FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O objetivo do estudo foi identificar e caracterizar as proteÃnas do fluido da rete testis de carneiros Morada Nova. Os testÃculos, obtidos de seis carneiros Morada Nova abatidos, foram imediatamente dissecados. A cabeÃa do epidÃdimo foi separada para ter acesso aos ductos eferentes. O fluido oriundo dos ductos eferentes foi obtido por massagem do testÃculo. Posteriormente, o fluido foi centrifugado para remoÃÃo dos debris celulares e espermatozoides. As proteÃnas foram precipitadas com acetona a -20ÂC e quantificadas pelo mÃtodo de Bradford. Cada amostra (400 μg) foi focalizada em tiras de 13 cm (pH 4-7) e a segunda dimensÃo foi realizada em SDS-PAGE a 15%. Os gÃis obtidos foram escaneados com um ImageScanner II (GE Lifesciences, EUA) e analisados utilizando o aplicativo PDQuest versÃo 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, EUA). Os spots detectados apÃs a anÃlise dos mapas 2-D no PDQuest foram cortados dos gÃis e submetidos a digestÃo com tripsina. As proteÃnas foram identificadas por espectrometria de massa em tandem. A informaÃÃo sobre a proteÃna adquirida pela busca no MASCOT foi analisada atravÃs da utilizaÃÃo do programa para anotaÃÃes de proteÃnas (STRAP). Redes de interaÃÃo proteÃna-proteÃna foram obtidas a partir do banco de dados STRING versÃo 9.0. Nos gÃis foram detectados em mÃdia 227  32,1 spots, onde 51% das proteÃnas se encontraram acima de 40 kDa representando 65% da intensidade de todos os spots detectados nos gÃis. Com base na anÃlise da ontologia gÃnica, os processos biolÃgicos mais comuns associados Ãs proteÃnas do fluido rete testis foram regulaÃÃo (24,28%) e processos celulares (23,27%). LigaÃÃo (27,42%) e a atividade catalÃtica (19,30%) corresponderam Ãs funÃÃes moleculares mais frequentes. As proteÃnas mais intensamente expressas foram: albumina, clusterina, serotransferrina, imunoglobulina gama-1 e alfa-2-HS-glicoproteÃna. A maioria das proteÃnas identificadas desempenha importantes papÃis nos processos de espermatogÃnese, proteÃÃo espermÃtica, motilidade, capacitaÃÃo e reaÃÃo acrossÃmica. O fluido da rete testis possui vÃrias proteÃnas envolvidas na espermatogÃnese, o que representa um importante fator, uma vez que estas molÃculas contribuem para o desenvolvimento das cÃlulas germinativas, participando no transporte e conversÃo de substÃncias requeridas para a produÃÃo dos gametas masculinos. / The aim of the study was to identify and characterize the proteins of the rete testis fluid from Morada Nova rams. The testicles, obtained from six slaughtered Morada Nova rams, were immediately dissected. The head of the epididymis was separated to gain access to the efferent ducts. The fluid from the efferent ducts was obtained by testis massage. Thereafter, the fluid was centrifuged to remove cell debris and sperm. Proteins were precipitated with acetone at -20ÂC and quantified by the Bradford assay. Each sample (400 Âg) was focused in strips of 13 cm (pH 4-7) and the second dimension was conducted on SDS-PAGE 15%. The gels were scanned with an ImageScanner II (GE Lifesciences, USA) and analyzed using the PDQuest version 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, USA). Spots detected after PDQuest analysis of 2-D maps were cut from gels and submitted to trypsin digestion. Proteins were identified using tandem mass spectrometry. Protein information obtained by MASCOT was analyzed using the software tool for searching annotations of proteins (STRAP). Protein-protein interaction networks were obtained from STRING version 9.0 database. In the gels were detected 227  32.1 spots (mean  SD), where 51% of the proteins were found above 40 kDa, corresponding to 65% of the intensity of all spots detected. Based on gene ontology analysis, the most common biological processes associated with proteins from rete testis fluid were regulation (24.28%) and cellular process (23.27%). Binding (27.42%) and catalytic activity (19.30%) corresponded to the most frequent molecular functions for those proteins. The most intensely expressed proteins were: albumin, clusterin, serotransferrin, immunoglobulin gamma-1 chain and alpha-2-HS-glycoprotein. The rete testis fluid has a large quantity of proteins related to the spermatogenesis. This feature is important in view of the fact that these molecules contribute to the development of the germ cells, as a result of the transport and conversion of substances required to the production of male gametes.

