Os mecanismos celulares envolvidos na hiperplasia prostática benigna (HPB) não são bem compreendidos e pouco se sabe sobre como os proteoglicanos estão relacionados com esta condição. Neste estudo foi avaliada a expressão de proteoglicanos de superfície celular e do estroma na HPB. As amostras de próstata com HPB foram colhidas de pacientes submetidos à prostatectomia aberta e ressecção transuretral da próstata (RTUP), enquanto as amostras do grupo controle consistiram na zona de transição de próstatas normais de adultos jovens. Foram usados anticorpos primários anti-sindecan-1, anti-biglican e anti-decorin. A imunomarcação foi avaliada determinando-se a área relativa marcada pelo anticorpo, ou usando-se um escore atribuído à intensidade da coloração. Os resultados mostraram que, no grupo controle, a expressão do sindecan-1 foi mínima ou nula. Na HPB, no entanto, a imunomarcação deste proteoglicano foi intensa e localizada principalmente nas células basais do ácino prostático e com menor intensidade na superfície basolateral das células secretoras. Como não houve diferença entre as amostras obtidas através da prostatectomia aberta e da RTUP, esses grupos foram combinados em um único grupo HPB. A área marcada pelo anticorpo anti-sindecan-1 no epitélio das amostras de HPB foi nove vezes maior do que na próstata normal (p<0,001), e não houve correlações significativas entre a marcação do sindecan-1naHPB e o volume da próstata, o PSA ou a idade do paciente. Quanto ao biglican e ao decorin, a marcação foi exclusivamente no estroma, tanto no grupo controle quanto no grupo HPB, e não houve diferença significativa na extensão e intensidade da coloração entre estes dois grupos. Em conclusão, a imunomarcação do sindecan-1 na HPB é intensa e está localizada no epitélio glandular exclusivamente, mas a intensidade não se correlaciona com o tamanho da próstata ou PSA. A expressão do decorin e do biglican, no entanto, não foi alterada na HPB. / The cellular mechanisms involved in benign prostatic hyperplasia (BPH) are not well understood, and little is known about how proteoglycans are affected. Here we investigated the protein expression of stromal and cell surface proteoglycans in BPH. BPH samples were colected from open prostatectomy and transurethral resection of the prostate (TURP), while controls consisted of the transitional zone of normal prostates from young adults. We used primary antibodies against the proteoglycans syndecan-1, biglycan, and decorin. Immunolabeling was evaluated by determining the relative area of staining, or by using a score for staining intensity. The results showed that, in controls, syndecan-1 was mostly negative. In BPH, however, the labeling of this proteoglycan was intense and located mainly in acinar basal cells, but could extended into the secretory cells. As there were no differences in samples from open prostatectomy and TURP, these groups were combined into a BPH group. Syndecan-1 labeling area in the epithelium of BPH samples was nine times greater than that of controls (p<0,001), and there were no significant correlations between syndecan-1 labeling in BPH and prostate volume, PSA, or patients age. Biglycan and decorin labeling were in the stroma exclusively, in control and BPH samples, and there were no significant differences in extent and intensity of the staining between these two groups. In conclusion, syndecan-1 immunolabeling in BPH is prominent and is located in the glandular epithelium exclusively, but intensity does not correlate with prostate size or PSA. Decorin and biglycan labeling, however, were unchanged in BPH.

