Orientadora: Janete Apparecida Desidério Sena / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva / Banca: Gislayne Fernandes Lemes Trindade Vilas-Bôas / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Resumo: Aedes aegypti (Linnaeus), principal vetor da dengue no Brasil, tem sido combatido com o uso maciço de produtos químicos, contribuindo com o desenvolvimento de resistência e inviabilizando o controle do inseto. Bioinseticidas à base de Bacillus thuringiensis vêm apresentando resultados satisfatórios no controle de dípteros, devido à produção de proteínas bioinseticidas denominadas Cry (cristal), Cyt (citolíticas) e Chi (quitinase) e os efeitos sinergísticos existentes entre elas. O presente trabalho objetivou a seleção de isolados de B. thuringiensis, portadores de genes cry, cyt e chi com alta eficiência no controle de A. aegypti. Uma coleção de 1073 isolados de B. thuringiensis, provenientes de diversas regiões brasileiras, foi submetida à Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), com base nos iniciadores específicos para os genes cry4Aa, cry4Ba, cry10Aa, cry11Aa, cry11Ba, cyt1Aa, cyt1Ab, cyt2Aa e chi. Os isolados dípteros-específico foram avaliados quanto à estruturação genética e através de bioensaios seletivos e quantitativos, para determinação da CL50 e CL90. Apenas 45 (4,19%) apresentaram amplificação para os genes cry e cyt e destes, 25 (54,34%) eram quitinolíticos. Foram definidos 21 haplótipos entre os 45 isolados de B. thuringiensis, os quais foram submetidos aos bioensaios seletivos, indicando 13 isolados que causaram 100% de mortalidade às larvas de A. aegypti. Os bioensaios quantitativos e análise de agrupamento permitiram selecionar quatro isolados altamente tóxicos às larvas de A. aegypti. A identificação dos genes cry, cyt e chi de B. thuringiensis e análise dos efeitos sinergísticos entre as toxinas, associadas à análise da toxicidade a insetos vetores permitiram a seleção de isolados que poderão ser utilizados em formulações de novos bioinseticidas brasileiros, podendo contornar possíveis problemas de resistência. / Abstract: Aedes aegypti (Linnaeus), the main vector of dengue fever in Brazil, has been controlled with massive use of chemical products wich, contributed to the development of resistance decreasing the insect control efficacy. Bioinsecticides based on Bacillus thuringiensis is currently presenting satisfactory results on controlling dipterans, due to the production of Cry proteins (crystal proteins), Cyt (citolitic) and Chi (chitinase) with synergistic effects between them. The present work aimed to select B. thuringiensis isolates with cry, cyt and chi genes exhibiting high efficiency on A. aegypti larvae. A bacterial collection containing 1073 isolates of B. thuringiensis, obtained from different Brazilian locations, had their DNA isolated and submitted to PCR amplifications using specific primers for the genes cry4Aa, cry4Ba, cry10Aa, cry11Aa, cry11Ba, cyt1Aa, cyt1Ab, cyt2Aa e chi. The dipterans-especific isolates were then evaluated for the genetic structure and through selective and latter to quantitative bioassays for the determination of LC50 and LC90. Forty five out of 1073 isolates (4.19%) presented amplicons for the cry and cyt genes and from these 25 (54.34%) were detected as chitinolitic. Twenty one haplotypes were identified among the 45 isolates of B. thuringiensis, which were submitted to the selective bioassays, indicating 13 isolates that caused 100% mortality of A. aegypti larvae. The quantitative bioassays and the statistical analysis have pointed four toxic isolates to A. aegypti larvae. The identification of the cry, cyt and chi genes of B. thuringiensis and the analysis of the synergistic effects among the toxins, along with the toxicity analysis towards the vector insects allowed the selection of a set of isolates that can be used for the formulation of new bioinsecticides from Brazilian origin, that would avoid or at least delay the appearance of resistance problems. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-10-30Bitstream added on 2014-06-13T21:05:10Z : No. of bitstreams: 1 prette_n_dr_jabo.pdf: 397603 bytes, checksum: f2f29adeabc306b7b382c01f4d6b99d5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve como objetivo avaliar “in vitro”, a ação de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, para larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas não alimentadas de Rhipicephalus sanguineus e para onde as mesmas fases do ciclo de vida do ácaro mantidas alimentadas em cães por meio de câmaras de alimentação coladas no dorso do animal. A ação no ambiente habitado pelo cão foi avaliada por meio de infestações naturais em boxes com todos os estádios do ácaro. Foram usadas suspensões contendo 108 conídios mL-1 de cada isolado. Nos ensaios com as fases não alimentadas os estádios foram imersos nas suspensões dos fungos e no ensaio com de alimentação no cão os diversos estádios do ciclo biológico do carrapato foram imersos ou pulverizados com as suspensões de conídios, e no ensaio do ambiente do cão as suspensões foram pulverizadas em todo o canil. Nos ensaios “in vitro” foram avaliadas a mortalidade de larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas, e no ensaio com alimentação no cão avaliou-se a mortalidade de cada estádio e os indivíduos sobreviventes foram colocados para ingurgitar em coelhos, para avaliação dos estádios subseqüentes do ciclo do carrapato, até se obter novamente a mesma fase em que iniciaram o ciclo. No ensaio do ambiente do cão foi avaliada diariamente a infestação dos animais com as diversas fases do ciclo de vida do ácaro. B. bassiana e M. anisopliae promoveram significativa redução da sobrevivência de todos os estádios não alimentados, deixando claro a atividade patogênica para a fase não alimentada de R. sanguineus. No experimento com a alimentação em cães, B. bassiana promoveu mortalidade de fêmea, mas não houve mortalidade de larvas e ninfas, fato este também observado para M. anisopliae... / This work aimed to assess the in vitro” action of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, for unfed larvae, nymphs and adult male and female of Rhipicephalus sanguineus and for the same stadiums the tick life cycle maintained fed on dogs through feeding cameras fixed on dog’s dorsal region. The action on the ambient where the dog lives was also evaluated through natural infestations with all of the stadiums of the acarid. Suspensions containing 108 conidia mL-1 of each isolated were used. In every assay with the unfed phase, the stadiums were immersed in the suspensions of the fungus and in the assays with feeding cameras, all the phases of the biological cycle of the tick were immersed or powdered with the conidial suspension and in the assay in the ambient suspensions were spread powdered in the whole box. In the in vitro assays it was evaluated the larvae, nymphs and adult male and female mortality. In the feeding cameras assay, the mortality of each stadium was evaluated and the surviving individuals were put for engorged in rabbits, to evaluate subsequent stadiums of the cycle of the tick, until obtain the same stadium wich was attained at the moment they began the cycle. In the environmental assay it was daily evaluated the infestation of the animals with all the phases of the life cycle of the acarid. B. bassiana and M. anisopliae promoted a significant reduction of the survival rate of all unfed stadiums of the tick what brings a strong evidence of pathogenicicity to unfed phases of R. sanguineus. In the experiment with feeding cameras, B. bassiana promoted female mortality, but mortality of larvae and nymphs were not observed fact this also observed for M. anisopliae. In the environment of the dog naturally infested with the stadiums of R. sanguineus was possible to observe that B. bassiana reduced the number of unfed and engorged larvae in the first week after treatment ...(Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Antonio Carlos Busoli / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Banca: Marcos Doniseti Michelotto / Resumo: Alabama argillacea (Hübner) é praga chave do algodoeiro no Brasil. Com o objetivo de estudar a intensidade de oviposição de A. argillacea e o parasitismo de seus ovos por Trichogramma pretiosum Riley, nos estágios fenológicos de sete cultivares, instalou-se o experimento na Fazenda Savana na região de Chapadão do Sul, MS, no ano agrícola 2006/07. As cultivares FMT 701, FMX 966, Acala 90, NuOPAL, Delta Penta, CD 409 e DeltaOPAL, foram semeadas em 20/12/2006, no Delineamento de Blocos Casualizados (DBC), com cinco