como maiores títulos, em bovinos baguás. Os bubalinos e ovinos apresentaram uma maior reatividade contra as estirpes A24 Cruzeiro e 01 Campos, respectivamente, demonstrando maior número de soros reagentes. No entanto, ambas as espécies revelaram maiores títulos para a estirpe C3 Indaial. Nos suínos domésticos e silvestres, predominou a reatividade a estirpe A24 Cruzeiro. Em bovinos, a maior ocorrência de soros positivos ao teste de IOGA foi encontrada em animais entre 12 a 36 meses de idade, e na prova BFL-ELISA, em animais acima de 36 meses. Nas demais espécies, ambos os testes laboratoriais utilizados demonstraram um maior número de soros reativos em indivíduos adultos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A serologic survey, using Agar Gel Immunodifusion (AGID) and liquid Phase Blocking-ELISA (LPB-ELISA) were assessed in this study, in the period from to 1996 to 1998, to detect or titer, respectively, antibodies to Virus Infection Associated Antigen (VIAA) and the foot-and-mouth disease virus (FMDV) 01 Campos, A24 Cruzeiro e C3 Indaial reference strains, in non-vaccinated domestic and wild susceptible animal species. A total of 383 blood serum samples were collected from free-ranging cattle (78 samples), water buffalo (39 samples), sheep (139 samples), domestic (63 samples) and wild pigs (49 samples) and deers (15 samples), living in the Pantanal (Nhecolândia region) of Mato Grosso do Sul State, Brazil. All the investigated species, excepting deer, showed positive animais to FMDV antigens. The AGID detected a total of 47 (12,3%) positive animais for VIA antigen, mostly of them were free-living cattle and buffalo. The LPD-EUSA identified 175 (45,7%) serum samples as reactive to FMDV antigens, specially among cattle, buffalo and sheep. The predominant reactivity to FMDV antigens, characterized by the higher number of positives and the higher antibodies titers, were detected to C3 Indaial strain, particularly among the free-Iiving cattle. Buffaloes and pigs showed, in turn, a prominent reactivity to A24 Cruzeiro strain, while sheep reacted more to 01 Campos strain, though buffalo and sheep serum samples had higher antibody titers to C3 Indaial strain. The highest frequency of positive animais to VIA antigen were found in free-ranging cattle, whose age ranged from 12 to 36 months, contrasting to the results of LPB-EUSA that detected the highest rate of positives in the older bovines (~36 months). The older animais from other species demonstrated, in both serological tests, the highest frequency of positivity... (Complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Mestre

Resumo: Yersinia enterocolitica é um enteropatógeno que pode levar ao desenvolvimento de artrite reativa. Um dos mecanismos imunomoduladores usados pelos patógenos artritogênicos é a ativação policlonal de linfócitos. O objetivo deste estudo foi verificar se ocorre ativação policlonal de linfócitos B e comparar o padrão isotípico de imunoglobulinas produzidas durante a infecção com Y. enterocolitica O:8 em linhagens de camundongos suscetíveis (BALB/c) e resistentes (C57BL/6), bem como analisar o padrão de secreção de citocinas pró-inflamatórias e regulatórias pelas populações de células T CD4+ e CD8+. / Abstract: Yersinia enterocolitica is an enteropathogen that can lead to the development of reactive arthritis. One of the immunomodulating mechanisms used by arthritogenic pathogens is the polyclonal activation of lymphocytes. The objective of this study was to verify if the polyclonal activation of B-lymphocytes occur and to compare the different immunoglobulin (Ig) isotypes produced during the infection with Y. enterocolitica O:8 in susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice strains. We also analyzed the production of pro-inflammatory and regulatory cytokines in T CD4+ and T CD8+ lymphocytes populations. / Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Maria Regina D'Império Lima / Banca: Phileno Pinge / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Deise Pasetto Falcão / Doutor

Resumo: O objetivo deste estudo foi padronizar a reação de Imunofluorescência direta (IFD) para detecção de oocistos de Cryptosporidium parvum em amostras fecais de bezerros. Os anticorpos policlonais anti-C. parvum foram produzidos em dois coelhos adultos da raça Nova Zelândia, e titulados por meio do ensaio imuno-enzimático indireto (ELISA). A fração de imunoglobulina G (IgG) foi purificada a partir do soro do coelho imunizado, utilizando-se diálise em sulfato de amônio seguida de cromatografia em coluna de DEAE celulose e conjugação com isotiocianato de fluoresceína. Por meio da IFD padronizada, foi testada a reatividade cruzada do conjugado produzido contra outras espécies de Cryptosporidium (C. andersoni e C. serpentis) e