Os mecanismos celulares envolvidos na hiperplasia prostática benigna (HPB) não são bem compreendidos e pouco se sabe sobre como os proteoglicanos estão relacionados com esta condição. Neste estudo foi avaliada a expressão de proteoglicanos de superfície celular e do estroma na HPB. As amostras de próstata com HPB foram colhidas de pacientes submetidos à prostatectomia aberta e ressecção transuretral da próstata (RTUP), enquanto as amostras do grupo controle consistiram na zona de transição de próstatas normais de adultos jovens. Foram usados anticorpos primários anti-sindecan-1, anti-biglican e anti-decorin. A imunomarcação foi avaliada determinando-se a área relativa marcada pelo anticorpo, ou usando-se um escore atribuído à intensidade da coloração. Os resultados mostraram que, no grupo controle, a expressão do sindecan-1 foi mínima ou nula. Na HPB, no entanto, a imunomarcação deste proteoglicano foi intensa e localizada principalmente nas células basais do ácino prostático e com menor intensidade na superfície basolateral das células secretoras. Como não houve diferença entre as amostras obtidas através da prostatectomia aberta e da RTUP, esses grupos foram combinados em um único grupo HPB. A área marcada pelo anticorpo anti-sindecan-1 no epitélio das amostras de HPB foi nove vezes maior do que na próstata normal (p<0,001), e não houve correlações significativas entre a marcação do sindecan-1naHPB e o volume da próstata, o PSA ou a idade do paciente. Quanto ao biglican e ao decorin, a marcação foi exclusivamente no estroma, tanto no grupo controle quanto no grupo HPB, e não houve diferença significativa na extensão e intensidade da coloração entre estes dois grupos. Em conclusão, a imunomarcação do sindecan-1 na HPB é intensa e está localizada no epitélio glandular exclusivamente, mas a intensidade não se correlaciona com o tamanho da próstata ou PSA. A expressão do decorin e do biglican, no entanto, não foi alterada na HPB. / The cellular mechanisms involved in benign prostatic hyperplasia (BPH) are not well understood, and little is known about how proteoglycans are affected. Here we investigated the protein expression of stromal and cell surface proteoglycans in BPH. BPH samples were colected from open prostatectomy and transurethral resection of the prostate (TURP), while controls consisted of the transitional zone of normal prostates from young adults. We used primary antibodies against the proteoglycans syndecan-1, biglycan, and decorin. Immunolabeling was evaluated by determining the relative area of staining, or by using a score for staining intensity. The results showed that, in controls, syndecan-1 was mostly negative. In BPH, however, the labeling of this proteoglycan was intense and located mainly in acinar basal cells, but could extended into the secretory cells. As there were no differences in samples from open prostatectomy and TURP, these groups were combined into a BPH group. Syndecan-1 labeling area in the epithelium of BPH samples was nine times greater than that of controls (p<0,001), and there were no significant correlations between syndecan-1 labeling in BPH and prostate volume, PSA, or patients age. Biglycan and decorin labeling were in the stroma exclusively, in control and BPH samples, and there were no significant differences in extent and intensity of the staining between these two groups. In conclusion, syndecan-1 immunolabeling in BPH is prominent and is located in the glandular epithelium exclusively, but intensity does not correlate with prostate size or PSA. Decorin and biglycan labeling, however, were unchanged in BPH.

Carcinona epidermóide é um prevalente tumor de cabeça e pescoço relacionado a altas taxas de mortalidade. Neste trabalho, verificamos se AG73 (RKRLQVQLSIRT, cadeia a1), peptídeo derivado da laminina-111, regula migração, invasão e secreção de protease em células de carcinoma epidermóide oral (OSCC). Cadeia a1 da laminina e MMP9 estão expressas neste tumor in vivo e in vitro. AG73 induziu aumento da taxa migratória de células OSCC em ensaios de ferida e migração, e também estimulou invasão em ensaio em câmaras bipartites com Matrigel. Células OSCC crescidas sobre AG73 exibiram aumento dose-dependente de MMP9, detectado por zimografia. Buscamos receptores de AG73 que regulariam atividade nesta linhagem. Células OSCC crescidas sobre AG73 exibiram colocalização de sindecana-1 e integrina b1, e silenciamento desses receptores com RNA de interferência promoveu diminuição de migração e invasão dependente de AG73 nestas células. Esses resultados sugerem que sindecana-1 e integrina b1, ativados