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Ação da hidrocortisona no desenvolvimento de Schistosoma mansoni Em biomphalaria glabrataSerrano, Deborah Regina 29 July 1998 (has links)
Orientadores: Eliana Maria Zanotti Magalhães, Luiz Augusto Magalhães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T00:56:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1998 / Resumo: Os corticosteróides, hormônios do córtex da supra-renal com formação esteróide ou composto qualquer que possua atividades similares, tem como exemplo principal a hidrocortisona (cortisol), que nos mamíferos apresenta efeito anti-inflamatório e imunossupressivo, atuando. principalmente sobre as células de defesa. É por isso usada em casos de infecção e alergia, inibindo melhor a resposta primária do que secundária. Os moluscos apresentam sistema de defesa interno constituído por mecanismo de origem celular e humoral. Os amebócitos, células de defesa, podem ser de dois tipos: hialinócito e granulócito, sendo o segundo semelhante aos macrófagos dos mamíferos e responsáveis pela atividade fagocitária. Com o objetivo de verificar a ação da hidrocortisona sobre os componentes da hemolinfa de Biomphalaria glabrata infectada com miracídios de Schistosoma mansoni da linhagem BH e sua influência no desenvolvimento do trematódeo em seu hospedeiro intermediário, realizamos vários experimentos: verificação da sobrevivência dos moluscos, taxa de infecção, número de cercárias liberadas, verificação da reação amebocitária em torno dos esporocistos. Os resultados mostraram que os moluscos tratados com hidrocortisona apresentaram menor quantidade de amebócitos circulantes na hemolinfa, maior suscetibilidade à infecção, precocidade na liberação de cercárias, liberação de cercárias em maior número, predominância de esporocistos viáveis sem reação amebocitária ao seu redor, precocidade no aparecimento dos esporocistos secundários. Tais dados, compatíveis entre si, sugerem atuação da hidrocortisona sobre o sistema de defesa interno dos moluscos Biomphalaria glabrata de modo semelhante ao que ocorre no ser humano, ou seja, causando imunossupressão. Tal atuação facilitaria o desenvolvimento do Schistosoma mansoni em seu hospedeiro intermediário / Abstract: Hydrocortisone (cortisol) is the main example of a drug which presents antiinflammatory and immunosupressive efTects in mammals like other compounds as corticosteroids, suprarenal hormones with steroid formation or any others with similar activities. Its main activity is on the cell defence and is used in the infection and allergy cases best inhibiting primary than secondary response. The internal defence system of molluscs are constituted by humoral and cell mechanisms. Two types of amoebocytes, the cell defence in molluscs are found: hialinocyte and granulocyte. The second type is similar to the macrophage of mammals and is responsible for the phagocytic activity. Experiments were conducted to verify the mo de of action of hydrocortisone over the haemolimph cells of Biomphalaria glabrata infected with BH strain of Schistosoma mansoni miracidia and its developmental influence in the intermediate host. Survival of molluscs, rate of infection, number of released cercaria, haemolymph circulating amoebocytes, amoebocyte reaction around the sporocysts were verified. Molluscs treated with hydrocortisone exhibited less circulating amoebocytes in the haemolymph, more susceptibility to the infection, more production and precocious release of cercaria and predominance of viable sporocysts without secondary sporocysts. These results which are compatible among them, suggest similar mo de of action of hydrocortisone in the defence system óf Biomphalaria glabrata and human been causing immunosupression. This action would facilitate the Schistosoma mansoni development in its intermediary host / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas
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Regulatory functions of proteasome component RPN11/POH1 in Schistosoma mansoni and human cellsNabhan, Joseph. January 2006 (has links)
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Caracterização estrutural da Uridina Fosforilase de Schistosoma mansoni / Structural characterization of Uridine Phosphorylase from Schistosoma mansoniSilva Neto, Antonio Marinho da 16 August 2013 (has links)
A esquistossomose humana, doença causada pelo S. mansoni e com 6 milhões de infectados somente no Brasil, possui uma única estratégia terapêutica eficiente atualmente disponível. Esta se baseia na utilização de praziquantel e relatos de cepas resistentes à essa droga tem despertado o interesse da comunidade científica sobre o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Uma melhor caracterização dos processos metabólicos do parasita podem auxiliar nestas buscas. Diante desse contexto, nosso grupo tem trabalhado na caracterização estrutural e funcional das enzimas que compõem a via de salvação de purinas e pirimidinas deste parasita, com dez enzimas já caracterizadas. Uma das enzimas remanescentes é a uridina fosforilase (UP) (EC 2.4.2.3), cujo a qual o genoma do parasita apresenta duas isoformas, a smUPa e smUPb (92% de identidade entre elas). Com o objetivo de caracterizar estruturalmente estas enzimas, ambas foram obtidas via expressão heteróloga, purificadas e submetidas a ensaios de cristalização e co-cristalização (para obtenção das estruturas interagindo com diferentes ligantes). Após coleta de dados de difração de raio-x, processamento e refinamento adequado foram obtidas seis estruturas da smUPa (smUPaapo, smUPa+Timidina, smUPa+timina, smUPa+uracil, smUPa-5fluorouracil) e duas da smUPb (smUPbapo e smUPb+citrato). A análise das estruturas revela que as duas isoformas apresentam essencialmente a mesma estrutura, no entanto, apesar das poucas divergências em nível de sequência de aminoácidos, existem diferenças significativas entre os sítios ativos. A smUPa apresenta o sítio com as mesmas características de UPs conhecidas, em contrapartida a smUPb apresenta duas mudanças significativas que elimina a capacidade de