Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Patología Animal. / Se realizó un desafío experimental con el objeto de dilucidar si existe variación en la susceptibilidad/resistencia frente a piscirickettsiosis entre familias de la especie salmón del Atlántico (Salmo salar). Para este fin, se emplearon 4.955 salmones del Atlántico, de edad aproximada 10 meses, en estadio de “pre-smolt” pertenecientes a 29 familias, cada una compuesta por propios hermanos. El número de peces inoculados por familia varió desde un mínimo de 80 hasta un máximo de 87 ejemplares. Los animales fueron infectados con Piscirickettsia salmonis mediante inyección intraperitoneal (0,2 x 103,8 DICT50/pez). A su vez, otros 86 individuos de cada familia fueron utilizados como control, siendo inyectados por la misma vía y en volumen equivalente, con solución “buffer” fosfato salino (PBS) pH 7,2 estéril. Los peces inoculados se mantuvieron cohabitando con los controles en dos estanques de 2,5 m3 de modo de tener una réplica experimental. El ensayo tuvo una duración de 52 días post-inoculación. Durante este período, se efectuaron registros diarios de mortalidad. Mediante el método estadístico de Kaplan-Meier, se obtuvieron los valores de supervivencia de cada familia y posteriormente estos datos fueron comparados usando la prueba de Log-rank. Hubo mortalidades atribuibles a la enfermedad en todas las familias inoculadas con la bacteria y los porcentajes finales de mortalidad acumulada, ordenados por familia, variaron entre 10,5% y 70%. Las probabilidades de supervivencia fueron significativamente diferentes entre las distintas familias (p ≤ 0,05). Los resultados muestran que hay variaciones en la susceptibilidad/resistencia a piscirickettsiosis entre familias de salmón del Atlántico y que estos rasgos dependen, al menos en parte, de las características genotípicas de estos peces / In this work, susceptibility to piscirickettsiosis among some Atlantic salmon (Salmo salar) families was compared by challenging them with Piscirickettsia salmonis. Juvenile fish belonging to 29 different full sibling families were used. Per family, a minimum of 80 and a maximum of 87 fish were infected by intraperitoneal injection with a P. salmonis suspension (0.2 x 103.8 TCID50/fish) and 86 individuals were sham-inoculated with sterile PBS. Fish were held in two identical tanks supplied with fresh water. They were pit-tagged and allotted in such a way that every family had half of its inoculated (n~43) and half of its sham- inoculated fish (n=43) cohabiting in each tank. Trial lasted 52 days after the inoculation time. Final cumulative mortalities ranged from 10.5 to 70%. Kaplan-Meier analysis and Log-rank comparison tests showed that survival likeliness was different among all the families (p≤ 0.05). Same comparison between specific pairs of families exhibited survival differences in a high number of them too. Results show that there are significant variations in the degree of susceptibility/resistance to P. salmonis among families of Atlantic salmon and strongly suggest that this outcome is in its turn associated with differences in fish genotypes / Financiamiento: Proyectos Innova N° 05CT6PPT-10 y Fondecyt N° 1080692.

El importante aumento registrado en el número de investigaciones iniciadas para la aplicación de medidas de salvaguardias durante el último tiempo, junto a la aplicación y luego revocación de medidas de salvaguardia sobre las importaciones de salmón por parte de la Unión Europea sirven de motivación para el estudio de las medidas de salvaguardias, en particular en lo referente a la investigación y a los efectos sobre el bienestar. Los procedimientos de investigación usados en la actualidad carecen de bases económicas, razón por la cual en ocasiones se toman decisiones opuestas a lo aconsejable por la teoría económica. Adicionalmente el efecto sobre el bienestar esta relacionado con el tamaño del país que aplica la medida de salvaguardia, pudiendo ser beneficioso para países grandes, mientras para países pequeños siempre involucrará una pérdida de bienestar. Si bien éstas medidas pueden ser consideradas como arbitrarias e injustas, su existencia se justifica por razones políticas basadas principalmente en la existencia de válvulas de escape y mecanismos de seguro necesarios al momento de firmar acuerdos de libre comercio y reducciones arancelarias.

