Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento (CNPq) / World Health Organization (WHO) / Howard Hughes Medical Institute / Proteinas de adesao celular sao essenciais para a invasao celular do hospedeiro mamifero pelo parasita Trypanosoma cruzi. Neste trabalho, nos mostramos que membros de gDispersed Gene Family-1 h, originalmente descrita como uma familia de sequencias nucleares repetitivas presente em varios cromossomos e compondo a terceira maior familia genica especifica deste parasita, contem caracteristicas de adesinas, incluindo quatro segmentos com similaridade significante a sequencia da subunidade ƒÀ7 de integrina humana. Ensaios de biotinilacao da superficie de parasitas e citometria de fluxo com anticorpos anti-DGF-1 indicaram que os membros dessa familia genica sao expressos na superficie das formas tripomastigotas. A genealogia de DGF-1, inferida por algoritmos de rede a partir de dados do Projeto Genoma da linhagem CL Brener de T. cruzi, sugere que essa familia genica pode ser dividida em pelo menos tres grupos com diferentes padroes de distribuicao de seus dominios funcionais. Analisando o perfil de uso dos codons, observou-se que as copias expressas apresentavam um uso preferencial de codons, favorecendo as bases GC, ao passo que copias nao-expressas, incluindo alguns pseudogenes, apresentavam uma distribuicao homogenea no uso de codons. A entropia informacional de Shannon foi utilizada como uma medida da variabilidade de sequencia e revelou que quatro segmentos de alta entropia coincidem com modulos funcionais putativos das proteinas preditas. Contradizendo a ideia de que alta variabilidade esta associada a selecao positiva, os resultados de dois testes distintos de selecao mostraram que posicoes altamente variaveis nao estao necessariamente sob selecao positiva. Nossa hipotese e de que membros de DGF-1 estao associados com a habilidade do T. cruzi se ligar a proteinas da matriz extracelular, como fibronectina e laminina, e especulamos sobre os mecanismos que gerariam diversidade nessas moleculas na ausencia de selecao. / Surface adhesion proteins are essential for Trypanosoma cruzi invasion of mammalian cells. Here we show that Dispersed Gene Family-1 (DGF-1) members, previously identified as nuclear repeated sequences present in several chromosomes and comprising the third largest T. cruzi-specific gene family, have conserved adhesin motifs including four segments with significant similarity to human beta 7 integrin. Flow cytometry and biotinylation assays with anti-DGF-1 antibodies indicated that, as expected, DGF-1 members are expressed on the trypomastigote surface. The DGF-1 genealogy, inferred using T. cruzi Genome Project data and network phylogeny algorithms, suggests that this gene family is separated in at least three groups with differential distribution of functional domains. To identify which members of this gene family are expressed we used a combined approach of RT-PCR and codon usage profiles, showing that expressed members have a very biased codon usage favoring GC whereas non-expressed members have a homogeneous distribution. Shannon information entropy was used to measure sequence variability and revealed four major high entropy segments in the extracellular domain of DGF-1 overlapping with important putative functional modules of the predicted proteins. Testing for natural selection, however, indicated that these high entropy segments were not under positive selection, which contradicts the notion that positive selection is the cause of high variability in specific domains of a protein relative to other less variable regions in the same molecule. We hypothesize that members of the DGF-1 family are associated with the ability of T. cruzi to bind extracellular matrix proteins, such as fibronectin and laminin, and speculate on mechanisms that would be generating the localized diversity in these molecules in the absence of selection. / FAPESP: 03/05317-0 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

CUNHA NETO, J. Seleção de clones de aceroleira, repetibilidade, correlações e uso de técnicas multivariadas entre caracteres agronômicos e de pós-colheita. 2009. 131 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrária, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-17T21:04:43Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_jcunhaneto.pdf: 1293349 bytes, checksum: 12c776f7e3c071861c35fab19c2683d2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-21T18:45:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_jcunhaneto.pdf: 1293349 bytes, checksum: 12c776f7e3c071861c35fab19c2683d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-21T18:45:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_jcunhaneto.pdf: 1293349 bytes, checksum: 12c776f7e3c071861c35fab19c2683d2 (MD5) Previous issue date: 2009 / Given the demand for varieties or clones of acerola above Embrapa Tropical Agroindustry developed in the years 1996 to 2007, the program of genetic improvement of aceroleira in order to recommend clones productive, with fruits of excellent quality, but also to avoid genetic homogeneity of commercial plantations. Having this goal in 1996, dies 100 plants were selected by mass selection in an orchard of fruit company of Ceara S/A (FRUCESA). From these matrices was initiated the program to improve the aceroleira at Embrapa Tropical Agroindustry, which was divided into breeding stock and clonal, resulting in 2003 in the launch of four clones recommended for the State of Ceará, the following: BRS 235 (Apodi) , BRS 236 (Cereja), BRS 237 (Roxinha) and BRS 238 (Frutacor). Another result of this study was to obtain 25 clones of aceroleira in progenies of the second round of selection, which were installed in the experimental field of Embrapa Tropical Agroindustry in December 2002 for evaluation during the period of five years, followed by selection the three best clones based on their agronomic and post-harvest. The experiment was installed in the Experimental Field of Paraipaba (CE), under a randomized block design with 25 treatments, three replications and three plants per plot, spaced 4 m x 4 m. From the assessments it was estimated the variability of the clones, as well as the coefficient of repeatability and correlation of the characteristics evaluated. The selection was made after the construction of selection index of Mulamba & Mock, aided by the method of principal components. It was observed that the 25 clones have reduced genetic variability for agronomic traits. The selection of clones, based only on morphological characteristics and production can now present satisfactory results from the second year of evaluation, it was highlighted for clones 79 / 2 (7), 79/10 (9) and 87 / 11 (7) with potential for use in a commercial. It was observed that the method of principal components based on a correlation matrix is presented as the most efficient for the estimation of the coefficient of repeatability. Estimates of the coefficients of repeatability of AP characteristics, DC, weight, TSS and vitamin C, show high regularity in the superiority of individuals from one year to another, and that 5-10 assessments are sufficient to predict the actual level of individuals with certainty of 95%. Based on the correlation coefficients between the characters it follows that the selection of fruits with higher content of vitamin C can be carried out indirectly. From the selection index of Mulamba & Mock was recommended the selection of genotypes 87/11 (7), 79/10 (9) and 91 / 8 (2) by presenting a number of favorable attributes, with potential to be evaluated in large-scale experiments in different regions of the state of Ceará. / Diante da demanda por variedades ou clones de aceroleiras superiores a Embrapa Agroindústria Tropical desenvolveu, nos anos de 1996 a 2007, o programa de melhoramento genético da aceroleira, com o propósito de recomendar clones produtivos, com frutos de excelente qualidade, como também de evitar a homogeneização genética dos plantios comerciais. Diante deste objetivo, em 1996, foram selecionadas 100 plantas matrizes por meio da seleção massal em um pomar da empresa Frutas do Ceará S/A (FRUCESA). A partir dessas matrizes foi iniciado o programa de melhoramento da aceroleira na Embrapa Agroindústria Tropical, o qual foi dividido em melhoramento