interagir com a base nitrogenada (Q201L) e a cavidade que acomoda a base nitrogenada (G126D), o que torna as smUPs um caso único de isoformas de UP em um mesmo organismo conhecidas. É plausível que a smUPb não seja capaz de catalisar a fosforólise reversível da uridina, sendo ou um pseudogene ou alguma outra enzima com atividade catalítica diferente da UP. Para a completa caracterização destas enzimas, testes de atividade enzimática serão realizados e deverão auxiliar a determinar a real função da smUPb. / Human schistosomiasis, a disease caused by Schistosoma sp., is estimated to affect six million individuals in Brazil alone and there is currently only one therapeutic strategy available. This is based on the use of praziquantel and reports of the appearance of strains resistant to the drug has motivated the scientific community towards the search for new possible therapies. Biochemical characterization of the parasites metabolism is essential for the rational development of new therapeutic alternatives. Based on this,reasoning our group has been working on the structural and functional characterization of the enzymes involved in the pyrimidine and purine salvage pathways of S. mansoni. One of the remaining enzymes to be characterized is uridine phosphorylase (UP) (EC 2.4.2.3), for which there are two isoforms present in the parasite genome, smUPa and smUPb, which share 92% sequence identity. In order to structurally characterize these enzymes, both smUPs were produced by heterologous expression, purified and submitted to crystallization e co-crystallization assays, in the latter case in order to obtain the structure of different enzyme-ligand complexes. After data collection, processing and refinement, five structures of smUPa (smUPaapo, smUPa+Timidina, smUPa+timina, smUPa+uracil and smUPa+5fluorouracil) and two structures of smUPb (smUPbapo and smUPb+citrato) were obtained. Analysis of the structures revealed that the isoforms have the same fold, but despite the high sequence identity, significant differences are observed at the active site probably profoundly affecting enzyme activity. Whilst SmUPa presents an active site similar to that of other known UPs, smUPb is predicted to lack the ability to interact with the nucleoside base due to the presence of a leucine in place of a glutamine at position 201 and an aspartatic acid in place of glycine at position 126. These differences turn the smUPs into a unique case of UP isoforms. It is plausible that smUPb is unable to catalyze the reversible phosphorolysis of uridine and could be either a pseudogene or a different enzyme altogether of unknown catalytic activity. A complete functional characterization in vitro will be necessary in order to determine its real function.
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Adenina fosforibosiltransferase de Schistosoma mansoni: proposta de detalhamento do mecanismo catalítico por dinâmica molecular / Adenine phosphoribosyltransferase from Schistosoma mansoni: insights into the catalytic mechanism via molecular dynamicsCaldas, Victor Emanoel Armini 12 August 2011 (has links)
A Adenina Fosforibosiltransferase (APRT E.C. 2.4.2.7) pertence à família de enzimas Fosforibosil Transferases (PRTase) do Tipo I , que catalisa a conversão reversível de Adenina e 5-fosfo-α-D-ribose-1-difosfato (PRPP) em difosfato e adenosina monofosfato, um importante precursor energético da célula. A APRT integra a via de salvação de purinas, única forma de suprir o balanço de purinas em Schistosoma mansoni. Este trabalho apresenta o isolamento, clonagem, expressão heteróloga e purificação da APRT de S. mansoni a fim de caracterizá-la quanto seus parâmetros físico-químicos. Não se obtendo cristais de proteína, foram elaborados modelos tridimensionais por homologia para estudos de dinâmica molecular e avaliação conformacional via tCONCOORD. A estrutura de APRT humana foi usada como controle nas simulações. Os dados computacionais e de biologia molecular foram comparados entre si para validação mútua e, verificou-se que a análise cuidadosa de dados computacionais é capaz de fornecer informações críticas sobre a APRT, auxiliando e guiando os estudos experimentais. Ainda, as simulações de dinâmica molecular foram capazes de evidenciar a abertura de loops do sítio ativo, explicitar a importância da análise de rotâmeros em modelos, permitindo, então, rearranjar da forma correta resíduos erroneamente modelados. Por fim, um estudo envolvendo mecanismo catalítico sugere a participação de uma molécula de água abstraindo o próton ligado ao N9 da adenina e, para efeito de comparação, um mecanismo alternativo independente desta participação também foi descrito. Ambas as observações expandem a corrente visão sobre o mecanismo catalítico de APRTs. / The Adenine Phoshoribosyltransferase (APRT E.C.2.4.2.7) belongs to the Phosphoribosyltransferase enzyme family (PRTase) of type I which catalyzes the reversible conversion of adenine and 5-phospho-α-D-ribose-1-diphosphate (PRPP) in diphosphate and adenosine monophosphate, an important source of this compound for the cell. APRT is involved in the purine salvage pathway, the only way that Schistosoma mansoni has to supply its purine demands. This work shows the isolation, cloning, heterologous expression and the purification of APRT from S. mansoni in order to establish its physical chemical and kinetics parameters. Since crystallographic structure was not obtained, we built homology models to perform molecular dynamics experiments and conformational evaluation via tCONCOORD. The human APRT structure was used as control in the simulation experiments. The computational and molecular biology data were compared for consistency and the detailed analysis of the former allowed us to improve experimental manipulation of APRT. The molecular dynamics experiments showed the opening of the loops of the catalytic binding site and the key function of rotamers. Finally, we were able to suggest that a water molecule may catch the proton of adenine N9. Both observations improve the current view of APRT catalytic mechanism.