com outros agentes etiológicos presentes em fezes de bovinos (Escherichia coli, Eimeria sp. e Candida sp.). A IFD foi comparada à microscopia com contraste de fase em solução de Sheather (MCF), avaliando a capacidade de detecção de oocistos de Cryptosporidium sp. em alíquotas de fezes de bezerro inoculadas com oocistos de C. parvum, e em amostras fecais de bezerros naturalmente infectados provenientes de 37 propriedades leiteiras da região de Araçatuba, SP. Nas amostras comprovadas como positivas, foi ainda feita uma análise semi-quantitativa de oocistos de Cryptosporidium sp., visualizados por campo de microscopia em ambas as técnicas. O conjugado anti-C. parvum apresentou reatividade com C. andersoni e C. serpentis. A IFD foi utilizada com sucesso para detecção de oocistos de C. parvum em fezes de bezerros, apresentando sensibilidade para detecção de até 104 oocistos em 3 g de fezes. Entre as 300 amostras fecais de bezerros naturalmente infectados, 19,67% (59/300) foram positivas para a presença de oocistos de Cryptosporidium sp. pela IFD, apresentando diferença estatisticamente significante (p<0.05) em relação às amostras positivas pela MCF / Abstract: The objective of this experiment was to standardize the direct immunofluorescence assay (DIF) for detection of Cryptosporidium parvum oocysts in fecal samples of calves. The anti-C. parvum polyclonal antibodies were produced in two adult rabbits of New Zealand breed, and titrated by an indirect enzyme-linked immunosorbent (ELISA). The immunoglobulin G (IgG) was purified from the serum of immunized rabbits by dialysis in ammonium sulfate followed by column chromatography on DEAE cellulose, and conjugated with fluorescein isothiocyanate. Using DIF the anti-C. parvum conjugate was tested for the presence of cross-reactivity against other species of Cryptosporidium (C. andersoni and C. serpentis), and other infectious agents present in cattle fecal samples (Escherichia coli, Eimeria sp. and Candida sp.). A comparison between the DIF and phase contrast microscopy in Sheather solution (MCF) was accomplished for evaluation of the efficiency of both techniques for detection of Cryptosporidium sp. oocysts in fecal samples of calves seeded with C. parvum oocysts, and in fecal samples from naturally infected calves from 37 dairy farms in the region of Araçatuba, SP. A semi-quantitative analysis of Cryptosporidium sp. oocysts per microscopic field was accomplished for both techniques. The anti-C. parvum conjugate showed cross-reactivity with C. andersoni and C. serpentis oocysts. The DIF has been used successfully in the detection of C. parvum oocysts in fecal samples of calves, with sensitivity for detecting 104 oocysts in 3 g of fecal samples. Among the 300 fecal samples from naturally infected calves, 19.67% (59/300) were positive for Cryptosporidium oocysts by DIF, with significant statistical difference (p <0.05) when compared to the number of positive samples by MCF / Orientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Coorientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Ricardo Velludo Gomes de Soutello / Banca: Luzia Helena Queiroz / Mestre

Orientador: Mario de Beni Arrigoni / Banca: Paulo Roberto Leme / Banca: Paulo Henrique Mazza Rodrigues / Resumo: Esse estudo foi realizado para avaliar o efeito do preparado de anticorpos policlonais (PAP) e/ou da monensina sódica (MON) sobre o desempenho, características e perfil de ácidos graxos da carcaça em bovinos Brangus Jovens confinados. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2 x 2 com medidas repetidas no tempo, sendo os fatores a inclusão ou não de MON e de PAP, avaliados em dois períodos (crescimento e terminação), totalizando 24 baias, sendo 6 repetições (baia) por tratamento (3 animais/baia), com 72 Brangus machos não castrados (285.9 ± 38.7 kg). As dietas dos tratamentos foram diferentes apenas no tocante aos aditivos utilizados: controle (sem aditivo), MON, PAP ou MON + PAP (MIX). Não foi observado efeito (P>0,05) da inclusão do PAP (+) em relação a não inclusão do PAP (-) para nenhuma das variáveis do desempenho. Também não foi encontrada interação (P>0,05) entre os aditivos, nem como para aditivos e período para as variáveis de desempenho. No entanto, foi observado efeito (P < 0,05) da inclusão de MON (+) em relação a não inclusão de MON (-) para as variáveis ganho de peso diário (GPD), ganho de peso total (GP), peso vivo final (PVF), conversão alimentar (CA), eficiência alimentar (EA), custo para ganhar um kilo de peso vivo (CKPV) e peso de carcaça quente (PCQ), em que os animais que receberam MON (+) tiveram maior (P< 0,05) GPD, GP, PVF e melhor (P< 0,05) CA, EA e CKPV que aqueles que não receberam MON (-). Para as variáveis de ultrassom e perfil de ácidos graxos não foram observados efeitos principais (P > 0,05) dos aditivos. Contudo, foi observada interação (P < 0,05) entre MON e período para a variável área de olho de lombo final, embora não tenha sido constatada diferença estatística (P>0,05) entre animais que receberam ou não MON dentro de cada período... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study, conducted at the São Paulo State University feedlot, Botucatu Campus, Brazil, was designed to test the effects of polyclonal antibody preparation (PAP) against rumen bacteria and/or monensin (MON) on feedlot performance, carcass characteristics and fatty acid profile of Brangus bullocks. Seventy-two 9-mo-old bullocks (285.9 ± 38.7 kg) were assigned to 24 pens (3 bullocks/pen) and used in a completely randomized design with 2 x 2 factorial arrangement of treatments, where the factors were inclusion or not of PAP or MON, measured over two phases, growing and finishing, replicated 6 times. The diets treatments were different only about feed additives used: control (no additive), MON, PAP or MON + PAP (MIX). No significant (P > 0.05) PAP main effect, interactions between feed additives or between feed additives and phase were observed for any performance variables. However, significant (P>0.05) MON main effect were observed for average daily gain (ADG), total gain (TG), final body weigh (FBW), hot carcass weight (HCW), feed:gain ratio (G:F) and cost to gain one kilo of BW (CKBW), animals fed MON had higher (P<0,05) ADG, TG, FBW and better (P<0.05) G:F and CKBW than animals not fed MON. For ultrasound and fatty acid profile (FAP) variables, no significant (P>0.05) feed additives main effect were observed. However, significant (P>0.05) interactions between MON and phase were observed for final rib eye area variable, though, no significancy (P>0.05) between animals fed MON or not inside each phase were observed. For FAP, significant (P>0.05) interactions were observed between feed additives for the variables linoleic acid, polyunsaturated fatty acid (PUFA), polyunsaturated fatty acid per saturated fatty acid (PUFA/AGS) and polyunsaturated fatty acid per monounsaturated fatty acid (PUFA/MUFA). However, no significant (P>0.05) means effects among treatments were observed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Aramis Augusto Pinto / Banca: Camillo Del Cistia Andrade / Resumo: A nucleoproteina do vírus da doença de Newcastle (VDN) é um dos componentes antigênicos ideais para fazer o imunodiagnóstico da DN, por ser mais conservada e possuir uma elevada imunogenicidade. A sequência completa do gene da nucleoproteína (NP) (1470 pb) da estirpe La Sota do VDN foi amplificada, nesse estudo, por RT-PCR e submetida a clonagem no vetor de expressão em Escherichia coli pETSUMO (Invitrogen). A proteína NP foi expressa sob a forma de uma proteína recombinante de fusão contendo o peptídeo SUMO e a sequência de poli-histidina, em seguida foi purificada em resina de níquel-agarose e caracterizada por SDSPAGE e Western-blotting, apresentando um peso molecular de cerca de 66kDa e reatividade com anticorpos policlonais de galinhas hiperimunizadas com esse mesmo vírus. Foi então desenvolvido um método indireto de ELISA com essa proteína (NPVDN- ELISA) para ser aplicado na detecção de anticorpos anti-virais específicos. O NP-VDN-ELISA revelou ser capaz de diferenciar amostras de soros positivos para o VDN das amostras de soros negativos e, na comparação dos resultados obtidos na análise de 125 soros de campo pelo NP-VDN-ELISA com os do teste de Inibição da Hemaglutinação (HI), foi encontrado um coeficiente de correlação significante entre estes métodos (r = 0,8345), bem como elevadas sensibilidade (89,3%), acurácia (90,4%) e especificidade (95,5%). Concluindo, a proteína NP recombinante expressa pelo sistema pET SUMO - E. coli compartilha os principais epítopos para interagir com anticorpos de galinhas produzidos contra a proteína NP do VDN, tendo, portanto, um bom potencial de ser aplicada de forma bem sucedida e com vantagens no teste de ELISA para realizar de forma mais rápida e prática, o imunodiagnóstico da DN de um maior número de amostras séricas de galinhas / Abstract: The nucleocapsid protein (NP) of Newcastle Disease Virus (NDV), is a preferred choice to develop a serologic assay on account of highly conserved sequences, and high immunogenicity. The whole open-reading-frame (orf) of NP gene from LaSota strain of NDV was amplified by RT-PCR and cloned in pETSUMO vector (Invitrogen) and Escherichia coli as cellular host. The NP protein was expressed as a fusion recombinant protein containing SUMO peptide and poly-histidine tags. This protein was easily purified in nickel-agarose resin, and characterized by SDS-PAGE and Western-blotting, showing a molecular weight of approximately 66 kDa and