Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CamilaRG_Parcial.pdf: 158507 bytes, checksum: 013883c6921cd038ab4e057b7304b25f (MD5) Previous issue date: 2009-07-30 / The Chagas disease is a infectious and parasite disease that has as the causative agent a Trypanosoma cruzi, a protozoan parasite that can be transmitted to humans by the faeces of triatomines ( barbeiros ) in the blood-sucking. To understand the relationship between factors associated with chagasic infection and the risk of transmission of Trypanosoma cruzi, this work aimed to make a correlation between the results of serology, obtained by different immunological techniques, used for diagnosis of Chagas disease and risk factors to which the population of the city of Apodi-RN is exposed, to be considered a endemic area. The case-control study was conducted with 199 individuals, which initially was applied a questionary about socio-economic questions and some risk factors which they were exposed and also favor the spread of disease. Then was given the diagnosis by immunological techniques of serology by indirect hemagglutination, ELISA and indirect immunofluorescence. From the diagnosis, the subjects were divided into case group (presence of infection) and control group (no infection). Regarding the descriptive characteristics of the sample, were found a higher frequency of female individuals (59.3%), between 36 and 50 years of age (36.7%), with low education level (91%) and income monthly up to 1 minimum wage (67.8%). The serology, performed by three techniques of different principles, had a reactivity of 38.9% by Indirect Hemagglutination, 39.7% by ELISA and 38.7% by Indirect Immunofluorescence. As the result of the serology, 71 of samples showed reactivity in 2 or more techniques. On some risk variables, was found a significant relationship between individuals who had been bitten by the triatomines and had positive serology for Chagas disease (93.3%). Other variables of risk revealed individuals who had positive serology and had domestic animal (80.3%), lived in poorly maintained homes (97.2%) and near the forest (84.5%). A better understanding of the dynamics of transmission of T. cruzi and the risk factors that contribute to its occurrence in a region are needed to develop effective strategies for control of Chagas disease in these ?reas / A doen?a de Chagas humana ? uma doen?a infecciosa e parasit?ria que tem como agente etiol?gico o Trypanosoma cruzi, um parasita protozo?rio que pode ser transmitido aos humanos pelas fezes dos triatom?neos ( barbeiros ) no ato do hematofagismo. Ao perceber a rela??o existente entre fatores associados ? infec??o chag?sica e os riscos de transmiss?o do Trypanosoma cruzi, este trabalho teve como objetivo fazer uma correla??o entre os resultados da sorologia, obtidos por t?cnicas imunol?gicas diferentes, utilizadas para o diagn?stico da doen?a de Chagas e os fatores de risco aos quais a popula??o do munic?pio de Apodi-RN encontra-se exposta, por ser considerada uma ?rea end?mica. O estudo do tipo Caso-Controle foi realizado com 199 indiv?duos, aos quais, inicialmente foi aplicado um question?rio abordando par?metros epidemiol?gicos e fatores de risco que favorecem a dissemina??o da doen?a. Em seguida, foi dado o diagn?stico imunol?gico por sorologia pelas t?cnicas de Hemaglutina??o Indireta, ELISA e Imunofluoresc?ncia Indireta. A partir do diagn?stico, os indiv?duos foram divididos em grupo caso (presen?a de infec??o) e grupo controle (aus?ncia de infec??o). Em rela??o ? caracteriza??o descritiva da amostra, foi encontrada uma maior freq??ncia de indiv?duos do sexo feminino (59,3%), entre 36 50 anos (36,7%), com baixo grau de escolaridade (91%) e renda mensal de at? 1 sal?rio m?nimo (67,8%). A sorologia, feita por tr?s t?cnicas de princ?pios diferentes, apresentou uma reatividade de 38,9% por Hemaglutina??o Indireta, 39,7% por ELISA e 38,7% por Imunofluoresc?ncia Indireta. Quanto ao resultado da sorologia, 71 das amostras estudadas apresentou reatividade em 2 ou mais t?cnicas utilizadas. Sobre algumas vari?veis de risco, foi encontrada uma rela??o significativa entre indiv?duos que tinham sido picados pelo barbeiro e apresentavam sorologia positiva para doen?a de Chagas (93,3%). Outras vari?veis de risco revelaram indiv?duos que apresentaram sorologia positiva e que tinham animal dom?stico (80,3%), moravam em casas mal conservadas (97,2%) e pr?ximo ? mata ou floresta (84,5%). Um melhor entendimento da din?mica de transmiss?o do Trypanosoma cruzi e os fatores de risco que contribuem para o seu aparecimento em uma determinada regi?o s?o necess?rios para o desenvolvimento de efetivas estrat?gias de controle da doen?a de Chagas nessas ?reas

Vem se verificando uma crescente preocupação por parte de diversos países e de órgãos internacionais de saúde e conservação animais quanto à necessidade de monitoramento da ocorrência e da distribuição de enfermidades infecciosas em populações de animais silvestres, devido ao potencial destas doenças de causarem impacto na dinâmica e conservação de espécies silvestres, na saúde dos animais domésticos e na saúde pública. A ocorrência de brucelose vem sendo relatada em diversas espécies de mamíferos marinhos, em vários centros de pesquisa no mundo, contudo, não há dados na literatura científica sobre a ocorrência desta infecção em mamíferos aquáticos fluviais brasileiros. Nos cetáceos, a brucelose é causada pela Brucella ceti, sendo associada a problemas reprodutivos, quadros de meningoencefalite e infecções em tecidos linfóides. Assim, o presente trabalho teve como objetivo pesquisar a ocorrência de infecção por Brucella spp. em botos-vermelhos de vida livre da Amazônia (Inia geoffrensis), procedentes da Reserva de Desenvolvimento Sustentável de Mamirauá, Tefé, Amazonas, Brasil. A pesquisa foi realizada em animais de vida livre, de ambos os sexos e várias idades, sendo realizadas duas expedições para colheita de amostras, nos anos de 2010 e 2011. De cada animal foram coletadas amostras de sangue, leite e suabes