Submitted by Fabio Sossai Possebon null (fabio.cid@fmvz.unesp.br) on 2016-02-24T18:24:37Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Fábio S Possebon - Salmonella em suínos Final.pdf: 1036715 bytes, checksum: 11bc9e5b832c6262c21bfb938afd4b94 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-25T19:42:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 possebon_fs_me_bot.pdf: 1036715 bytes, checksum: 11bc9e5b832c6262c21bfb938afd4b94 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T19:42:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 possebon_fs_me_bot.pdf: 1036715 bytes, checksum: 11bc9e5b832c6262c21bfb938afd4b94 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho avaliou 250 animais de 25 lotes distintos abatidos em 4 estabelecimentos do estado de São Paulo para a presença de Salmonella nos linfonodos mesentéricos, e caracterizou o perfil de resistência das cepas isoladas aos principais antibióticos. O patógeno estava presente em 36,4% das amostras e 72% dos lotes analisados. Dos 91 isolados, 67 foram sorotipados, e os principais sorovares encontrados foram S. Typhimurium (n=13), S. 1.4,5,12:i:- (n=12) S. Infantis (n=12) e S. Havana (n=11). Os compostos com menor eficácia frente aos isolados foram estreptomicina e tetraciclina (68,1% de resistência) ampicilina e sulfonamidas (62,6%), cloranfenicol (56,0%), trimetoprim-sulfametoxazol (41,8%) e ácido nalidíxico (40,7%). Os mais efetivos foram aztreonam e cefoxitina, (ambos com 3,3% de resistência) e cefepima e ceftriaxona, (ambos com 7,7%). Cepas multidrogas resistentes (MDR) corresponderam a 70,3% dos isolados. Oito cepas foram submetidas ao MLST: quatro S. Typhimurium e uma S. 1.4,5,12:i:- todas pertencentes ao ST 19, duas S. Infantis pertenceram ao ST 32 e uma S. Derby, pertencente ao ST 40. A grande prevalência do patógeno nos animais analisados, com altas taxas de resistência aos antibióticos e pertencentes a grupos genéticos frequentemente associados a surtos e doenças em humanos demonstram que a cadeia produtiva da carne suína é uma fonte de contaminação em potencial nos casos de salmonelose, sendo necessárias medidas preventivas eficazes para o controle do patógeno e diminuição do risco de veiculação de patógenos por alimentos. / This study evaluated 250 animals of 25 different batches processed in four slaughterhouses in São Paulo state - Brazil for the presence of Salmonella in the mesenteric lymph nodes, and characterized the resistance profile for the main antibiotics. The pathogen was present in 36.4% of samples and 72% of the analyzed batches. Of the 91 isolates, 67 were serotyped, and the main serovars found were S. Typhimurium (n = 13), S. 1.4,5,12:i- (n = 12) S. Infantis (n = 12) and S. Havana (n = 11). The compounds with less efficacy were streptomycin and tetracycline (68.1% resistant) ampicillin and sulphonamides (62.6%), chloramphenicol (56.0%), trimethoprim-sulfamethoxazole (41.8%), and nalidixic acid (40.7%). The most effective were cephalothin and aztreonam, (both with 3.3% resistant) and ceftriaxone and cefepime (both with 7.7%). Multidrug-resistant strains (MDR) accounted for 70.3% of the isolates. Eight strains were submitted to MLST: Four S. Typhimurium and one S.1.4,5,12:i:- all belonging to the ST 19, two S. Infantis, belonging to the ST 32 and one S. Derby, belonging to ST 40. The high prevalence of the pathogen in the analyzed animals, with high rates of resistance to antibiotics and belonging to genetic groups that are often associated with outbreaks and disease in humans, shows that the production chain of pork is a potential source of contamination in salmonellosis cases, with the necessity of effective preventive measures for pathogen control and lower the risk of foodborne diseases transmission.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-02-17Bitstream added on 2014-06-13T19:04:11Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_gh_dr_jabo.pdf: 314775 bytes, checksum: 0fd8bccb749e336852eff962616e3d04 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foi desenvolvido um ensaio imunoenzimático do tipo ELISA indireto para a detecção de resposta sorológica de aves para Salmonella sorotipos Gallinarum, Pullorum, Enteritidis e Typhimurium. Utilizou-se antígeno solúvel obtido por meio de sonicação de cultura de Salmonella Gallinarum (AgSG), Salmonella Enteritidis cepa aflagelar (AgSE) e Salmonella Typhimuirum cepa aflagelar (AgTM), os conjugados peroxidase e fosfatase alcalina e amostras de soros positivos e negativos de vários sorotipos de salmonelas. Os resultados demonstraram que o AgSG pode ser utilizado diluído a 1:25.000 (peroxidase e fosfatase alcalina). Observou-se que o ELISA contendo S. Gallinarum como antígeno e fosfatase alcalina como enzima, propicia a separação de reações positivas para Gallinarum e Pullorum de Enteritidis. O AgSE pode ser utilizado diluído a 1:10.000 (peroxidase) ou 1:5.000 (fosfatase alcalina). Nestas condições, o ELISA/AgSE detectou resposta sorológica para os sorotipos Enteritidis, Gallinarum e Pullorum. O ELISA com o AgTM demonstrou que o antígeno pode ser diluído a 1:20.000 para ambos os conjugados. O ELISA/AgTM demonstrou reatividade entre salmonelas dos grupos B e D. Todas as amostras de soros testes devem ser analisadas diluídas a 1:1.000. Concluindo, o ELISA mostrou-se um teste útil para identificar aves com reação sorológica contra S. Gallinarum, S. Pullorum, S. Enteritidis e S. Typhimurium, podendo ainda identificar