Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-15T20:04:42Z No. of bitstreams: 1 2018_ThainádeMeloLessaAmorim.pdf: 2404105 bytes, checksum: 9fcf175fa9624298e799cbd236095c91 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-17T17:45:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_ThainádeMeloLessaAmorim.pdf: 2404105 bytes, checksum: 9fcf175fa9624298e799cbd236095c91 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-17T17:45:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_ThainádeMeloLessaAmorim.pdf: 2404105 bytes, checksum: 9fcf175fa9624298e799cbd236095c91 (MD5) Previous issue date: 2018-05-16 / O teste de amplificação de ácidos nucleicos (NAT) é baseado na PCR em tempo real (qPCR), sendo atualmente utilizado na triagem de doadores em bancos de sangue, para detectar a presença do material genético dos vírus HIV, HBV e HCV em bolsas destinadas à doação. Este teste é mais sensível do que as técnicas sorológicas, por ser capaz de detectar a infecção na fase aguda antes do aparecimento de anticorpos, reduzindo o período de janela imunológica. Até o momento, nenhum teste NAT foi desenvolvido para a pesquisa de patógenos protozoários e a transmissão de doenças parasitárias via transfusão sanguínea e transplante de órgãos aumentou nos últimos anos. Neste trabalho, desenvolvemos um teste de diagnóstico NAT utilizando qPCR Sybr Green e TaqMan para a pesquisa do DNA de protozoários de alta relevância clínica, transmissíveis via transfusão sanguínea e endêmicos no Brasil, como o Trypanosoma cruzi, causador da doença de Chagas, Leishmania spp., causadoras das leishmanioses, Toxoplasma gondii, causador da Toxoplasmose, e Plasmodium spp., causadores da malária. Para tanto, foram utilizados pares de primers específicos para amplificação de genes conservados de cada um destes patógenos. Com relação aos testes de eficiência dos pares de primers utilizados, não houve perda de linearidade, pois os declives se mantiveram próximos de 100%. A sensibilidade para detecção de T. cruzi, Leishmania sp. e Plasmodium sp. foi semelhante na qPCR Sybr Green e TaqMan, para T. gondii, a qPCR TaqMan foi mais sensível, detectando um limite de 0,005 parasitas/µL. Constatamos que com relação à linearidade e sensibilidade ambas as metodologias são similares e com relação à especificidade, a TaqMan qPCR que utiliza sondas fluorogênicas gene-específicas marcadas com fluoróforos diferentes, apresentouse superior ao Sybr Green qPCR, possibilitando a definição do tipo de protozoário presente na amostra a ser analisada. Deste modo, propomos o sistema de qPCR Sybr Green utilizando primers com alvo no rRNA 28S de Trypanosomatidae para a amplificação dos genes de T. cruzi e Leishmania sp. e com alvo no rRNA 18S para os genes de Plasmodium sp. e T. gondii. para ser utilizado nos testes de triagem. Em uma segunda etapa, o sistema qPCR TaqMan deve ser então utilizado nos testes confirmatórios. Deste modo, o estabelecimento deste teste diagnóstico na rotina de bancos de sangue contribuirá fortemente para o aumento da segurança transfusional. / The nucleic acid amplification test (NAT) is based on real-time PCR (qPCR) and is currently used in blood donor screening to detect the presence of the genetic material of HIV, HBV and HCV viruses in donated pockets. This test is more sensitive than serologic techniques, because it is able to detect acute infection before the appearance of antibodies, reducing the period of immunological window. To date, no NAT test has been developed for protozoan pathogen research, and transmission of parasitic diseases via blood transfusion and organ transplantation has increased in recent years. In this work, we developed a NAT diagnostic test using qPCR Sybr Green and TaqMan to investigate the DNA of protozoa of high clinical relevance, transmissible through blood transfusion and endemic in Brazil, such as Trypanosoma cruzi, which causes Chagas disease, Leishmania spp. , causing the leishmaniasis, Toxoplasma gondii, causative of toxoplasmosis, and Plasmodium spp., causing malaria. For this, specific pairs of primers were used for the amplification of conserved genes of each of these pathogens. Regarding the efficiency tests of the pairs of primers used, there was no loss of linearity, since the slopes remained close to 100%. The sensitivity for detection of T. cruzi, Leishmania sp. and Plasmodium sp. was similar in qPCR Sybr Green and TaqMan, for T. gondii, qPCR TaqMan was more sensitive, detecting a limit of 0.005 parasites / μL. We found that with regard to linearity and sensitivity both methodologies are similar and with respect to specificity, TaqMan qPCR that uses gene-specific fluorogenic probes labeled with different fluorophores, was superior to Sybr Green qPCR, allowing the definition of protozoan type present in the sample to be analyzed. Thus, we propose the Sybr Green qPCR system using target primers in the Trypanosomatidae 28S rRNA for the amplification of the T. cruzi and Leishmania sp. and targeted at the 18S rRNA for the Plasmodium sp genes and T. gondii to be used in the screening tests. In a second step, the TaqMan qPCR system should be used in the confirmatory tests. In this way, the establishment of this diagnostic test in routine blood banks will contribute greatly to the increase of transfusion safety.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-28Bitstream added on 2014-06-13T20:38:56Z : No. of bitstreams: 1 bossolan_rp_me_botfm.pdf: 430534 bytes, checksum: 621278eaf59ba43e891caf2e11e8b99b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Uma das preocupações atuais dos serviços de saúde diz respeito aos baixos índices de doação de sangue. Essa constatação levou os hemocentros a desenvolverem programas de conscientização, na mídia e nas escolas, partindo do pressuposto que a formação de cidadãos responsáveis pelo bemestar pessoal e coletivo se inicia na infância. Frente à necessidade de subsídios para elaboração desses programas, este projeto teve como objetivo investigar a concepção que escolares de idades e estágios cognitivos diversos têm sobre doação de sangue, a importância que atribuem ao ato de doar e receber sangue, as informações de que dispõem, quais são suas fontes de informação, assim como fantasias e sentimentos associados à doação e recepção. Para tal, 145 escolares de faixa etária dos 6, 8 e 10 anos de idade foram submetidos a provas de desenvolvimento cognitivo, responderam a uma entrevista individual, semi-estruturada, com questões norteadoras sobre