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Patogenicidade de fungos associados à sementes de andropogon e caracterização morfológica e molecular de Curvularia lunata

Santos, Patrícia Resplandes Rocha dos 20 December 2016 (has links)
O Andropogon L. é uma gramínea forrageira, amplamente distribuída em áreas de Cerrado e com períodos de seca prolongada. Apresenta características de ser denso com grandes touceiras e com inflorescência plumosa, tendo uma elevada capacidade na disseminação de suas sementes. Por sua vez, as sementes são consideradas principais fontes de abrigo e transporte de agentes patogênicos para áreas livres de doenças. No Tocantins, não há registros de trabalhos que relacionem a incidência de fungos em sementes de Andropogon como causadores de doenças em culturas de importância agrícola. Da mesma forma, não há pesquisas sobre o transporte, transmissibilidade e patogenicidade de fungos associados à suas sementes. O trabalho objetivou avaliar a qualidade sanitária de sementes do Andropogon, a transmissão de fungos via semente-plântula e a patogenicidade à plantas de outras espécies de importância agrícola, e também realizar a caracterização morfológica e molecular de Curvularia sp. isolados de sementes de Andropogon. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Pesquisa em Fitopatologia, Laboratório de Controle Biológico de Doenças e Casa de Vegetação da Universidade Federal do Tocantins. No capítulo 1, utilizou-se o método blotter test para a avaliação da sanidade das sementes com e sem desinfestação. A incidência dos fungos foi avaliada a partir da análise individual das sementes com auxílio de microscópio estereoscópico e ótico. A germinação das sementes foi avaliada após 10 dias de instalação do teste, juntamente com a identificação de fungos associados às sementes não germinadas. Para os fungos detectados na análise sanitária avaliou-se a capacidade de transmissão via semente-plântula. A patogenicidade dos fungos oriundos das sementes de Andropogon foi avaliada por meio da inoculação na própria planta e também foi avaliada a capacidade destes fungos em infectar outras plantas de interesse econômico. No capítulo 2, a identificação morfológica foi realizada a partir de observações macro e micromorfológicas utilizando-se como base as características descritas na literatura quanto ao aspecto da colônia e conídios de Curvularia sp. A caracterização molecular foi realizada a partir da extração do DNA, amplificação e sequenciamento da região do gene Clg2p. A transmissão foi avaliada a partir da semeadura de sementes sem tratamento com fungicidas, onde ao final de 40 dias observou-se sintomas típicos de mancha foliar de Curvularia. A patogenicidade foi avaliada a partir da inoculação de suspensão de conídios de Curvularia sp. nas folhas de plantas sadias, observando ao final de 10 dias, se houve sintomas do patógeno. Foram identificados e quantificados nas sementes de Andropogon L. fungos dos gêneros Alternaria sp., Bipolaris sp., Curvularia sp., Fusarium sp., Phoma sp., Aspergillus sp., Cladosporium sp., Penicillium sp. e Rhizopus sp. A realização da desinfestação das sementes reduziu os fungos presentes nas sementes. O fungo Curvularia sp. foi transmitido das sementes para as plantas de Andropogon. As sementes de Andropogon L. transportaram e disseminaram fungos que uma vez inoculados causaram infecção na própria planta e em outras culturas de importância econômica, tais como: arroz, feijão-caupi, melancia, melão, milho, sorgo e aos capins marandu, mombaça, piatã e quicuia. Baseado em marcadores morfológicos e moleculares, o fungo identificado com elevada incidência associado às sementes de Andropogon coletadas em diferentes regiões produtoras agrícolas, trata-se de Curvularia lunata. C. lunata é transmitido para as plantas de Andropogon via semente, sendo patogênico a esta espécie de gramínea forrageira, causando manchas necróticas foliares. / Andropogon L. is a forage grass, widely distributed in Cerrado areas and with prolonged drought periods. It presents dense characteristics with large clumps and with plumose inflorescence, with high capacity in the seeds dissemination. In turn, seeds are considered the main sources of shelter and transport of pathogens to disease-free areas. In Tocantins, there are no studies records relate the fungi incidence in Andropogon grass seeds as diseases cause in agricultural importance crops. Likewise, there is no research about the transport, transmissibility and pathogenicity of fungi associated with their seeds. The work