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Perfil clínico e epidemiológico dos portadores de mielorradiculopatia esquistossomótica atendidos em uma unidade de saúde de Pernambuco / Clinical and epidemiological profile of persons with Schistosomiasis Mielorradiculopathy treated in a unit of Health of PernambucoSilva, Cristiana Machado da Rosa e January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / A esquistossomose mansônica (EM) ainda representa um dos maiores e mais graves problemas de saúde pública no Brasil. A população acometida geralmente reside em áreas endêmicas e enfrenta problemas relacionados a precárias condições de higiene e de recursos sanitários. A parasitose encontra-se em processo de urbanização, passando a envolver cada vez mais os centros urbanos e áreas litorâneas. Pernambuco é considerado um dos Estados de maior prevalência da doença no Nordeste e grande parte de seus municípios localizam-se em áreas endêmicas. Hoje, a mielorradiculopatia esquistossomótica (MRE) é considerada uma das formas ectópicas mais graves da infecção pelo S. mansoni, sendo bastante freqüente entre as mielopatias não traumáticas. Diante da subnotificação do número de casos, do aumento dos relatos da neuroparasitose e da carência de estudos sistemáticos, o estudo propõe-se a descrever e caracterizar as manifestações clínicas e questões epidemiológicas do grupo populacional com MRE atendido em uma unidade de saúde no Estado de Pernambuco, no período de 2002 a 2006. Foram avaliados 6277 prontuários, dos quais 82 (18 por cento) eram de casos de MRE, com faixa etária compreendida entre 14 a 75 anos, sendo predominantemente oriundos da região metropolitana de Recife, não mais restritos a regiões consideradas endêmicas. Os resultados mais importantes encontrados foram: sexo masculino (63,4 por cento), contato com coleção hídrica (92 por cento), nível da lesão torácica (51,2 por cento), forma mielorradicular (80 por cento), parasitológico de fezes (32,6 por cento), terapêutica específica associada à corticoterapia (55 por cento) / As manifestações clínicas mais freqüentes foram: fraqueza muscular (100 por cento), dificuldade para deambular (52 por cento), hipo ou arreflexia aquiliana (56 por cento) e patelar (57,3 por cento). Espera-se que os resultados apresentados colaborem para um maior reconhecimento da parasitose. A pesquisa aponta para a necessidade de se estabelecer uma padronização propedêutica a fim de se considerar a EM como etiologia provável das mielorradiculopatias, independente do município de procedência, favorecendo o prognóstico e evitando a subnotificação da MRE. Recomenda-se a realização de novos estudos que levem ao conhecimento da prevalência da MRE em Pernambuco
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Estudo parasitológico e histopatológico da infecção esquistossomótica em animais adultos cujas mães foram desnutridas na lactação / Parasitological and histopathological study of schistosome infection in adult animals whose mothers were malnoutrished during lactationChristiane Leal Corrêa 14 December 2009 (has links)
Estudos mostram uma grande associação entre alterações nutricionais, hormonais ou ambientais durante períodos críticos da vida, como a gestação e lactação, e o surgimento de doenças crônicas na vida adulta tais como obesidade, diabetes e doenças cardiovasculares, decorrentes de alterações fisio-adaptativas do organismo. Esse fenômeno biológico é denominado programação metabólica. No presente trabalho, avaliamos a resposta parasitológica e histopatológica, durante a fase aguda da infecção, em camundongos adultos infectados com Schistosoma mansoni no modelo de programação pela desnutrição materna na lactação. Ao nascimento da ninhada, as lactantes foram divididas em: (C) controle - livre acesso a ração normal com 23% de proteína; (RP) restrição protéica - livre acesso a dieta com 8% de proteína; (RC) restrição calórica - acesso restrito à ração controle, cuja quantidade foi calculada de acordo com a ingestão do grupo RP. A restrição alimentar foi mantida até o final da lactação. Pós-desmame, todos os filhotes tiveram livre acesso à ração. A infecção das proles de 60 dias de idade foi por via transcutânea com 50 cercárias (cepa BH). O sacrifício ocorreu após 9 semanas de infecção (120 dias de vida). Avaliamos ingestão alimentar, peso e composição corporais, massa tecidual, hormônios séricos, além de morfometria, concentração de colágeno e a resposta inflamatória celular dos granulomas hepáticos. Nos vermes adultos recuperados avaliamos a infectividade e a morfologia do sistema reprodutor e tegumento. No estudo parasitológico foi avaliado o número de ovos eliminados nas fezes e o percentual de estágios evolutivos (oograma). A desnutrição materna pós-natal programou a prole RP para menor ganho de peso e hipofagia e a prole RC para sobrepeso e hiperfagia. O período pré-patente foi mais longo (45 dias) em ambas as proles programadas. Aos 55 dias de infecção com S mansoni, o grupo RP apresentou maior número de ovos nas fezes. Este grupo apresentou maior número de ovos totais nas porções intestinais e fezes, assim como aumento de ovos em todos os estágios evolutivos. Observamos que os vermes machos e fêmeas obtidos das proles RC e RP apresentaram alterações no sistema reprodutor e na estrutura do tegumento. O grupo RP infectado apresentou maior grau de lesão hepática provocada pelo número aumentado de áreas alteradas pelo estágio pré-granulomatoso classificado por