por AG73, podem regular migração, invasão e secreção de MMPs em células OSCC. / Oral squamous cell carcinoma is a prevalent head and neck tumor, related to high mortality rates. Here we studied the role played by AG73 (RKRLQVQLSIRT, a1 chain) on migration, invasion and protease secretion of a cell line (OSCC) from human oral squamous cell carcinoma. Laminin a1 chain and MMP9 are expressed in oral squamous cell carcinoma cells in vivo and in vitro. AG73 increased migratory activity of OSCC cells, as shown by monolayer wound assays and migration assays. This peptide also stimulated cell invasion in chemotaxis chambers coated with Matrigel. OSCC cells cultured on AG73 showed a dose-dependent increase of MMP9 secretion, detected by zymography. We searched for AG73 receptors regulating activities in this cell line. OSCC cells grown on AG73 exhibited colocalization of syndecan-1 and b1 integrin, and siRNA knockdown of these receptors decreased AG73-dependent migration and invasion of OSCC cells. Our results suggest that syndecan-1 and b1 integrin signaling downstream of AG73 regulate migration, invasion and MMP secretion by OSCC cells

Estudamos indução da atividade de MMP pelo peptídeo da laminina a1 AG73 em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico. CAC2 cultivadas em laminina-111 com AG73 geraram espaços pseudocísticos. Inibidor de MMP diminuiu tais espaços, sugerindo ação de MMPs. CAC2 crescidas sobre AG73 mostraram aumento dose-dependente de MMP9. RNAi para MMP9 diminuiu remodelação em cultura 3D. Buscamos receptores de AG73 ligados à atividade de MMP9. CAC2 crescidas sobre AG73 exibiram colocalização de sindecan-1 e integrina b1. RNAi para sindecan-1 ou para integrina b1 geraram, isolados, redução na adesão a AG73 e nas atividades de remodelação e de protease. Duplo RNAi estudou a cooperação entre os receptores e promoveu diminuição na adesão a AG73 e na atividade de MMP. Distinção de receptores foi feita por cromatografia de afinidade e espectrometria de massa, através de colunas de afinidade com AG73 acoplado, que resultou em possíveis receptores, como integrinas b1 e aV. Sugerimos que AG73 regula adesão e secreção de MMP em células CAC2 através de sindecan-1 e integrina b1. / We studied induction of MMP activity by b1-laminin peptide AG73 in adenoid cystic carcinoma cell line (CAC2). Cells grown inside AG73-enriched laminin-111 exhibited pseudocystics spaces. MMP inhibitor decreased those spaces, suggesting MMPs action. Cells grown on AG73 showed a dose-dependent increase of MMP9 secretion. MMP9 siRNAi decreased remodeling in 3D culture. We searched for AG73 receptors regulating MMP9 activity. CAC2 grown on AG73 exhibited colocalization of syndecan-1 and b1 integrin. Syndecan-1 siRNA or siRNA b1 integrin showed reduction in adhesion to AG73 and in remodeling and protease activities. Double-knockdown explored syndecan-1 and 1 integrin cooperation and showed decrease in adhesion to AG73 and in MMP activity. Receptors characterization was made by affinity chromatography followed by mass spectrometry through AG73-affinity columns and showed putative receptors, like b1 and aV integrins. We suggest that AG73 peptide regulates adhesion and MMP secretion in CAC2 cells through syndecan-1 and b1 integrin.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-02-29T22:55:50Z No. of bitstreams: 1 EmiliaBeatrizDasNevesSilvaMaiaPimentel_TESE.pdf: 2954281 bytes, checksum: 39a346f6b0d47bccce334327ee69b78b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-03-02T19:34:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EmiliaBeatrizDasNevesSilvaMaiaPimentel_TESE.pdf: 2954281 bytes, checksum: 39a346f6b0d47bccce334327ee69b78b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-02T19:34:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EmiliaBeatrizDasNevesSilvaMaiaPimentel_TESE.pdf: 2954281 bytes, checksum: 39a346f6b0d47bccce334327ee69b78b (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Tumores odontog?nicos prov?m de tecidos dent?rios por prolifera??o de tecido epitelial e/ou mesenquimal. Biologicamente, estas les?es poder ter naturezas distintas, sendo caracterizadas como altera??es no desenvolvimento tecidual (hamartomas), tumores benignos n?o agressivos ou agressivo e tumores malignos. No desenvolvimento e na progress?o desses tumores odontog?nicos, diferentes rela??es de intera??es epit?lio/mesenquimais ocorrem originando os diferentes tipos dessas les?es. Numerosas mol?culas sinalizadoras participam dessas rela??es, dentre estas o fator de crescimento fibrobl?stico (FGF), e a prote?na (?ssea Morfog?nica (BMP) e proteoglicanos