aim was evaluate the sanitary quality of Andropogon grass seeds, the fungi transmission by seed-seedlings and the fungis pathogenicity to other species plants of agricultural importance, and also perform the Curvularia sp. morphological and molecular characterization, isolated from Andropogon grass seeds. The experiments were conducted at the Phytopathology Research Laboratory, Biologic Control of Disease Laboratory and green house of Tocantins Federal University. In chapter 1, the blotter test method was used to evaluate seed health with and without disinfestation. The fungi incidence was evaluated from seeds individual analysis using stereoscopic and optical microscope. The seeds germination was evaluated after 10 days after test installation, together with the fungi identification associated with non-germinated seeds. For the detected fungus in the sanitary analysis was evaluated the transmission capacity of seed-seedling. The fungi pathogenicity from the Andropogon seeds grass was evaluated by inoculation in the plant itself and was also evaluated the ability of these fungi to infect other plants of economic interest. In chapter 2, the morphological identification was performed from macro and micromorphological observations using as basis the characteristics described in literature regarding the aspect of the colony and conidia of Curvularia sp. Molecular characterization was performed from DNA extraction, amplification and sequencing gene Clg2p region. Transmission was evaluated from seed sowing whitout treatment with fungicides, where at the end of 40 days typical leaf spot symptoms of Curvularia. The pathogenicity was evaluated from the inoculation of conidia suspension on leaves of healthy plants, observing at the end 10 days, if there were symptoms of the pathogen. Were identified and quantified in the seeds of Andropogon L. fungi of the genera Alternaria sp., Bipolaris sp., Curvularia sp., Fusarium sp., Phoma sp., Aspergillus sp., Cladosporium sp., Penicillium sp. and Rhizopus sp. The seed disinfestation reduced the fungi present in the seeds. The fungus Curvularia sp. it was transmitted seed to Andropogon plant. Andropogon L. seeds carried and spread fungi the once inoculated caused infection in the plant itself and other economically important crops, such as rice, cowpea, watermelon, melon, corn, sorghum and grasses marandu, mombaça, piatã and quicuia. Based on morphological and molecular markers, the fungus identified with high incidence associated with Andropogon seeds collected in different agricultural producing regions, is Curvularia lunata. C. lunata is transmitted to plants of Andropogon by seed, being pathogenic to this species of forage grass, causing foliar necrotic spots.
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Análise da incidência de Fusarium spp. toxigênico e de níveis de fumonisinas em grãos ardidos de milho híbrido / Incidence of toxigenic Fusarium spp. and levels of fumonisins in hybrid maize rot grains

Ottoni, Júlia Ronzella 28 January 2009 (has links)
O milho (Zea mays) é um cereal amplamente cultivado no Brasil e no mundo. Sua produtividade pode ser afetada por diversos fatores incluindo a colonização fúngica. Em Fitopatologia, grãos afetados por fungos são denominados grãos ardidos e os gêneros mais encontrados em milho são Stenocarpella e Fusarium. Espécies de Fusarium podem causar podridões nas espigas e também podem produzir fumonisinas, toxina esta tóxica para animais e humanos e associadas ao desenvolvimento de diversas doenças. O presente trabalho teve como objetivo analisar a incidência de Fusarium ssp. com potencial toxigênico em amostras de grãos ardidos através da identificação da presença do gene fum5, responsável pela produção de fumonisinas pelo fungo, bem como quantificar os níveis de fumonisinas encontrados nessas amostras e comparação com os resultados obtidos de grãos assintomáticos. Um total de 100 amostras dos anos de 2006 e 2007 provenientes das principais regiões produtoras do Brasil foram submetidas à três análises. A primeira avaliou a incidência de Fusarium spp. nos grãos através do método do papel de filtro com congelamento e em 100% das amostras foi encontrado o fungo em níveis que variaram de 34 a 91%. A segunda análise utilizou a PCR para confirmação do gênero, identificação de espécies (F. verticillioides, F. proliferatum e F. subglutinans) e identificação da presença do gene fum5. A PCR confirmou 93% dos isolados como pertencentes ao gênero Fusarium. Os isolados negativos passaram por análise morfológica e todos