exsudativo, menor capacidade de produção de colágeno e maior manifestação inflamatória, caracterizando uma deficiência na modulação do processo inflamatório. Já o grupo RC mostrou menor número de granulomas hepáticos, maior produção de colágeno e vários hepatócitos binucleados, portanto, apresentando melhores condições para modular a resposta inflamatória e melhor capacidade de regeneração hepática diante da presença de lesão, apresentando uma relação parasito-hospedeiro mais equilibrada. O conjunto dos nossos achados sugere que a desnutrição neonatal programou o estado metabólico do hospedeiro repercutindo na evolução da esquistossomose, onde o grupo RC apresentou maior habilidade na modulação da resposta inflamatória e o grupo RP exibiu fragilidades nesta complexa, mas fascinante, relação parasito-hospedeiro. Assim, a programação pela desnutrição materna na lactação afeta a evolução da esquistossomose murina experimental. / Studies have shown a strong association between nutritional, hormonal or environmental changes during critical periods of life, as pregnancy and lactation, and chronic diseases in adult life such as obesity, diabetes and cardiovascular disease, due to body physiological adaptive changes. This biological phenomenon is called metabolic programming. In the present study, we evaluated parasitological behavior and histopathological response during the acute phase of infection in adult mice infected with Schistosoma mansoni in the programming model by maternal malnutrition during lactation. At birth, mothers were divided into: (C) control - free access to normal diet with 23% protein, (PR) protein restriction - free access to diet with 8% protein, (CR) caloric restriction - restricted access to C diet, the amount was calculated according to the PR group intake. Malnutrition was maintained until the end of lactation. Post-weaning, all pups had free access to food. At 60 days-old, offspring was infected percutaneous with 50 cercariae (BH strain). Offspring were killed after 9 weeks of infection (120 days). We evaluated food intake, body weight and body composition, tissue mass, serum hormones, and morphometry, collagen concentration and cellular inflammatory response of the liver granulomas. In adult worms recovered, we analysed infectivity and the morphology of the reproductive system and tegument. The parasitological parameters were assayed by the number of eggs in the stool and the percent of evolutive stages (oogram pattern). Postnatal maternal malnutrition programs PR offspring for lower weight gain and hypophagia and CR offspring for overweight and hyperphagia. The prepatent period was longer (45 days) in both programmed offspring. At 55 days of infection with S. mansoni, PR group had higher number of eggs in the feces. This group had higher number of eggs in feces and intestinal parts as well as higher eggs in all stages of development. We found that male and female worms obtained from the PR and CR offspring showed changes in the reproductive system and structure of the tegument. PR-infected group showed a higher degree of liver damage caused by the increased number of areas altered by the pre-granulomatous exudative sorted by lower capacity to produce more collagen and inflammatory manifestations, indicating a deficiency in the modulation of the inflammatory process. Since CR-infected group showed lower liver granulomas, increased production of collagen and several binucleate hepatocytes, thus providing better conditions to modulate the inflammatory response and increased power of liver regeneration in the presence of injury, presenting a host-parasite relationship more balanced. Taken together, our findings suggest that neonatal malnutrition programs the metabolic state of the host with the consequent evolution of schistosomiasis, where CR group showed higher ability in modulating the inflammatory response and the PR group exhibited weaknesses in this complex, but fascinating, host-parasite relationship. Thus, the programming by malnutrition during lactation affects the development of experimental murine schistosomiasis.
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Estudo parasitológico e histopatológico da infecção esquistossomótica em animais adultos cujas mães foram desnutridas na lactação / Parasitological and histopathological study of schistosome infection in adult animals whose mothers were malnoutrished during lactationChristiane Leal Corrêa 14 December 2009 (has links)
Estudos mostram uma grande associação entre alterações nutricionais, hormonais ou ambientais durante períodos críticos da vida, como a gestação e lactação, e o surgimento de doenças crônicas na vida adulta tais como obesidade, diabetes e doenças cardiovasculares, decorrentes de alterações fisio-adaptativas do organismo. Esse fenômeno biológico é denominado programação metabólica. No presente trabalho, avaliamos a resposta parasitológica e histopatológica, durante a fase aguda da infecção, em camundongos adultos infectados com Schistosoma mansoni no modelo de programação pela desnutrição materna na lactação. Ao nascimento da ninhada, as lactantes foram divididas em: (C) controle - livre acesso a ração normal com 23% de proteína; (RP) restrição protéica - livre acesso a dieta com 8% de proteína; (RC) restrição calórica - acesso restrito à ração controle, cuja quantidade foi calculada de acordo com a ingestão do grupo RP. A restrição alimentar foi mantida até o final da lactação. Pós-desmame, todos os