genital, anal, nasal, oral e de eventuais lesões cutâneas apresentadas. Um total de 161 animais foi capturado. A detecção de anticorpos séricos anti-Brucella foi realizada utilizando-se as provas de soroaglutinação com antígeno acidificado tamponado (AAT), teste do 2-mercaptoetanol (2-ME) e o teste de polarização fluorescente (PF). As amostras de leite e de suabes foram submetidos ao cultivo microbiológico e à reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detecção direta de Brucella spp. As colônias bacterianas que apresentaram características morfológicas compatíveis com Brucella spp. foram identificadas pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se os primers específicos para detecção do gênero Brucella, direcionados ao DNA codificador da região interespaçadora do RNA ribossomal de Brucella (PCR-ITS). As amostras que apresentaram resultados positivos, foram caracterizadas quanto ao gene recA pela amplificação (PCR-recA) e posterior sequenciamento do produto amplificado. A PCR-ITS também foi empregada para o diagnóstico direto das infecções por Brucella spp. nas amostras de sangue, leite e suabes, as quais foram caracterizadas da mesma forma que as colônias bacterianas isoladas. As 67 amostras de soros colhidas apresentaram resultados negativos nos testes de AAT, PF e IDGA. Das 369 amostras submetidas ao cultivo microbiológico, duas amostras de suabe apresentaram características compatíveis com o gênero Brucella e resultados positivos pela PCR-ITS. Uma delas foi identificada como pertencendo à espécie Ochrobactrum intermedium. A segunda amostra não pôde ser caracterizada por não ter sido obtida em cultura pura. Das 118 amostras de sangue total analisadas pela PCR-ITS, seis (7,08%) apresentaram resultados positivos. Das 248 amostras de suabes analisadas pela PCR-ITS, uma (0,4%) apresentou resultado positivo. Das 29 amostras de leite analisadas pela PCR-ITS, cinco (17,24%) apresentaram resultados positivos. Considerando os 128 animais amostrados, 11 (8,59%) apresentaram resultado positivo pela PCR-ITS em pelo menos uma amostra testada. Das 12 amostras biológicas que apresentaram resultados positivos pela PCR-ITS e foram submetidas à PCR-recA, apenas duas apresentaram o produto amplificado no tamanho esperado. De acodo com a análise filogenética utilizada, uma delas apresentou similaridade aos microrganismos Cellulomonas fimi, Cellulomonas flavigena e Cellvibrio gilvus. A segunda amostra foi agrupada juntamente com as bactérias Propionicimonas paludicola, Micropruina glycogenica, Naumannella halotolerans e Propionibacterium propionicum com maior proximidade com a espécie P. propionicum. De acordo com os resultados apresentados, não foi evidenciada a ocorrência de infecções por Brucella spp. na população amostrada pelos métodos sorológicos e microbiológicos. Foi isolada uma estirpe de Ochrobactrum intermedium de um exemplar da espécie Inia geoffrensis, contudo, a importância sanitária destes resultados para esta espécie de boto não pôde ser determinada. / There is a growing concern among several countries and international institutions of animal health and conservation regarding the surveillance of infectious diseases in wildlife populations, because these infections may cause impact on the dynamics and conservation of wildlife species, as well as on the health of livestock and public health. Brucellosis has been reported in several species of marine mammals in various research centers worldwide. However, there is no data about the occurrence of brucellosis in aquatic mammals in Brazil. Brucellosis in cetacean is caused by Brucella ceti and has been associated to reproductive problems, meningoencephalitis and lymphoid tissues infections. The objective of this study was to investigate the occurrence of Brucella spp. infection in free living amazon river dolphin (Inia geoffrensis), from Mamirauá Sustainable Development Reserve, in Tefé municipality, Amazonas State, Brazil. Samples were collected from free-living animals from both sexes and different ages during two expeditions, in 2010 and 2011. Samples of serum, whole blood and milk as well as genital, anal, nasal, oral and cutaneous lesions swabs were collected. One hundred and sixty one animals were samples. Serodiagnosis was performed using the acidified buffered antigen test (ABAT), the 2-mercaptoethanol (2ME) test and the fluorescent polarization assay (FPA). Milk and swabs samples were submitted to microbiological culture and polymerase chain reaction (PCR) to the direct diagnosis of Brucella spp. Bacterial colonies showing morphologies compatible with Brucella spp. were tested by a PCR using specific primers directed to the 16S-23S interpace region of the ribosomal DNA of Brucella (ITS-PCR). Samples with positive results by ITS-PCR were amplified using primers specific to the gene recA (PCR-recA), and the amplicon was sequenced. ITSPCR was also used to diagnosis of Brucella spp. infections directly in samples of blood, milk and swabs which were characterized as the bacterial colonies. All 67 serum samples were negative in the three serological tests used. Eleven of the 128 (8.59%) animals showed positive results by ITS-PCR in at least one biological sample. Of the 369 samples tested by microbiological culture, two had positive results in ITS-PCR. Accroding to the characterization of recA gene, one of them was identified as Ochrobactrum intermedium and the other sample could not be characterized because it was not isolated in pure culture. Of the 118 whole blood samples, six (7.08%) were positive by ITS-PCR. Five of the 248 (17.24%) milk samples and one of the 248 (0.4%) swab samples were positive by ITS-PCR. Of the 12 psoitive samples by ITS-PCR, only two were amplified by the recA-PCR and sequenced. According to the phylogenetic analysis, one sample clustered with Cellulomonas fimi, Cellulomonas flavigena e Cellvibrio gilvus group showing major similarity with C. fimi. The other sample clustered with the bacteria Propionicimonas paludicola, Micropruina glycogenica, Naumannella halotolerans, being more similar to Propionibacterium propionicum. An Ochrobactrum intermedium strain was isolated from a dolphin, however, the sanitary importance of the detection could not be determined.