populacional e clonal, resultando em 2003 no lançamento de quatro clones recomendados para o Estado do Ceará, a seguir: BRS 235 (Apodi), BRS 236 (Cereja), BRS 237 (Roxinha) e BRS 238 (Frutacor). Outro resultado deste trabalho foi à obtenção de 25 clones de aceroleira, em progênies de segundo ciclo de seleção, que foram instalados no campo experimental da Embrapa Agroindústria Tropical, em dezembro de 2002, para avaliação, durante o período de cinco anos, seguida pela seleção dos três melhores clones com base em suas características agronômicas e de pós-colheita. O experimento foi instalado no Campo Experimental de Paraipaba (CE), sob delineamento de blocos ao acaso, com 25 tratamentos, três repetições e três plantas por parcela, no espaçamento de 4 m x 4 m. A partir das avaliações estimou-se a variabilidade dos clones, como também o coeficiente de repetibilidade e correlação das características avaliadas. A seleção foi realizada após a construção do índice de seleção de Mulamba & Mock, auxiliada pelo método das componentes principais. Observou-se que os 25 clones apresentam reduzida variabilidade genética para as características agronômicas. A seleção de clones, com base apenas nas características morfológicas e de produção já pode apresentar resultados satisfatórios a partir do segundo ano de avaliação, tendo-se destaque para os clones 79/2 (7), 79/10 (9) e 87/11 (7) com potencial para serem utilizados em plantio comercial. Observou-se que o método dos componentes principais com base na matriz de correlação se apresenta como o mais eficiente para a estimação do coeficiente de repetibilidade. As estimativas dos coeficientes de repetibilidade das características AP, DC, PESO, SST e vitamina C, demonstram alta regularidade na superioridade dos indivíduos de um ano para outro, e que de 5 a 10 avaliações são suficientes para predizer o valor real dos indivíduos com nível de certeza de 95%. Com base nos coeficientes de correlação entre os caracteres conclui-se que a seleção de frutos com maior conteúdo de vitamina C pode ser realizada de forma indireta. A partir do índice de seleção de Mulamba & Mock foi recomendada a seleção dos genótipos 87/11 (7), 79/10 (9) e 91/8 (2) por apresentarem uma série de atributos favoráveis, com potencial para serem avaliados em experimentos de larga escala em diferentes regiões do Estado do Ceará.

SAHM, Bianca Del Bianco. Prospecção de substâncias com potencial anticâncer em microrganismos associados ao zoantídeo Protopalythoa variabilis (cnidaria, anthozoa). 2014. 104 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-10-07T15:54:47Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_bdbsahm.pdf: 2081558 bytes, checksum: d0b1f0d3bb8290c475c247d1e3be880d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-10-07T15:55:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_bdbsahm.pdf: 2081558 bytes, checksum: d0b1f0d3bb8290c475c247d1e3be880d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-07T15:55:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_bdbsahm.pdf: 2081558 bytes, checksum: d0b1f0d3bb8290c475c247d1e3be880d (MD5) Previous issue date: 2014 / Natural products exhibit a fundamental role in the discovery of new medicines. Marine natural products possess a huge chemical and pharmacological potential to yield new leads. Previous results support the promising chemical and pharmacological potential of the zoanthid Protopalythoa variabilis from the coast of Ceara State. On the other hand, strong evidences have indicated that associated microorganisms are the producers of the elaborate arsenal of secondary metabolites isolated from marine invertebrates. Then this study aimed to investigate the biomedical potential of associated microbiota to P. variabilis. The efforts to isolate associated bacteria yielded 10 different strains, and 3 of them showed typical actinomycete morphology. Here 2 of these actinomcetes had their anticancer potential studied. The strain BRA-035 belongs to the genus Streptomyces. BRA-035 culture using A1 broth yielded an acetate extract with potent cytotoxicity against a prostatic carcinoma cell line (PC-3/M), with inhibitory concetrantion mean (IC50) value in pg/mL. The bioguided fractionation led to the isolation of glucopiericidin A, piericidin D and piericidin A, and the later showed high antiprolifetative activity against ovarian cancer (OVCAR-8), colon cancer (HCT-116) and PC-3/M with IC50 values ranging from pico to fentomolar. Although Piericidin A has been widely studied, this might be the first report of cytotoxic activity against the lineages tested in this work, as well as the magnitude of its potency. Another strain selected for this study, BRA-060, was identified as belong to the genus Streptomyces also. The fermentation was optimized in marine broth to produce an acetate extract highly cytotoxic against a leukemia cell line (HL-60). The bioguided fractionation of these extracts yielded three diketopiperazines: cyclo (L-Try-trans-L-Pro); cyclo (L-Phe-cis-4-OH-D-Pro) and cyclo (L-Phe-trans-4-OH-D-Pro). The diketopiperazines isolated showed potent cytotoxic activity against glioblastoma (SF-295), ovarian cancer (OVCAR-8), HCT-116, HL-60 and another leukemia (K-562) The IC50 values ranging from nanomolar and micromolar. Althought their structures have already been described in the literature, there was no previous report of their cytotoxic acitivities. Altogether, these results emphasize the value of microbiota associated with the zoanthid P. variabilis, found on the coast of Ceará State, as a source of active compounds. / Os produtos naturais apresentam um papel fundamental na descoberta de novos fármacos. Nesse contexto, os produtos naturais marinhos apresentam um grande potencial químico e farmacológico. Resultados prévios demonstraram um potencial químico e farmacológico promissor do zoantídeo Protopalythoa variabilis encontrado no litoral cearense. Por outro lado, fortes indícios apontam que os microrganismos associados sejam os verdadeiros responsáveis pelo elaborado arsenal de metabólitos secundários isolados de invertebrados marinhos. Dessa forma surgiu o interesse em estudar o potencial biomédico da microbiota associada ao P. variabilis. Os esforços para isolar as bactérias renderam um total de 10 colônias. Destas, 3 apresentaram padrões morfológicos típicos de actinomicetos e 2 delas foram estudadas neste trabalho. A cepa BRA-035 foi identificada como pertencente ao gênero de actinomicetos Streptomyces, e seu extrato acetato de etila, resultante da fermentação em meio A1, causou alta inibição do crescimento celular contra a linhagem de carcinoma de próstata metastático PC-3/M, com concentração inibitória média (CI50 ) na ordem de pg/mL. O fracionamento bioguiado levou ao isolamento dos compostos glicopiericidina A, piercidina D, e piericidina A, sendo que esta última apresentou elevada atividade antiproliferativa em linhagens tumorais de câncer de ovário (OVCAR-8), câncer de cólon (HCT-116) e PC-3/M, com CI50 encontradas na ordem de pico até fento molar. Apesar de já ter sido amplamente estudada, esta pode ser a primeira ocorrência de atividade antiproliferativa de Piericidina A contra as linhagens testadas neste trabalho, assim como a ordem de grandeza de sua potência. Outra cepa selecionada para estudo, a BRA-060, também foi identificada como pertencente ao gêrero Streptomyces. Sua fermentação foi otimizada em meio Marine Broth para produção de extrato acetato de etila com citotoxicidade contra a linhagem de leucemia promielocítica HL-60 em ng/mL. O fracionamento bioguiado deste extrato resultou no isolamento de três dicetopiperazinas: a ciclo (L-Tyr-trans-L-Pro), a ciclo(L-Phe-cis-4-OH-D-Pro) e a ciclo(L-Phe-trans-4-OH-L-Pro). As dicetopiperazinas isoladas apresentaram potente atividade citotóxica contra as linhagens de glioblastoma (SF-295), câncer de ovário (OVCAR-8), HCT-116 e HL-60 e outra leceumia K-562, com valores de CI50 variando de nano a micro molar. Embora suas estruturas já terem sido descritas pela literatura, nenhum trabalho foi feito quanto a suas atividades citotóxicas, podendo este ser o primeiro relato sobre suas propriedades antitumorais. Esses resultados ressaltam a importância da microbiota associada ao zoantídeo P. variabilis, encontrado no litoral cearense, como fonte de compostos com potencial anticâncer.