aves com sorologia positiva para S. Gallinarum, S. Pullorum sem que haja reação cruzada com amostras de soro de aves vacinadas ou infectada por S. Enteritidis. / This study was done to assess the enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) for detection chicken serologic response against Salmonella enterica sorotypes Gallinarum, Pullorum, Enteritidis and Typhimurium. The test was performed using soluble proteins from Salmonella Gallinarum strain 9 (AgSG), from non-flagellate Salmonella Enteritidis strain (AgSE) and from not flagellate Salmonella Typhimurium (AgTM) strain as detecting antigen and peroxidase and alkaline phosphatase enzymes, as conjugate. According to the results, the antigen has to be diluted at 1:25.000 (AgSG, peroxidase and alkaline phosphatase). In addition, using alkaline phosphatase enzyme, the assay was helpful to separate positive serological reaction to serotypes Gallinarum and Pullorum from Enteritidis. To the ELISA/AgSE, the antigen has to be diluted at 1:10.000 for peroxidase assay and at 1:5.000 for alkaline phosphatase assay. In this condition, the ELISA/AgSE can detect serological reaction to S. Enteritidis, S. Gallinarum and S. Pullorum. To the ELISA/AgTM the antigen has to be diluted at 1:20.000 to both enzymes. In this condition the ELISA/AgTM showed sensibility but was no possible to separate positive serological reaction to serotype concerning at the group B and group D. In all test, the sample of serum has to be diluted at 1:1.000. Therefore, the ELISA was able to identity reactors birds to Salmonella antigens and also to detect serological response to S. Gallinarum, S. Pullorum antigen with no cross-reaction with serum samples taken from birds either challenged or vaccinated against S. Enteritidis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-10-27Bitstream added on 2014-06-13T20:56:21Z : No. of bitstreams: 1 trovo_kvp_me_jabo.pdf: 1135657 bytes, checksum: 6bc1ead1c6c9700296f5633e53127c76 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Atualmente, a produção de frangos de corte no Brasil tem sofrido uma considerável perda em produção devido a ação do C/ostridium perfringens, agente causador da Enterite Necrótica. Por outro lado, a Sa/monella spp também se toma uma preocupação dentro da criação devido a ação na saúde pública. Com isso objetivou-se verificar a contaminação por C/ostridium perfringens e Sa/monella spp em camas de frango, novas e reutilizadas, relacionando a proliferação das mesmas com o efeito do pH e o desempenho e taxa de mortalidade. As amostras eram compostas de cama de maravalha advindas da região de Sertãozinho. Foi utilizado o Delineamento em blocos casualizado com 10 repetições. Para a análise de C/ostridium spp. as amostras foram submetidas à diluições seriadas, semeadas em duplicatas, em placas de petri, com meio SPS e incubadas em jarras anaeróbias com o sistema Gás-Pak, à temperatura de 3537°C/24-48h. Para análise de Sa/monella spp., um grama de cada amostra foi enriquecido em caldo de tetrationato-novobiocina (TN) e selenito-novobiocina (SN) e incubadas a 42°C/24 horas. Após, 1 ml dos caldos foram semeados em placas contendo meio MacConkey (Difco) e novamente incubados nas mesmas condições. Confirmando-se a suspeita do gênero, colônias características foram isoladas, e inoculadas em ágar tríplice açúcar ferro (TSI) e submetidas ao teste de aglutinação em lâmina. A sorotipagem para a identificação da espécie foi realizada no Instituto Adolfo lutz de São Paulo, Brasil. Com as reutilizações da cama, houve uma significativa redução na contagem de C/ostridium perfringens e aumento nos valores de pH devido à liberação de amônia. Numericamente também houve redução nos níveis de mortalidade e melhora na conversão alimentar. A análise de Salmonella mostrou-se positiva em 26,67% das amostras, sendo caracterizado... / This work was done with the aim of verified the contamination by Clostridium perfringens and Salmonella spp in new and re-used poultry litter, relating its proliferation with the effect of pH, performance and mortality rate. The analyses were done at the microbiology laboratory of FCAVJ - UNESP. Samples were poultry litter of woods shaves coming from chicken sheds of Sertãozinho, Sao Paulo State. Blocks designed with 10 repetitions was used. For Clostridium spp. counting samples were submitted to ten fold dilutions up to 10-6, streaked in duplicates, on Petri dishes with SPS medium and incubated under anaerobic conditions with the GAS-PAK system at 35-37°C for /24-48h. For the analysis of Salmonella spp. one gram of each sample was enriched in Tetrationate-novobiocin (TN) and selenite- novobiocin broth (SN) and incubated at 42°C by 24h. Afier, 1 mL from the broths were streaked onto MacConkey plates and again incubated under the same conditions. Confirming the suspected genera five typical colonies were picked up and inoculated on triple sugar, iron agar (TSI), and afier submitted to agglutination test. Sero typing for identification of species was realized at Adolfo Lutz institute of Sao Paulo, Brazil The re-utilization of the litters allows a significative reduction in the counting of Clostridium perfringens and an increase in the pH values due to the liberation of ammonia. Numerically there was also a reduction on the levals of mortality and improvement in feed efficiency. Salmonella was present in 26,67 of the samples been characterized as Salmonella Heidelberg and Salmonella Mbandaka.

Orientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Luciano dos Santos Bersot / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o processo de disseminação de Salmonella Enteritidis via diferentes superfícies de corte (madeira, plástico com triclosan, vidro e aço inoxidável), a partir de pele de frango contaminada (5 log UFC/g), para alimentos prontos para o consumo, bem como o efeito de diferentes protocolos de higienização destas superfícies no controle da contaminação. Os seguintes protocolos foram simulados: protocolo 1, nenhuma limpeza foi realizada depois do manuseio da pele contaminada; protocolo 2, as superfícies foram rinsadas em água corrente, protocolo 3 as superfícies foram limpas com detergente e esfregação mecânica; protocolo 4, o protocolo 3 foi aplicado e as superfícies submetidas a sanitização com hipoclorito. A recuperação do patógeno foi possível em todas as superfícies no protocolo 1, com contagens variando de 1,90 a 2,80 log, bem como nos tomates nelas manuseados. Observou-se uma redução no número de células de S. Enteritidis nos protocolos subseqüentes, tanto nas superfícies como nos tomates, chegando a níveis não detectáveis no protocolo 4. As taxas de transferência da pele para superfícies e tomates variaram de 0,09 a 10,1%. Das superfícies avaliadas, a madeira foi a mais difícil de higienizar e o aço inoxidável a mais fácil. O protocolo 4 foi o que proporcionou a maior de redução de contaminação cruzada e proteção à saúde do consumidor / Abstract: The aim of this research was to evaluate the spreading process of Salmonella Enteritidis on different cutting boards (wood, triclosan incorporated plastic, glass and stainless steel), from contaminated poultry skin (5 log CFU/g) to food ready to eat, as well the effect of different cleaning protocols on these surfaces to contamination control. The following scenarios were simulated: scenario 1, no cleaning was performed after handling the contaminated skin; scenario 2, the surfaces were rinsed in water, scenario 3 the surfaces were cleaned with detergent and mechanical scrubbing; scenario 4, protocol 3 was applied and the surfaces submitted to sanitization with sodium hypochlorite. The recovery of the pathogen was possible in all surfaces in scenario 1, with scores ranging from 1.90 to 2.80 log, as well in the tomatoes handled on them. There was a reduction in the number of S. Enteritidis cells in subsequent scenarios, on the surfaces and in tomatoes, reaching undetectable levels in scenario 4. The transfer rates of skin surfaces and tomatoes ranged from 0.09 to 10.1%. About the surfaces assessed, the wood was the most difficult to sanitize and stainless steel easier. Scenario 4 was the one that provided the largest reduction of cross-contamination and protect consumer health / Mestre

A boa qualidade do ar é fator essencial para manutenção da saúde humana e ambiental. O material particulado atmosférico é um poluente do ar que consiste de uma variedade de substâncias orgânicas e inorgânicas, entre as quais, algumas apresentam características genotóxicas. O ramo petroquímico é um importante componente da atividade industrial do estado do Rio Grande do Sul, Brasil, com histórico de emissões prejudiciais à qualidade do ar. O presente estudo objetivou avaliar os efeitos biológicos associados à dispersão de material particulado atmosférico inalável em área sob influência de um complexo petroquímico, integrando os resultados de biomonitoramento ambiental e humano através de biomarcadores de genotoxicidade. Amostras de material particulado foram coletadas em área de característica mista rural, urbana e industrial, utilizando filtros de membrana de Teflon e amostradores de grandes volumes de ar, semanalmente, por períodos de 24hs. Partículas inaláveis finas (MP2,5) foram amostradas em dois locais– NO e NE - posicionados na primeira e segunda direção preferencial dos ventos na região de estudo, a 2,5Km de distância da principal fonte emissora da central de matérias-primas do complexo petroquímico. Em um terceiro local (NO II), afastado 35Km da fonte emissora e na primeira direção dos ventos foi analisado partículas inaláveis grossas (MP10). Extratos orgânicos foram obtidos dos filtros com solvente diclorometano e avaliados pelo ensaio Salmonella/microssoma, método de microssuspensão, com as linhagens TA98, YG1021 e YG1024. Para avaliar a mutagenicidade dos metabólitos utilizou-se a fração de metabolização de mamíferos (S9). Também foram empregados Ensaio Cometa (EC) e Teste de Micronúcleos em linhagem celular de pulmão de hamster chinês (V79), nos extratos dos locais NO e NE. Os 16 hidrocarbonetos políclicos aromáticos (HPAs) considerados preferenciais pela agência ambiental norte americana (USEPA) foram avaliados nos extratos orgânicos para caracterização dos três locais. Foi realizado o biomonitoramento humano em crianças de escolas públicas do Local NO e NO II, com coleta de sangue periférico e células esfoliadas da