Orientadores: Mary Anne Heidi Dolder, Karina Carvalho Mancini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T15:52:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moya_JulianaSiqueira_M.pdf: 6061809 bytes, checksum: 3498b49d3b5da2af4c020b2cec6420ed (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Iporangaia pustulosa (Arachnida: Opiliones) é uma espécie de opilião pertencente à subordem Laniatores. Machos adultos desta espécie tiveram seus aparelhos reprodutores dissecados, e seus testículos e vesículas seminais processados para microscopias de luz e eletrônicas de transmissão (convencional e citoquímica - E-PTA) e varredura. O aparelho reprodutor de I. pustulosa é composto por um testículo tubular, dois ductos deferentes que se unem em uma grande vesícula seminal. O testículo apresenta cistos com células germinativas em diferentes fases de desenvolvimento. A espermiogênese é centrípeta e caracterizada por: (1) ausência de formação de flagelo; (2) centro cinético reduzido a dois centríolos do tipo 9+0; (3) formação de manchete de microtúbulos, que auxiliam na compactação nuclear e na determinação da forma celular; (4) gradual compactação cromatínica nas diferentes fases das espermátides até a total compactação nos espermatozóides; (5) desenvolvimento de uma invaginação citoplasmática em direção ao núcleo, desprovida de organelas; (6) acrossomo formado a partir de vesículas do Golgi, composto por uma vesícula acrossomal, um material denso sub-acrossomal, mitocôndrias e pequenas vesículas associadas; (7) espermatozóides ovais, aflagelados, com membrana plasmática ondulada. Pelo método de E-PTA foram detectadas proteínas básicas em diferentes estruturas ao longo do desenvolvimento da espermiogênese. Os espermatozóides formados são liberados dos cistos no centro do testículo e são armazenados na vesícula seminal. Dispersos pela luz da vesícula, os espermatozóides apresentam os mesmos componentes observados no testículo, porém adquirem projeções extracelulares aderidas às ondulações da membrana recobrindo a superfície celular, exceto na região do acrossomo. Essas projeções são adquiridas gradualmente ao longo da extensão da vesícula seminal e são recobertas por um material amorfo na extremidade semelhante a um glicocálice. A espermiogênese de I. pustulosa e a morfologia dos espermatozóides testiculares e vesiculares são semelhantes ao descrito para a espécie Vonones sayi, também pertencente à sub-ordem Laniatores. Por não ocorrer formação de axonema durante a espermiogênese, os espermatozóides de I. pustulosa são aflagelados e tais projeções podem estar envolvidas no transporte do espermatozóide, sua ancoragem no interior da fêmea ou ainda no reconhecimento do óvulo / Abstract: Iporangaia pustulosa (Arachnida: Opiliones) is a harvestman species belonging to the Laniatores suborder. Adult males of this species had their reproductive tracts dissected and their testis and seminal vesicles were processed for light, transmission (routine preparations and cytochemistry: E-PTA) and scanning electron microscopy. The reproductive tract of I. pustulosa is composed of a tubular testis and two deferent ducts that connect to a large seminal vesicle. The testis presents cysts of germ cells in different developmental stages. Spermiogenesis in I. pustulosa is centripetal and characterized by (1) the lack of flagellum formation; (2) the kinetic center reduced to two centrioles of the 9+0 type; (3) the microtubule manchette formation; (4) the gradual chromatin condensation from spermatids to spermatozoa; (5) the cytoplasmic invagination development, without organelles, that extends into the nucleus; (6) the acrosome formed by Golgi vesicles, composed of acrossomal vesicles, a subacrosomic dense material, associated mitochondria and small vesicles; (7) the oval aflagellated spermatozoa, with a wavy plasma membrane. With the E-PTA method, basic proteins were detected in different structures throughout spermiogenesis. The spermatozoa are released from the cysts in the center of the testis and are kept in the seminal vesicle lumen. There, the spermatozoa present the same components observed in the testis, however they acquire extracellular projections, which adhere to the wavy membrane covering the cell surface, except in the acrosome area. These projections are acquired gradually along the seminal vesicle length and are covered by an amorphous material on their tips, resembling a glycocalix. The spermiogenesis of I. pustulosa as well as the morphology of testicular and seminal vesicle spermatozoa are similar to that described for Vonones sayi, also belonging to the Laniatores suborder. As axoneme formation does not occur during the spermiogenesis, I. pustulosa spermatozoa are aflagellated and their projections could help to transport sperm along the male and female reproductive tracts, anchor the spermatozoa inside the female and/or play a role in oocyte recognition / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