foram confirmados. As PCRs para espécies identificaram 82% dos isolados como F. verticillioides, 3% como F. subglutinans e nenhum como F. proliferatum. A PCR para potencial toxigênico foi positiva para 81% dos isolados. A terceira análise consistiu na quantificação de fumonisinas (B1, B2 e B3 na proporção 5:3:1) através do método de ELISA e os níveis variaram de 4,4 a mais de 90 µg/g. Grãos assintomáticos da segunda safra de 2007 foram analisados separadamente para comparação. Em 100% das amostras houve incidência de Fusarium spp, variando de 74 a 87%. A PCR para confirmação do gênero foi positiva para 87% dos isolados e os demais passaram por análise morfológica e então confirmados. As PCRs para identificação de espécies mostrou 60% dos isolados como sendo F. verticillioides, 3% como F. subglutinans e nenhum como F. proliferatum. A maior concentração de fumonisinas nos grãos assintomáticos foi de 2,1 µg/g e em 53% das amostras não foram detectadas fumonisinas. Os resultados mostraram que há uma alta incidência de Fusarium spp. em grãos ardidos e assintomáticos. Grãos ardidos e assintomáticos têm Fusarium spp. com potencial toxigênico mas os níveis de fumonisinas encontrados nos grãos assintomáticos foram muito baixos em comparação com os encontrados nos grãos ardidos mostrando que, em condições adversas, esse fungo deixa de ser endofítico e passa a ser patogênico, podendo causar doenças na planta e produzir toxinas. Pelo fato das fumonisinas estarem concentradas nos grãos ardidos, a redução dessas toxinas da dieta deve ser baseada na eliminação dos mesmos através do controle do beneficiamento. / Maize is a cereal widely cultivated in Brazil and worldwide. Its productivity can be affected by numerous factors including fungal colonization. In pathological terms, affected grains by fungi are denominated rot grains and the two most prevalent genera found in maize are Stenocarpella and Fusarium. Species of Fusarium can cause rotting in the stalks and also produce fumonisins, which are toxic both for animals and humans since their occurrence is associated to many diseases. The present work aimed to analyse the incidence of Fusarium ssp. with toxigenic potential in rot grains samples through the identification of the presence of the gene fum5, responsible for the production of fumonisins, as well as to quantify the levels of fumonisins found in these samples and compare with the results obtained in asymptomatic grains. A total of 100 samples from the 2006 and 2007 harvests were collected from the main producing regions of Brazil and were submitted to three analyses. The first evaluated the incidence of Fusarium ssp. in the grains through the method of filter paper and freezing, which revealed incidences that varied from 34 to 91%. The second analysis used specific primers and PCR to confirm the genus and species (F. verticillioides, F. proliferatum and F. subglutinans) and to detect the presence of the fum5 gene. The results indicated that 93% of the isolates belonged to the genus Fusarium. The PCR - negative isolates were confirmed as Fusarium after morphological analysis. Eigthy two percent of the isolates were classified as F. verticillioides, 3% as F. subglutinans and none as F. proliferatum using speciesspecific PCR. The fum5 gene was detected in eighty one percent of the isolates. The third analysis consisted in the quantification of the fumonisins (B1, B2 e B3 in the proportion of 5:3:1) through the ELISA method and the levels varied from 4,4 to more than 90 µg/g. Asymptomatic grains from the second cropping season of 2007 were analyzed separately for comparison purposes. The incidence of Fusarium spp. in these varied from 74 to 87%. The PCR for confirmation of the genus was positive for 87% of the isolates. The PCRs for species identification showed 60% of the isolated as being F. verticillioides, 3% as F. subglutinans and none as F. proliferatum. The greater concentration of fumonisins in the asymptomatic grains was of 2,1 µg/g and in 53% of the samples fumonisins were not detected. Rot and asymptomatic grains presented Fusarium spp. with toxigenic potential but the levels of fumonisins found in the asymptomatic grains were much lower compared with rot grains, showing that, in adverse conditions, this fungus changes from endophytic to pathogenic, being able to parasitize the plant and to produce toxins. The fact that fumonisins levels are much higher in rot grains, a simple measure to reduce the levels of these toxins in the animal diet would be to eliminate them during processing.