mucosa oral. Em sangue periférico foi utilizado o Ensaio do micronúcleo (MN) com bloqueio da citocinese- citoma (CBMN-cyt) para avaliar as frequências de células com MN e anomalias nucleares (brotos nucleares - NBUDs, pontes nucleoplásmicas -NPBs), e EC avaliando o parâmetro intensidade de cauda. Utilizou-se o Ensaio do MN em mucosa oral-citoma (BMCyt) para detectar MN e anomalias nucleares. Todos os extratos de MP2,5 mostraram mutagenicidade pelo ensaio Salmonella, sendo destacada a presença de compostos nitrogenados. Verificaram-se respostas genotóxicas no EC em 87% dos extratos testados e indução de micronúcleos em 74% dos ensaios realizados, além de citotoxicidade em V79, para todas as amostras avaliadas. Os resultados obtidos nos três biomarcadores in vitro, e o perfil de HPAs mais tóxicos no material particulado, apontaram pior qualidade do ar do Local NO, sendo compatível com a maior dispersão de poluentes na primeira direção dos ventos. O biomonitoramento contou com a participação de 54 crianças de 5 a 12 anos, com média de 8,3 ± 1,8 anos. Danos ao DNA pelo EC foram significativamente mais elevados no local NO, em relação ao local NO II. A frequência de MN no CBMN-cyt não diferiu entre os grupos, porém, foram significantemente maiores em relação a um local de referência externo. A ocorrência de NBUDs foi significativamente mais elevada no local NO II. Quanto ao ensaio BMCyt, não houve diferença entre os grupos para MNs e NBUDs. As frequências das alterações nucleares, cariorréxis e cariólise, foram significativamente mais elevadas no local mais afastado da fonte emissora (NOII). A avaliação ambiental associando o Ensaio Salmonella e análise de HPAs mostrou que mesmo amostras dentro dos padrões de controle da qualidade, apresentam potencial genotóxico. Estes resultados permitiram evidenciar que as crianças avaliadas estão expostas a uma mistura de contaminantes de diferentes fontes, sendo a proximidade da indústria petroquímica um contribuinte aos fatores de risco. Medidas são necessárias para identificar e reduzir emissões e efeitos perigosos, uma vez que os padrões de qualidade do ar não são suficientes para garantir a saúde das populações expostas. A complexa composição do MP2,5 pode provocar diversos efeitos genotóxicos, sendo a utilização de diferentes bioensaios fundamental para o entendimento dos efeitos dessa matriz. / Good air quality is essential key to human and environmental health maintenance. Atmospheric particulate matter is an air pollutant consisting of a variety of organic and inorganic substances, some of which presents genotoxic characteristics. The petrochemical industry is an important activity in Rio Grande do Sul state, Brazil, with a history of emissions that are detrimental to air quality. The present study aimed to evaluate the biological effects associated with the dispersion of inhalable particulate matter in an area under the influence of a petrochemical complex, integrating the results of environmental and human biomonitoring through genotoxicity biomarkers. Particulate matter samples were collected in mixed rural, urban and industrial area, using Teflon membrane filters and large air volume samplers, weekly, for periods of 24 hours. Fine inhalable particles (PM2.5) were sampled at two locations - NO and NE - positioned in the first and second preferential wind directions in the study region, 2.5 km away from the main emission source of industrial raw material center. In a third location (NO II), 35 km away from the emission source and in the first wind direction, coarse inhalable particles (MP10) were analyzed. Organic extracts were obtained with dichloromethane from sampled filters and evaluated by the Salmonella/microsome assay, microsuspension method, with the strains TA98, YG1021 and YG1024. The mammalian metabolization fraction (S9) was used to evaluate metabolite mutagenicity. Also, the Comet Assay (EC) and Micronucleus Test in Chinese hamster lung cell line (V79) was used to test the NO and NE samples. The 16 polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) considered preferential by the US Environmental Agency (USEPA) were evaluated in the organic extracts for characterization of the three sites. Human biomonitoring was carried out in children of public schools from NO and NO II sites, through the collection of peripheral blood and buccal exfoliated cells. To peripheral blood samples, the cytokinesis-block MN cytome assay (CBMN-cyt) was used to evaluate the frequencies of cells with micronuclei (MN) and nuclear abnormalities (nuclear buds - NBUDs, nucleoplasmic bridges - NPBs), and EC evaluating the tail intensity. The buccal MN cytome assay (BMCyt) was used to detect MN and nuclear abnormalities. All PM2.5 extracts showed mutagenicity through the Salmonella assay, highlighting the nitrogenated compounds effects. Genotoxic responses in EC were observed in 87% of the tested extracts and MN induction in 74% of the tests, in addition all