filhotes tiveram livre acesso à ração. A infecção das proles de 60 dias de idade foi por via transcutânea com 50 cercárias (cepa BH). O sacrifício ocorreu após 9 semanas de infecção (120 dias de vida). Avaliamos ingestão alimentar, peso e composição corporais, massa tecidual, hormônios séricos, além de morfometria, concentração de colágeno e a resposta inflamatória celular dos granulomas hepáticos. Nos vermes adultos recuperados avaliamos a infectividade e a morfologia do sistema reprodutor e tegumento. No estudo parasitológico foi avaliado o número de ovos eliminados nas fezes e o percentual de estágios evolutivos (oograma). A desnutrição materna pós-natal programou a prole RP para menor ganho de peso e hipofagia e a prole RC para sobrepeso e hiperfagia. O período pré-patente foi mais longo (45 dias) em ambas as proles programadas. Aos 55 dias de infecção com S mansoni, o grupo RP apresentou maior número de ovos nas fezes. Este grupo apresentou maior número de ovos totais nas porções intestinais e fezes, assim como aumento de ovos em todos os estágios evolutivos. Observamos que os vermes machos e fêmeas obtidos das proles RC e RP apresentaram alterações no sistema reprodutor e na estrutura do tegumento. O grupo RP infectado apresentou maior grau de lesão hepática provocada pelo número aumentado de áreas alteradas pelo estágio pré-granulomatoso classificado por exsudativo, menor capacidade de produção de colágeno e maior manifestação inflamatória, caracterizando uma deficiência na modulação do processo inflamatório. Já o grupo RC mostrou menor número de granulomas hepáticos, maior produção de colágeno e vários hepatócitos binucleados, portanto, apresentando melhores condições para modular a resposta inflamatória e melhor capacidade de regeneração hepática diante da presença de lesão, apresentando uma relação parasito-hospedeiro mais equilibrada. O conjunto dos nossos achados sugere que a desnutrição neonatal programou o estado metabólico do hospedeiro repercutindo na evolução da esquistossomose, onde o grupo RC apresentou maior habilidade na modulação da resposta inflamatória e o grupo RP exibiu fragilidades nesta complexa, mas fascinante, relação parasito-hospedeiro. Assim, a programação pela desnutrição materna na lactação afeta a evolução da esquistossomose murina experimental. / Studies have shown a strong association between nutritional, hormonal or environmental changes during critical periods of life, as pregnancy and lactation, and chronic diseases in adult life such as obesity, diabetes and cardiovascular disease, due to body physiological adaptive changes. This biological phenomenon is called metabolic programming. In the present study, we evaluated parasitological behavior and histopathological response during the acute phase of infection in adult mice infected with Schistosoma mansoni in the programming model by maternal malnutrition during lactation. At birth, mothers were divided into: (C) control - free access to normal diet with 23% protein, (PR) protein restriction - free access to diet with 8% protein, (CR) caloric restriction - restricted access to C diet, the amount was calculated according to the PR group intake. Malnutrition was maintained until the end of lactation. Post-weaning, all pups had free access to food. At 60 days-old, offspring was infected percutaneous with 50 cercariae (BH strain). Offspring were killed after 9 weeks of infection (120 days). We evaluated food intake, body weight and body composition, tissue mass, serum hormones, and morphometry, collagen concentration and cellular inflammatory response of the liver granulomas. In adult worms recovered, we analysed infectivity and the morphology of the reproductive system and tegument. The parasitological parameters were assayed by the number of eggs in the stool and the percent of evolutive stages (oogram pattern). Postnatal maternal malnutrition programs PR offspring for lower weight gain and hypophagia and CR offspring for overweight and hyperphagia. The prepatent period was longer (45 days) in both programmed offspring. At 55 days of infection with S. mansoni, PR group had higher number of eggs in the feces. This group had higher number of eggs in feces and intestinal parts as well as higher eggs in all stages of development. We found that male and female worms obtained from the PR and CR offspring showed changes in the reproductive system and structure of the tegument. PR-infected group showed a higher degree of liver damage caused by the increased number of areas altered by the pre-granulomatous exudative sorted by lower capacity to produce more collagen and inflammatory manifestations, indicating a deficiency in the modulation of the inflammatory process. Since CR-infected group showed lower liver granulomas, increased production of collagen and several binucleate hepatocytes, thus providing better conditions to modulate the inflammatory response and increased power of liver regeneration in the presence of injury, presenting a host-parasite relationship more balanced. Taken together, our findings suggest that neonatal malnutrition programs the metabolic state of the host with the consequent evolution of schistosomiasis, where CR group showed higher ability in modulating the inflammatory response and the PR group exhibited weaknesses in this complex, but fascinating, host-parasite relationship. Thus, the programming by malnutrition during lactation affects the development of experimental murine schistosomiasis.