repetições. As avaliações foram semanais contando-se o número de ovos em 10 plantas ao acaso por parcela, assim como o número de ovos parasitados. Os dados foram analisados pelo teste F e as médias dos tratamentos comparadas pelo teste Tukey (p 0,05). A porcentagem de ovos parasitados foi determinada em relação ao número total de ovos avaliados. Acala 90 foi a mais preferida pela praga, ocorrendo maior pico de oviposição aos 82 dias de emergência das plantas (DAE), e o segundo pico aos 110 DAE, respectivamente, com 3,7 e 3,3 ovos por planta. NuOPAL e FMX 966 foram menos ovipositadas, com 2,3 ovos por planta. Acala 90 apesar de ser a mais ovipositada, não apresentou maior porcentagem de ovos parasitados. FMX 966 atingiu índice de 82% aos 47 DAE e 100% de ovos parasitados aos 145 e 149 DAE. / Abstract: Alabama argillacea (Hübner) is a key pest in brazilian cotton. The objective of this study was to evaluate the oviposition preference of A. argillacea and the eggs parasitism by Trichogramma pretiosum Riley, in different phenological plant stages. The work was carried out in the Chapadão do Sul region, during the 2006/07 growing season. It was used FMT 701, FMX 966, Acala 90, NuOPAL, Delta Penta, Coodetec 409 and DeltaOPAL cotton cultivars. RCB was the experimental design adapter, with five replications. The samples were taken weekly, verifying the number of eggs and parasited eggs in ten randomized plants per plot. The results were analyzed by F test and the treatments average were compared by Tukey test ( p 0,05). Acala 90 was the most preferred by the pest, occurring major peak of oviposition at 82 days after emergence (DAE), and second peak at 110 DAE, respectively, with 3.7 to 3.3 eggs/plant. NuOPAL and FMX 966 were the less oviposited, with 2.3 eggs/plant. Acala 90 was the most oviposited, but not the most parasited. FMX 966 presented 82% of parasitism in 47 DAE and 100% of parasited eggs in 145 and 149 DAE. NuOPAL presented minor density of eggs/plant, but presented minor percentage of parasited eggs. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-07Bitstream added on 2014-06-13T20:32:43Z : No. of bitstreams: 1 silva_ea_me_jabo.pdf: 212479 bytes, checksum: f623a7656c932e982970a3b197fe9b4c (MD5) / Mic Cotton Consultoria Tecnica / Alabama argillacea (Hübner) é praga chave do algodoeiro no Brasil. Com o objetivo de estudar a intensidade de oviposição de A. argillacea e o parasitismo de seus ovos por Trichogramma pretiosum Riley, nos estágios fenológicos de sete cultivares, instalou-se o experimento na Fazenda Savana na região de Chapadão do Sul, MS, no ano agrícola 2006/07. As cultivares FMT 701, FMX 966, Acala 90, NuOPAL, Delta Penta, CD 409 e DeltaOPAL, foram semeadas em 20/12/2006, no Delineamento de Blocos Casualizados (DBC), com cinco repetições. As avaliações foram semanais contando-se o número de ovos em 10 plantas ao acaso por parcela, assim como o número de ovos parasitados. Os dados foram analisados pelo teste F e as médias dos tratamentos comparadas pelo teste Tukey (p 0,05). A porcentagem de ovos parasitados foi determinada em relação ao número total de ovos avaliados. Acala 90 foi a mais preferida pela praga, ocorrendo maior pico de oviposição aos 82 dias de emergência das plantas (DAE), e o segundo pico aos 110 DAE, respectivamente, com 3,7 e 3,3 ovos por planta. NuOPAL e FMX 966 foram menos ovipositadas, com 2,3 ovos por planta. Acala 90 apesar de ser a mais ovipositada, não apresentou maior porcentagem de ovos parasitados. FMX 966 atingiu índice de 82% aos 47 DAE e 100% de ovos parasitados aos 145 e 149 DAE. / Alabama argillacea (Hübner) is a key pest in brazilian cotton. The objective of this study was to evaluate the oviposition preference of A. argillacea and the eggs parasitism by Trichogramma pretiosum Riley, in different phenological plant stages. The work was carried out in the Chapadão do Sul region, during the 2006/07 growing season. It was used FMT 701, FMX 966, Acala 90, NuOPAL, Delta Penta, Coodetec 409 and DeltaOPAL cotton cultivars. RCB was the experimental design adapter, with five replications. The samples were taken weekly, verifying the number of eggs and parasited eggs in ten randomized plants per plot. The results were analyzed by F test and the treatments average were compared by Tukey test ( p 0,05). Acala 90 was