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-18T19:05:14Z No. of bitstreams: 1 Andréia Carvalho dos Santos. Diagnostico sorologico...2011.pdf: 1884519 bytes, checksum: 6aff70f55415c00ce177ca938c909c5e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-18T19:05:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andréia Carvalho dos Santos. Diagnostico sorologico...2011.pdf: 1884519 bytes, checksum: 6aff70f55415c00ce177ca938c909c5e (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A confirmação da leptospirose utilizando o Teste de Aglutinação Microscópica (MAT) requer amostras da fase aguda e convalescente para identificar soroconversão ou aumento de quatro vezes nos títulos. A Organização Mundial de Saúde (OMS) recomenda que a coleta da amostra convalescente seja realizada ≥14 dias após a coleta da amostra aguda. No entanto, a dificuldade na coleta de amostras convalescentes impede a confirmação dos casos e é uma das principais causas para sub-notificação da leptospirose. Este estudo investigou a viabilidade da coleta de uma amostra de soro aguda tardia de casos internados com leptospirose e avaliou se a análise sorológica desta amostra pode melhorar a eficiência do protocolo de confirmação diagnóstica de leptospirose. De 2003 a 2009, uma vigilância hospitalar ativa em Salvador-Brasil, identificou prospectivamente pacientes hospitalizados com suspeita clínica da leptospirose. Três amostras de sangue foram coletadas para cada caso: uma amostra aguda precoce, uma amostra aguda tardia e uma amostra convalescente, coletadas respectivamente nas primeiras 24 horas após hospitalização, e 4 e ≥14 dias depois da coleta da primeira amostra. Os pacientes identificados tiveram o diagnóstico de leptospirose confirmado por soroconversão, aumento de quatro vezes de títulos, ou título único ≥1:800 no MAT. O desempenho diagnóstico do MAT e do ELISA IgM na avaliação combinada das amostras aguda precoce e aguda tardia foi comparado ao desempenho da avaliação das amostras aguda precoce e convalescente que segue a recomendação de testagem da OMS. Nós confirmamos 643 (68%) dos 938 casos suspeitos. A coleta de amostra convalescente foi possível para 63% dos pacientes confirmados, e 55% dos pacientes suspeitos. Em contraste, a amostra da fase aguda tardia foi coletada para 77% e 66% dos pacientes confirmados e suspeitos, respectivamente. Para os 302 casos confirmados que tiveram as três amostras de soro coletadas, a sensibilidade do MAT e do IgM-ELISA na análise das amostras aguda precoce e tardia foi de 97% (IC95%, 94-99%) e 96% (93-98%), respectivamente, em comparação aos resultados da análise das amostras aguda precoce e convalescente. Em contraste, considerando apenas as amostras agudas destes 302 pacientes, a sensibilidade do MAT e do IgM-ELISA foi de 44% (38-50%) e 75% (69-79%), respectivamente. Amostra aguda tardia e convalescente foi obtida dos casos suspeitos de leptospirose que evoluíram para óbito de 32% e 6%, respectivamente. Os resultados indicam que a coleta e o teste sorológico da amostra aguda tardia de pacientes hospitalizados por leptospirose é viável e melhora a eficiência dos atuais protocolos de confirmação laboratorial de casos de leptospirose. / Confirmation of leptospirosis with MAT requires evaluating acute and convalescent-phase sera samples to identify seroconversion or fourfold rise in titers. Current World Health Organization (WHO) protocols recommend that convalescent samples are collected with ≥14days after the acute sample collection. However, the difficulty in collecting convalescent samples hampers case confirmation and is a major cause for leptospirosis under-reporting. This study evaluated feasibility of collecting a late acute-sera sample from hospitalized cases of leptospirosis and determined to serological analysis of this sample can improve the efficiency of the protocol to confirm the diagnosis of leptospirosis. From 2003 to 2009, active hospital-based surveillance in Salvador-Brazil prospectively identified hospitalized cases of patients with clinical suspicion of leptospirosis. Three blood samples were collected for each case: an early acute sample, a sample of late acute and convalescent sample collected during the first 24 hours after hospitalization 4 and ≥ 14 days after the first sampling, respectively. The identified patients were diagnosed with leptospirosis by seroconversion, fourfold rise in titers, or a titer ≥1:800 in the MAT. The diagnostic performance of the MAT and IgM ELISA in the combined sample of early acute and late acute sample performance was compared to the early assessment of acute and convalescent samples following a WHO recommendation for testing. We confirmed the leptospirosis diagnosis in 643 (68%) of 938 suspected cases. Convalescent-phase samples were collected from 63% of the confirmed patients, but in only 55% of the suspected cases. In contrast, the late acute phase sample was collected for 77% and 66% of confirmed and suspected patients, respectively. Among the 302 confirmed cases which all three samples were obtained, the sensitivity of MAT and IgM-ELISA was 97% (IC95%, 94-99%) and 96% (93-98%), respectively, when results of early and late acute-phase samples were evaluated in comparison to the results of the early acute and convalescent samples. In contrast, the sensitivity of MAT and IgM-ELISA was 44% (38-50%) and 75% (69-79%), respectively, when only a single early acute-phase sample was evaluated. Late acute-phase and convalescent-phase samples were obtained from 32% and 6% of the suspected leptospirosis and deaths, respectively. These findings indicate that collection and serologic testing of a late-acute-phase sample among hospitalized patients with suspected leptospirosis may significantly increase the efficiency of protocols for laboratory case confirmation.

Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2014-08-01T13:26:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Claudia.pdf: 3475820 bytes, checksum: 6332703f9ff4576a262fa833bd645549 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-01T13:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Claudia.pdf: 3475820 bytes, checksum: 6332703f9ff4576a262fa833bd645549 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Bio-Manguinhos / A AIDS é um problema mundial de Saúde Pública. Com a necessidade de ampliar o acesso ao diagnóstico laboratorial da infecção causada pelo HIV, foi incentivado pelo Ministério da Saúde o desenvolvimento de testes de elevada sensibilidade e especificidade, além de baixo custo para uso em rotina, visando a detecção de anticorpos para o HIV no sangue humano. Esses testes sorológicos são instrumentos para auxiliar no diagnóstico clínico, na proteção do suprimento de sangue e no monitoramento da infecção pelo HIV. Bio-Manguinhos, Unidade Técnica da Fiocruz, voltada para o desenvolvimento e produção de imunobiológicos, biofármacos e reativos para diagnóstico, tem estimulado o estabelecimento de plataformas tecnológicas que permitam o desenvolvimento e a incorporação de novos produtos e processos para a Saúde Pública. Na presente avaliação, amostras de plasma de indivíduos soropositivos e negativos para a infecção pelo HIV e de doadores de sangue, além de um painel comercial de título misto para anticorpos contra o HIV, foram utilizadas na validação de reagentes e insumos disponíveis no mercado nacional em comparação aos importados, em uso, atualmente, na produção do tampão de corrida do Teste Rápido para Diagnóstico de HIV-1/2, de Bio-Manguinhos. O desempenho do tampão de corrida que compõe esse kit, formulado com insumos importados, frente ao tampão preparado com produtos encontrados no mercado nacional foi o mesmo, com relação à intensidade da linha teste e ao tempo da visualização da linha controle, a partir da adição da amostra e do referido tampão de corrida. No presente estudo foi verificado que não houve diferença estatística entre os reagentes analisados em um nível de significância de α=0,05. Além disso, todos os ensaios apresentaram percentuais de sensibilidade e especificidade de 100%, sugerindo que os reagentes nacionais podem ser utilizados em substituição aos importados, sem prejuízo no desempenho da reação imunológica inerente ao processo. Neste estudo não foram verificadas diferenças significativas no custo dos sete reagentes nacionais (Cloreto de sódio; Soro de Galinha; Sulfato de estreptomicina; Tween 20; EDTA Dissódico; Fosfato de Sódio Dibásico e EDTA Tetrassódico) avaliados frente aos importados. Sendo assim, de forma preliminar, podemos dizer que os reagentes nacionais apresentam o mesmo desempenho em relação aos importados, minimizando desta forma, os entraves burocráticos, permitindo maior agilidade no ato da compra e contribuindo para reduzir o período de espera da chegada do produto para o prosseguimento do processo produtivo do kit Teste Rápido por Bio-Manguinhos. / AIDS is a global problem of Public Health. With the need to expand access to the laboratory diagnosis of HIV infection it was encouraged by the Ministry of Health the development of tests of high sensitivity, specitivity and low cost for routine, in order to detect antibodies to HIV in human blood. These serological tests are important tools in clinical diagnosis, have in protecting the blood supply and in monitoring of HIV/AIDS. Bio-Manguinhos, a Technical Unit of Fiocruz on development and manufacturing of immunobiological, biopharmaceutical and reagents for diagnosis, have encouraged the establishment of technological platforms for the development and incorporation of new products and processes for Public Health. In the present study clinical samples from seropositive and nonreactive individuals for the HIV/AIDS infection and blood donors samples together with a mixed titer commercial panel were used in the validation of reagents and supplies obtained in internal market compared to those imported products currently used in the production of the running buffer of Rapid Test for Diagnosis of HIV – 1 / 2 Bio-Manguinhos. The performance of the running buffer of the kit, formulated with imported reagents in comparison with products found in the internal market was the same with respect to the intensity of the test line and to the time line view of control, from the moment of sample and the running buffer addition. In the study it was found that within a range of 95% there was no statistical difference between the reagents tested in α=0,05 significance level. Moreover, all the tests presented sensitivity and specificity percentages of 100% suggesting that the reagents obtained in the internal market may be used to replace imported ones without impairing performance of the immune response inherent to the process. In this study no significant differences in the cost of the seven reagents tested were observed (national or imported ones). Thus, in a preliminary way one can say that national reagents have the same performance in relation to those imported, thus minimizing the bureaucratic obstacles, allowing greater flexibility in the purchase and contributing to reduce the period for the arrival of the product the communication of the productive process Test Kit Rapid Bio-Manguinhos.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Mestrado (Priscila dos Santos).pdf: 1949971 bytes, checksum: 5d2bfc6944be7acb2dd8d954eea44bdd (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O diagnóstico da toxoplasmose baseia-se principalmente, na detecção de anticorpos específicos em soro de pacientes, por meio de ensaios sorológicos. As maiores limitações referem-se à alta prevalência de anticorpos de IgG e IgM persistentes por longos períodos, dificultando o diagnóstico da infecção aguda. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar o desempenho da imunofluorescência indireta por citometria de fluxo para a pesquisa de anticorpos anti-taquizoítas fixados (AATF) de T. gondii e avidez de IgG no sorodiagnóstico da toxoplasmose aguda humana. Foram analisadas amostras de pacientes com toxoplasmose aguda (AG), crônica (CR), indivíduos não-infectados (NI) e pacientes portadores de outras doenças. A pesquisa de AATF IgM permitiu segregar os grupos AG e CR utilizando a diluição de soro 1:32.000 e ponto de corte (PC) de 40% de porcentagem de parasitos fluorescentes positivos (PPFP), com sensibilidade de 100% e especificidade de 90%. Na avaliação da reatividade cruzada de IgM foram encontrados resultados falso-positivos, apenas para pacientes portadores de malária e mononucleose infecciosa. Entretanto, a pesquisa de AATF IgG, utilizando PC de 10% PPFP e diluição do soro de 1:32.000 permitiu segregar apenas os grupos AG e NI, com 93,3% de sensibilidade e 100% de especificidade. Quanto à pesquisa de AATF subclasses de IgG, as diluições séricas escolhidas aplicadas no diagnóstico da toxoplasmose aguda, utilizando como controle o grupo NI foram 1:32.000 para IgG1, 1:400 para IgG2, 1:2.000/1:8.000 para IgG3 e 1:400/1:1.600 para IgG4 e PC de 10% PPFP, para todas as subclasses. Entretanto, apenas AATF IgG2 e AATF IgG4 apresentaram 100% de sensibilidade e especificidade. A pesquisa da avidez de IgG quando aplicada na segregação dos grupos AG e CR, apresentou 100% de sensibilidade e especificidade. Utilizando-se a pesquisa de AATF IgM como ensaio inicial, e avidez de IgG como ensaio confirmatório, foi possível estabelecer o diagnóstico da toxoplasmose aguda. Os índices de desempenho demonstraram melhor desempenho da pesquisa de anticorpos IgM anti-T. gondii e avidez de IgG por citometria de fluxo do que pelo sistema VIDAS® TOXO (ELFA Enzyme Linked Fluorescente Assay) no diagnóstico da toxoplasmose aguda. Esses resultados demonstram a aplicabilidade da citometria de fluxo para pesquisa de anticorpos anti-T. gondii, como uma importante ferramenta no diagnóstico da toxoplasmose aguda. / The diagnosis of toxoplasmosis is based mainly on the detection of specific antibodies in sera of patients by serological tests. The major limitations of these tests are the high prevalence of IgG and IgM antibodies, which persist for long periods of time, hampering the diagnosis of acute infection. Therefore, the objective of this study was to evaluate the performance of an indirect immunofluorescence assay based on flow cytometry for the detection of the reactivity of anti-fixed tachyzoites antibodies (AFTA) of T. gondii and IgG avidity in the serodiagnosis of human acute toxoplasmosis. Serum samples from patients with acute toxoplasmosis (AC), chronic toxoplasmosis (CHR), non-infected individuals (NI), and patients with other diseases were analyzed. The analysis of AFTA IgM allowed to segregate groups AC and CHR using a serum dilution of 1:32,000 and a percentage of positive fluorescent parasites (PPFP) of 40% as cut off, resulting in 100% and 90% of sensitivity and specificity, respectively. However, the analysis of AFTA IgG using a PPFP of 10% as cut off and a serum dilution of 1:32,000 allowed to segregate only the group AC and NI, with 93,3% of sensitivity and 100% of specificity. The serum dilutions applied on the study of AFTA IgG subclasses in the diagnosis of acute toxoplasmosis using NI as control group were: 1:32,000 for IgG1, 1:400 for IgG2, 1:2,000 and 1:8,000 for IgG3, and 1:400 and 1:1,600 for IgG4. It was used a PPFP of 10% as a cut off for all subclasses. Moreover, only AFTA IgG2 and AFTA IgG4 showed 100% of sensitivity and specificity. The analysis of IgG avidity when to groups AC and CHR, showed 100% of sensitivity and specificity. Using the AFTA IgM as the initial test and IgG avidity as a confirmatory test, it was possible to establish the diagnosis of human acute toxoplasmosis. The evaluation of IgM cross-reactivity demonstrated false-positive results only for patients with malaria and infectious mononucleosis. The detection of IgM anti-T. gondii antibodies and IgG avidity by flow cytometry showed a better performance in comparison to the VIDAS® TOXO (ELFA - Enzyme Linked Fluorescent Assay) in the diagnosis of acute toxoplasmosis. These results demonstrate the applicability of the detection of anti-T. gondii antibodies by flow cytometry and its importance in the diagnosis of human acute toxoplasmosis.