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Caracterização estrutural da Uridina Fosforilase de Schistosoma mansoni / Structural characterization of Uridine Phosphorylase from Schistosoma mansoniAntonio Marinho da Silva Neto 16 August 2013 (has links)
A esquistossomose humana, doença causada pelo S. mansoni e com 6 milhões de infectados somente no Brasil, possui uma única estratégia terapêutica eficiente atualmente disponível. Esta se baseia na utilização de praziquantel e relatos de cepas resistentes à essa droga tem despertado o interesse da comunidade científica sobre o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Uma melhor caracterização dos processos metabólicos do parasita podem auxiliar nestas buscas. Diante desse contexto, nosso grupo tem trabalhado na caracterização estrutural e funcional das enzimas que compõem a via de salvação de purinas e pirimidinas deste parasita, com dez enzimas já caracterizadas. Uma das enzimas remanescentes é a uridina fosforilase (UP) (EC 2.4.2.3), cujo a qual o genoma do parasita apresenta duas isoformas, a smUPa e smUPb (92% de identidade entre elas). Com o objetivo de caracterizar estruturalmente estas enzimas, ambas foram obtidas via expressão heteróloga, purificadas e submetidas a ensaios de cristalização e co-cristalização (para obtenção das estruturas interagindo com diferentes ligantes). Após coleta de dados de difração de raio-x, processamento e refinamento adequado foram obtidas seis estruturas da smUPa (smUPaapo, smUPa+Timidina, smUPa+timina, smUPa+uracil, smUPa-5fluorouracil) e duas da smUPb (smUPbapo e smUPb+citrato). A análise das estruturas revela que as duas isoformas apresentam essencialmente a mesma estrutura, no entanto, apesar das poucas divergências em nível de sequência de aminoácidos, existem diferenças significativas entre os sítios ativos. A smUPa apresenta o sítio com as mesmas características de UPs conhecidas, em contrapartida a smUPb apresenta duas mudanças significativas que elimina a capacidade de interagir com a base nitrogenada (Q201L) e a cavidade que acomoda a base nitrogenada (G126D), o que torna as smUPs um caso único de isoformas de UP em um mesmo organismo conhecidas. É plausível que a smUPb não seja capaz de catalisar a fosforólise reversível da uridina, sendo ou um pseudogene ou alguma outra enzima com atividade catalítica diferente da UP. Para a completa caracterização destas enzimas, testes de atividade enzimática serão realizados e deverão auxiliar a determinar a real função da smUPb. / Human schistosomiasis, a disease caused by Schistosoma sp., is estimated to affect six million individuals in Brazil alone and there is currently only one therapeutic strategy available. This is based on the use of praziquantel and reports of the appearance of strains resistant to the drug has motivated the scientific community towards the search for new possible therapies. Biochemical characterization of the parasites metabolism is essential for the rational development of new therapeutic alternatives. Based on this,reasoning our group has been working on the structural and functional characterization of the enzymes involved in the pyrimidine and purine salvage pathways of S. mansoni. One of the remaining enzymes to be characterized is uridine phosphorylase (UP) (EC 2.4.2.3), for which there are two isoforms present in the parasite genome, smUPa and smUPb, which share 92% sequence identity. In order to structurally characterize these enzymes, both smUPs were produced by heterologous expression, purified and submitted to crystallization e co-crystallization assays, in the latter case in order to obtain the structure of different enzyme-ligand complexes. After data collection, processing and refinement, five structures of smUPa (smUPaapo, smUPa+Timidina, smUPa+timina, smUPa+uracil and smUPa+5fluorouracil) and two structures of smUPb (smUPbapo and smUPb+citrato) were obtained. Analysis of the structures revealed that the isoforms have the same fold, but despite the high sequence identity, significant differences are observed at the active site probably profoundly affecting enzyme activity. Whilst SmUPa presents an active site similar to that of other known UPs, smUPb is predicted to lack the ability to interact with the nucleoside base due to the presence of a leucine in place of a glutamine at position 201 and an aspartatic acid in place of glycine at position 126. These differences turn the smUPs into a unique case of UP isoforms. It is plausible that smUPb is unable to catalyze the reversible phosphorolysis of uridine and could be either a pseudogene or a different enzyme altogether of unknown catalytic activity. A complete functional characterization in vitro will be necessary in order to determine its real function.
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Efeito da amamentação e gestação em camundongos sensibilizados com antígeno solúvel do verme de Schistosoma mansoni (SWAP), na resposta imune dos descendentes adultosSILVA, Maria da Conceição 29 February 2016 (has links)
Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T13:48:12Z