the samples showed cytotoxicity to V79 cells. The results of the three biomarkers in vitro and the more toxic PAHs profile presented by the particulate matter, showed a lower air quality of NO site. It is compatible with the greater pollutants dispersion in the first winds direction. Biomonitoring included 54 school children aged 5 to 12 years, with a mean of 8.3 ± 1.82 years. DNA damage evaluated by EC was significantly higher in children from NO compared to NO II. The MN frequency by CBMN-cyt did not differ between groups, however, it was significantly higher in relation to an external reference site. The occurrence of nuclear buds was higher at the NO II site. Regarding the BMCyt assay, there was no difference between groups for MNs and NBUDs. The frequencies of nuclear abnormalities, karyorrhexis and karyolysis were significantly higher at the site farthest from the emission source (NOII). The environmental evaluation with the Salmonella assay and PAH analysis showed genotoxic potential even to samples within the quality standards. These results showed that the schoolchildren are exposed to a mixture of contaminants from different sources, being the proximity of the petrochemical industry a risk factor. Actions are needed to identify and reduce emissions and adverse effects since air quality standards are not enough to ensure the health of exposed populations. The complex PM2.5 composition could cause several genotoxic effects, and the use of different bioassays is fundamental for understanding the effects of this environmental matrix.

Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Derby (S. Derby) é um dos sorovares mais frequentemente detectados na cadeia produtiva de suínos na região sul do Brasil. Estudos prévios indicaram que isolados de S. Derby apresentando perfis similares de resistência a antimicrobianos estavam circulando ao longo dos anos nesta região. A sobrevivência de Salmonella no ambiente e a persistência no hospedeiro são facilitadas pela sua habilidade em formar biofilmes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi identificar a presença de grupos clonais entre 140 isolados de S. Derby coletados ao longo de um período de dez anos de diferentes origens da cadeia produtiva de suínos (linfonodos, conteúdo intestinal, ambiente e produtos suínos). Para tanto, o perfil de resistência a antimicrobianos, através de dois conceitos distintos de avaliação de resistência (valores ECOFF e valores de breakpoint), a habilidade em formar biofilmes e a caracterização genotípica por macro-restrição (PFGE) foram avaliados. A determinação do MIC foi realizada em todos os isolados, frente aos seguintes antimicrobianos: ácido nalidíxico, ampicilina, cefotaxima, ceftazidima, ciprofloxacina, colistina, florfenicol, gentamicina, estreptomicina e tetraciclina. Para avaliar a capacidade de S. Derby em formar biofilmes, três metodologias foram aplicadas: i. morfologia de colônia em ágar contendo Vermelho Congo, para determinar a detecção fenotípica de fímbria curli e celulose; ii. formação de biofilme na interface ar-líquido em caldo LB; iii. aderência em microplacas de poliestireno de 96 poços. No total, apenas 17 (12,1%) isolados puderam ser classificados como suscetíveis a todos os antimicrobianos testados. As maiores frequências de populações “non-Wild Type” (nWT) foram observadas frente a tetraciclina (75,7%), estreptomicina (70%) e colistina (11,4%), enquanto que não foram detectadas populações nWT para ciprofloxacina, ceftazidima e gentamicina. Multi-resistência (resistência a ≥ 3 antimicrobianos; de acordo com valores de breakpoint) foi detectada em 8,6% dos isolados. Em ágar contendo Vermelho Congo, três diferentes morfologias de colônia foram observadas. A morfologia Rdar (vermelha, seca e rugosa) foi a mais frequente, sendo detectada em 59 isolados (42,1%); enquanto que as morfologias Saw (branca e mucoide) e Pdar (rosa, seca e rugosa) foram observadas em 46 (32,9%) e em 35 (25%) dos isolados, respectivamente. Os morfotipos Rdar e Pdar, que em conjunto albergaram a maioria dos isolados, são considerados os mais usualmente observados em isolados de Salmonella capazes de formar biofilme. A formação de película rígida, sem dispersão por agitação, foi observada em 24 amostras (17,1%) em caldo LB convencional e em 78 amostras (55,7%) em caldo LB low salt, sendo todas pertencentes aos morfotipos Rdar ou Pdar. Em placas de poliestireno de 96 poços, um grande número (n=96; 68,6%) dos isolados foram fracamente ou moderadamente produtores de biofilme, incluindo todos os isolados que apresentaram os morfotipos Rdar e Pdar. Através dos perfis de formação de biofilme e de resistência a antimicrobianos observados, 36 isolados foram selecionados para macro-restrição por eletroforese em campo pulsado (PFGE). Destas, 27 foram agrupadas em 11 pulsotipos que apresentavam mais de uma cepa com 100% de similaridade. Desta forma, foi possível identificar clones e cepas intimamente relacionadas