A Fibrose Cística (FC) é uma doença letal, de caráter autossômico recessivo, que acomete populações de diferentes etnias. A doença caracteriza-se pelo comprometimento sistêmico das glândulas exócrinas e, na maioria dos pacientes, a doença pulmonar acaba tornando-se a patologia predominante. A infecção por P. aeruginosa é a principal causa de mortalidade dos pacientes com FC. O Sistema de Secreção Tipo III da bactéria é expresso na fase aguda da doença e é responsável por injetar proteínas citotóxicas no interior da célula eucariótica. Há um grande interesse em se investigar a resposta de anticorpos anti P. aeruginosa em pacientes com FC a fim de diagnosticar a colonização e ou infecção pulmonar antes da cultura, permitindo a antibioticoterapia preventiva, a fim de se evitar a infecção pulmonar crônica. Nesta tese, investigamos a resposta de anticorpos (IgG+IgM+IgA) contra as proteínas do SSTT de P. aeruginosa, através do Western-Blot. Participaram do estudo 51 pacientes com FC, de 1.1 a 16.8 anos acompanhados no Departamento de Pneumologia do Instituto Fernandes Figueira - FioCruz, durante um período aproximado de 2 anos. De cada paciente foram coletadas de 1 a 4 amostras de sangue, com intervalo médio de 6 meses entre as coletas. O grupo controle negativo consistiu de 28 indivíduos não fibrocísticos, de 2 a 17 anos, atendidos no Hospital Universitário Pedro Ernesto - HUPE UERJ. As proteínas do SSTT foram extraídas das cepas PAO1 e PAOΔExsA (regulador da expressão do SSTT) de P. aeruginosa. Controles positivos e negativos foram utilizados em todas as reações. Para a identificação das proteínas do SSTT na reação utilizou-se antisoro de camundongos imunizados com a proteína recombinante PcrV. Doze (75%) dos 16 pacientes fibrocísticos considerados não infectados por P. aeruginosa tiveram a primeira sorologia positiva para PopB e 15 (93,75%) para ExoS/ExoT, indicando a colonização ou infecção por P. aeruginosa. Aproximadamente 25% e 35,7% dos soros do grupo controle mostraram reatividade fraca com PopB ou ExoS/ExoT, respectivamente. O tempo decorrido entre a primeira sorologia positiva e o primeiro isolamento de P. aeruginosa nestes pacientes variou de 18 a 30 meses. Concluindo, é possível fazer o diagnóstico sorológico da infecção pulmonar por P. aeruginosa antes do isolamento da bactéria pela cultura. / Cystic Fibrosis (CF) is a lethal disease of autosomal recessive character, which affects people of different ethnicities. The disease is characterized by the involvement of systemic exocrine glands and in most patients, the lung disease becomes the predominant pathology. The infection with P. aeruginosa is the leading cause of mortality in patients with CF. The Type III Secretion System (TTSS) of bacteria is expressed during acute disease and injects cytotoxic proteins inside the host cell. There is a great interesting in investigate the antibody response to P. aeruginosa in CF patients in order to diagnose a pulmonary infection or colonization before the culture. Then, preventive antibiotic treatment can be initiated before the installation of chronic lung infection. We investigated the antibody response (IgG + IgA + IgM) against TTSS proteins of P. aeruginosa by Western-blot. The study included 51 patients with CF, from 1.1 to 16.8 years attending the Pediatric Pulmonology Unit of Fernandes Figueira Institute (IFF) FIOCRUZ, Rio de Janeiro, for a period of approximately 2 years. Most patients had or 4 blood samples collected for antibody analyses. Samples were obtained with a mean interval of 6 months. The negative control group consisted of 28 non-CF individuals, from 2 to 17 years, attended at Pedro Ernesto University Hospital - HUPE - UERJ. The TTSS proteins were extracted from strains PAO1 and PAOΔExsA (regulator of TTSS proteins expression) of P. aeruginosa. Positive and negative controls were used in all reactions. For the identification of TTSS proteins in the reaction we used antisera from mice immunized with the recombinant protein PcrV. Twelve (75%) of 16 CF patients considered not infected by P. aeruginosa had their first serology positive for "PopB" and 15 (93.75%) for "ExoS/ExoT. These results indicated that these patients were colonized or infected by P. aeruginosa. About 25% e 35,7% of negative control sera showed a weak reactivity with PopB or ExoS, respectively. The time between the first positive serology and the first isolation of P. aeruginosa in these patients ranged from 18 to 30 months. In conclusion, it is possible to make a serological diagnosis of pulmonary infection by P. aeruginosa before the isolation of the bacterium by culture.