the most preferred by the pest, occurring major peak of oviposition at 82 days after emergence (DAE), and second peak at 110 DAE, respectively, with 3.7 to 3.3 eggs/plant. NuOPAL and FMX 966 were the less oviposited, with 2.3 eggs/plant. Acala 90 was the most oviposited, but not the most parasited. FMX 966 presented 82% of parasitism in 47 DAE and 100% of parasited eggs in 145 and 149 DAE. NuOPAL presented minor density of eggs/plant, but presented minor percentage of parasited eggs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-13Bitstream added on 2014-06-13T19:12:59Z : No. of bitstreams: 1 rossi_jr_me_jabo.pdf: 1016425 bytes, checksum: 885b9804e9660ef2c359c1d1eb71a757 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Dentre os microrganismos empregados no controle de mosquitos, a bactéria Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) se destaca por apresentar atividade tóxica contra insetos da ordem Diptera, na qual produz inclusões cristalinas compostas pelas proteínas Cry, que são codificadas por genes cry presentes em um único plasmídeo. A produção dessas proteínas em grande escala está relacionada a mecanismos transcricionais, como por exemplo, a expressão de um gene sob o controle de um promotor forte. Tendo em vista que a bactéria Bti SPS1 (Patente PI0200228-0) foi isolada do território brasileiro e que possui potencial para o controle de vetores por produzir uma maior quantidade de esporos/cristais em menor tempo, este trabalho teve por finalidade a caracterização da região promotora dos genes cry4Aa, cry4Ba e cry11Aa de Bti SPS1 pelas técnicas de PCR e “Southern blotting”. Em associação a estas técnicas, foi realizado bioensaio para a verificação da mortalidade de larvas de Aedes aegypti. Os resultados das análises moleculares indicaram homologia no perfil de hibridização da região promotora da linhagem padrão Bti T14-001 e do isolado Bti SPS1. A quantificação das suspensões em espectrofotômetro (DO600nm) e a leitura de esporos em câmara de Neubauer, revelaram que o isolado Bti SPS1 produz uma maior quantidade de esporos/cristais em relação à linhagem padrão Bti T14-001. O bioensaio apresentou elevados índices de mortalidade. Estes resultados tornam a bactéria Bti SPS1 uma fonte promissora para novas formulações visando o controle de vetores. / Among the microorganisms used for mosquitoes’ control the bacterium Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) is frequently considered since it presents toxic activities’ against Diptera, producing crystal inclusions including Cry proteins, which are coded by a sole plasmid borne set of genes. The production of these proteins in large scale is related to transcriptional mechanisms, as an example, a particular gene expression controlled by a strong promoter. Since the Bti bacterial isolate SPS1 (Patent PI0200228-0) was isolated within the Brazilian territory and exhibits potential for the control of vector insects due to a higher crystal production ability in shorter time period, this work had as objective the characterization of the promotion region for the genes cry4Aa, cry4Ba e cry11Aa using PCR and “Southern blotting” techniques. Also some bioassays using Aedes aegypti larvae were carried out. The results from the molecular analysis have indicated homology for the hybridization profile from the promoter region from the type strain of Bti T14-001 and that of the SPS1 isolate. Spectrofotometric (OD600nm) and Neubauer chamber measures have revealed that the SPS1 isolate produces a higher amount of spore/crystal as compared to the Bti T14-001 strain. The bioassay presented higher mortality levels. These results seem to indicate that the isolate SPS1 is a promising bacterial strain to be used on formulations able to control insect vector pests.