de S. Derby que circularam em granjas, matadouros-frigoríficos e foram encontrados em alimentos ao longo de uma década. / Salmonella enterica subsp. enterica serovar Derby (S. Derby) is one of the serovars most frequently detected in the swine production chain of southern Brazil. Previous studies indicated that isolates of S. Derby displaying similar antimicrobial resistance profiles circulated over the years in this region. Survival of Salmonella in the environment and persistence in the host are facilitated by the ability to form biofilms. Thus, the aim of this study was to identify the presence of clonal groups between 140 S. Derby isolates collected over a ten-year period from various porcine origins (lymph nodes, intestinal content, environment and pork). Therefore, the antimicrobial resistance profile, through two distinct concepts of resistance evaluation (ECOFF value and breakpoint value), the ability to form biofilm and the genotypic characterization by macro-restriction (PFGE) were evaluated. MIC determinations were performed on all isolates, against the following antimicrobials: nalidixic acid, ampicillin, cefotaxime, ceftazidime, ciprofloxacin, colistin, florfenicol, gentamicin, streptomycin and tetracycline. To evaluate the S. Derby ability to form biofilm, three methods were applied: i. colony morphology on Congo Red agar, to determine the phenotypic detection of curli fimbriae and cellulose; ii. biofilm formation in liquid-air interface of LB broth; iii. adherence on a 96-well polystyrene microtiter plate. In total, only 17 (12.1%) isolates were classified as susceptible to all antimicrobials tested. The highest frequencies of non-Wild Type (nWT) populations were observed against tetracycline (75.7%), streptomycin (70%) and colistin (11.4%), whereas there were no detectable nWT population to ciprofloxacin, ceftazidime and gentamicin. Multidrug resistance (resistance to ≥ 3 antimicrobials) was detected in 8.6% of isolates. On Congo Red agar, three different colony morphology types were observed. The Rdar type (read, dry and rough) was the most frequent, being detected in 59 isolates (42.1%); while Saw (white and smoth) and Pdar (pink, dry and rough) types were observed in 46 (32.9%) and 35 isolates (25%), respectively. The Rdar and Pdar types, which together encompassed the majority of the isolates, are considered the most often observed in Salmonella isolates able to form biofilm. The formation of a rigid pellicle, which could not be dispersed by agitation, was observed in 24 (17.1%) isolates in conventional LB broth and in 78 (55.7%) isolates in low salt LB broth, all belonging to morphotypes Rdar or Pdar. On 96-well polystyrene microtiter plate, a larger number (n=96; 68.6%) of isolates showed to be weak or moderate biofilm producers, including all isolates that showed the Rdar and Pdar type. Through the biofilm and resistance profiles observed, 36 isolates were selected for macro-restriction for pulsed-feld gel electrophoresis (PFGE). Of these, 27 isolates were clustered in 11 pulsotypes which presented more than one strain with 100% of similarity. Therefore, was possible to identify clones and strains closely related of S. Derby that circulated in pig farms, slaughter plants and encountered in foods along a decade.

The objective of the present study was to evaluate the influence of the environment upon marine shrimp farming with regard to bacteriological quality of the water, pond sediments and livestock (Litopenaeus vannamei). The study was carried out on four shrimp farms in Cearà (1, 2, 3 and 4). Of the eight samplings performed, 3 involved water (one outside the farm-PEX, one at the pumping site-PB, and one in the pond-PV); 3 involved sediment (at locations PEX, PB and PV), and two consisted of harvested and processed shrimp. Samplings were carried out in different seasons (dry, intermediary and rainy) and totaled 288 individual samples (108 water; 108 sediment; 72 shrimp). The most probable numbers (MPN) of total coliforms (TC), fecal coliforms (FC) and Escherichia coli were determined and samples were investigated for Salmonella strains. The bacteriological contamination observed on the shrimp farms was predominantly caused by TC and FC and was most intense during the intermediary season. Farms 2 and 4 yielded the highest concentrations of FC in water and sediment, respectively, at sampling locations PEX and PB during the three seasons. No shrimp sample presented E. coli values above those permitted by the European Commission (EU). However, on account of the Salmonella values observed, Farms 2 and 4 would be barred from exporting shrimp to the EU. In addition, water sampled at Farm 3 contained Salmonella strains capable of infecting the livestock. Only Farm 1 presented an exogenous and endogenous environment free of fecal contamination. The presence of Salmonella and E. coli in water and shrimp samples is disquieting, considering the fact that theses pathogens