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / Esta práctica se realizó en Laboratorio Centrovet Ltda., ubicado en Avda. Los Cerrillos # 602, comuna de Cerrillos, Santiago. El trabajo desempeñado durante la práctica en el Laboratorio Centrovet Ltda. se realizó en dos etapas, pasando por los dos departamentos del Área de Investigación y Desarrollo Farmacéutico: Investigación y Desarrollo Analítico e Investigación y Desarrollo Galénico. En el Departamento de Investigación y Desarrollo Analítico se trabajó en la implementación de una metodología bioanalítica para cuantificar el contenido de deltametrina en tejido de salmón. En primer lugar, se adquirieron las destrezas necesarias para manejar los equipos que el laboratorio puso a disposición para realizar los análisis. Se determinaron los límites de detección (LOD) y cuantificación (LOQ) de deltametrina en soluciones fortificadas con cantidades conocidas del analito mediante HPLC UV-Vis (High Performance Liquid Chromatography). De acuerdo a información previamente recopilada, se probaron diversos métodos de limpieza y extracción del principio activo a partir de matriz de tejido de salmón fortificado con cantidades conocidas de deltametrina, con el fin de evaluar la recuperación obtenida con cada protocolo de extracción. Se probó también la limpieza con cuatro columnas de extracción en fase sólida, de las cuales ninguna entregó una recuperación del analito igual o mayor al 70%, porcentaje mínimo exigido para poder realizar estudios de depleción. Se hicieron pruebas de limpieza con el método QUECHERS cuyos resultados mostraron amplias señales interferentes a lo largo de todo el cromatograma. Por último, se realizaron extracciones con diferentes solventes con posterior limpieza con NaCl, encontrando los mejores resultados a partir de la extracción con acetato de etilo, que permitió visualizar el peak de deltametrina a altas concentraciones, pero no se logró obtener la separación de peaks para concentraciones cercanas al límite de cuantificación. En conclusión, a pesar de que la mayoría de los métodos ensayados no proporcionó buenos resultados, queda abierta la posibilidad para que se realicen investigaciones a futuro a partir de la extracción con acetato de etilo con posterior limpieza con NaCl. La segunda parte de la práctica se realizó en el Departamento de Investigación y Desarrollo Galénico. Se trabajó en la realización de pruebas preliminares para el desarrollo de una formulación inyectable de amoxicilina trihidrato con clavulanato de potasio en suspensión como forma farmacéutica multidosis de uso veterinario orientada al tratamiento antibiótico por vía intramuscular de vacas que padecen mastitis. Se estudiaron las características y propiedades fisicoquímicas de un producto de referencia presente en el mercado. Posteriormente se elaboraron varias formulaciones de prueba con diferentes excipientes para evaluar de forma preliminar las propiedades fisicoquímicas obtenidas con cada uno y con la variación de sus concentraciones, con el fin de acercarse lo más posible al producto de referencia. Se realizaron primeramente mediciones del coeficiente de sedimentación y la resuspendibilidad de las formulaciones elaboradas. Esto permitió descartar excipientes y determinar la cantidad apropiada de otros. Luego se realizaron más pruebas variando el vehículo de las formulaciones para medir nuevamente coeficiente de sedimentación y resuspendibilidad, determinar volumen y velocidad de sedimentación y además realizar pruebas de viscosidad y jeringabilidad. Se seleccionaron las formulaciones que mostraban las mejores propiedades fisicoquímicas y con ellas se elaboraron tres lotes de investigación para ser almacenados en tres condiciones de estantería diferentes: 25°C y 60% de humedad, 40°C y 75% de humedad (estabilidad acelerada) y 5°C sin control de humedad como estudio de estabilidad adicional, ya que el producto de referencia se almacena bajo esas condiciones. Estos estudios demoran seis meses, razón por la que al término de la práctica aún no se encontraban disponibles los resultados. En base a todas las pruebas realizadas se pudo concluir cuales fueron los excipientes que otorgaron las propiedades deseadas a la formulación. El uso de Waglinol® como vehículo contribuyó de forma importante en la obtención de una viscosidad apropiada para la inyectabilidad y jeringabilidad del producto en comparación con Novamol®