de sulfato de heparan (sindecan), as mol?culas envolvidas nos processos de transcri??o e os produtos transcritos. Diante, objetivo dessa pesquisa foi investigar a imunolocaliza??o de fatores de crescimento (BMP-4 e FGF-8) e de prote?na mesenquimal (Sindecan-1) em uma s?rie de tumores odontog?nicos apresentando comportamento biol?gicos distintos, visando contribuir para um melhor entendimento da participa??o dessas proteinas no desenvolvimento tumoral. A amostra foi constitu?da por 21 ameloblastomas do tipo s?lido, 19 cerataocistos odontog?nicos e 14 tumores odontog?nicos adenomat?ides. As c?lulas imunomarcadas por BMP-4 e FGF-8 foram quantificadas, enquanto a contagem de sindecan-1 foi semi-quantitativa, e cada caso tumoral catergorizado em escores: 0 - ausente; 1 - 1 a 10% de c?lulas positivas, 2 - 11 a 50% de c?lulas positivas; e 3 - > < 50% de c?lulas positivas. Maior imunoexpress?o da sindecan-e foi observada no epit?lio das les?es quando comparada com o mesenquima. No ameloblastoma e o ceratocisto odontog?nico essa express?o foi maior que no TOA, o que pode caracterizar um comportamento biol?gico mais agressivo dessas duas primeiras les?es. A maior express?o de BMP-4 no mesenquima de ameloblastoma comparado ao ceratocisto ( p=0,009), pode indicar uma intera??o e participa??o ativa nas c?lulas parenquimais na patogenese desses tumores, enquanto que no tecido epitelial, nenhuma diferen?a signigicativa foi observada quando comparadas as tr?s les?es. Sendo que no ameloblastoma sua express?o foi predominantemente mesenquimal (p=0,008), enquanto no ceratocisto maior express?o foi observada no epit?lio (p = 0,0046). Em todas as les?es, correla??o forte ou moderada foi observada na imunoexpress?o de BMP-4 no epit?lio e mesenquima. Para FGF-8, em nenhuma les?o foi observaa diferen?a entre a imunoexprss?o no epit?lio ou mesenquima, contudo no ameloblastoma correla??o positiva foi encontrada (Correla??o Spearman, rho=0,857,p<0,001), indicando que a imunoexpress?o de FGF-8 concomitante foi indicar um pior progn?stico para ameloblastomas e tamb?m, estar a uma associado a uma maior atividade osteol?tica obsrervada nesses tumores. Concluiu-se ent?o que os tr?s biomarcadores avaliados nesse estudo (BMP-4, FGF-8 e Sindecan) participam ativamente da patogenese das les?es, sendo que maior imunoexpress?o de FGF-8 e sindecan pode estar associada a um comportamento biol?gico mais agressivo, enquanto BMP-4 apresentou padr?o de imunoexpress?o semelhante nas tr?s les?es, podendo estar associado ? diferencia??o celular e manuten??o do padr?o de crescimento da les?es. / The development and progression of odontogenic tumors have been associated with an imbalance in the activity of growth factors, adhesion molecules, extracellular matrix proteins and their degradation enzymes, angiogenic factors and osteolytic. Some studies have shown that interaction relationships inductive epithelial / mesenchymal determinants of Odontogenesis are mimicked by these tumors. The objective of this research was to investigate the immunolocalization of growth factors (BMP-4 and FGF-8) and Sindecan-1 structural protein in a series of odontogenic tumors presenting different biological behaviors, to contribute to a better understanding of the role of these proteins in tumor development. The sample consisted of 21 of the solid ameloblastoma, odontogenic keratocysts 19 and 14 odontogenic adenomatoid tumors. Increased Sindecan-1 immunostaining was seen in the epithelium of the lesions when compared with mesenchyme. In ameloblastoma and odontogenic keratocysts, this expression was higher than in AOT. Epithelial expression of BMP4 showed quantitatively similar in the three studied lesions; however, when anlisada mesenchymal immunoreactivity, was detected significant higher expression when compared to the ameloblastoma keratocysts. In ameloblastoma, mesenchymal expression was predominantly (p = 0.008), while in keratocyst higher expression in the epithelium was observed (p = 0.046). In all injuries, strong or moderate correlation was observed in the BMP-4 immunoreactivity in the epithelium and mesenchyme. FGF-8, no injury was observed difference between the immunoreactivity in the epithelium or mesenchyme, however in ameloblastoma positive correlation was found (Spearman correlation, rho = 0.857, p <0.001). The results of this study suggest that the three evaluated biomarkers actively involved in the pathogenesis of lesions, especially the expression of ameloblastomas indicating a strong interaction between parenchymal and stromal cells which may contribute to its marked aggressiveness.