A Fibrose Cística (FC) é uma doença letal, de caráter autossômico recessivo, que acomete populações de diferentes etnias. A doença caracteriza-se pelo comprometimento sistêmico das glândulas exócrinas e, na maioria dos pacientes, a doença pulmonar acaba tornando-se a patologia predominante. A infecção por P. aeruginosa é a principal causa de mortalidade dos pacientes com FC. O Sistema de Secreção Tipo III da bactéria é expresso na fase aguda da doença e é responsável por injetar proteínas citotóxicas no interior da célula eucariótica. Há um grande interesse em se investigar a resposta de anticorpos anti P. aeruginosa em pacientes com FC a fim de diagnosticar a colonização e ou infecção pulmonar antes da cultura, permitindo a antibioticoterapia preventiva, a fim de se evitar a infecção pulmonar crônica. Nesta tese, investigamos a resposta de anticorpos (IgG+IgM+IgA) contra as proteínas do SSTT de P. aeruginosa, através do Western-Blot. Participaram do estudo 51 pacientes com FC, de 1.1 a 16.8 anos acompanhados no Departamento de Pneumologia do Instituto Fernandes Figueira - FioCruz, durante um período aproximado de 2 anos. De cada paciente foram coletadas de 1 a 4 amostras de sangue, com intervalo médio de 6 meses entre as coletas. O grupo controle negativo consistiu de 28 indivíduos não fibrocísticos, de 2 a 17 anos, atendidos no Hospital Universitário Pedro Ernesto - HUPE UERJ. As proteínas do SSTT foram extraídas das cepas PAO1 e PAOΔExsA (regulador da expressão do SSTT) de P. aeruginosa. Controles positivos e negativos foram utilizados em todas as reações. Para a identificação das proteínas do SSTT na reação utilizou-se antisoro de camundongos imunizados com a proteína recombinante PcrV. Doze (75%) dos 16 pacientes fibrocísticos considerados não infectados por P. aeruginosa tiveram a primeira sorologia positiva para PopB e 15 (93,75%) para ExoS/ExoT, indicando a colonização ou infecção por P. aeruginosa. Aproximadamente 25% e 35,7% dos soros do grupo controle mostraram reatividade fraca com PopB ou ExoS/ExoT, respectivamente. O tempo decorrido entre a primeira sorologia positiva e o primeiro isolamento de P. aeruginosa nestes pacientes variou de 18 a 30 meses. Concluindo, é possível fazer o diagnóstico sorológico da infecção pulmonar por P. aeruginosa antes do isolamento da bactéria pela cultura. / Cystic Fibrosis (CF) is a lethal disease of autosomal recessive character, which affects people of different ethnicities. The disease is characterized by the involvement of systemic exocrine glands and in most patients, the lung disease becomes the predominant pathology. The infection with P. aeruginosa is the leading cause of mortality in patients with CF. The Type III Secretion System (TTSS) of bacteria is expressed during acute disease and injects cytotoxic proteins inside the host cell. There is a great interesting in investigate the antibody response to P. aeruginosa in CF patients in order to diagnose a pulmonary infection or colonization before the culture. Then, preventive antibiotic treatment can be initiated before the installation of chronic lung infection. We investigated the antibody response (IgG + IgA + IgM) against TTSS proteins of P. aeruginosa by Western-blot. The study included 51 patients with CF, from 1.1 to 16.8 years attending the Pediatric Pulmonology Unit of Fernandes Figueira Institute (IFF) FIOCRUZ, Rio de Janeiro, for a period of approximately 2 years. Most patients had or 4 blood samples collected for antibody analyses. Samples were obtained with a mean interval of 6 months. The negative control group consisted of 28 non-CF individuals, from 2 to 17 years, attended at Pedro Ernesto University Hospital - HUPE - UERJ. The TTSS proteins were extracted from strains PAO1 and PAOΔExsA (regulator of TTSS proteins expression) of P. aeruginosa. Positive and negative controls were used in all reactions. For the identification of TTSS proteins in the reaction we used antisera from mice immunized with the recombinant protein PcrV. Twelve (75%) of 16 CF patients considered not infected by P. aeruginosa had their first serology positive for "PopB" and 15 (93.75%) for "ExoS/ExoT. These results indicated that these patients were colonized or infected by P. aeruginosa. About 25% e 35,7% of negative control sera showed a weak reactivity with PopB or ExoS, respectively. The time between the first positive serology and the first isolation of P. aeruginosa in these patients ranged from 18 to 30 months. In conclusion, it is possible to make a serological diagnosis of pulmonary infection by P. aeruginosa before the isolation of the bacterium by culture.