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo / El afrecho de soya (Glycine max) es una alternativa de reemplazo parcial a la proteína animal producto de la disminución y altos costos de la harina de pescado utilizada como principal materia prima en la elaboración de dietas para salmónidos. En este sentido, el afrecho de soya reúne importantes características nutricionales tales como un elevado contenido de proteínas (48%) y un perfil de aminoácidos adecuado, sin embargo y debido a la presencia de factores anti nutricionales (FAN) sus niveles de inclusión se limitan a 25%, estos componentes están asociados a efectos de disminución de parámetros productivos y de digestibilidad de nutrientes. Dentro de los FAN de mayor concentración se encuentran los carbohidratos indigestibles termo estables, con niveles de 35-45% de la materia seca, dentro de los cuales un 20% corresponden a α-galactósidos (rafinosa y estaquiosa) y polisacáridos no derivados del almidón (celulosa, hemicelulosa y pectinas). En el presente estudio se utilizó un proceso de fermentación en estado sólido utilizando bacterias Streptomyces sp, Cohenella termotolerans y Cellulomicrobium sp., disminuyendo la concentración de α-galactósidos y NSP del afrecho de soya. Con la finalidad de evaluar el efecto de la inclusión de 30% de ingrediente vegetal en dietas para salmón del Atlántico, se realizó un estudio de crecimiento y de digestibilidad de nutrientes.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Hasta la fecha, se han realizado múltiples estudios sobre la transmisión vertical de Piscirickettsia salmonis. Al respecto, se ha demostrado que la bacteria puede infectar ovas durante el proceso de fertilización y que es capaz de adherirse a la superficie coriónica mediante unas estructuras denominadas complejo de adhesión piscirickettsial o CAP. Estos estudios sólo han sido realizados en ovas de la especie trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) utilizando la cepa de referencia LF-89. En la presente memoria, se buscó comparar la infección de dos cepas de esta bacteria (LF-89 y SLGO-95) sobre ovas de salmón del Atlántico (Salmo salar) y trucha arco iris. Los experimentos consistieron en el desafío de ovas de las dos especies salmonídeas, con dos suspensiones bacterianas de P. salmonis (cepas LF-89 y SLGO-95) durante distintos tiempos (1, 3, 5, 10, 30 y 60 min) para obtener una cinética de infección. Las muestras de estas ovas fueron sometidas a una técnica “dot-blot” para la detección de P. salmonis, y los resultados fueron analizados densitométricamente mediante un “software” computacional. Además, mediante una técnica de microscopía electrónica de barrido (MEB) se observó la superficie coriónica de ovas de salmón de Atlántico y trucha arco iris con el fin de detectar si la bacteria se unía mediante el CAP. Mediante la técnica de “dot-blot” se estableció que las ovas de salmón del Atlántico son sensibles a la infección con cualquiera de las dos cepas de P. salmonis usadas (SLGO-95 y LF-89), mientras que las ovas de trucha arco iris sólo presentaron positividad a la infección con la cepa SLGO-95. En el caso de la especie salmón del Atlántico se detectó positividad al “dot-blot” en muestras provenientes de ovas desafiadas durante dos tiempos (10 y 60 min) con la cepa SLGO-95 y tres tiempos (5, 10 y 60 min) con la cepa LF-89. Para ovas de trucha arco iris desafiadas con la cepa SLGO-95 se detectó positividad a la infección en cuatro tiempos de desafío (1, 3, 10 y 60 min) bacteria-ova. Mediante el uso de MEB se observó la presencia de CAP sobre la superficie de ovas de salmón del Atlántico y trucha arco iris desafiadas 5 min a ambas cepas de P. salmonis. Los resultados de “dot-blot” y MEB permiten concluir que ambas cepas se unen e infectan a las ovas de salmón del Atlántico, lo cual es el primer indicio de una posible infección vertical en dicha especie. Por otra parte, el método “dot-blot” no permitió comparar la cinética de infección entre ovas y cepas de bacterias, por lo que sólo se pudo utilizar como una técnica cualitativa para la detección de P. salmonis.