Carcinona epidermóide é um prevalente tumor de cabeça e pescoço relacionado a altas taxas de mortalidade. Neste trabalho, verificamos se AG73 (RKRLQVQLSIRT, cadeia a1), peptídeo derivado da laminina-111, regula migração, invasão e secreção de protease em células de carcinoma epidermóide oral (OSCC). Cadeia a1 da laminina e MMP9 estão expressas neste tumor in vivo e in vitro. AG73 induziu aumento da taxa migratória de células OSCC em ensaios de ferida e migração, e também estimulou invasão em ensaio em câmaras bipartites com Matrigel. Células OSCC crescidas sobre AG73 exibiram aumento dose-dependente de MMP9, detectado por zimografia. Buscamos receptores de AG73 que regulariam atividade nesta linhagem. Células OSCC crescidas sobre AG73 exibiram colocalização de sindecana-1 e integrina b1, e silenciamento desses receptores com RNA de interferência promoveu diminuição de migração e invasão dependente de AG73 nestas células. Esses resultados sugerem que sindecana-1 e integrina b1, ativados por AG73, podem regular migração, invasão e secreção de MMPs em células OSCC. / Oral squamous cell carcinoma is a prevalent head and neck tumor, related to high mortality rates. Here we studied the role played by AG73 (RKRLQVQLSIRT, a1 chain) on migration, invasion and protease secretion of a cell line (OSCC) from human oral squamous cell carcinoma. Laminin a1 chain and MMP9 are expressed in oral squamous cell carcinoma cells in vivo and in vitro. AG73 increased migratory activity of OSCC cells, as shown by monolayer wound assays and migration assays. This peptide also stimulated cell invasion in chemotaxis chambers coated with Matrigel. OSCC cells cultured on AG73 showed a dose-dependent increase of MMP9 secretion, detected by zymography. We searched for AG73 receptors regulating activities in this cell line. OSCC cells grown on AG73 exhibited colocalization of syndecan-1 and b1 integrin, and siRNA knockdown of these receptors decreased AG73-dependent migration and invasion of OSCC cells. Our results suggest that syndecan-1 and b1 integrin signaling downstream of AG73 regulate migration, invasion and MMP secretion by OSCC cells

Estudamos indução da atividade de MMP pelo peptídeo da laminina a1 AG73 em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico. CAC2 cultivadas em laminina-111 com AG73 geraram espaços pseudocísticos. Inibidor de MMP diminuiu tais espaços, sugerindo ação de MMPs. CAC2 crescidas sobre AG73 mostraram aumento dose-dependente de MMP9. RNAi para MMP9 diminuiu remodelação em cultura 3D. Buscamos receptores de AG73 ligados à atividade de MMP9. CAC2 crescidas sobre AG73 exibiram colocalização de sindecan-1 e integrina b1. RNAi para sindecan-1 ou para integrina b1 geraram, isolados, redução na adesão a AG73 e nas atividades de remodelação e de protease. Duplo RNAi estudou a cooperação entre os receptores e promoveu diminuição na adesão a AG73 e na atividade de MMP. Distinção de receptores foi feita por cromatografia de afinidade e espectrometria de massa, através de colunas de afinidade com AG73 acoplado, que resultou em possíveis receptores, como integrinas b1 e aV. Sugerimos que AG73 regula adesão e secreção de MMP em células CAC2 através de sindecan-1 e integrina b1. / We studied induction of MMP activity by b1-laminin peptide AG73 in adenoid cystic carcinoma cell line (CAC2). Cells grown inside AG73-enriched laminin-111 exhibited pseudocystics spaces. MMP inhibitor decreased those spaces, suggesting MMPs action. Cells grown on AG73 showed a dose-dependent increase of MMP9 secretion. MMP9 siRNAi decreased remodeling in 3D culture. We searched for AG73 receptors regulating MMP9 activity. CAC2 grown on AG73 exhibited colocalization of syndecan-1 and b1 integrin. Syndecan-1 siRNA or siRNA b1 integrin showed reduction in adhesion to AG73 and in remodeling and protease activities. Double-knockdown explored syndecan-1 and 1 integrin cooperation and showed decrease in adhesion to AG73 and in MMP activity. Receptors characterization was made by affinity chromatography followed by mass spectrometry through AG73-affinity columns and showed putative receptors, like b1 and aV integrins. We suggest that AG73 peptide regulates adhesion and MMP secretion in CAC2 cells through syndecan-1 and b1 integrin.