are of fecal origin and that their natural habitat is the intestinal tract of warm-blooded animals. / O presente estudo teve por objetivo pesquisar a influÃncia do meio exÃgeno à carcinicultura na qualidade bacteriolÃgica da Ãgua, sedimento dos viveiros e no camarÃo de cultivo (Litopenaeus vannamei). Foram realizadas oito coletas em quatro Fazendas 1, 2, 3 e 4, sendo trÃs de Ãgua (ponto externo-PEX, ponto de bombeamento-PB e viveiro-PV) e trÃs de sedimento (PEX, PB e PV) e duas amostras de camarÃo (despescado e processado). As coletas foram realizadas em diferentes perÃodos sazonais (seco, intermediÃrio e chuvoso), perfazendo um total de 288 amostras, sendo 108 de Ãgua, 108 de sedimento e 72 de camarÃo. Foi determinado o NÃmero Mais ProvÃvel (NMP) de coliformes totais (CT), fecais (CF), e de Escherichia coli, alÃm da pesquisa e identificaÃÃo de Salmonella. Os resultados mostram que a contaminaÃÃo microbiolÃgica das fazendas à feita predominantemente por CT e CF, com maior intensidade na estaÃÃo intermediÃria. As Fazendas que apresentaram valores mais elevados de CF nas trÃs estaÃÃes foram as Fazendas 2 (PEX e PB) e 4 (PEX e PB) nas amostras de Ãgua e sedimento, respectivamente. Nenhuma amostra de camarÃo, das fazendas, apresentou valores acima do permitido para E. coli pela ComissÃo EuropÃia (CE). PorÃm se o parÃmetro considerado for a presenÃa de Salmonella, as Fazendas 4 e 2 nÃo estariam habilitadas a exportar os crustÃceos para paÃses da UniÃo da Comunidade EuropÃia. E ainda, das Ãguas da fazenda 3 tambÃm foram isoladas Salmonella o que facilmente poderia contaminar os camarÃes cultivados. Dentre as quatro fazendas, somente a Fazenda 1, nÃo apresentou ambiente endÃgeno e exÃgeno contaminado com material fecal. A detecÃÃo de Salmonella e a presenÃa de E. coli nas amostras de Ãgua e camarÃo à preocupante, uma vez que estes patÃgenos sÃo de origem fecal e seu habitat à o trato intestinal dos animais de sangue quente e pecilotÃrmicos.

Orientador: Edir Nepomuceno da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:14:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vessoni_CintiaLopesZaganini_M.pdf: 21669586 bytes, checksum: 1e5bff4e87a4bdaa25b5505d7715eb17 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Carcaças de frangos podem funcionar como veículo de bactérias patogênicas ao homem, particularmente as salmonelas. As infecções humanas têm se tornado freqüentes a partir desta via e sua gravidade estreitamente relacionada com seu perfil de resistência a drogas. O uso indiscriminado de antibióticos na terapêutica avícola e como promotores de crescimento em rações, tem sido apontado como causa de multirresistência de patógenos e levado à seleção de bactérias resistentes dentro do ecossistema. O perfil de resistência de bactérias residentes no trato digestivo das aves, como a Escherichía colíe Enterococcus spp, pode ser indicador do uso de tais drogas. Restrição ao uso de drogas em aves tem sido proposta, em todo o mundo, como medida para redução dos problemas de resistência antimicrobiana. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar cepas de Salmonella spp., Enterococcus spp. e Escherichía calí de 100 amostras de carcaças de frango de diferentes fornecedores e provenientes de diferentes Estados do Brasil, seguido pela etapa de determinar a resistência antimicrobiana às drogas de uso animal, usadas com finalidade terapêutica e promotora de crescimento. Das 100 carcaças de frango analisadas, 24% apresentaram contaminação por Salmonella spp, 84% por Enterococcus spp e 89% por Escherichía calí. As culturas confirmadas dos microorganismos descritos foram submetidas ao teste de resistência a 17 agentes antimicrobianos. Os agentes antimicrobianos utilizados foram amicacina 30 mcg, netilmicina 30 mcg, ciprofloxacina 5 mcg, cloranfenicol 30 mcg, ampicilina 10 mcg, aztreonam 30 mcg, gentamicina 10 mcg, tetraciclina 30 mcg, polimixicina B 300 U.I., sulfazotrim 25 mcg, ácido nalidixico 30 mcg, tobramicina 10 mcg, nitrofurazona 50 mcg, bacitracina 0,04 UJ., enrofloxacina, cefoxitina (30 mcg) e cefalotina (30 mcg). Os índices de resistência, simples ou múltipla a drogas, foram 75,6%, 29,7% e 20,3%, respectivamente para Enterococcus spp., E. calí e Salmonella spp. O gênero da Salmonella, que apresentou maior resistência foi o Newport (24,9%). O teste mostrou elevado índice de resistência a drogas entre as bactérias examinadas, tanto para as de uso humano como as de uso veterinário e, também, as usadas como promotoras de crescimento em rações. / Abstract: Chicken carcasses can act as a vehicle for pathogenic bacteria to human being, particularly for salmonellas. Food poisoning in humans from this source has become more frequent, the seriousness being directly related to the drug resistance profile of the organisms. The indiscriminate use of antibiotics in poultry therapeutics and in poultry feed as growth promoters has been indicated as the cause of multi-resistance to pathogens and