SOARES, M. E. S. Desenvolvimento de um sistema de apoio à decisão na seleção de motoniveladoras para a execução de obras de terraplenagem e de pavimentação. 2015. 81 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia de Transportes) – Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2015-07-16T13:10:41Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_messoares.pdf: 3433520 bytes, checksum: c8b7f05963b73c300b7d7c1a4cd5145e (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa(mmarlene@ufc.br) on 2015-07-17T14:07:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_messoares.pdf: 3433520 bytes, checksum: c8b7f05963b73c300b7d7c1a4cd5145e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-17T14:07:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_messoares.pdf: 3433520 bytes, checksum: c8b7f05963b73c300b7d7c1a4cd5145e (MD5) Previous issue date: 2015-05-12 / The demands on speed and efficiency of infrastructure design and construction has increased due to the use of software and more productive equipment, which has required better performance of equipment planners at each step. However, even considering that the costs associated with equipment are one of the items with the greatest weight in road construction, there are few computerized systems for fleet selection decision support. Fleet selection systems have been developed by researchers in Brazil and worldwide, but most of them consider only trucks and excavators/loaders or scrapers. This research aims at developing a decision support system for the selection of motor graders for construction activities involving earthmoving and paving works named SADPATROL. Initially, an analysis of the motor grader technological evolution was performed in order to evaluate the influence of the improvements on productivity gains. The equations presented in the literature were studied for productivity calculation and, after verifying the suitability of the equation, the equation was incorporated in the SADPATROL system with the necessary changes in its variables. Through the analysis of the variables in the equation, it was possible to identify how they influenced the productivity. Through this analysis, improvements were implemented. These improvements consisted of the inclusion of standard values for the system variables, allowing the achievement of more accurate results if the user has no data for productivity measured in the field. The SADPATROL system has 46 types of motor graders included in its database, from many different models and sizes and from 12 different manufacturers. The user is able to plan the fleet with its own equipment and verify if it satisfies the construction project deadline. If the deadline cannot be satisfied using the available fleet or the user has no equipment, the system performs the construction planning using all database equipment and provides the optimal solution with 46 options organized into fleets in increasing order according to the amount of equipment needed. It is also possible for the user to select the equipment using time cost information and, thus, achieve the lowest cost fleet. The significant amount of information necessary for motor graders selection and its inter-relationships and dependencies were organized in a systematic way in the SADPATROL system, reducing, the empiricism and the dependence on human expertise in selecting fleets. This research may also help in assisting in the development of technical standards and expanding the dissemination of knowledge about such equipment / A velocidade de concepção e de execução das infraestruturas tem aumentado devido à utilização de softwares e equipamentos eficientes, o que tem exigido um melhor desempenho de cada etapa. No entanto, apesar dos custos envolvidos com equipamentos serem os itens de maior peso na construção rodoviária, poucos são os sistemas existentes de apoio à decisão para a seleção das frotas. Propostas de seleção de frotas têm sido elaboradas por pesquisadores no Brasil e no mundo, porém a maioria consideram apenas caminhões e escavadeiras/carregadeiras ou scrapers. Este trabalho tem como objetivo desenvolver um sistema de apoio à decisão na seleção de motoniveladoras para a execução de obras de terraplenagem e de pavimentação, denominado SADPATROL. Inicialmente, foi feita uma análise da evolução tecnológica do equipamento motoniveladora visando verificar a influência destas melhorias sobre o aumento da produtividade. Foram analisadas as equações existentes na literatura para o cálculo de produtividade e após verificada a representatividade da equação utilizada no país esta foi escolhida para compor o SADPATROL, com as devidas alterações em suas variáveis. Através da análise de cada variável da equação foi possível identificar o quanto as mesmas influenciavam no resultado da produção desta forma, foram implementadas melhorias, como a inserção de valores padrões para as variáveis do sistema, permitindo a obtenção de resultados mais precisos, caso o usuário não possua dados medidos em campo. O SADPATROL possui cadastrado em seu banco de dados 46 tipos de motoniveladoras, dos mais variados modelos e tamanhos, de 12 fabricantes distintos. É possibilitado ao usuário calcular a frota com equipamentos próprios e verificar se esta atende ao prazo da obra. Caso o prazo não seja atendido pela frota própria ou o usuário não possua equipamentos, o sistema executa as informações da obra para todos os equipamentos do banco de dados e fornece a solução com as 46 opções organizadas em frotas, em ordem crescente de quantidade de equipamento. É possibilitado ainda selecionar os equipamentos nos quais se possui informação de custo horário, para assim obter a frota de menor custo. Toda a multiplicidade de informações necessárias à seleção de motoniveladoras, e suas inter-relações e dependências, foram organizadas de forma sistêmica no software SADPATROL, diminuindo assim o empirismo e a dependência da experiência humana na seleção de frotas. A presente pesquisa pode ainda contribuir para auxiliar a elaboração de normas técnicas e para a disseminação do conhecimento sobre o referido equipamento