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Previous issue date: 2016-02-29 / CNPq / Descendentes adultos de mães esquistossomóticas demonstraram alteração da imunidade para antígenos homológos e heterólogos, devido á gestação ou amamentação nestas mães. A gestação em descendentes, sob infecção pós-natal concomitantemente imunizados com OA(ovalbumina)+adjuvante, demonstrou maior número de granulomas e alta deposição de colágeno enquanto que a amamentação diminuiu o tamanho. Para o antígeno heterólogo, ambas a gestação e a amamentação levaram à imunossupressão anti-OA. Contudo, sabe-se pouco sobre os efeitos da sensibilização materna com antígenos parasitários do verme do S. mansoni (SWAP). Aqui, as mães foram sensibilizadas com SWAP e foi avaliada a imunidade em descendentes nascidos e/ou amamentados. Para isto, descendentes adultos foram divididos em: animais nascidos de mães sensibilizadas e amamentados em mães não-sensibilizadas (MI), animais nascidos em mães não-sensibilizadas e amamentados em mães sensibilizadas (AI) ou nascidos e/amamentados (MIAI) em mães sensibilizadas e mães não-sensibilizadas (Controle). Estes descendentes foram infectados (80 cercárias de S. mansoni) e uma parte foi imunizada com OA+adjuvante. Realizou-se a dupla marcação para linfócitos T e coestimulatórias (CD4 e CD28, CD154 ou CTLA-4) e macrófagos (CD14 e CD40) em esplenócitos, sob estimulação com OA ou mitógeno (ConA). Foi realizada a dosagem das citocinas (IL-4, IL-10, IL-5 e IFN-γ), e anticorpos IgG1 e IgG2a anti-SWAP e antiOA, bem como a histomorfometria do granuloma hepático. Em relação ao Controle, os grupos AI e MIAI, sob infecção pós-natal apresentaram menor grau de fibrose e não houve diferença no grupo MI. Houve maior produção de IL-10 nos grupos MIAI, AI e MI, com diminuição de IL-5 e maior frequência de células CD14+CD40+ no primeiro e menor produção de IFN- e maior frequência de células CD4+CD28+ no segundo. No grupo MI, houve maior frequência basal de células CD4+CD28+ e CD14+CD40+, porém estiveram diminuídas em resposta ao mitógeno. Houve maior produção de isótipo IgG2a anti-SWAP em todos os grupos experimentais e de IgG1 anti-SWAP apenas no grupo AI.Para a imunidade anti-OA, no grupo MIAI, houve maior frequência de células CD14+/CD40, menor produção de IL-5 sem diferença na produção de anticorpos anti-OA. Amamentação induziu maior frequência de células CD4+/CD28, CD4+/CTLA-4, CD14+/CD40, maiores níveis de IL-4 e menos IFN-γ basal e em resposta à OA e maior produção de IgG1 anti-OA. A gestação induziu maior frequência basal de células CD14+/CD40+ e menor frequência em resposta à OA e ConA, maiores níveis de IL-4, em resposta à OA, sem diferença para IFN-γ. Em resposta ao mitógeno, menos células CD4+CD28+, alta frequência de células CD40/CD154, e altos níveis de IL-10. Assim, a amamentação, e não a gestação, em mães sensibilizadas com SWAP, seguida de infecção pós-natal ameniza a inflamação granulomatosa. Para o antígeno heterólogo, ambos gestação e amamentação desviam a resposta para Th2, porém a amamentação melhora os status de ativação de linfócitos e macrófagos, acompanhada de melhor resposta de anticorpos anti-OA. / Descendants adult schistosome mothers had alterations of immunity to homologous and heterologous antigens due to pregnancy or breastfeeding these mothers. The pregnancy in offspring in postnatal infection concomitantly immunized with OA (ovalbumin) + adjuvant, demonstrated great number of granulomas and high deposition of collagen, while suckled decreased size. For the heterologous antigen, both pregnancy and breastfeeding led to anti-OA immunosuppression. However, little is known about the effects of maternal sensitization with worm parasite antigens of S. mansoni (SWAP). Here, mothers were sensitized with SWAP and immunity was evaluated in born and / or breastfed offspring. For this, adult descendants were divided into animals born sensitized mothers and breastfed in non-sensitized mothers (BIM), animals born in nonsensitized and breastfeeding mothers sensitized mothers (SIM) or born and / breastfed (BSIM) in mothers sensitized mothers and non-sensitized (CONTROL). These offspring were infected (80 cercariae of S. mansoni) and a part was immunized with adjuvant + OA. Was performed for double labeling T lymphocytes and co-stimulatory (CD4 and CD28 or CTLA-4 CD154) and macrophages (CD14 and CD40) in splenocytes, OA or upon stimulation with mitogen (ConA). the dosage of cytokines was performed (IL-4, IL-10, IL-5 and IFN-γ) and IgG1 and IgG2a anti-SWAP and anti-OA and histomorphometry of hepatic granuloma. In relation to control, SIM and BSIM groups under postnatal infection had lower degree of fibrosis and no difference in BIM group. There was a greater IL-10 production in BSIM groups, SIM and BIM, with decreased IL-5 and increased frequency of CD14+ CD40+ in the first and lowest IFN-γ and increased frequency of CD4+ CD28+ in the second. In the BIM group had higher baseline frequency of CD4+CD28+ and CD14+CD40+ cells, but were reduced in response to mitogen. There was a higher production of isotype IgG2a anti-SWAP in all experimental groups and anti-IgG1 SWAP only in the SIM group. For the anti-OA immunity in BSIM group had a greater frequency of CD14+/ CD40 cells, decreased production of IL-5 with no difference in the production of anti-OA antibodies. Breastfeeding induced higher frequency of CD4+/CD28+ CD4+/CTLA-4+, CD14+/ CD40+ increased IL-4 levels under basal and IFN-γ and in response to OA and increased production of anti-OA IgG1. Pregnancy induced basal frequency of CD14+/ CD40+ and lower frequency in response to OA and Con-A, increased IL-4 levels in response to OA was no difference for IFN-γ. In response to mitogen less CD4+ CD28+ cells, CD40 high-frequency cells CD154, and high IL-10 levels. Thus, breastfeeding, and not pregnancy in mothers sensitized with SWAP, followed by postnatal alleviates granulomatous inflammation infection. For the heterologous antigen, both pregnancy and breastfeeding divert the response towards Th2, but breastfeeding enhances activation status of lymphocytes and macrophages, together with better anti-OA antibody response.