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-09-18Bitstream added on 2014-06-13T20:43:10Z : No. of bitstreams: 1 algazi_adf_dr_jabo.pdf: 940112 bytes, checksum: 2ed564ef1af617edc20e4563d7fa8fa4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Metriona elatior Klug é potencial candidato para o controle biológico de Solanum viarum Dunal (joá-bravo), principalmente em locais onde está planta é caracterizada como invasora e exótica. A especificidade é um forte requisito para a adequabilidade de um organismo como agente de controle biológico. Assim, a preferência alimentar das diferentes fases de desenvolvimento desse inseto em laboratório, foi avaliada em quatorze híbridos de Solanum melogena Linnaeus (berinjela). Adicionalmente, foi realizado à análise citogenética do inseto e do joá-bravo. O estudo iniciou-se pelos testes de dupla e múltipla escolha, em períodos de exposição de 24 e 48 horas, oferecendo discos de tecido foliar, em condições de placas de Petri. As avaliações da sobrevivência e consumo foliar das larvas e adultos (recém emergidos e sem distinção sexual) foram realizadas em folhas de joá-bravo e nos híbridos de berinjela mantidas túrgidas pela imersão do pecíolo em água. A área foliar foi medida antes e após quatro dias de exposição ao inseto e a longevidade avaliada através de observações diárias. Os adultos e as larvas de M. elatior apresentaram maior taxa de alimentação, sobrevivência e consumo na planta daninha. Dentre os híbridos comercias, Minikuro Kowishiki e Redonda Wase Oomaru foram mais preferidos pelos adultos e larvas, respectivamente, do crisomelídeo em estudo. No entanto, estes dados são preliminares para teste de risco. As análises citogenéticas permitiram quantificar o número cromossômico de 2n = 24 para ovos de M. elatior e 2n = 18 nas raízes de S. viarum. / Metriona elatior Klug is a potential agent for the biological control of Solanum viarum Dunal (tropical soda apple), especially in regions where this plant is an exotic and invasive plant. Feeding specificity is an important requirement for the adoption of an organism as a biological control agent. The feeding preference of this insect at different development stages was tested under lab conditions in fourteen Solanum melogena Linnaeus (eggplant) hybrids and S. viarum. In addition, a cytogenetical analysis was performed in tropical soda apple and the insect. The study started with dual and multiple choice testes with exposure times of 24 and 48 hours, by providing leaf disks to insects in Petri dishes. Survival and leaf consumption of larvae and adults (nearly emerged, regardless of sex) were determined in tropical soda apple and eggplant leaves kept turgid by petiole immersion in water. Leaf area was measured before and after four days of exposure to the insect while longevity was determined through daily observations. M. elatior adults and larvae showed higher feeding, survival and consumption rates on the weed specie. The eggplant commercial hybrids Minikuro Kowishiki and Redonda Wase Oomaru were the most preferred by adults and larvae, respectively. However, results are still preliminary for a risk test. Cytogenetical analyses allowed us to count the chromosome number of M. elatior (2n = 24) in eggs and S. viarum (2n = 18) in roots.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-06Bitstream added on 2014-06-13T19:55:58Z : No. of bitstreams: 1 santos_ps_me_jabo.pdf: 335704 bytes, checksum: 115114dd0becad3405d05e364da4f676 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP) / Nos últimos anos o ataque da Dactylopius opuntiae, conhecida como cochonilha-do-carmim, à palma forrageira no Nordeste, tem causado grandes prejuízos principalmente na região da Paraíba, Pernambuco e Alagoas. Uma alternativa em desenvolvimento para o controle da praga é a seleção de fungos patogênicos e virulentos ao inseto. Neste estudo foi proposta a avaliação de produtos a serem usados como componentes da formulação de bioinseticidas, para o preparo de caldas a serem aplicadas no controle da cochonilha. Foi utilizado o isolado LCB63 de Beauveria bassiana previamente selecionado quanto à patogenicidade e virulência ao inseto. Avaliou-se a exposição do isolado a diferentes concentrações (0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5 e 1,0%) de surfactantes (Unitol L/20, Ultranex NP/100, Ultratan D, Surfon 3403, Surfon 5409, Sabão OMO®, Detergente neutro Ypê®) através do crescimento de colônias, germinação após exposição temporária aos produtos e a influência do balanço hidrofílico-lipofílico (HLB) na dispersão e viabilidade de conídios. Em outro experimento, avaliou-se a tolerância dos conídios do isolado à radiação solar e ultravioleta em fluxo laminar sob efeito de diferentes concentrações de fotoprotetores (Neo Heliopan AV, Neo Heliopan E1000, Oxibenzona, Amido e Leite) em diferentes períodos de