led to the selection of resistant bacteria within the ecosystem. The resistance profile of bacteria present in the digestive tract of poultry, such as Escherichia coli and Enterococcus spp, may be an indicator of the use of such drugs. Throughout the world proposals have been made to restrict the use of drugs in poultry, as a means of reducing the problems of anti-microbial resistance. The objective of this research was to isolate and characterize strains of Salmonella spp., Enterococcus spp and Escherichia coli from chicken carcasses from different suppliers in different Brazilian states. After this step, the anti-microbial resistance to drugs commonly used in animais for both therapeutic and growth promoter purposes, was determined. Of the 100 chicken carcasses analyzed, 24% were contaminated with Salmonella spp, 89% were contaminated with Escherichia coli and 84% were contaminated with Enterococcus spp. The confirmed cultures of the microorganisms described were submitted to a resistance test for 17 anti-microbial agents. The used anti-microbial agents were amicacin 30 mcg, netilmicin 30 mcg, ciprofloxacin 5 mcg, chloranphenicol 30 mcg, ampicilin 10 mcg, aztreonam 30 mcg, gentamicin 10 mcg, tetracyclin 30 mcg, polimixicin B 300 U.I., sulphazothrim 25 mcg, nalidixic acid 30 mcg, tobramicin 10 mcg, nitrofurazon 50 mcg, bacitracin 0,04 U.I., enrofloxacin, cephoxitin (30 mcg) e cephalotin (30 mcg). The resistance rates were 75,6%, 29,7% e 20,3%, respectively for Enterococcus spp., E. coli and Salmonella spp Newport (24,9%) was the most resistant Salmonella sorotype. The test showed a high rate of resistance to the drugs by the bacteria examined, both for those used in humans and those used for veterinary purposes and to those used in feeds to promote growth. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Las mascotas exóticas, especialmente los reptiles -ampliamente distribuidos por el mundo representan un alto riesgo para la Salud Pública, debido principalmente a su condición de portadores intestinales de Salmonella spp., estimándose que del total de casos de salmonelosis un 7% se asocia al contacto con reptiles (SAR). Del total de SAR un 15% aproximadamente presenta un cuadro invasivo, los cuales incluyen septicemia, meningitis, infección en cartílagos e inclusive la muerte. La invasividad de Salmonella se encuentra asociada a genes de virulencia, que se organizan principalmente en la isla de Patogenicidad 2 (SPI-2) de su genoma. En consideración a lo anterior el propósito de este estudio fue detectar genes de virulencia asociados a invasividad, en cepas de Salmonella spp. aisladas desde reptiles en cautiverio de la Región Metropolitana. En este estudio se seleccionaron cuatro genes de virulencia (spiA, sseG, ssaB, sscB) asociados a invasividad, específicamente a la sobrevivencia de esta bacteria al interior de macrófagos y su diseminación sistémica. De las 34 cepas analizadas, el perfil más frecuente encontrado fue spiA/sscB/sseG (35,2%), seguido por sscB/sseG/ssaB (8,8%), siendo los genes mayormente detectados sseG (91%), ssaB (71%) y sscB (61%), mientras que el gen spiA fue menor su detección (31%). Estos resultados constituyen la primera aproximación molecular de la potencial virulencia de cepas de Salmonella aislada desde reptiles en Chile. Se discuten los resultados con la variabilidad genética en cepas de diferentes fuentes animales y el hombre. / Exotic pets, especially reptiles, are widely distributed throughout the world, particularly in Chile, where a high percentage are intestinal carriers of Salmonella spp. (About 50%), representing a risk to public health. Thus, it is estimated that of all cases of salmonellosis in humans, about 6-7% is associated with contact with reptiles (RAS). Of total RAS, about 15% has a box-invasive, which include septicemia, meningitis, infection in cartilage and even death. Salmonella invasiveness is encoded in virulence genes that are organized primarily in Pathogenicity Island 2 (SPI-2). The purpose of this study was to detect genes associated with invasiveness virulence in Salmonella strains, isolated from reptiles in captivity in the Metropolitan Region. In this study, four virulence genes (spiA, sseG, ssaB, sscB) associated with invasiveness, and therefore, belonging to the pathogenicity island 2 were selected. These genes are related to the survival of the bacteria within macrophages and their systemic dissemination. Of the 34 strains tested, the most common profile was spiA/ sscB/ sseG (35.2%), followed by sscB/sseG/ssaB (8.8%), the most prevalent genes sseG (91%), ssaB (71%) and sscB (61%), while the spiA obtained a lower prevalence (31%). These results provide the first molecular approach of potential virulence of Salmonella strains isolated from reptiles in Chile. The results with the genetic viability in different strains of animals and humans sources are discussed.

M.Tech. (Biotechnology) / Please refer to full text to view abstract