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Avaliação do efeito do praziquantel associado a lipossomas em Schistosoma mansoni in vivo / Evaluation of the praziquantel in liposome effect in Schistosoma mansoni in vivoFrezza, Tarsila Ferraz, 1983- 27 July 2007 (has links)
Orientador: Silmara Marques Allegretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T03:19:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2007 / Resumo: Para o tratamento da esquistossomose mansônica no Brasil, a Oxamniquina (OXA) e o Praziquantel (PRZ) são os fármacos escolhidos. O primeiro tem sua produção reduzida por causa dos efeitos colaterais, carcinogênicos e mutagênicos que apresenta. O segundo tem amplo espectro de atuação e baixa toxicidade, quando comparado ao OXA, mas tem a desvantagem de ser eliminado rapidamente pelo organismo. Além disso, tem ação dependente da idade do parasito e seu uso extensivo culmina na resistência do Schistosoma mansoni ao fármaco. Assim, o estudo de novas alternativas que tornem o PRZ mais disponível no organismo, com taxa de liberação mais adequada, é necessário. Uma dessas alternativas é sua incorporação ao lipossoma (LPZ). O presente trabalho teve por objetivo analisar o efeito do PRZ incorporado a LPZ (PRZ+LPZ) pela sua ação na sobrevida dos vermes adultos de S. mansoni, linhagem BH, e alteração na postura dos ovos além da sua ação na formação de granulomas no fígado. Foram testadas cinco doses de PRZ livre e PRZ+LPZ (40; 47; 60; 250 e 300 mg/kg) em camundongos Swiss, administradas por meio da tubagem esofágica, em dose única. Os lipossomas de fosfatidilcolina foram preparados pelo método da sonicação. Os camundongos foram divididos em dois grandes grupos (um deles foi tratado após 30 dias de infecção e o outro após 45 dias) sendo que em cada grupo, dez animais receberam uma determinada dose de PRZ a ser testada, para os outros dez a mesma dose, dessa vez com o PRZ+LPZ e para os dez restantes, Tampão Tris HCl pH 7,5. Após 15 dias da administração do tratamento, os animais foram sacrificados e necrospsiados. O tratamento feito com PRZ+LPZ na dose de 300 mg/kg, administrado no 45º dia de infecção, mostrou-se mais eficaz para a maioria dos parâmetros analisados (maior quantidade de vermes fora do sistema porta-hepático ¿ indicando uma resposta do verme à ação do fármaco - maior redução no número de vermes e de ovos nas fezes e maior redução dos ovos viáveis no intestino ¿ principalmente dos imaturos). Provavelmente, este tratamento alterou a oviposição do verme. Os órgãos dos camundongos tratados com PRZ+LPZ na dose 300 mg/kg, administrado no 30º dia de infecção, apresentaram poucas lesões. Além disso, não apresentaram granulomas nos fígados observados histologicamente, o que pode ser explicado pela baixa oviposição que ocorre nesse período, com o fato deste tratamento talvez ter a capacidade de minimizar a formação dos granulomas. O tratamento feito com PRZ+LPZ foi superior provavelmente porque aumentou a disponibilidade do fármaco no organismo assim como a sua solubilidade em meios aquosos. Além disso, o fármaco, quando incorporado, provavelmente foi absorvido com mais facilidade pelo verme, fazendo com que os danos provocados pelo PRZ no parasito, fossem mais profundos / Abstract: For the treatment of schistosomiasis mansoni in Brazil, the drugs of choice are Oxamniquina (OXA) and the Praziquantel (PRZ). OXA has its production reduced by its collateral, carcinogenic and mutagenic effects that it presents. PRZ has wide action spectrum and low toxicity, when compared to OXA. However, it has the disadvantage of being eliminated very fast by the organism. Besides, it has its action depending on the age of the parasite and its extensive use leads to a resistance of the Schistosoma mansoni to the drug. It¿s necessary the research of new alternatives to make PRZ more available in the organism, with more adequate liberation rate. One of these alternatives is its incorporation to the liposome (LPZ). The current work had as a target to analyze the effect of the PRZ incorporated to LPZ (PRZ+LPZ) by its action in the survival of adult worms of Schistosoma mansoni, BH strain, and alteration in the laying of eggs beyond its action in the formation of granulomas in the liver. Five doses were tested of PRZ e PRZ+LPZ (40; 47; 60; 250 and 300 mg/kg) in Swiss mice, administered by the intragastric route in only one dose. The liposomes of phosphatidilcoline were prepared by the method of sonication. The mice were divided in two big groups (one of them was treated after 30 days of infection and the other group treated after 45 days) and in each group ten animals received a determined dose of PRZ to be tested, to the other ten the same dose, this time with PRZ+LPZ and to the last ten, Busser Tris HCl pH 7,5. After 15 days of the administration of the treatment, the animals were sacrificed and necropsies. The treatment done with PRZ+LPZ in the dose of 300 mg/kg, administered of the 45th day of the infection, showed itself superior to the majority of the analyzed parameters (higher quantity of worms outside the porta-hepatic system ¿which indicates a response of the worm to the action of the drug -, big reduction in the number of worms and eggs in the fezzes and big reduction of the viable eggs in the intestines ¿ mainly of immature eggs). Probably this treatment altered the oviposition of the worm. The organs of mice treated with PRZ+LPZ in dose of 300 mg/kg, administered in the 30est day of infection, presented fewer injuries. Besides, they don¿t show granulomas in the livers observed histological, which can be explained by the low oviposition that occurs in this period, with the fact that this treatment perhaps having the capacity of minimize the formation of granulomas. The treatment done with PRZ+LPZ was superior probably because the availability increased of the drug in the organism as well its solubility in water environment. Besides, the drug, when incorporated, probably was more easily absorbed by the worm, making the harm provoqued by PRZ deeper / Mestrado / Mestre em Parasitologia
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