exposição. Finalmente, verificou-se a mortalidade de ninfas de D. opuntiae utilizando-se formulações contendo os surfactantes e fotoprotetores que apresentaram os melhores resultados nos experimentos anteriores. Unitol L/20 e Ultranex NP/100 não apresentaram efeito deletério na formação de colônias, e Surfon 5409, detergente neutro Ypê® e sabão OMO®, apresentaram grande toxicidade ao fungo. Não houve interferência de Unitol L/20, Ultranex NP/100 e Ultratan D na germinação dos conídios nos primeiros 10 minutos de exposição aos surfactantes... / For the last years the attack of Dactylopius opuntiae know as Carmine cochineal to forage palm, in northern states of Brazil, have causes great prejudice, mainly in the regions of Paraíba, Pernambuco e Alagoas. One developing alternative for the control of this pest is the selection of pathogenic and virulent fungi to the insect. This study proposed the evaluation of products to be used as compounds in the formulation of bioinsecticides, for the preparation of broths applied in the control of cochineal. The isolate LCB63 of Beauveria bassiana previously selected for its pathogenicity and virulence to the insect, was used. The exposition of the isolate in different concentrations (0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5 and 1.0%) of surfactants (Unitol L/20, Ultranex NP/100, Ultratan D, Surfon 3403, Surfon 5409, OMO® washing powder, Ypê® neutral detergent) was evaluated through the colonies growth, germination after temporary exposition to the products and influence of the hydro-lipofilic balance (HLB) in the dispersion and viability of the conidia. Another experiment evaluated the tolerance of the conidia to solar radiation and ultraviolet in laminar flow hood, under the effect of different photoprotector concentrations (Neo Heliopan AV, Neo Heliopan E1000, Oxibenzona, starch and milk) with different exposition timing. Finally, the mortality of D. opuntiae in the nymph stage was verified by using the formulations containing the surfactants and the photoprotectors that demonstrated the best results in the previous experiments. Unitol L/20 and Ultranex NP/100 didn’t show a deleterious effect in the formation of the colonies, while Surfon 5409, Ypê® neutral detergent and OMO® washing powder showed great toxicity to the fungus. There was no interference of Unitol L/20, Ultranex NP/100 and Ultratan D in the conidia germination during the first ten minutes of exposition to the surfactants... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-17Bitstream added on 2014-06-13T18:56:06Z : No. of bitstreams: 1 davolos_cc_me_jabo.pdf: 358910 bytes, checksum: 020446e7d045944b95dfcb371b8ab71e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bacillus thuringiensis é entomopatogênica muito utilizada no controle de insetos-praga e a predição de sua atividade tóxica é realizada por PCR na identificação de genes cry. Assim sendo, este trabalho objetivou elaborar novos oligonucleotídeos iniciadores para a detecção das subclasses cry1Ab, cry1Ac, cry1Ca, cry1Ea e cry1Fa, estudar o potencial de controle de 31 isolados de B. thuringiensis à duas populações de Spodoptera frugiperda por meio de bioensaios e analisar a taxa de expressão dos genes presentes nos isolados por qPCR em tempo real. Um par de oligonucleotídeo iniciador foi elaborado para cada subclasse e dentre os isolados testados 6,5% e 48,5% apresentaram os genes cry1Ab e cry1Ac, respectivamente, nenhum dos isolados apresentou os genes cry1Ca, cry1Ea e cry1Fa. Dentre os 31 isolados, 13 apresentaram mortalidade acima de 75% para as larvas da população de campo e apenas nove para a população de laboratório, mostrando que os isolados controlaram com maior eficiência as larvas da população de campo. A presença dos genes cry1Ab e cry1Ac conjuntamente foi associada à elevado potencial de controle às larvas da população de campo e baixo às larvas da população de laboratório. A expressão do gene cry1Ab, não foi constatada em nenhum dos isolados nas condições analisadas e, para o gene cry1Ac, todos os isolados apresentaram taxa de expressão. Os resultados de expressão foram associados ao potencial de controle das larvas de S. frugiperda das populações testadas, sendo que os elevados níveis de expressão do gene cry1Ac foram associados diretamente a elevado potencial de controle