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Análise da incidência de Fusarium spp. toxigênico e de níveis de fumonisinas em grãos ardidos de milho híbrido / Incidence of toxigenic Fusarium spp. and levels of fumonisins in hybrid maize rot grains

Júlia Ronzella Ottoni 28 January 2009 (has links)
O milho (Zea mays) é um cereal amplamente cultivado no Brasil e no mundo. Sua produtividade pode ser afetada por diversos fatores incluindo a colonização fúngica. Em Fitopatologia, grãos afetados por fungos são denominados grãos ardidos e os gêneros mais encontrados em milho são Stenocarpella e Fusarium. Espécies de Fusarium podem causar podridões nas espigas e também podem produzir fumonisinas, toxina esta tóxica para animais e humanos e associadas ao desenvolvimento de diversas doenças. O presente trabalho teve como objetivo analisar a incidência de Fusarium ssp. com potencial toxigênico em amostras de grãos ardidos através da identificação da presença do gene fum5, responsável pela produção de fumonisinas pelo fungo, bem como quantificar os níveis de fumonisinas encontrados nessas amostras e comparação com os resultados obtidos de grãos assintomáticos. Um total de 100 amostras dos anos de 2006 e 2007 provenientes das principais regiões produtoras do Brasil foram submetidas à três análises. A primeira avaliou a incidência de Fusarium spp. nos grãos através do método do papel de filtro com congelamento e em 100% das amostras foi encontrado o fungo em níveis que variaram de 34 a 91%. A segunda análise utilizou a PCR para confirmação do gênero, identificação de espécies (F. verticillioides, F. proliferatum e F. subglutinans) e identificação da presença do gene fum5. A PCR confirmou 93% dos isolados como pertencentes ao gênero Fusarium. Os isolados negativos passaram por análise morfológica e todos foram confirmados. As PCRs para espécies identificaram 82% dos isolados como F. verticillioides, 3% como F. subglutinans e nenhum como F. proliferatum. A PCR para potencial toxigênico foi positiva para 81% dos isolados. A terceira análise consistiu na quantificação de fumonisinas (B1, B2 e B3 na proporção 5:3:1) através do método de ELISA e os níveis variaram de 4,4 a mais de 90 µg/g. Grãos assintomáticos da segunda safra de 2007 foram analisados separadamente para comparação. Em 100% das amostras houve incidência de Fusarium spp, variando de 74 a 87%. A PCR para confirmação do gênero foi positiva para 87% dos isolados e os demais passaram por análise morfológica e então confirmados. As PCRs para identificação de espécies mostrou 60% dos isolados como sendo F. verticillioides, 3% como F. subglutinans e nenhum como F. proliferatum. A maior concentração de fumonisinas nos grãos assintomáticos foi de 2,1 µg/g e em 53% das amostras não foram detectadas fumonisinas. Os resultados mostraram que há uma alta incidência de Fusarium spp. em grãos ardidos e assintomáticos. Grãos ardidos e assintomáticos têm Fusarium spp. com potencial toxigênico mas os níveis de fumonisinas encontrados nos grãos assintomáticos foram muito baixos em comparação com os encontrados nos grãos ardidos mostrando que, em condições adversas, esse fungo deixa de ser endofítico e passa a ser patogênico, podendo causar doenças na planta e produzir toxinas. Pelo fato das fumonisinas estarem concentradas nos grãos ardidos, a redução dessas toxinas da dieta deve ser baseada na eliminação dos mesmos através do controle do beneficiamento. / Maize is a cereal widely cultivated in Brazil and worldwide. Its productivity can be affected by numerous factors including fungal colonization. In pathological terms, affected grains by fungi are denominated rot grains and the two most prevalent genera found in maize are Stenocarpella and Fusarium. Species of Fusarium