MEIRA, Assuero Silva. Estudo do potencial citotóxico de novos ésteres sintéticos derivados da mistura triterpenoidica a-/ß-amirina em modelos experimentais in vitro. 2011. 124 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-07T11:44:40Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_asmeira.pdf: 5851915 bytes, checksum: aa16a7db83f12d03afb14bdb279c0e74 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-08T11:25:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_asmeira.pdf: 5851915 bytes, checksum: aa16a7db83f12d03afb14bdb279c0e74 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-08T11:25:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_asmeira.pdf: 5851915 bytes, checksum: aa16a7db83f12d03afb14bdb279c0e74 (MD5) Previous issue date: 2011 / Triterpenoids are compounds that in recent years have aroused considerable interest because of their structural diversity and the discovery of a broad spectrum of pharmacological activities. This study evaluated the cytotoxic potential of four derivatives of a mixture of α-, β-amyrin in human tumor cell lines. Among these, only compound 3-O-α-Carboximaleinato of, β-amyrin (3a/3b) was active, especially in the leukemic cell line HL-60, with IC50 values ranging from 1.8 to 3.0 µM. This derivative had its cytotoxic evaluated, also at the other leukemia cell line, K562, with IC50 values ranging between 1.76 and 2.96 µM, suggesting a specificity of this substance for leukemia. And their specificity for tumor cells was confirmed in cytotoxicity assays in a strain of macrophages, J774 (IC50 between 3.10 and 3.60 µM) and mononuclear cells in human peripheral blood mononuclear cells, whose proliferation was not prevented, and there wasn’t damage in the DNA of these cells. None of the compounds showed hemolytic activity against erythrocytes of mice (EC50> 200 mg / mL), suggesting a cytotoxic mechanism more specific. Thus, to determine the mechanism of action involved, sequences of in vitro experiments were performed in HL-60 cell line. Cells were treated at different concentrations of the sample 3a/3b (1.5, 3.0 and 6.0 µM) during 24h. The viability of HL-60 cells (trypan blue test and flow cytometry) was reduced at concentrations of 3.0 and 6.0 µM after treatment. Morphological analysis of cellular changes performed by staining methods (May-Grünwald-Giemsa and acridine orange / ethidium bromide (LA / BE)) and by flow cytometry (membrane integrity) showed typical features of apoptotic cells (intact membrane , reduction of cell volume, picnotic nucleus and chromatolysis), also at concentrations of 3.0 and 6.0 µM. Further testing by flow cytometry revealed that there was externalization of phosphatidylserine, there was no formation of reactive oxygen species (ROS) and that the molecule 3a/3b only induced the extrinsic pathway of apoptosis by activation of initiator caspase 8 and subsequent activation of caspases 3 and 7. These data indicate a cytotoxic mechanism induced by an apoptotic pathway, involving death receptors. Therefore, these results indicate the cytotoxic potential of 3a/3b analogue. / Triterpenóides são compostos que nos últimos anos têm despertados grande interesse em razão de sua diversidade estrutural e da descoberta de um amplo espectro de atividades farmacológicas. O presente estudo avaliou o potencial citotóxico de quatro derivados de uma mistura de α-,β-amirina em linhagens tumorais humanas. Dentre estes, apenas o composto 3-O-Carboximaleinato de α-, β-amirina (3a/3b) foi ativo, especialmente na linhagem leucêmica HL-60, com valores de IC50 variando entre 1,8 e 3,0 µM. Este derivado foi avaliado, também frente à outra linhagem leucêmica, K562, com IC50 variando entre 1,76 e 2,96 µM, sugerindo uma especificidade desta substância para leucemias. E sua especificidade para células tumorais foi confirmada em ensaios de citotoxicidade em células não transformadas, sendo testada em uma linhagem de macrófagos, J774 (IC50 entre 3,10 e 3,60 µM) e em células mononucleares do sangue periférico humano (CMSPH), cuja proliferação não foi impedida e não houve dano ao DNA destas células. Nenhum dos compostos mostrou atividade hemolítica contra eritrócitos de camundongos (EC50 > 200 µg/mL), o que sugere uma citotoxicidade por mecanismos de ação mais específicos. Desta forma, a fim de determinar o mecanismo de ação envolvido, uma sequência de experimentos in vitro foram realizados na linhagem HL-60. As células foram tratadas em diferentes concentrações da amostra 3a/3b (1,5, 3,0 e 6,0 µM) por 24h. A viabilidade das células HL-60 (teste azul de tripan e citometria de fluxo) foi reduzida nas concentrações de 3,0 e 6,0 µM, após o tratamento. A análise morfológica das alterações celulares realizada por métodos de coloração (May-Grünwald-Giemsa e laranja de acridina/brometo de etídio (LA/BE)) e por citometria de fluxo (integridade de membrana) revelaram características típicas de células apoptóticas (membrana íntegra, redução do volume celular, núcleo picnótico e cromatólise), também nas concentrações de 3,0 e 6,0 µM. Outros testes por citometria de fluxo revelaram que houve externalização da fosfatidilserina, que não houve formação de espécies reativas de oxigênio (EROS) e que a molécula 3a/3b induziu apenas a via extrínseca da apoptose, pela ativação da caspase iniciadora 8 e a consequente ativação das caspases efetoras 3 e 7. Estes dados indicam um mecanismo citotóxico por indução de uma via apoptótica, envolvendo receptores de morte. Por conseguinte, estes resultados apontam o potencial citotóxico do análogo 3a/3b.