da população de laboratório. / Bacillus thuringiensis is entomopathogenic used for insect control and the prediction of the toxic activity is performed by PCR on the identification of cry genes. Thus, the aim of this research was develop news primers for detection the subclasses cry1Ab, cry1Ac, cry1Ca, cry1Ea and cry1Fa, study the potential control of 31 isolates of B. thuringiensis against two Spodoptera frugiperda populations by bioassays and analyze the rate of gene expression present on the isolates by real-time qPCR. A pair of primer was prepared for each subclass, the genes cry1Ab and cry1Ac were found in 6.5% and 48.5% of the isolates, respectively, and the genes cry1Ca, cry1Ea and cry1Fa were not detected on the isolates. Among the 31 isolates, 13 showed over 75% mortality for the larvae of field population and only nine isolates to the laboratory population, showing that the isolates controlled more efficiently the larvae of the field population. The presence of cry1Ab and cry1Ac genes were correlated to high levels of insecticidal activity for the larvae of field population and low levels control to the laboratory population. The expression of cry1Ab was not found in any of the isolates analyzed and the rates expression of cry1Ac gene was detected in all isolates. The results of gene expression were associated with the potential control to S. frugiperda, and the high levels of cry1Ac gene expression were linked directly to high levels of insecticidal activity for the laboratory population.

Orientador: Antônio Carlos Monteiro / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Lúcia Padilha Cury Thomaz de Aquino / Banca: Inajá Marchizeli Wenzel / Banca: Fernando Antonio de Ávila / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar "in vitro", a ação de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, para larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas não alimentadas de Rhipicephalus sanguineus e para onde as mesmas fases do ciclo de vida do ácaro mantidas alimentadas em cães por meio de câmaras de alimentação coladas no dorso do animal. A ação no ambiente habitado pelo cão foi avaliada por meio de infestações naturais em boxes com todos os estádios do ácaro. Foram usadas suspensões contendo 108 conídios mL-1 de cada isolado. Nos ensaios com as fases não alimentadas os estádios foram imersos nas suspensões dos fungos e no ensaio com de alimentação no cão os diversos estádios do ciclo biológico do carrapato foram imersos ou pulverizados com as suspensões de conídios, e no ensaio do ambiente do cão as suspensões foram pulverizadas em todo o canil. Nos ensaios "in vitro" foram avaliadas a mortalidade de larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas, e no ensaio com alimentação no cão avaliou-se a mortalidade de cada estádio e os indivíduos sobreviventes foram colocados para ingurgitar em coelhos, para avaliação dos estádios subseqüentes do ciclo do carrapato, até se obter novamente a mesma fase em que iniciaram o ciclo. No ensaio do ambiente do cão foi avaliada diariamente a infestação dos animais com as diversas fases do ciclo de vida do ácaro. B. bassiana e M. anisopliae promoveram significativa redução da sobrevivência de todos os estádios não alimentados, deixando claro a atividade patogênica para a fase não alimentada de R. sanguineus. No experimento com a alimentação em cães, B. bassiana promoveu mortalidade de fêmea, mas não houve mortalidade de larvas e ninfas, fato este também observado para M. anisopliae ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work aimed to assess the "in vitro" action of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, for unfed larvae, nymphs and adult male and female of Rhipicephalus sanguineus and for the same stadiums the tick life cycle maintained fed on dogs through feeding cameras fixed on dog's dorsal region. The action on the ambient where the dog lives was also evaluated through natural infestations with all of the stadiums of the acarid. Suspensions containing 108 conidia mL-1 of each isolated were used. In every assay with the unfed phase, the stadiums were immersed in the suspensions of the fungus and in the assays with feeding cameras, all the phases of the biological cycle of the tick were immersed or powdered with the conidial suspension and in the