Vem se verificando uma crescente preocupação por parte de diversos países e de órgãos internacionais de saúde e conservação animais quanto à necessidade de monitoramento da ocorrência e da distribuição de enfermidades infecciosas em populações de animais silvestres, devido ao potencial destas doenças de causarem impacto na dinâmica e conservação de espécies silvestres, na saúde dos animais domésticos e na saúde pública. A ocorrência de brucelose vem sendo relatada em diversas espécies de mamíferos marinhos, em vários centros de pesquisa no mundo, contudo, não há dados na literatura científica sobre a ocorrência desta infecção em mamíferos aquáticos fluviais brasileiros. Nos cetáceos, a brucelose é causada pela Brucella ceti, sendo associada a problemas reprodutivos, quadros de meningoencefalite e infecções em tecidos linfóides. Assim, o presente trabalho teve como objetivo pesquisar a ocorrência de infecção por Brucella spp. em botos-vermelhos de vida livre da Amazônia (Inia geoffrensis), procedentes da Reserva de Desenvolvimento Sustentável de Mamirauá, Tefé, Amazonas, Brasil. A pesquisa foi realizada em animais de vida livre, de ambos os sexos e várias idades, sendo realizadas duas expedições para colheita de amostras, nos anos de 2010 e 2011. De cada animal foram coletadas amostras de sangue, leite e suabes genital, anal, nasal, oral e de eventuais lesões cutâneas apresentadas. Um total de 161 animais foi capturado. A detecção de anticorpos séricos anti-Brucella foi realizada utilizando-se as provas de soroaglutinação com antígeno acidificado tamponado (AAT), teste do 2-mercaptoetanol (2-ME) e o teste de polarização fluorescente (PF). As amostras de leite e de suabes foram submetidos ao cultivo microbiológico e à reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detecção direta de Brucella spp. As colônias bacterianas que apresentaram características morfológicas compatíveis com Brucella spp. foram identificadas pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se os primers específicos para detecção do gênero Brucella, direcionados ao DNA codificador da região interespaçadora do RNA ribossomal de Brucella (PCR-ITS). As amostras que apresentaram resultados positivos, foram caracterizadas quanto ao gene recA pela amplificação (PCR-recA) e posterior sequenciamento do produto amplificado. A PCR-ITS também foi empregada para o diagnóstico direto das infecções por Brucella spp. nas amostras de sangue, leite e suabes, as quais foram caracterizadas da mesma forma que as colônias bacterianas isoladas. As 67 amostras de soros colhidas apresentaram resultados negativos nos testes de AAT, PF e IDGA. Das 369 amostras submetidas ao cultivo microbiológico, duas amostras de suabe apresentaram características compatíveis com o gênero Brucella e resultados positivos pela PCR-ITS. Uma delas foi identificada como pertencendo à espécie Ochrobactrum intermedium. A segunda amostra não pôde ser caracterizada por não ter sido obtida em cultura pura. Das 118 amostras de sangue total analisadas pela PCR-ITS, seis (7,08%) apresentaram resultados positivos. Das 248 amostras de suabes analisadas pela PCR-ITS, uma (0,4%) apresentou resultado positivo. Das 29 amostras de leite analisadas pela PCR-ITS, cinco (17,24%) apresentaram resultados positivos. Considerando os 128 animais amostrados, 11 (8,59%) apresentaram resultado positivo pela PCR-ITS em pelo menos uma amostra testada. Das 12 amostras biológicas que apresentaram resultados positivos pela PCR-ITS e foram submetidas à PCR-recA, apenas duas apresentaram o produto amplificado no tamanho esperado. De acodo com a análise filogenética utilizada, uma delas apresentou similaridade aos microrganismos Cellulomonas fimi, Cellulomonas flavigena e Cellvibrio gilvus. A segunda amostra foi agrupada juntamente com as bactérias Propionicimonas paludicola, Micropruina glycogenica, Naumannella halotolerans e Propionibacterium propionicum com maior proximidade com a espécie P. propionicum. De acordo com os resultados apresentados, não foi evidenciada a ocorrência de infecções por Brucella spp. na população amostrada pelos métodos sorológicos e microbiológicos. Foi isolada uma estirpe de Ochrobactrum intermedium de um exemplar da espécie Inia geoffrensis, contudo, a importância sanitária destes resultados para esta espécie de boto não pôde ser determinada. / There is a growing concern among several countries and international institutions of animal health and conservation regarding the surveillance of infectious diseases in wildlife populations, because these infections may cause impact on the dynamics and conservation of wildlife species, as well as on the health of livestock and public health. Brucellosis has been reported in several species of marine mammals in various research centers worldwide. However, there is no data about the occurrence of brucellosis in aquatic mammals in Brazil. Brucellosis in cetacean is caused by Brucella ceti and has been associated to reproductive problems, meningoencephalitis and lymphoid tissues infections. The objective of this study was to investigate the occurrence of Brucella spp. infection in free living amazon river dolphin (Inia geoffrensis), from Mamirauá Sustainable Development Reserve, in Tefé municipality, Amazonas State, Brazil. Samples were collected from free-living animals from both sexes and different ages during two expeditions, in 2010 and 2011. Samples of serum, whole blood and milk as well as genital, anal, nasal, oral and cutaneous lesions swabs were collected. One hundred and sixty one animals were samples. Serodiagnosis was performed using the acidified buffered antigen test (ABAT), the 2-mercaptoethanol (2ME) test and the fluorescent polarization assay (FPA). Milk and swabs samples were submitted to microbiological culture and polymerase chain reaction (PCR) to the direct diagnosis of Brucella spp. Bacterial colonies showing morphologies compatible with Brucella spp. were tested by a PCR using specific primers directed to the 16S-23S interpace region of the ribosomal DNA of Brucella (ITS-PCR). Samples with positive results by ITS-PCR were amplified using primers specific to the gene recA (PCR-recA), and the amplicon was sequenced. ITSPCR was also used to diagnosis of Brucella spp. infections directly in samples of blood, milk and swabs which were characterized as the bacterial colonies. All 67 serum samples were negative in the three serological tests used. Eleven of the 128 (8.59%) animals showed positive results by ITS-PCR in at least one biological sample. Of the 369 samples tested by microbiological culture, two had positive results in ITS-PCR. Accroding to the characterization of recA gene, one of them was identified as Ochrobactrum intermedium and the other sample could not be characterized because it was not isolated in pure culture. Of the 118 whole blood samples, six (7.08%) were positive by ITS-PCR. Five of the 248 (17.24%) milk samples and one of the 248 (0.4%) swab samples were positive by ITS-PCR. Of the 12 psoitive samples by ITS-PCR, only two were amplified by the recA-PCR and sequenced. According to the phylogenetic analysis, one sample clustered with Cellulomonas fimi, Cellulomonas flavigena e Cellvibrio gilvus group showing major similarity with C. fimi. The other sample clustered with the bacteria Propionicimonas paludicola, Micropruina glycogenica, Naumannella halotolerans, being more similar to Propionibacterium propionicum. An Ochrobactrum intermedium strain was isolated from a dolphin, however, the sanitary importance of the detection could not be determined.