BEZERRA, Daniel Pereira. Potencial anticâncer da piplartina e da piperina, amidas isoladas de plantas do gênero piper. 2005. 140 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-09T15:42:49Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_dpbezerra.pdf: 807370 bytes, checksum: 167b7dccf8e281ad52b11ad4ce185c6c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-12T12:12:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_dpbezerra.pdf: 807370 bytes, checksum: 167b7dccf8e281ad52b11ad4ce185c6c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-12T12:12:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_dpbezerra.pdf: 807370 bytes, checksum: 167b7dccf8e281ad52b11ad4ce185c6c (MD5) Previous issue date: 2005 / Piplartine and piperine are alkaloids/amides isolated from Piper species. The activity of these compounds was initially evaluated on the brine shrimp lethality assay, sea urchin development, MTT assay using tumor cell lines, and hemolytic assay. Piperine showed a higher toxicity in brine shrimp than piplartine. Both piplartine and piperine inhibited the sea urchin development, but in this assay piplartine was more potent than piperine. In MTT assay, piplartine was also the most active with IC50 values ranging from 0.7 to 1.7 µg/mL. None of the tested substances induced hemolysis. Since the piplartine showed the best results, its mode of action was studied. Viability of HL-60, K562, JUKART, and MOLT-4 cell lines were affected by piplartine only after an exposure time of 24h, as analyzed by the Trypan blue exclusion. Piplatine reduced the number of viable cells associated with an increasing of the number of non-viable cells, which corroborate data from morphologic analysis. The cytotoxic activity of piplartine was related to the inhibition of DNA synthesis, as revealed by the reduction of BrdU incorporation. Administration of piplartine or piperine (50 or 100 mg/kg/day) inhibited the solid tumor development in mice transplanted with Sarcoma 180. The inhibition rates were of 28.7 and 52.3% for piplartine and 55.1 and 56.8% for piperine at lowest and highest dose, respectively. Piplartine-antitumor activity was related to the tumor proliferation rate inhibition, as observed by reduction of Ki67 staining in tumor of the treated-animals. The histopathological analysis of liver and kidney showed that both organs were reversible affected by piplartine and piperine treatment, but in a different way. Piperine was more toxic to the liver while piplartine affected more the kidney. Thus, both amides may act as antitumor agents, although, they seem to act through different pathways. Piplartine activity seems to be related to direct cytotoxicity on tumor cells, while piperine presented a host mediated activity. / Piplartina e piperina são alcalóides/amidas presentes em plantas do gênero Piper. A atividade desses compostos foi inicialmente avaliada através do ensaio de toxicidade aguda em Artemia sp., desenvolvimento de ovos de ouriço do mar, ensaio do MTT usando células tumorais e ensaio hemolítico. A piperina apresentou toxicidade maior em Artemia sp. que a piplartina. Ambas inibiram o desenvolvimento de ouriço do mar, mas neste ensaio a piplartina foi mais potente que a piperina. No ensaio do MTT, a piplartina também foi a mais ativa com valores de CI50 variando de 0,7 a 1,7 µg/mL. Nenhuma das substâncias testadas induziu hemólise. O mecanismo de ação da piplartina foi, então, estudado. A viabilidade de células HL-60, K562, JUKART e MOLT-4 foi afetada por piplartina apenas após de um período de exposição de 24h, quando analisada por exclusão por azul de tripan. A piplatina reduziu o número de células viáveis associado com um aumento no número de células não-viáveis, o que colabora com os achados da analise morfológica, onde observou-se um aumento do número de células mortas. A atividade citotóxica da piplartina está relacionada com a inibição da síntese de DNA, como revelado pela incorporação do BrdU. A administração de piplartina ou piperina (50 ou 100 mg/kg/dia) inibe o desenvolvimento de tumor sólido em camundongos transplantados com Sarcoma 180. A inibição foi de 28,7 e 52,3% para piplartina e 55,1 e 56,8% para piperina na menor e maior dose, respectivamente. A atividade antitumoral da piplartina, mas não da piperina, está relacionada com a inibição da proliferação do tumor, como observada pela redução da marcação com Ki67 em tumores de animais tratados. A analise histopatológica do fígado e rins demostrou que ambos os órgãos foram reversivelmente afetados pelo tratamento com piplartina e piperina, mas de maneira diferente. A piperina foi mais tóxica para o fígado, enquanto que a piplartina afetou mais os rins. Assim, ambas as amidas podem atuar como agentes antitumorais, embora, elas pareçam atuar por vias diferentes. Sendo que a atividade da piplartina parece estar relacionada diretamente a sua ação citotóxica, enquanto que a atividade da piperina séria mediada pelo hospedeiro.

ROCHA, Danilo Damasceno. Estudo das atividades citóxica e antitumoral de vitafisalinas isoladas de Acnistus arborescens. 2008. 123 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-21T13:30:01Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_ddrocha.pdf: 2475867 bytes, checksum: 2d242c7faf0be539e6e6c0d452db07c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-21T16:27:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_ddrocha.pdf: 2475867 bytes, checksum: 2d242c7faf0be539e6e6c0d452db07c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-21T16:27:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_ddrocha.pdf: 2475867 bytes, checksum: 2d242c7faf0be539e6e6c0d452db07c5 (MD5) Previous issue date: 2008 / Withaphysalins are C28-steroidal lactones structurally based on the ergostane skeleton commonly found in Solanaceae species. In order to evaluate the anticancer properties of these compounds, five withaphysalins [O, F, M, N and (17S,20R,22R)-5β,6β: 18,20-diepoxy-4β,18-dihydroxy-1-oxowitha-24-enolide] isolated from Acnistus arborescens, a plant from the northeastern Brazilian flora, were analyzed in several biological models. All five withaphysalins showed cytotoxic effects against tumor cell lines, being withaphysalin O the most potent and withaphysalin (17S,20R,22R)-5β,6β: 18,20-diepoxy-4β,18-dihydroxy-1-oxowitha-24-enolide, the less potent. Based on these results, its shown that a double-bond between carbons 2 and 3 is essential for the cytotoxic activity of withaphysalins. Withaphysalins (O, F and N) did not show any specificity to tumor cell lines, showing similar cytotoxic and genotoxic effects against leukemic cells (HL-60) and normal cells (PBMC). Cell viability and growth curves of HL-60 and K-562 treated cells were determined using trypan blue exclusion assay, where all withaphysalins reduced the number of viable cells in a dose-and time-dependent fashion, with IC50 values ranging from 0.7 to 3.5 μM after 72 h of incubation. In HL-60 and K-562 cells, the withaphysalins inhibited DNA synthesis, induced morphological alterations, typical of apoptosis, and only in the HL-60 cell line, and they induced activation of caspase-3. Moreover, it was performed the analyzes of cell membrane integrity, cell cycle distribution, DNA fragmentation and the mitochondrial membrane potential using flow citometry. In these experiments, withaphysalins O and F, only at concentration of 10µM, reduced the number of viable cells to 60 and 40% respectively. In the cell cycle analysis, both withaphysalins led to a cell cycle arrest at G2/M, at the concentration of 5μM. Cells treated with both withaphysalins also showed a significant increase in DNA fragmentation when compared to the negative control. Results of the mitochondrial transmembrane potential showed depolarization changes in accordance to the tested concentration (2.5, 5 and 10μg/mL) with 4.7, 17.5 and 9.1% for withaphysalin O and 7.6, 16.6 and 5.6% for withaphysalin F, respectively. The in vivo antitumor effects of withaphysalin F was performed in animals bearing the sarcoma 180 tumor, and at the highest dose tested (20mg/Kg/day), growth tumor was inhibited in 77%. Histopatological analysis of mice organs showed that withaphysalin F causes moderate toxic effects mostly in liver and kidney, but they may be considered reversible