assay in the ambient suspensions were spread powdered in the whole box. In the "in vitro" assays it was evaluated the larvae, nymphs and adult male and female mortality. In the feeding cameras assay, the mortality of each stadium was evaluated and the surviving individuals were put for engorged in rabbits, to evaluate subsequent stadiums of the cycle of the tick, until obtain the same stadium wich was attained at the moment they began the cycle. In the environmental assay it was daily evaluated the infestation of the animals with all the phases of the life cycle of the acarid. B. bassiana and M. anisopliae promoted a significant reduction of the survival rate of all unfed stadiums of the tick what brings a strong evidence of pathogenicicity to unfed phases of R. sanguineus. In the experiment with feeding cameras, B. bassiana promoted female mortality, but mortality of larvae and nymphs were not observed fact this also observed for M. anisopliae. In the environment of the dog naturally infested with the stadiums of R. sanguineus was possible to observe that B. bassiana reduced the number of unfed and engorged larvae in the first week after treatment ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva / Banca: Sérgio Antonio de Bortoli / Resumo: Dentre os microrganismos empregados no controle de mosquitos, a bactéria Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) se destaca por apresentar atividade tóxica contra insetos da ordem Diptera, na qual produz inclusões cristalinas compostas pelas proteínas Cry, que são codificadas por genes cry presentes em um único plasmídeo. A produção dessas proteínas em grande escala está relacionada a mecanismos transcricionais, como por exemplo, a expressão de um gene sob o controle de um promotor forte. Tendo em vista que a bactéria Bti SPS1 (Patente PI0200228-0) foi isolada do território brasileiro e que possui potencial para o controle de vetores por produzir uma maior quantidade de esporos/cristais em menor tempo, este trabalho teve por finalidade a caracterização da região promotora dos genes cry4Aa, cry4Ba e cry11Aa de Bti SPS1 pelas técnicas de PCR e "Southern blotting". Em associação a estas técnicas, foi realizado bioensaio para a verificação da mortalidade de larvas de Aedes aegypti. Os resultados das análises moleculares indicaram homologia no perfil de hibridização da região promotora da linhagem padrão Bti T14-001 e do isolado Bti SPS1. A quantificação das suspensões em espectrofotômetro (DO600nm) e a leitura de esporos em câmara de Neubauer, revelaram que o isolado Bti SPS1 produz uma maior quantidade de esporos/cristais em relação à linhagem padrão Bti T14-001. O bioensaio apresentou elevados índices de mortalidade. Estes resultados tornam a bactéria Bti SPS1 uma fonte promissora para novas formulações visando o controle de vetores. / Abstract: Among the microorganisms used for mosquitoes' control the bacterium Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) is frequently considered since it presents toxic activities' against Diptera, producing crystal inclusions including Cry proteins, which are coded by a sole plasmid borne set of genes. The production of these proteins in large scale is related to transcriptional mechanisms, as an example, a particular gene expression controlled by a strong promoter. Since the Bti bacterial isolate SPS1 (Patent PI0200228-0) was isolated within the Brazilian territory and exhibits potential for the control of vector insects due to a higher crystal production ability in shorter time period, this work had as objective the characterization of the promotion region for the genes cry4Aa, cry4Ba e cry11Aa using PCR and "Southern blotting" techniques. Also some bioassays using Aedes aegypti larvae were carried out. The results from the molecular analysis have indicated homology for the hybridization profile from the promoter region from the type strain of Bti T14-001 and that of the SPS1 isolate. Spectrofotometric (OD600nm) and Neubauer chamber measures have revealed that the SPS1 isolate produces a higher amount of spore/crystal as compared to the Bti T14-001 strain. The bioassay presented higher mortality levels. These results seem to indicate that the isolate SPS1 is a promising bacterial strain to be used on formulations able to control insect vector pests. / Mestre