reactivity with polyclonal antibodies from NDV hiperimmunized chickens. The recombinant NP protein was used as antigen to develop an indirect ELISA (NP-NDVELISA) for the detection chicken anti-NDV antibodies. The capability of the recombinant NP protein to differentiate positive from normal chicken sera was evident in NP-NDV-ELISA, and by comparing this ELISA with haemagglutination-inhibition test (HI) a high and significant correlation with the haemagglutination-inhibition test (r = 0,8345), as well as high sensitivity (89,3%), specificity (95,5%) and accuracy (90,4%) were obtained. In conclusion the results indicated that the recombinant NP protein shared the main epitopes with the homologous viral protein and has a great potential to be advantageously used in the ELISA for the analysis of large number of samples in the DN immunodiagnosis / Mestre

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: João Pessoa Araujo Júnior / Banca: Valéria Marçal Félix de Lima / Banca: Edison Luiz Durigon / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Resumo: O vírus da Bronquite infecciosa (VBI) é um Coronavírus aviário que infecta aves domésticas de corte e postura, ocasionando grandes perdas econômicas na indústria avícola. Dada a natureza altamente contagiosa e aguda da doença, há uma grande necessidade do desenvolvimento de métodos diagnósticos que possam ajudar na detecção e/ou caracterização de estirpes variantes do VBI. Sendo assim, para auxiliar no diagnostico laboratorial da infecção, foi construída uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais pela técnica de Phage-display. Para tanto, após a imunização de galinhas com a estirpe vacinal H120, foi extraído o RNA total do baço das aves imunizadas e amplificadas as cadeias variáveis leve e pesada que foram unidas por linker, originando o fragmento gênico de cadeia única scFv. Após a realização de três ciclos de seleção foram obtidos 400 clones que foram avaliados em ensaios de ELISA e Western blotting para averiguação da especificidade dos mesmos frente às proteínas da estirpe H120. Após realização dos testes foram selecionados dois clones, um que apresentou grande reatividade para com a proteína de nucleocapsídeo (N) (scFv-N) e o outro com reatividade para com a subunidade 1 da glicoproteína de superfície (S) (scFv-S1). O anticorpo scFv-S1 quando utilizado em ensaio de vírus-neutralização em ovos embrionados mostrou titulo significativo de proteção. Já em testes de ELISA utilizando estirpes de referência e isolados brasileiros de campo do VBI, o anticorpo scFv-N foi capaz de detectar todas as estirpes (H120, M41, Arkansas, IBVPR05, IBVPR02, IBVPR01, IBVSC01), enquanto que o scFv-S1 pode discriminar as estirpes pertencentes ao sorotipo Massachusetts (H120, M41 e IBVSC01) das demais estirpes variantes avaliadas. Os fragmentos de anticorpos scFv-N e scFv-S1 também mostraram bons resultados quando utilizados na técnica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Infectious bronchitis virus (IBV), the coronavirus of the chicken, is one of the main causes of economic loss within the poultry industry, affecting the performance of meattype and egg-laying domestic fowls. Given the highly contagious and acute nature of the disease, there is an urgent need for the development of diagnostic assays that can detect and/or characterize IBV strains. In order to improve the laboratory diagnosis of IBV infection, phage-displayed recombinant antibody library derived from splenic mRNA of chickens immunized with H120 vaccine strain of infectious bronchitis virus (IBV) was constructed as single chain variable fragments (scFv) by overlap extension polymerase chain reaction (PCR) of the individual heavy (VH) and light (VL) chain variable gene segments. After three rounds of panning selection, ten scFv phage display antibodies of 400 randomly chosen clones were demonstrated to react with IBV antigens by ELISA. The western blot analysis selected two scFv antibodies reacting strongly with nucleocapsid (N) (scFv-N) protein or subunit 1 of spike glycoprotein (S1) (scFv-S1) of IBV. The anti-S1 scFv antibody showed a significant neutralization titre in embryonating chicken egg test. In ELISA analysis using reference IBV strains and Brazilian field isolates, the anti-N scFv antibody was able to detect all strains (H120, M41, ARKANSAS, IBVPR05, IBVPR02, IBVPR01, IBVSC01), while the anti-S1 could discriminate Massachusetts serotype (H120, M41 and IBVSC01) between variant strains. A scFv-based indirect immunoperoxidase (IP) procedure was also applied to detect infectious bronchitis virus (IBV) antigens in formalin-fixed tracheal tissue sections. Thus, the results showed that scFv-N and scFv-S1 antibodies can be used for the detection and differentiation of IBV strains. / Doutor