effects. Taking in account all these data, it can be concluded that withaphysalins could be considered as an emerging class of new anticancer compounds. / As vitafisalinas são lactonas esteroidais (C28), estruturalmente baseadas no esqueleto do ergostano, comumente encontradas em plantas da família Solanaceae. A fim de avaliar as propriedades anticâncer desses compostos, cinco vitafisalinas [O, F, M, N e (17S, 20R, 22R) -5 β, 6β :18,20-2-diepóxi β-4, 18 - diidróxi-1 - oxovita-3-24-enolido] isoladas da Acnistus arborescens, planta típica do nordeste brasileiro, foram analisadas utilizando diversos modelos biológicos. Todas as cinco vitafisalinas mostraram efeitos citotóxicos em linhagens de células tumorais, sendo a vitafisalina O a mais potente e a vitafisalina (17S, 20R, 22R) -5 β, 6β :18,20-2-diepóxi β-4, 18 - diidróxi-1-oxovita-3 - 24-enolido) a menos potente. Ao compararmos as estruturas químicas das vitafisalinas e suas atividades, foi observado que a ligação dupla entre os carbonos 2 e 3 é essencial para os efeitos citotóxicos desses compostos. No entanto, as vitafisalinas (O, F e N) não mostraram qualquer especificidade para linhagens tumorais, já que também apresentaram efeitos citotóxicos e genotóxicos, semelhantes, em células leucêmicas (HL-60) e em células normais (PBMC). A viabilidade celular e curvas de crescimento foram determinadas, para as linhagens de HL-60 e K-562, utilizando o ensaio de exclusão de azul de tripan. As vitafisalinas O, F, M e N reduziram o número de células viáveis de modo dose e tempo dependente, apresentando valores de CI50 variando de 0,7 a 3,5 μM após 72 horas de incubação. Nas mesmas linhagens leucêmicas, as vitafisalinas também inibiram a síntese de DNA, causaram alterações morfológicas típicas de apoptose, e apenas na linhagem HL-60 induziram a ativação da caspase-3. Além disso, foi realizado, em células de HL-60, a análise da integridade da membrana celular, distribuição do ciclo celular, fragmentação de DNA e o potencial transmembrânico de mitocôndria, utilizando citometria de fluxo. Nestes experimentos, as vitafisalinas O e F, somente na concentração de 10 μM, reduziram o número de células viáveis para 60 e 40%, respectivamente. Na análise do ciclo celular, ambas vitafisalinas, na concentração de 5 μM, causaram um acúmulo de células na fase G2/M do ciclo celular. Ambas vitafisalinas também causaram um aumento significativo do número de células apresentando fragmentação de DNA. Os resultados da análise do potencial transmembrânico de mitocôndria mostraram um aumento na despolarização de 4,7, 17,5 e 9,1% causado pela vitafisalina O e de 7,6, 16,6 e 5,6% pela vitafisalina F. O efeito antitumoral (in vivo) da vitafisalina F foi analisado em camundongos transplantados com o tumor Sarcoma 180, nas doses de 5, 10 e 20 mg/Kg/dia por via intraperitoneal e na dose de 20 mg/Kg/dia por via oral. O crescimento do tumor foi inibido em mais de 76% na maior doses testada (20mg/Kg/dia), tanto por via intraperitoneal quanto por via oral. A análise histopatológica dos órgãos dos animais mostraram que a vitafisalina F provoca efeitos tóxicos moderados, principalmente no fígado e nos rins, mas esses podem ser considerados como reversíveis. Tendo em vista todos estes dados, pode concluir-se que as vitafisalinas podem ser consideradas como uma classe emergente de novos compostos anticâncer.

MILITÃO. Gardênia Carmen Gadelha. Potencial antitumoral de flavonóides isolados de plantas do nordeste brasileiro : estudos preliminares da relação estrutura-atividade citotóxica. 2005. 105 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-27T14:12:41Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_gcgmilitão.pdf: 3115763 bytes, checksum: bdb24d2523fe3d4e744e758ddeeffc63 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-27T15:58:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_gcgmilitão.pdf: 3115763 bytes, checksum: bdb24d2523fe3d4e744e758ddeeffc63 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-27T15:58:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_gcgmilitão.pdf: 3115763 bytes, checksum: bdb24d2523fe3d4e744e758ddeeffc63 (MD5) Previous issue date: 2005 / In searching for anticancer compounds derived from plant sources, 18 flavonoids were assayed for their cytotoxic potentials and the results were compared for structure-activity relationship purposes. The flavonoid group was subdivided in flavones and pterocarpans. The cytotoxic activity was initially evaluated on tumor cell lines, through the MTT assay, and on sea urchin eggs development. The pterocarpans showed a consistently higher activity on both assays. For the flavones, some structure-activity observations can be highlighted: a) a hydroxyl instead of a methoxyl group on C4 and C5 positions increases activity; b) a hydroxyl and a sugar on C3 position decreases activity and, by the data acquired, it can be emphasized that the methoxyl on C3 increases activity and c) the methoxyl on C7 position increases activity. The pterocarpans, a methoxyl group on C2 position increases the cytotoxic activity. Since the 2,3,9- trimethoxypterocarpan showed the best results in both assays, mode of action studies were conducted for the non-prenylated pterocarpans as an attempt to understand the influence of these groups over their bioactivity. All pterocarpans tested reduced cell viability, as indicated by the trypan blue assay, except for the 3,10-dihydroxy-9-methoxypterocarpan at 12,5 micrograma/mL. They also inhibited DNA synthesis and 2,3,9-trimethoxypterocarpan induced morphological cell alterations, which could be suggestive of apoptosis. On the assays for induction of cellular apoptosis this same compound caused DNA fragmentation and mitochondria depolarization, therefore maintaining membrane integrity, typical apoptotic signs. The other compounds, besides DNA fragmentation, there was noticeable loss of membrane integrity on higher concentrations, an indicative cell death by necrosis. Based on these observations, it is conclusive that the methoxyl group on C2 position is an important pharmacophoric unit for pterocarpans, which emerge as a potential class of anticancer chemicals. / Na busca por compostos obtidos de plantas com potencial antitumoral, dezoito flavonóides foram avaliados quanto a atividade citotóxica, seus resultados foram comparados a fim de compreender quais grupamentos conferem uma maior atividade da molécula. O grupo dos flavonóides foi dividido em flavonas e pterocarpanos. Inicialmente, a atividade citotóxica foi avaliada em células tumorais através do método do MTT e no desenvolvimento embrionário de ovos de ouriço do mar. O grupo dos pterocarpanos foi mais ativo que as flavonas em ambos os ensaios utilizados. No grupo das flavonas algumas observações sobre a relação estrutura-atividade podem ser citadas: a) a hidroxila no lugar da metoxila em C4’ e C5’melhora a atividade; b) a hidroxila e o açúcar em C3 diminui a atividade; c) A metoxila em C3 e em C7 aumenta a atividade. No grupo dos pterocarpanos a metoxila em C2 potencializa a atividade citotóxica. Como o composto 2,3,9- trimetoxipterocarpano apresentou os melhores resultados em ambos os ensaios, foram realizados ensaios para estudo do mecanismo de ação apenas dos pterocarpanos não prenilados, na tentativa de entender a influência dos grupos sobre a atividade. Todos os pterocarpanos testados reduziram a viabilidade celular por azul de tripan nas concentrações testadas, exceto o composto 3,10- dihidroxi-9-metoxipterocarpano na concentração de 12,5 micrograma/mL. Também inibiram a síntese de DNA e causaram alterações morfológicas nas células sugestivas de apoptose para o composto 2,3,9-trimetoxipterocarpano. Nos ensaios que avaliam a indução da apoptose o composto 2,3,9-trimetoxipterocarpano causou fragmentação do DNA, despolarização da mitocôndria e manutenção da integridade da membrana celular, achados característicos da apoptose. Já os outros compostos induziram, além de fragmentação do DNA, perda da integridade da membrana plasmática nas maiores concentrações, indicando morte celular por necrose. Com base nesses resultados podemos concluir que o grupamento metoxila em C2 constitue uma importante unidade farmacofórica para os pterocarpanos, que apontam como um grupo com elevado potencial antitumoral.

MAGALHÃES, Hemerson Iury Ferreira. Atividade antitumoral in vitro e in vivo das fisalinas B e D isoladas da Physalis angulata Lin. 2005. 118 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-02T16:33:21Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_hifmagalhães.pdf: 2442734 bytes, checksum: 7f6232f80f4f580fef80227118698302 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-04T11:27:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_hifmagalhães.pdf: 2442734 bytes, checksum: 7f6232f80f4f580fef80227118698302 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-04T11:27:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_hifmagalhães.pdf: 2442734 bytes, checksum: 7f6232f80f4f580fef80227118698302 (MD5) Previous issue date: 2005 / The present study describes the phytochemical analysis of the chloroform and ethyl acetate partitions obtained from the ethanol extract of Physalis angulata L. (Solanaceae). The sílica gel chromatography resulted on the separation of 5 whytaesteroids (physalina D, B, F, 5-a-etoxi-6-b-hidroxi-5,6-dihidrophysalin B, E and a semi-synthetic physalin named as 5-a-etóxi-6-b-hidróxi-2,3,5,6-tetrahidrophysalin B). The physalins were evaluated for their cytotoxic potentials on 9 tumor cell lines (CEM, HL-60, PC-3, HCT-8, MDA-MB-231, MDA-MB 435, K-562, MCF-7, B-16), on the embryogenesis of sea-urchin eggs and for its lytic capacity in erythrocytes. Antitumoral activity in vivo was observed on a mouse model inoculated with Sarcoma 180. The physalins showed a promising cytotoxic effect, being physalin D the most active on the cell lines (IC50 < 3,0 mg/mL). The physalins D, B, F, 5-a-etoxi-6-b-hidroxi-5, 6-dihidrophysalin B inhibited the progression of the sea-urchin embryo’s cell cycle within a concentration under 30 µg/mL. On the 1st cleavage and blastulae stages, physalin D showed to be the most active, with the respective IC50 of 4.786 and 5.498 µg/mL. On 3rd cleavage, physalin B presented an IC50 of 5.308 µg/mL. None of the physalins showed any sings of lytic activity in concentrations as high as 200 µg/mL. The study about the physalins effects upon cell viability (trypan blue daye) and death mechanisms on HL-60 cells (EB/AO staining) suggests that physalins B and D were the strongest inducers of apoptosis. Physalin D also induced cellular necrosis on a rather intense level. Physalin B, on doses of 10 and 25 mg/Kg, inhibited tumor growth on 44 e 52%, respectively, while physalin D inhibited tumor growth on 45% in both treatments. The antitumor activity in vivo was related to the lowest proliferation rate, as evaluated by the Ki-67 antibody marker. The histopathological analysis of kidney and liver suggests that those organs are affected, in a reversible manner, on mice treated with physalins. / Physalis angulata L. (Solanaceae) é uma planta considerada daninha conhecida popularmente como Camapu, dispersa em vários estados do Brasil e em vários continentes. O presente trabalho relata o estudo fitoquímico dos extratos: clorofórmico e acetato de etila, oriundos do extrato etanólico das partes aéreas de Physalis angulata L. A cromatografia em sílica gel resultou na separação de cinco vitaesteróides (fisalinas D, B, F, 5-a-etóxi-6-b-hidróxi-5,6-diidrofisalina B, E, e uma fisalina semi-sintética denominada de 5-a-etóxi-6-b-hidróxi-2,3,5,6-tetrahidrofisalina B). As cinco fisalinas foram avaliadas quanto ao potencial citotóxico em 9 linhagens de células tumorais (CEM, HL-60, PC-3, HCT-8, MDA-MB-231, MDA-MB 435, K-562, MCF-7, B-16), sobre o desenvolvimento de embriões de ouriço do mar e quanto à sua capacidade hemolítica. A atividade antitumoral in vivo para as fisalinas B e D foi avaliada em camundongos inoculados com o tumor sarcoma 180. As fisalinas apresentaram uma promissora atividade citotóxica, sendo que a fisalina D foi a mais ativa sobre as células tumorais com uma CI50 < 3,0 µg/mL. As fisalinas D, B, F, 5-a-etóxi-6-b-hidróxi-5,6-diidrofisalina B, inibiram o desenvolvimento embrionário em uma concentração < 30 µg/mL, entretanto, na 1ª. divisão e na blástula, a fisalina D (PA-1), novamente foi a mais ativa, com CI50 = 4.786 e 5.498 µg/mL, respectivamente. Na 3ª divisão, a fisalina B (PA-2) mostrou uma CI50 de 5.308 µg/mL. Nenhuma fisalina apresentou atividade hemolítica na máxima concentração testada (200 µg/mL). O estudo dos efeitos das frações sobre a viabilidade (exclusão por azul de tripan), e indução de morte (coloração por BE/LA) nas células HL-60 demonstrou que principalmente a fisalina B e D (10 µg/mL) foram as mais fortes indutoras do fenômeno apoptótico. Porém, fisalina D (15 µg/mL) apresentou elevado perfil na indução de necrose celular. As fisalinas D e fisalina B nas doses de 10 e 25 mg/Kg apresentaram potencial de inibição do crescimento tumoral correspondente a 45% em ambas as doses para a fisalina D e de 44 e 52%, respectivamente para a fisalina B. Esta atividade antitumoral in vivo foi relacionada à inibição da taxa de proliferação do tumor, como observado pela marcação através do anticorpo Ki-67. A análise de histopatológica de rim e fígado mostrou que ambos os órgãos foram moderadamente afetados após o tratamento com as fisalinas, mas de uma maneira reversível.