can cause rotting in the stalks and also produce fumonisins, which are toxic both for animals and humans since their occurrence is associated to many diseases. The present work aimed to analyse the incidence of Fusarium ssp. with toxigenic potential in rot grains samples through the identification of the presence of the gene fum5, responsible for the production of fumonisins, as well as to quantify the levels of fumonisins found in these samples and compare with the results obtained in asymptomatic grains. A total of 100 samples from the 2006 and 2007 harvests were collected from the main producing regions of Brazil and were submitted to three analyses. The first evaluated the incidence of Fusarium ssp. in the grains through the method of filter paper and freezing, which revealed incidences that varied from 34 to 91%. The second analysis used specific primers and PCR to confirm the genus and species (F. verticillioides, F. proliferatum and F. subglutinans) and to detect the presence of the fum5 gene. The results indicated that 93% of the isolates belonged to the genus Fusarium. The PCR - negative isolates were confirmed as Fusarium after morphological analysis. Eigthy two percent of the isolates were classified as F. verticillioides, 3% as F. subglutinans and none as F. proliferatum using speciesspecific PCR. The fum5 gene was detected in eighty one percent of the isolates. The third analysis consisted in the quantification of the fumonisins (B1, B2 e B3 in the proportion of 5:3:1) through the ELISA method and the levels varied from 4,4 to more than 90 µg/g. Asymptomatic grains from the second cropping season of 2007 were analyzed separately for comparison purposes. The incidence of Fusarium spp. in these varied from 74 to 87%. The PCR for confirmation of the genus was positive for 87% of the isolates. The PCRs for species identification showed 60% of the isolated as being F. verticillioides, 3% as F. subglutinans and none as F. proliferatum. The greater concentration of fumonisins in the asymptomatic grains was of 2,1 µg/g and in 53% of the samples fumonisins were not detected. Rot and asymptomatic grains presented Fusarium spp. with toxigenic potential but the levels of fumonisins found in the asymptomatic grains were much lower compared with rot grains, showing that, in adverse conditions, this fungus changes from endophytic to pathogenic, being able to parasitize the plant and to produce toxins. The fact that fumonisins levels are much higher in rot grains, a simple measure to reduce the levels of these toxins in the animal diet would be to eliminate them during processing.
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PATÓGENOS EM SEMENTES DE PINUS SPP. ÊNFASE EM LASIODIPLODIA SP. E FUSARIUM SPP. / PATHOGENS IN PINUS SPP. SEEDS. - EMPHASIS ON LASIODIPLODIA SP. AND FUSARIUM SPP.

Maciel, Caciara Gonzatto 24 February 2016 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The genus Pinus is highlight in the forestry sector, especially in southern Brazil, by production of wood and cellulose. However, their seeds are vulnerable to attack by fungi causing diseases in nurseries. The present study aims to evaluate the physiological and sanitary quality of Pinus spp. seeds. from different origins; morphological and molecular identification of fungal species isolated from seeds of Pinus sp.; evaluate the pathogenic potential these fungi; and testing the efficacy of biocontrol agents for the treatment of seeds. For initial characterization of seed were evaluated germination and sanity tests. Four lots were utilized and samples were composed of 400 seeds for each test. The morphological characterization of the fungal isolates was accomplished based on specific keys to the genera Fusarium and