os temas discutidos e tiveram que se posicionar frente a um dilema. Num segundo momento, foi pedido que elaborassem um desenho parà sensibilizar as pessoas a doarem sangue. Os resultados mostraram que, tanto na entrevista como na resolução do dilema e no desenho, a maioria das crianças associou a doação com um ato de ajuda ao outro, parecendo mostrar que, independente do recurso metodológico utilizado, os escolares relacionaram o ato de doar om os valores de generosidade e solidariedade, possivelmente influenciados elos slogans veiculados nas campanhas. Apesar das crianças com maior escolaridade, na fase de desenvolvimento formal, possuir um número significativamente maior de informações, quando comparadas com as maIs ovas, que freqüentavam o pré e a segunda série, o nível de desinformação e... / One of the actual concerns in health servlces is the low number of blood donation. This observation led hemocenters to develop awareness programs in media and at schools, once the formation of citizens responsible for the individual and collective well-being begins in childhood. Due to the necessity of information for the programs' design, the aim of this project was to investigate the idea that students from different cognitive stages and ages have about blood donation, the importance they give to the act of donating and receiving blood, the information they have on the issue and its source, as well as the fantasies and feelings related to it. Thus, 145 students aged 6, 8 and 10 years were submitted to cognitive development tests; answered to an individual sem istructured interview, with question related to the themes discussed previously, and had to solve a dilemma. On a second moment, they were asked to draw a touching picture to motivate people to donate blood. Results showed that in the three situations, interview, dilemma solving and drawing, children associated the donation with an act of helping the other, showing that, independent on the methodological source used, the act of donating was related to generosity and solidarity values, possibly because these are the most frequently used slogans in campaigns. Despite the fact that children with a higher levei of education, in formal development stage, also have a significantly higher levei of information, disinformation and misinformation was high, in the sample as a whole, if compared to the younger ones, who were at pre-primary and second year of primary school. Children from the outskirts public schools were the least informed on the issue. When trying to justify the reason why people do not onate blood, children mentioned emotional conditions, fear of pain or damage... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Gimol Benzaquen Perosa / Banca: Eliana Goldfarb Cyrino / Banca: Mário Sérgio Vasconcelos / Resumo: Uma das preocupações atuais dos serviços de saúde diz respeito aos baixos índices de doação de sangue. Essa constatação levou os hemocentros a desenvolverem programas de conscientização, na mídia e nas escolas, partindo do pressuposto que a formação de cidadãos responsáveis pelo bemestar pessoal e coletivo se inicia na infância. Frente à necessidade de subsídios para elaboração desses programas, este projeto teve como objetivo investigar a concepção que escolares de idades e estágios cognitivos diversos têm sobre doação de sangue, a importância que atribuem ao ato de doar e receber sangue, as informações de que dispõem, quais são suas fontes de informação, assim como fantasias e sentimentos associados à doação e recepção. Para tal, 145 escolares de faixa etária dos 6, 8 e 10 anos de idade foram submetidos a provas de desenvolvimento cognitivo, responderam a uma entrevista individual, semi-estruturada, com questões norteadoras sobre os temas discutidos e tiveram que se posicionar frente a um dilema. Num segundo momento, foi pedido que elaborassem um desenho parà sensibilizar as pessoas a doarem sangue. Os resultados mostraram que, tanto na entrevista como na resolução do dilema e no desenho, a maioria das crianças associou a doação com um ato de ajuda ao outro, parecendo mostrar que, independente do recurso metodológico utilizado, os escolares relacionaram o ato de doar om os valores de generosidade e solidariedade, possivelmente influenciados elos slogans veiculados nas campanhas. Apesar das crianças com maior escolaridade, na fase de desenvolvimento formal, possuir um número significativamente maior de informações, quando comparadas com as maIs ovas, que freqüentavam o pré e a segunda série, o nível de desinformação e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the actual concerns in health servlces is the low number of blood donation. This observation led hemocenters to develop awareness programs in media and at schools, once the formation of citizens responsible for the individual and collective well-being begins in childhood. Due to the necessity of information for the programs' design, the aim of this project was to investigate the idea that students from different cognitive stages and ages have about blood donation, the importance they give to the act of donating and receiving blood, the information they have on the issue and its source, as well as the fantasies and feelings related to it. Thus, 145 students aged 6, 8 and 10 years were submitted to cognitive development tests; answered to an individual sem istructured interview, with question related to the themes discussed previously, and had to solve a dilemma. On a second moment, they were asked to draw a touching picture to motivate people to donate blood. Results showed that in the three situations, interview, dilemma solving and drawing, children associated the donation with an act of helping the other, showing that, independent on the methodological source used, the act of donating was related to generosity and solidarity values, possibly because these are the most frequently used slogans in campaigns. Despite the fact that children with a higher levei of education, in formal development stage, also have a significantly higher levei of information, disinformation and misinformation was high, in the sample as a whole, if compared to the younger ones, who were at pre-primary and second year of primary school. Children from the outskirts public schools were the least informed on the issue. When trying to justify the reason why people do not onate blood, children mentioned emotional conditions, fear of pain or damage... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre