Estima-se atualmente que mais de 5% da população mundial vem fazendo uso recreativo de algum tipo de substância psicoativa, sendo que o direito a esse uso é tema recorrente da sociedade contemporânea. Por apresentar riscos associados à saúde e a segurança das populações, o uso abusivo dessas substâncias tem instigado a toxicologia social na busca de respostas, com as quais se possa caracterizar, analisar e gerenciar esses riscos. Drogas de grande consumo no Brasil são a anfetamina, cocaína e Cannabis sativa. Esta tese desenvolveu uma nova metodologia para detectar e quantificar anfetamina, cocaína e tetrahidrocanabinol em sangue total, com uso de microextração em fase líquida via fibra de polipropileno (HF-LPME), seguida de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC-MS). Trata-se de uma técnica que apresenta vantagens sobre as tradicionais, uma vez que demanda quantidades menores de solvente orgânico, diminuindo riscos e custos de processo. Também propôs um estudo com a aplicação dos métodos em 69 amostras de sangue de vivos e de post mortem, as quais foram obtidas por convênio com a superintendência da polícia técnica científica de São Paulo (SPTC/SP). Os métodos desenvolvidos foram validados de acordo com diretrizes internacionais de interesse forense. Como resultado da validação, os métodos desenvolvidos se mostraram precisos e exatos para anfetamina e cocaína. O limite de detecção da cocaína foi de 5 ng . mL-1 e o limite de quantificação de 10 ng . mL-1. Quanto a anfetamina, os limites de detecção e de quantificação foram de 5 ng . mL-1. A técnica de HF-LPME não foi aplicável ao tetraidrocanabinol (Δ9-THC). Como resultado da análise das amostras, 40% delas apresentaram resultados positivos para cocaína. Desses positivos, 35% foram oriundos das matrizes de sangue de vivos e 64% oriundos de sangue post mortem. Nenhuma delas apresentou resultado quantificável para anfetamina. / It is currently estimated that more than 5% of the world\'s population has been doing recreational use of some kind of psychoactive substances and the legal right to such use is a recurring theme debated by contemporary society. Due to the risks associated with populations health and safety, the abusive use of these substances has been instigating by social toxicology to search for answers to characterize, analyze and manage these risks. Drugs of great consumption in Brazil are, amphetamine cocaine and marijuana. This thesis proposes to develop a new methodology to detect and quantify psychoactive drugs in whole blood with the use of liquid phase microextraction by polypropylene fiber (HFLPME), followed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). It is a technique that presents advantages compared with traditional ones, because of the smaller amounts demands of organic solvent, reducing risks and process costs. It also proposes a study with 69 blood samples taken from living persons and post mortem blood samples, which were obtained by agreement with the Superintendency of São Paulo Scientific Technical Police (SPTC / SP). The methods developed were validated according to international guidelines of forensic interest. As a result of the validation, the methods developed were precise and accurate for amphetamine and cocaine. The limit of cocaine detection was 5 ng . mL-1 and the limit of quantification was 10 ng . mL-1. As for amphetamine, the limits of detection and quantification were 5 ng . mL-1. The HF-LPME technique was not applicable to tetrahydrocannabinol (Δ9-THC). As a result of the sample analysis, 40% of them presented positive results for cocaine. Of these, 35% were from blood samples taken from living persons and 64% from the post mortem blood samples. None of the samples presented quantifiable results for amphetamine.

A exposição a baixos níveis de chumbo é associada a desordens cognitivas e neurológicas em crianças. Foi descrito um aumento dos níveis de chumbo no sangue de crianças que vivem em comunidades que recebem água fluoretada. Este estudo testou se flúor a 100 ppm na forma de ácido fluorsilícico na água induziria aumento na concentração de chumbo no sangue e tecidos calcificados de ratos Wistar expostos a baixos níveis de chumbo desde a idade gestacional. Ratas foram separadas em quatro grupos: controle e grupos que receberam água que continham 100 mg/L de fluoreto (F), 30 mg/L de chumbo (Pb), ou 100 mg/L de F e 30 mg/L de Pb (F+Pb), desde uma semana antes do acasalamento até que os filhotes completassem 81 dias. Todos os animais foram pesados ao longo do experimento. Sangue e tecidos calcificados foram coletados com 81 dias para análise de chumbo, flúor e fósforo em esmalte, dentina, osso total, osso superficial e sangue. Chumbo foi determinado por ICP-MS (Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry). Flúor foi medido através de elétrodo íon-específico e fósforo foi determinado por reação colorimétrica. As concentrações de chumbo triplicaram no grupo F+Pb (76.7±11.0 µg/dL) em comparação ao grupo Pb (22.6±8.5 µg/dL)(p <0.001), com a mesma tendência observada em todos os tecidos calcificados analisados (p <0.001 para todas as comparações). No esmalte, as concentrações de chumbo analisadas foram 2.5 vezes mais altas no grupo F+Pb em comparação ao grupo Pb (4,369±1,353 µg/g versus 1,768±1,892 µg/g). Na dentina, a concentração de chumbo encontrada no grupo F+Pb era 8.5±2.0 µg/g versus 4.9±1.7 µg/g no grupo Pb. Na superfície óssea, a concentração de chumbo encontrada no grupo F+Pb era 3.1 vezes maior do que as determinadas no grupo Pb, com 28.0±10.6 e 9.0±3.7 µg/g nos grupos F+Pb e Pb, respectivamente. No osso total, os valores de chumbo dobraram no grupo F+Pb (14.2±2.6 µg/g) em comparação com o grupo Pb (6.8±1.7 µg/g). Os valores de chumbo estavam abaixo do limite de detecção na maioria das amostras dos grupos Controle e F. As concentrações de flúor aumentaram em ambos os grupos expostos a flúor (F e F+Pb), com diferenças estatisticamente significantes dos grupos controle e Pb, mas nenhuma diferença foi encontrada nas concentrações de F entre os grupos F e F+Pb em quaisquer dos tecidos calcificados testados. Em conclusão, este estudo mostra um aumento nas concentrações de chumbo no sangue total, esmalte, dentina, superfície óssea e osso total em ratas com 81 dias expostas ao flúor e chumbo desde o período pré-natal. / Low-level lead exposure is linked to cognitive and neurological disorders in children. An increased risk for higher blood lead levels was described for children living in communities that receive fluoridated-water. This study tested whether water fluoride would induce increases in the blood and calcified tissue lead concentrations in Wistar rats exposed to low lead levels since gestational age. Female rats were allocated in four groups: control, and 3 groups that received water containing 100 mg/L of fluoride (F), 30 mg/L of lead (Pb), or 100 mg/L of F and 30 mg/L of Pb (F+Pb). Females mated and delivered their pups receiving the same water treatment. Female pups were maintained on the same water regimen until day 81. Lead was determined by ICP-MS (Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry), and fluoride was measured by ion-specific electrode in the whole blood, superficial enamel, dentine, surface bane, and whole bane. Mean whole blood lead concentrations triplicated in the F+Pb group (76.7±11.0 µg/dL) in comparison to the Pb group (22.6±8.5 µg/dL)(p < 0.001), with the same trend observed in all calcified tissues analyzed (p < 0.001 for all comparisons). In the enamel, mean lead concentrations were 2.5 times higher in the F+Pb group compared with the Pb group (4,369±1,353 µg/g versus 1,768±892 µg/g). In dentine, mean lead concentration found in F+Pb group was 8.5 ±2.0 µg/g versus 4.9±1.7 µg/g in the Pb group. In the bane surface, the mean lead concentration found in the F+Pb group was 3.1 times that determined in the Pb animals, with 28.0±10.6 and 9.0±3.7 µg/g in the F+Pb and Pb groups, respectively. In whole bane, mean lead values doubled in the F+Pb group (14.2±2.6 µg/g) in comparison with the Pb group (6.8±1.7 µg/g). Lead values were below detection limit in most Control and F group samples. Fluoride concentrations were increased in both groups exposed to fluoride (F and F+Pb), with statistically significant differences from the control and Pb groups, but no differences in the F concentrations were found between the F and F+Pb group in any of the calcified tissues tested. In conclusion, this study shows a fluoride-induced increase in the concentrations of lead of whole blood, enamel, dentine, surface bane and whole bane of 81-day female rats exposed to lead since gestational age, suggesting that a biological effect not recognized so far may underlie the epidemiological association between increased blood lead levels in children living in water-fluoridated communities.

Estima-se atualmente que mais de 5% da população mundial vem fazendo uso recreativo de algum tipo de substância psicoativa, sendo que o direito a esse uso é tema recorrente da sociedade contemporânea. Por apresentar riscos associados à saúde e a segurança das populações, o uso abusivo dessas substâncias tem instigado a toxicologia social na busca de respostas, com as quais se possa caracterizar, analisar e gerenciar esses riscos. Drogas de grande consumo no Brasil são a anfetamina, cocaína e Cannabis sativa. Esta tese desenvolveu uma nova metodologia para detectar e quantificar anfetamina, cocaína e tetrahidrocanabinol em sangue total, com uso de microextração em fase líquida via fibra de polipropileno (HF-LPME), seguida de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC-MS). Trata-se de uma técnica que apresenta vantagens sobre as tradicionais, uma vez que demanda quantidades menores de solvente orgânico, diminuindo riscos e custos de processo. Também propôs um estudo com a aplicação dos métodos em 69 amostras de sangue de vivos e de post mortem, as quais foram obtidas por convênio com a superintendência da polícia técnica científica de São Paulo (SPTC/SP). Os métodos desenvolvidos foram validados de acordo com diretrizes internacionais de interesse forense. Como resultado da validação, os métodos desenvolvidos se mostraram precisos e exatos para anfetamina e cocaína. O limite de detecção da cocaína foi de 5 ng . mL-1 e o limite de quantificação de 10 ng . mL-1. Quanto a anfetamina, os limites de detecção e de quantificação foram de 5 ng . mL-1. A técnica de HF-LPME não foi aplicável ao tetraidrocanabinol (&#916;9-THC). Como resultado da análise das amostras, 40% delas apresentaram resultados positivos para cocaína. Desses positivos, 35% foram oriundos das matrizes de sangue de vivos e 64% oriundos de sangue post mortem. Nenhuma delas apresentou resultado quantificável para anfetamina. / It is currently estimated that more than 5% of the world\'s population has been doing recreational use of some kind of psychoactive substances and the legal right to such use is a recurring theme debated by contemporary society. Due to the risks associated with populations health and safety, the abusive use of these substances has been instigating by social toxicology to search for answers to characterize, analyze and manage these risks. Drugs of great consumption in Brazil are, amphetamine cocaine and marijuana. This thesis proposes to develop a new methodology to detect and quantify psychoactive drugs in whole blood with the use of liquid phase microextraction by polypropylene fiber (HFLPME), followed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). It is a technique that presents advantages compared with traditional ones, because of the smaller amounts demands of organic solvent, reducing risks and process costs. It also proposes a study with 69 blood samples taken from living persons and post mortem blood samples, which were obtained by agreement with the Superintendency of São Paulo Scientific Technical Police (SPTC / SP). The methods developed were validated according to international guidelines of forensic interest. As a result of the validation, the methods developed were precise and accurate for amphetamine and cocaine. The limit of cocaine detection was 5 ng . mL-1 and the limit of quantification was 10 ng . mL-1. As for amphetamine, the limits of detection and quantification were 5 ng . mL-1. The HF-LPME technique was not applicable to tetrahydrocannabinol (&#916;9-THC). As a result of the sample analysis, 40% of them presented positive results for cocaine. Of these, 35% were from blood samples taken from living persons and 64% from the post mortem blood samples. None of the samples presented quantifiable results for amphetamine.

A exposição a baixos níveis de chumbo é associada a desordens cognitivas e neurológicas em crianças. Foi descrito um aumento dos níveis de chumbo no sangue de crianças que vivem em comunidades que recebem água fluoretada. Este estudo testou se flúor a 100 ppm na forma de ácido fluorsilícico na água induziria aumento na concentração de chumbo no sangue e tecidos calcificados de ratos Wistar expostos a baixos níveis de chumbo desde a idade gestacional. Ratas foram separadas em quatro grupos: controle e grupos que receberam água que continham 100 mg/L de fluoreto (F), 30 mg/L de chumbo (Pb), ou 100 mg/L de F e 30 mg/L de Pb (F+Pb), desde uma semana antes do acasalamento até que os filhotes completassem 81 dias. Todos os animais foram pesados ao longo do experimento. Sangue e tecidos calcificados foram coletados com 81 dias para análise de chumbo, flúor e fósforo em esmalte, dentina, osso total, osso superficial e sangue. Chumbo foi determinado por ICP-MS (Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry). Flúor foi medido através de elétrodo íon-específico e fósforo foi determinado por reação colorimétrica. As concentrações de chumbo triplicaram no grupo F+Pb (76.7±11.0 µg/dL) em comparação ao grupo Pb (22.6±8.5 µg/dL)(p <0.001), com a mesma tendência observada em todos os tecidos calcificados analisados (p <0.001 para todas as comparações). No esmalte, as concentrações de chumbo analisadas foram 2.5 vezes mais altas no grupo F+Pb em comparação ao grupo Pb (4,369±1,353 µg/g versus 1,768±1,892 µg/g). Na dentina, a concentração de chumbo encontrada no grupo F+Pb era 8.5±2.0 µg/g versus 4.9±1.7 µg/g no grupo Pb. Na superfície óssea, a concentração de chumbo encontrada no grupo F+Pb era 3.1 vezes maior do que as determinadas no grupo Pb, com 28.0±10.6 e 9.0±3.7 µg/g nos grupos F+Pb e Pb, respectivamente. No osso total, os valores de chumbo dobraram no grupo F+Pb (14.2±2.6 µg/g) em comparação com o grupo Pb (6.8±1.7 µg/g). Os valores de chumbo estavam abaixo do limite de detecção na maioria das amostras dos grupos Controle e F. As concentrações de flúor aumentaram em ambos os grupos expostos a flúor (F e F+Pb), com diferenças estatisticamente significantes dos grupos controle e Pb, mas nenhuma diferença foi encontrada nas concentrações de F entre os grupos F e F+Pb em quaisquer dos tecidos calcificados testados. Em conclusão, este estudo mostra um aumento nas concentrações de chumbo no sangue total, esmalte, dentina, superfície óssea e osso total em ratas com 81 dias expostas ao flúor e chumbo desde o período pré-natal. / Low-level lead exposure is linked to cognitive and neurological disorders in children. An increased risk for higher blood lead levels was described for children living in communities that receive fluoridated-water. This study tested whether water fluoride would induce increases in the blood and calcified tissue lead concentrations in Wistar rats exposed to low lead levels since gestational age. Female rats were allocated in four groups: control, and 3 groups that received water containing 100 mg/L of fluoride (F), 30 mg/L of lead (Pb), or 100 mg/L of F and 30 mg/L of Pb (F+Pb). Females mated and delivered their pups receiving the same water treatment. Female pups were maintained on the same water regimen until day 81. Lead was determined by ICP-MS (Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry), and fluoride was measured by ion-specific electrode in the whole blood, superficial enamel, dentine, surface bane, and whole bane. Mean whole blood lead concentrations triplicated in the F+Pb group (76.7±11.0 µg/dL) in comparison to the Pb group (22.6±8.5 µg/dL)(p < 0.001), with the same trend observed in all calcified tissues analyzed (p < 0.001 for all comparisons). In the enamel, mean lead concentrations were 2.5 times higher in the F+Pb group compared with the Pb group (4,369±1,353 µg/g versus 1,768±892 µg/g). In dentine, mean lead concentration found in F+Pb group was 8.5 ±2.0 µg/g versus 4.9±1.7 µg/g in the Pb group. In the bane surface, the mean lead concentration found in the F+Pb group was 3.1 times that determined in the Pb animals, with 28.0±10.6 and 9.0±3.7 µg/g in the F+Pb and Pb groups, respectively. In whole bane, mean lead values doubled in the F+Pb group (14.2±2.6 µg/g) in comparison with the Pb group (6.8±1.7 µg/g). Lead values were below detection limit in most Control and F group samples. Fluoride concentrations were increased in both groups exposed to fluoride (F and F+Pb), with statistically significant differences from the control and Pb groups, but no differences in the F concentrations were found between the F and F+Pb group in any of the calcified tissues tested. In conclusion, this study shows a fluoride-induced increase in the concentrations of lead of whole blood, enamel, dentine, surface bane and whole bane of 81-day female rats exposed to lead since gestational age, suggesting that a biological effect not recognized so far may underlie the epidemiological association between increased blood lead levels in children living in water-fluoridated communities.

Os eicosanoides, produtos do metabolismo do ácido araquidônico, apresentam papel importante na homeostasia e na patogênese de diversas doenças humanas. A biossíntese desses compostos pode ser estimulada por agentes farmacológicos como ionóforos e inibidores da Ca2+-ATPase, e também por agonistas naturais como o formil-metionil-leucil-fenialanina (fMLP). Considerando os interesses em avaliar e comparar o perfil de mediadores lipídicos, como os leucotrienos (LTs), as prostaglandinas (PGs), os ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs), os ácidos dihidroxitetraenoicos (DiHETEs) e os ácidos hidroxieicosatetraenoicos (HETEs), na saúde e na doença, o objetivo deste trabalho foi padronizar um método analítico para determinar do perfil de eicosanoides em plasma humano após estimulação do sangue total, e assim observar diferenças entre indivíduos saudáveis e doentes. Dessa forma, um método por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (HPLC-MS/MS) foi validado para quantificação de 22 eicosanoides em plasma de indivíduos saudáveis. A análise por HPLCMS/ MS foi realizada em modo negativo pelo modo de varredura por monitoramento de reações múltiplas (MRM). A linearidade do método apresentou coeficiente de correlação (r) maior que 0,98 para todos os eicosanoides analisados. A precisão e exatidão intra e inter-ensaios tiveram desvio padrão e erro relativo menores que 15%, exceto para o limite inferior de quantificação cujos valores foram menores que 20%. Para estimulação das células do sangue total, quatro estímulos (fMLP, ionomicina, A23187 e tapsigargina) foram utilizados. A análise estatística mostrou que o A23187 e a tapsigargina foram os estímulos mais potentes na indução da produção de eicosanoides. Em seguida, comparamos o perfil de eicosanoides em amostras de plasma de indivíduos saudáveis com pacientes com anemia falciforme (AF), em tratamento com hidroxiureia (HU) ou transfusão sanguínea crônica. Os resultados demonstraram que o método é preciso para determinação de diferenças entre os pacientes e indivíduos saudáveis quanto à produção dos mediadores lipídicos 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2 e PGE2. Portanto, nosso método analítico é sensível, específico e reprodutível para identificar e quantificar diferenças no perfil de eicosanoides em amostras de sangue estimuladas in vitro, e poderá contribuir para o estabelecimento do perfil de mediadores lipídicos em diferentes doenças inflamatórias e infecciosas. / Eicosanoids, products from arachidonic acid metabolism, play an important role in the homeostasis and in the pathogenesis of various human diseases. Pharmacological agents such as Ca2+ ionophores and Ca2+-ATPase inhibitors, as well as natural agonists such as fMet-leu-Phe (fMLP) can stimulate eicosanoid biosynthesis. Considering the interests in evaluate and compare the profile of lipid mediators, as leukotriens (LTs), prostaglandins (PGs), epoxyeicosatrienoic acids (EETs), dihydroxytetraenoic acids (DiHETEs) and hydroxyeicosatetraenoic acids (HETEs), in healthy and disease, the aim of this work was to standardize a method to determine the eicosanoid profile of human plasma samples after whole blood stimulation, and to assess differences between healthy and sick individuals. For this purpose, a liquid chromatographytandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was validated for the quantification of 22 eicosanoids using human plasma from healthy volunteers. In addition, we optimized a method for the stimulation of eicosanoids in human whole blood. LC-MS/MS analyses were performed by negative electrospray ionization and multiple reaction monitoring. An assumption of linearity resulted in a regression coefficient > 0.98 for all eicosanoids tested. The mean intra-assay and inter-assay accuracy and precision values had relative standard deviations and relative errors of < 15%, except for the lower limit of quantification, where these values were < 20%. For whole blood stimulation, four stimuli (fMLP, ionomycin, A23187, and thapsigargin) were used. Results of the statistical analysis showed that A23187 and thapsigargin were potent stimuli to induce the production of eicosanoids. We next compared the eicosanoid profiles of healthy volunteers to those of patients with sickle cell anemia (SCA) under treatment with hydroxyurea (HU) or after chronic red blood cell (RBC) transfusion. The results indicate that the method was sufficient to find a difference between lipid mediators released in whole blood of SCA patients compared to healthy subjects for 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2, and PGE2. In conclusion, our analytical method is sensitive, specific and reproducible for indentify and quantify changes in eicosanoid profiles in whole blood stimulated in vitro, which can contribute to establishing the eicosanoid profiles associated with different inflammatory and infectious diseases.

Os eicosanoides, produtos do metabolismo do ácido araquidônico, apresentam papel importante na homeostasia e na patogênese de diversas doenças humanas. A biossíntese desses compostos pode ser estimulada por agentes farmacológicos como ionóforos e inibidores da Ca2+-ATPase, e também por agonistas naturais como o formil-metionil-leucil-fenialanina (fMLP). Considerando os interesses em avaliar e comparar o perfil de mediadores lipídicos, como os leucotrienos (LTs), as prostaglandinas (PGs), os ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs), os ácidos dihidroxitetraenoicos (DiHETEs) e os ácidos hidroxieicosatetraenoicos (HETEs), na saúde e na doença, o objetivo deste trabalho foi padronizar um método analítico para determinar do perfil de eicosanoides em plasma humano após estimulação do sangue total, e assim observar diferenças entre indivíduos saudáveis e doentes. Dessa forma, um método por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (HPLC-MS/MS) foi validado para quantificação de 22 eicosanoides em plasma de indivíduos saudáveis. A análise por HPLCMS/ MS foi realizada em modo negativo pelo modo de varredura por monitoramento de reações múltiplas (MRM). A linearidade do método apresentou coeficiente de correlação (r) maior que 0,98 para todos os eicosanoides analisados. A precisão e exatidão intra e inter-ensaios tiveram desvio padrão e erro relativo menores que 15%, exceto para o limite inferior de quantificação cujos valores foram menores que 20%. Para estimulação das células do sangue total, quatro estímulos (fMLP, ionomicina, A23187 e tapsigargina) foram utilizados. A análise estatística mostrou que o A23187 e a tapsigargina foram os estímulos mais potentes na indução da produção de eicosanoides. Em seguida, comparamos o perfil de eicosanoides em amostras de plasma de indivíduos saudáveis com pacientes com anemia falciforme (AF), em tratamento com hidroxiureia (HU) ou transfusão sanguínea crônica. Os resultados demonstraram que o método é preciso para determinação de diferenças entre os pacientes e indivíduos saudáveis quanto à produção dos mediadores lipídicos 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2 e PGE2. Portanto, nosso método analítico é sensível, específico e reprodutível para identificar e quantificar diferenças no perfil de eicosanoides em amostras de sangue estimuladas in vitro, e poderá contribuir para o estabelecimento do perfil de mediadores lipídicos em diferentes doenças inflamatórias e infecciosas. / Eicosanoids, products from arachidonic acid metabolism, play an important role in the homeostasis and in the pathogenesis of various human diseases. Pharmacological agents such as Ca2+ ionophores and Ca2+-ATPase inhibitors, as well as natural agonists such as fMet-leu-Phe (fMLP) can stimulate eicosanoid biosynthesis. Considering the interests in evaluate and compare the profile of lipid mediators, as leukotriens (LTs), prostaglandins (PGs), epoxyeicosatrienoic acids (EETs), dihydroxytetraenoic acids (DiHETEs) and hydroxyeicosatetraenoic acids (HETEs), in healthy and disease, the aim of this work was to standardize a method to determine the eicosanoid profile of human plasma samples after whole blood stimulation, and to assess differences between healthy and sick individuals. For this purpose, a liquid chromatographytandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was validated for the quantification of 22 eicosanoids using human plasma from healthy volunteers. In addition, we optimized a method for the stimulation of eicosanoids in human whole blood. LC-MS/MS analyses were performed by negative electrospray ionization and multiple reaction monitoring. An assumption of linearity resulted in a regression coefficient > 0.98 for all eicosanoids tested. The mean intra-assay and inter-assay accuracy and precision values had relative standard deviations and relative errors of < 15%, except for the lower limit of quantification, where these values were < 20%. For whole blood stimulation, four stimuli (fMLP, ionomycin, A23187, and thapsigargin) were used. Results of the statistical analysis showed that A23187 and thapsigargin were potent stimuli to induce the production of eicosanoids. We next compared the eicosanoid profiles of healthy volunteers to those of patients with sickle cell anemia (SCA) under treatment with hydroxyurea (HU) or after chronic red blood cell (RBC) transfusion. The results indicate that the method was sufficient to find a difference between lipid mediators released in whole blood of SCA patients compared to healthy subjects for 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2, and PGE2. In conclusion, our analytical method is sensitive, specific and reproducible for indentify and quantify changes in eicosanoid profiles in whole blood stimulated in vitro, which can contribute to establishing the eicosanoid profiles associated with different inflammatory and infectious diseases.