BEZERRA, Daniel Pereira. Estudo das propriedades anticâncer da piplartina. 2008. 274 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-06T15:25:14Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_dpbezerra.pdf: 2542400 bytes, checksum: 859ced20597360fa2f01b6c9228aa8b3 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-06T15:48:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_dpbezerra.pdf: 2542400 bytes, checksum: 859ced20597360fa2f01b6c9228aa8b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-06T15:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_dpbezerra.pdf: 2542400 bytes, checksum: 859ced20597360fa2f01b6c9228aa8b3 (MD5) Previous issue date: 2008 / Piplartine is a known alkaloid/amide from Piper species with interesting cytotoxic properties. In order to understand the antineoplasic potential of piplartine, a pharmacological study was performed in several biological models. Piplartine displayed potent cytotoxicity against all cancer cell lines. By comparing the cytotoxicity of selected molecules that differ in structural elements, it was identified that the presence of the α,β-unsaturated carbonyl moiety of the amide ring is an important structural requirement for cytotoxic activity. In healthy peripheral blood mononuclear cells exposed to piplartine, it was observed only weak cytotoxic activity. Moreover, piplartine treatment induced apoptosis in HL-60 cells, by the intrinsic pathway, in a dose-dependent manner, as observed by morphology and cytoplasmatic membrane integrate changes, alteration in mitochondrial membrane potential and an increase in internucleosomal DNA fragmentation. In the cell cycle analysis, piplartine induced G2 cell cycle arrest. Piplartine treatment induced DNA strand breaks in V79 cells, as detected by neutral and alkaline comet assay. Its genotoxic mechanism of action seems to be similar to its cytotoxic activity. No mutagenic effect, with or without metabolic activation (S9 mix), in Salmonella strains (prokaryotic model) was observed under experimental conditions. On the other hand, piplartine was mutagenic and recombinogenic in Saccharomyces cerevisiae assays (eukaryotic model). This can be explained due to the differences in physiological between eukaryote and prokaryote DNA topoisomerase II, reflecting a possible interference of piplartine upon this enzyme activity. In vivo micronucleus test, piplartine increased in the levels of micronuclei in the highest dose tested (100 mg/kg). Nevertheless, no bone marrow cytotoxicity was found after piplartine-treated animals as observed by the polychromatic/normochromatic erythrocyte ratio. In pharmacokinetic study, a LC–MS/MS bioanalytical method for the determination of piplartine in rat plasma was established. The method developed shows great linearity and low quantification limit; precision and accuracy were within the acceptable ranges for bioanalytical purposes. In the concentration–time profiles, piplartine showed absorption kinetic of a monocompartimental model. Additionally, the plasma levels are compatible with the in vitro cytotoxicity which leads us to propose that the anticancer activity of piplartine is due to its direct cytotoxic properties. In antitumor assay, the combination of piplartine with 5-fluourouracil led to an in vitro and in vivo increasing of the tumor growth inhibition. In addition, hematological analysis showed leukopenia after 5-fluourouracil treatment, which was reversed by the combined use of piplartine. These data suggest that piplartine has promising anticancer potential / A piplartina é um alcalóide/amida conhecido encontrado em espécies do gênero Piper com propriedade citotóxica interessante. Para avaliar o seu potencial antineoplásico, um estudo farmacológico de suas propriedades anticâncer foi realizado em vários modelos biológicos. A piplartina apresentou potente atividade citotóxica em todas as linhagens tumorais testadas. Por comparação da citotoxicidade de moléculas com estruturas relacionadas com a piplartina, foi identificado que a presença da carbonila α,β-insaturada do anel amídico é essencial para a sua atividade citotóxica. Em células mononucleares de sangue periférico de doadores saudáveis expostas a piplartina, foi observada apenas fraca atividade citotóxica. Adicionalmente, a piplartina induziu apoptose em células leucêmicas HL-60, com participação da via intrínseca, de maneira dependente da concentração, como observado pelo padrão de morfologia celular, integridade da membrana citoplasmática, alteração no potencial transmembrânico da mitocôndria e aumento da fragmentação do DNA. Na análise do ciclo celular, foi observado bloqueio na fase G2. A piplartina foi capaz de induzir dano ao DNA em células V79, como observado pelo ensaio do cometa alcalino e neutro. Seu mecanismo de ação genotóxico parece ser semelhante ao da sua atividade citotóxica. Não foi observada atividade mutagênica, com ou sem ativação metabólica (S9), nas linhagens de Salmonella (modelo procariótico) testadas. Por outro lado, a piplartina foi mutagênica e recombinogênica em linhagens de Saccharomyces cerevisiae (modelo eucariótico). Isto pode ser explicado pela diferença fisiológica entre a enzima topoisomerase II de eucarióticos e procarióticos, refletindo uma possível interferência da piplartina sobre a atividade desta enzima. No ensaio do micronúcleo in vivo, a piplartina induziu aumento da freqüência de micronúcleo na maior dose testada (100 mg/kg). Entretanto, não alterou a proporção de eritrócitos policromáticos/normocromáticos. Em estudo farmacocinético, um método bioanalítico por LC-MS/MS foi desenvolvido e validado para a quantificação da piplartina em plasma de ratos. O método apresentou-se linear, sensível, preciso e exato. No estudo de disposição cinética, a piplartina apresentou um perfil de absorção típico de um modelo monocompartimentado. Adicionalmente, os níveis plasmáticos são compativeis com o valor obtido na citotoxicidade in vitro o que nos leva a propor que a atividade anticâncer da piplartina deve-se as suas propriedades citotóxica direto. No ensaio de atividade antitumoral, a combinação da piplartina com o 5-fluourouracil levou a um aumento da inibição do crescimento in vitro e in vivo. Além disso, análises hematológicas mostraram leucopenia após tratamento dos animais com o 5-fluourouracil, o qual foi revertido pela combinação com a piplartina. Esses dados sugerem que a piplartina apresenta um potencial anticâncer promissor