Magíster en Gestión y Dirección de Empresas / El proceso de vacunación en la Industria Acuícola aún se sigue desarrollando de forma manual. Se busca crear un plan de negocio que permita desarrollar y/o cambiar los procesos de vacunación en los centros de cultivos en tierra. La implementación permitirá aumentar la capacidad de vacunación, reducir los costos, y mejorar el proceso de vacunación. Dentro de los objetivos generales para desarrollar el proyecto es elaborar un plan de negocios orientado a la vacunación automática de peces en los centros de cultivos de agua dulce (Smolt específicamente) en la Industria productiva de salmones. La metodología a emplear para el logro de los objetivos se desarrollará de la siguiente forma en el plan de negocios, análisis estratégico, análisis de mercado, modelo de negocio, plan de operaciones, y un plan económico financiero. En el análisis de los principales resultados en el primer periodo (año 1) los costos fijos representan la principal variable crítica, es por ello que es de suma importancia monitorear el correcto desarrollo del proyecto en esta primera etapa. Se observa que la principal variable critica que impacta en el VAN son los ingresos por venta, es una variable importante ya que determinara el éxito del proyecto. Desde el escenario medio (-) se observa una TIR mayor a la tasa de descuento y un VAN positivo sobre 22 millones Dentro de las conclusiones se determina que el negocio resulta atractivo dada su naturaleza innovadora, vacunación automática de peces el cual busca desarrollar un modelo que está en el medio de los negocios actuales de vacunación, es decir no es un sistema automático fijo estático de gran volumen estructural y no es un sistema manual en el cual participan cuadrillas de operadores que actualmente tienen capacidades inferiores a la automática. Los volúmenes productivos de los salmoneros hacen que el negocio sea atractivo, durante el 2016 en promedio la cantidad de peces a vacunar (Smolt) estaba cerca de los 200 millones en promedio anuales de los cuales la empresa solo vacunaría entre un 2% y 5% del universo total entre los periodos 2 y 4 con una sola máquina de vacunaciones automática. Dentro de las recomendaciones y sugerencias respecto al financiamiento es fundamental conseguir y/o buscar alternativas de financiamiento para empezar a desarrollar el plan de negocio. Respecto a los proveedores, tomar contacto con los proveedores claves que participaran en cada etapa del proyecto, desarrollar los tiempos requeridos para iniciar y terminar las distintas etapas. Referente a la planificación es clave crear un plan de desarrollo del proyecto para dar cumplimiento a los hitos más importantes y así lograr el éxito en cada una de las etapas.

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias de la Acuicultura / Se entregan los parámetros genéticos de heredabilidad, correlaciones genéticas, y ganancia genética estimados para peso alevín, peso smolt y peso cosecha de dos líneas, año par e impar, de salmón Coho (Oncorhynchus kisutch), a partir de seis y cuatro generaciones respectivamente, del programa de reproducción de un núcleo comercial, en Chiloé, Región de Los Lagos. Se estima el nivel de consanguinidad alcanzado para cada línea en las cinco generaciones. La metodología utilizada considera el desove de reproductores individualizados, la incubación de ovas y desarrollo inicial de alevines en unidades segregadas por cada familia generada, marcaje individual de ejemplares juveniles y crecimiento en comunidad, con muestreos periódicos de peso corporal. La metodología de evaluación para la estimación de los parámetros genéticos fue el ‘modelo animal’ y los softwares Pedigree Viewer y MTDFREML.