Lasiodiplodia. For the molecular identification, ITS region and elongation factor, were sequenced. The pathogenicity test consists of the inoculation of the pine seeds by contact with a fungal culture of the pathogen, the substrate was sterilized sand, the test was kept in a growth room (25 ± 3 °C and photoperiod of 12 h) during 45 days. For biocontrol tests were used commercial products based on Trichoderma and Bacillus; and an isolated Bacillus themselves obtained from pine seeds. The in vitro control was conducted by direct confrontation betweem antagonist and pathogen. The in vivo test was carried out in conditions of vegetation for 60 days, the variables evaluated were emergence, stem diameter, fresh weight and dry seedling. The germination percentage of lots was higher 70%. The fungal genera associated with seeds were: Fusarium, Lasiodiplodia, Aspergillus, Penicillium and Trichoderma. Based on morphological and molecular characteristics identified the species F. oxysporum, F. verticillioides and Lasiodiplodia theobromae as pathogenic species to Pinus spp., causing pre and post-emergence damping-off. The antagonists show control potential of F. oxysporum, F. verticillioides and Lasiodiplodia theobromae in vitro. In vivo tests does not interfere with the development of the seedlings, until the 60 days of test. / O gênero Pinus destaca-se no setor florestal, especialmente na região Sul do Brasil, pela produção de madeira e celulose. Entretanto, suas sementes apresentam vulnerabilidade sanitária e doenças causadas por fungos são ocorrências decisivas na fase de produção de mudas nos viveiros. Diante disso, o presente estudo tem como objetivo avaliar a qualidade fisiológica e sanitária de sementes de Pinus spp. oriundas de diferentes procedências; identificar morfologicamente e molecularmente os isolados fúngicos associados as sementes; avaliar o potencial patogênico desses fungos; e testar a eficiência de agentes biocontroladores no tratamento das sementes. Para a caracterização inicial das sementes foram utilizados os testes de germinação e sanidade, avaliando-se quatro lotes e as amostras foram compostas por 400 sementes, para cada teste. A caracterização morfológica dos isolados fúngicos foi realizada com base em chaves específicas para os gêneros Fusarium e Lasiodiplodia, já para a identificação molecular, foram sequenciadas as regiões ITS e fator de elongação. O teste de patogenicidade consistiu na inoculação das sementes de Pinus via contato com a cultura fúngica do patógeno, sendo o substrato utilizado areia esterilizada com o teste mantido em sala de germinação (25 ± 3 °C e fotoperíodo de 12 h) durante 45 dias. Para os testes de biocontrole foram utilizados produtos comerciais à base de Trichoderma e Bacillus e um isolado de Bacillus obtido das próprias sementes de Pinus. O controle in vitro foi realizado pelo método de confronto pareado de culturas (antagonista x patógeno) e o teste in vivo foi desenvolvido em condições de casa de vegetação, durante 60 dias; as variáveis avaliadas foram emergência, diâmetro do colo, peso fresco e seco de mudas. O percentual de germinação dos lotes foi superior a 70%. Os gêneros fúngicos identificados nas sementes foram: Fusarium, Lasiodiplodia, Aspergillus, Penicillium e Trichoderma. Com base nas características morfológicas e moleculares identificaram-se as espécies Fusarium oxysporum, F. verticillioides e Lasiodiplodia theobromae como patogênicas a espécie em estudo, causando damping off de pré e pós-emergência. Os agentes antagonistas mostraram potencial de controle in vitro sobre F. oxysporum, F. verticillioides e L. theobromae e quando confrontados in vivo com L. theobromae não interferiram no desenvolvimento das mudas, até os 60 dias de condução do teste.
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Qualidade sanitária e fisiológica de sementes de leucena (Leucaena leucocephala (lam.) R. de Wit.): uma leguminosa de importância para os sistemas agrícolas do nordeste. / SANITARY AND PHYSIOLOGICAL QUALITY OF LEUCENA SEEDS (Leucaena leucocephala (Lam.) R. of Wit.): A LEGUMINOSA OF IMPORTANCE FOR AGRICULTURAL SYSTEMS NORTHEAST

Mendes, Sandra Santos 08 March 2006 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Leucaena is a tree specie that it is able to improve the soil and can give food for animals. It is an alternative to farmer in dry periods in Northest. Seeds of leucaena (Leucaena leucocephala Lam) from two populations (Reserva Florestal Ibura and Campus da Universidade Federal de Sergipe), were collected and storage for different periods as goal their utilization as alternative culture aiming agroecosystem sustainability. The objective of this work was to evaluate the physiological and sanitary seed quality and fungi infection to seedlings obtained of seeds storage for 2, 28 and 48 months. The seeds were storage in paper bags inside a refrigerated chamber with 40% of humidity at 10 ± 1° C and the experiments carried out in Phytosanitary Clinical, Tissues Culture and Vegetal Breeding Laboratory and Seeds Laboratory of Universidade Federal de Sergipe from February through December, 2005. It was used a statistical totally randomized design with four replications. It was detected in batches of 48 and 28 months fungi from Aspergillus and Penicillium genus. For seeds storage for 2 months it was detected Pestalotiopsis, Fusarium and Curvularia genus. In concerned to infection of the fungi it was verified the Aspergillus was able to cause hypocotyls necrosis on seedlings. For seeds physiological analysis tests as Germination Speed Index (IVG), Emergence Speed Index (IVE), Electrical Conductivity (CE), Accelerate Ageing (EA), Humidity (%U) and isozymes were carried out. It was verified the seeds storage for two months presented higher values of IVG. In the CE test the seeds storage for two months and submitted to accelerate ageing during 24 hours presented the higher values of CE. The isozyme markers showed alteration in patterns of bands intensity and absence of alteration in protein subunit which permit to infer the batches besides from different provenances, probably were not genetically divergent. This fact corroborates to justify the comparison made in this work. It was observed a decreasing in values of germination with increasing storage periods which suggest vigor lost. It was recommended the storage the leucaena seeds for a period maximum of two years for the conditions of present work. / A leucena (Leucaena leucocephala Lam.) é uma espécie arbórea, capaz de contribuir para o melhoramento do solo, além de servir de forragem para o gado, possibilitando ao agricultor uma alternativa para as regiões áridas do Nordeste. É uma espécie bem adaptada às regiões secas, conseguindo se manter verde por grande parte do ano. Sementes de leucena provenientes de duas populações (Reserva Florestal Ibura e Campus da Universidade Federal de Sergipe) foram coletadas e armazenadas em diferentes épocas do ano visando a sua utilização como alternativa para a sustentabilidade de agroecossistemas. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a qualidade fisiológica e sanitária e a transmissão de fungos associados às sementes armazenadas por 2, 28 e 48 meses em sacos de papel dentro de câmara fria com 40% de umidade a 10 ± 1° C. Os experimentos foram realizados na Clínica Fitossanitária, no Laboratório de Biotecnologia e Cultura de tecidos e no Laboratório de Sementes da Universidade Federal de Sergipe, no período compreendido entre fevereiro e dezembro de 2005. Para a análise fisiológica das sementes, empregou-se o delineamento inteiramente casualizado com 4 repetições e as sementes testadas foram previamente submetidas ao envelhecimento acelerado. Testes como Índice de Velocidade de Germinação (IVG), Índice de Velocidade de Emergência (IVE), Condutividade Elétrica (CE), Envelhecimento Acelerado (EA), Grau de Umidade (%U) e isoenzimas foram realizados. No teste de sanidade, nos lotes de 28 e 48 meses de armazenamento, fungos dos gêneros Aspergillus e Penicillium foram detectados Já nas sementes do lote de 2 meses de armazenamento, gêneros como Pestalotiopsis, Fusarium e Curvularia foram detectados e observou-se uma maior diversidade de gêneros fúngicos neste lote do que nos demais. Não foi verificada transmissão de fungos das sementes para as plântulas. Na análise fisiológica, verificou-se para as sementes armazenadas por 2 meses os maiores valores de IVG. No teste de CE as sementes com 2 meses de armazenamento submetidas ao EA por 24 horas apresentaram maiores valores. As análises usando marcadores isoenzimáticos mostraram alterações na intensidade de bandas dos perfis eletroforéticos e ausência de alterações nas subunidades protéicas, o que permite inferir que os lotes, apesar de serem de procedências diferentes, provavelmente não são geneticamente divergentes, o que pode justificar as comparações realizadas no presente trabalho. Observou-se, ainda, uma queda nos valores de germinação com o aumento nos períodos de armazenamento, sugerindo uma perda no vigor.

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