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Em 2008, foram diagnosticados no município de Juiz de Fora, os primeiros casos considerados autóctones de leishmaniose visceral canina (LVC) e estudos sobre epidemias urbanas da LV têm indicado que a LVC vem precedendo a infecção humana, visto que os cães são os principais reservatórios domésticos. Assim, o presente estudo teve como objetivo pesquisar a infecção de LVC no município de Juiz de Fora, bem como avaliar os fatores de risco associados à doença. O trabalho foi realizado com animais do canil municipal e ONGs e a partir do soro destes foram realizadas três técnicas sorológicas: o imunocromatográfico “TR DPP® e ELISA (“EIE-Leishmaniose visceral canina®), ambos fornecidos pela FIOCRUZ/Bio-Manguinhos e ELISA in house. A amostra totalizou 781 animais e a prevalência da LVC variou de acordo com a técnica empregada: o teste DPP apresentou soropositividade de 4,87% (IC 95% de 3,5-6,7%); o ELISA Bio-Manguinhos de 2,18% (IC 95% de 1,3-3,5%) e ELISA in house de 13,73% (IC 10,8-17,3%). Em relação à variabilidade observada entre as técnicas, vale a pena destacar que as mesmas apresentam antígenos diferentes e isto pode refletir nos resultados. A amostra foi composta, em sua maioria por fêmeas adultas, sem raça definida, porte médio e pelo curto. Na análise univariada, utilizando-se o ELISA Bio-Manguinhos como confirmatório para a LVC, foi observada associação estatística (p< 0,05; IC 95%) com sintomatologia clínica segundo Quinnell et al. 2003, origem dos animais (canil municipal) e grupo racial; além disto, houve sugestão de associação com sexo masculino e porte médio/grande dos animais. Na análise multivariada, o fato de ser procedente do canil e sintomatologia clínica mantiveram associadas ao desfecho, sendo também sugestiva o sexo masculino. Este foi o primeiro inquérito da LVC no município de Juiz de Fora e a presença da doença relatada neste trabalho, reforça a idéia de que a leishmaniose está em processo de expansão e urbanização no Brasil, apontando a necessidade de vigilância epidemiológica ativa. / In Brazil, the visceral leishmaniasis (LV), also known as calazar, is a zoonotic disease, with vector transmission caused by the Leishmania chagasi protozoan. This disease, before described as rural is going through a process of urbanization. In 2008, were diagnosed in Juiz de Fora municipality, the first cases considered autochthones of canine visceral leishmaniasis (CVL) and research about urban epidemic of LV has showed that the CVL is preceding the human infection, since that the dogs are the main domestic reservoirs. Then, the present study aimed to investigate the CVL infection in Juiz de Fora, as well as to value the risk factors associated to the disease. This work was done with the animals of the public kennel and ONGs and with the serum were realized three serological techniques: the immunochomatographic “TR DPP® and ELISA (EIE-leishmaniose visceral canine®), both given by FIOCRUZ/BIO-MANGUINHOS and ELISA in house. The samples totalized 781 animals and the prevalence of CVL varied according with the technique used: the test DPP showed soropositivity of 4.87% (IC 95% of 3.5-6.7%); the ELISA Bio-Manguinhos of 2.18% (IC 95% of 1.3-3.5%) and ELISA in house of 13.73% (IC 10.8-17.3%). In relation to variability observed among the techniques, as worth pointing out that same showed different antigens and this can reflect in the results. The sampIes were compound in majority by adult females, without definite race, medium-sized and short hair. In the univarious analysis using the ELISA Bio-Manguinhos as confirmatory for the CVL, was observed statistic association (p<0.05; IC 95%) with clinic sintomatology according by Quinnell et al. (2003), origin of animals (public kennel) and racial group; and also, there was suggestion of the association with masculine sex and medium/big port animals. In the multivarious analysis, the fact of being precedent from the kennell and clinic sintomatology kept associated to the result, being suggestive the masculine sex. This was the first enquiry of CVL in Juiz de Fora municipality and presence of the disease showed in this research, reinforce the idea that the leishmaniasis is in the process of expansion and urbanization in Brazil, pointing out necessity of an active epidemiologic vigilance.

Les maladies allergiques constituent une part importante des préoccupations de santé publique. Parmi elles, la maladie du poumon d’éleveur d’oiseaux (PEO) est une pathologie respiratoire liée à l’inhalation répétée de protéines antigéniques, localisées dans les fientes, les plumes et les squames des oiseaux. Actuellement, on connait peu de chose sur la nature des antigènes impliqués dans la maladie.La mise en évidence d’immunoglobulines G (IgG) spécifiques des agents étiologiques est un élément important dans la prise en charge diagnostique et thérapeutique. L’objectif de la thèse est d’identifier les protéines antigéniques de pigeon et de les produire par génie génétique afin de développer un test sérologique efficace et standardisé de type ELISA. L’approche immuno-protéomique développée combine l’utilisation d’analyses sérologiques (western blot, ELISA) et l’identification par spectrométrie de masse des protéines antigéniques et des protéines totales (shotgun) des fientes, squames et sérum de pigeon. Ainsi, 14 protéines antigéniques principalement localisées dans les fientes et les squames de pigeon ont été identifiées et 2 protéines recombinantes ont été produites, puis testées en ELISA. Les protéines recombinantes Immunoglobulin-lambda-like polypeptide-1 et Proprotéinase E sont très performantes pour le diagnostic sérologique du PEO avec une spécificité et une sensibilité respectives de 100% et 84%. Des protéines orthologues, potentiellement impliquées dans les réactions antigéniques croisées ont été identifiées à partir des fientes de perruche et de poule. Ce travail a permis d’identifier les protéines antigéniques des fientes de pigeon, d’apporter des précisions sur leur localisation, et de développer des antigènes recombinants standardisés et performants pour améliorer le diagnostic sérologique du PEO. Des études complémentaires, sur des modèles animaux et cellulaires, devront être menées pour explorer l'implication de ces protéines dans l'induction de la maladie. / Allergic diseases represent one of the most important public health concerns. Among them, Bird Fancier’s Lung disease (BFL) is a respiratory illness associated with repeated inhalation of antigenic proteins, present in bird droppings, feathers and blooms. Currently, little is known about the nature of the antigens involved in the disease. The detection of immunoglobulin G (IgG) specific etiologic agents is an important factor in diagnostic and therapeutic management.The objective of this thesis is to identify the antigenic proteins of pigeons and to produce them by genetic engineering in order to develop an effective and standardized ELISA-type serological test. The immuno-proteomic approach created combines the use of serological analyses (western blot, ELISA) and the identification by mass spectrometry of antigenic proteins and total proteins (shotgun) of pigeon droppings, blooms and serum. Thus, 14 antigenic proteins mainly located in droppings and blooms were identified, and 2 recombinant proteins were produced and then tested with ELISA.The recombinant proteins Immunoglobulin-lambda-like polypeptide-1 and Proproteinase E are highly effective for the serological diagnosis of BFL,with specificity and sensitivity rates of 100% and 84%, respectively. Orthologous proteins potentially involved in cross-antigen reactions were identified from budgerigar and hen droppings. This work made it possible to identify the antigenic proteins of pigeon droppings, to provide further details on their location, and to develop standardized and efficient recombinant antigens to improve the serological diagnosis of BFL.Additional studies on animals and cell models will be needed to explore the role of these proteins in the induction of the disease.