Tesis presentada como parte de los requisitos para optar al Grado de Magister en Ciencias de la Acuicultura / El mejoramiento genético es un elemento esencial en la acuicultura que permite, de forma continua, mejorar la eficiencia y la productividad de todo el modelo productivo y económico (Duncan et al., 2013). El mejoramiento genético en salmones se realiza mediante la selección artificial de las poblaciones de cultivo, en rasgos de relevancia económica que impactan en el crecimiento de los peces, en el rendimiento y en la calidad del producto final (Gjedrem 2012). Los programas de mejoramiento en salmones se iniciaron formalmente en Noruega a través de la empresa AKVAFORSK en 1975 (Gjedrem 2009). El principal y primer rasgo utilizado, que aporta valor económico para la empresa, es el peso a la cosecha, o su índice, la tasa de crecimiento especifico, y que con el paso de los años se ha consolidado como el principal criterio de selección para la industria salmonera e incorporado en la mayoría de los programas de mejoramiento genético a nivel mundial (Hershberger et al., 1990; Neira et al., 1997; Gjedrem 2000).

Memoria para optar al título de Bioquímico / La industria acuícola de salmónidos, como la del salmón del Atlántico o de la trucha arcoíris, constituye una de las principales actividades económicas de Chile. Sin embargo, en su puesta en marcha enfrenta desafíos técnicos y ambientales, incluyendo la aparición de enfermedades que se transmiten rápidamente dentro de las poblaciones de cultivo. La segunda causa de pérdidas por patología infecciosa es la Necrosis Pancreática Infecciosa, causada por el virus IPNv. Se ha descrito que la citoquina IFN-I induce una potente actividad antiviral contra IPNv. Para este trabajo de investigación, se propuso clonar IFN-I de la especie Salmo salar en Bacillus megaterium, una bacteria inocua capaz de producir grandes cantidades de proteína y que ha sido utilizada exitosamente en la industria biotecnológica. Para lo anterior, se diseñó un método de clonación clásico y se logró exitosamente la transformación de Escherichia coli con el vector de B. megaterium pSSBm110 con el gen de IFN-I como inserto (pSSBm110:IFN-I). Se probaron luego dos métodos de transformación para B. megaterium, uno de electroporación que no dio resultados cuantificables y otro de creación de protoplastos libres de pared capaces de absorber ADN exógeno. Sin embargo, a pesar de lograr la transformación y la clonación exitosa del vector pSSBm110:IFN-I en B. megaterium, no se logró la detección de la expresión de IFN-I recombinante, por lo cual serán necesarios nuevos intentos para lograr su uso como sistema de expresión para esta citoquina / The salmonid aquaculture industry, such as the Atlantic salmon or the rainbow trout aquaculture, is one of the Chile’s main economic activities. However, this industry faces technical and environmental challenges, including the emergence of diseases which spread quickly through the fish populations. The infectious pancreatic necrosis, which is caused by the IPNv virus, is the second cause of fish losses related to an infectious disease. It has been described that the cytokine IFN-I induces a powerful antiviral response against IPNv. In this research, we proposed the cloning of IFN-I from Salmo salar in the harmless bacterium Bacillus megaterium, a species of high-yielding protein production, successfully used in the biotechnology industry. For this, a classic cloning method was used, obtaining transformed Escherichia coli cells with the B. megaterium pSSBm110 vector, and the IFN-I insert (pSSBm110:IFN-I). Then, two B. megaterium transformation methods were tested. The first one, an electroporation method, which did not offer quantifiable results. The second one, a method based on protoplast cells generation where foreign DNA was absorbed. Even though the transformation and cloning in B. megaterium were both successful, and verified through sequencing, the expression of the recombinant peptide was not detectable. Thus, new attempts will be necessary to use this expression system for this cytokine / FIA PYT-2012-0056

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo / El afrecho de soya (AS) ha sido utilizado como sustituto de la harina de pescado (HP) debido a su bajo precio, disponibilidad y propiedades nutricionales, pero su nivel de inclusión ha estado limitado debido a la presencia de factores anti-nutricionales. Varias alternativas han sido planteadas para reducir los niveles de estos compuestos (Polisacáridos no derivados del almidón (NSP), alfa-Galactosidos (GOS), saponinas, lectinas, etc.) una de ellas es el pre-tratamiento de la soya mediante Fermentación en Estado Sólido (SSF), sin embargo hay poca información disponible sobre los efectos del afrecho de soya fermentada (ASF) en alimentos para salmónidos, aun mas hay pocos estudios que hagan referencia al efecto que causan las fuentes proteicas vegetales en el intestino proximal.