No Estado do Maranhão, na região da Baixada Maranhense, presenta na fauna silvestre o réptil Kinosternon scorpioides, um quelônio de água doce popularmente conhecido como jurará e que possui valor social, econômico e ambiental para os ribeirinhos da cidade de São Bento. Este estudo contempla suas características biológicas reprodutivas baseadas em seu ambiente natural, com o intuito de permitir a preservação e o estabelecimento de planos de manejo reprodutivo e de uso sustentável da espécie. Recentemente poucos estudos em todo o mundo tratam sobre os aspectos do ciclo reprodutivo de tartarugas em face das características endócrinas, na América do Sul estudos desse tipo são recentes e escassos, sendo assim este é o primeiro estudo, que se tem conhecimento, que elucida um padrão sazonal reprodutivo da espécie K. scorpioides, associando hormônios gonadais com aspectos comportamentais. Trinta e oito animais adultos tiveram seus órgãos reprodutivos caracterizados para as enzimas esteroidogênicas P450 aromatase, P450c17 e PNADPH redutase através de imunomarcação e blotting, além de índice gonadossomático, morfometria e concentração de testosterona, corticosterona e estradiol pela técnica de radioimunoensaio. As mudanças biométricas, morfometria celular e a esteroidogênese testicular entre os períodos chuvoso e seco sugerem que o estrógeno produzido pelas células de leydig podem afetar a produção e a apoptose de células germinais durante o processo de espermatogênese, e a presença das enzimas P450aromatase e P450c17 em células de leydig acompanhados com a recrudescência testicular também reforça a ideia, de que elas podem desempenhar um papel na quiescência testicular. Esse trabalho evidenciou que as enzimas citocromo P450, citocromo P450c17 e NADPH-citocromo P450-redutase estão presentes no testículo e epidídimo nos diferentes períodos climáticos e podem estar relacionados à síntese de testosterona em tartarugas concordando com os diferentes achados para biometria e espermiogênese nos períodos chuvoso e seco, o que, nos leva a sugerir um estado de quiescência durante o período seco e atividade espermatogênica no período chuvoso, semelhante ao que ocorre com as espécies que apresentam comportamento reprodutivo sazonal / In the state of Maranhão, in the lowland region, the reptile Kinosternon scorpioides, a freshwater chelonian, popularly known as swear has social, economic and environmental value to the riparian of the city of São Bento. This study includes reproductive biological characteristics based on their natural environment in order to enable the preservation and the establishment of reproductive management plans and sustainable use of the species. To date, few studies around the world address the aspects of the reproductive cycle of the turtles in the face of the endocrine features. In South America, these studies are recent and scarce. So this is the first study that elucidates a reproductive seasonal pattern of the species K. scorpioides, by associating gonadal hormones with behavioral aspects. Thirty-eight adult animals had their reproductive organs characterized for P450 steroidogenic enzyme aromatase, P450c17 and NADPH reductase by immunostaining and immunoblotting, and gonadossomatic index, morphology and concentration of testosterone, corticosterone and estradiol by radioimmunoassay. Biometric changes, cell morphology and testicular steroidogenesis between the rainy and dry seasons suggests that the estrogen produced by the leydig cells can affect the production and apoptosis of germ cells during spermatogenesis process; and the presence of P450aromatase and P450c17 enzymes in the leydig cells accompanied with testicular recrudescence also reinforces the idea that they may play a role in testicular quiescence. This work showed that the cytochrome P450 enzymes, P450c17 and NADPH-cytochrome P450 reductase are present in the testis and epididymis at different climatic periods and may be related to testosterone synthesis in turtles agreeing to the different findings for biometrics and spermiogenesis in and dry rainy periods. These findings suggest a state of quiescence during the dry season and spermatogenic activity during the rainy season, similar to those found in species with seasonal reproductive behavior

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-05-18T14:02:23Z No. of bitstreams: 1 Luiz Andre Rodrigues de Lima.pdf: 2120469 bytes, checksum: 547b856a4a41c79b0e6825587dbb6569 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-18T14:02:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Andre Rodrigues de Lima.pdf: 2120469 bytes, checksum: 547b856a4a41c79b0e6825587dbb6569 (MD5) Previous issue date: 2011-02-10 / The directly heat applied on the testis has given new information about the mechanisms triggers of spermatogenesis damages. Pecan nut shell [Carya illinoensis (Wangenh) K. Koch], is a vegetal by-product with low cost and elevated antioxidant potential and therefore can be considered a promissory substance, because it is rich in polifenols, condensed tannins, flavonoids substances and proanthocyanidis. The aim of this study was to verify whether the pecan nut tea has been protective effects against deleterious actions, produced by heat in the testicular parenchyma and its capacity to accelerate the spermatogenesis recovery process. Forty-five male Wistar rats (Rattus norvegicus, var. albinus) were used and divided in three groups. The testicular heat shock (HS) were been applied in all animals. The first one group G1 hadn’t received pecan nut tea on its diet; the second G2, only received the cited tea before (HS) and the third group G3 received the pecan nut tea before and after HS. The animals were evaluated on 15, 30 and 60 days after heat shock according to histopathological and histometrical testis alterations as well plasmatic testosterone. The occurrence of oxidative stress (OS) was observed through the determination of lipid peroxidation (LP), measured by the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). Carbonil group, reduced glutathione (GSH), vitamin C levels, catalase activity and protein content in testis were evaluated. In this work was observed a recover of testis weight recover in animals belong to G1 and G2 groups at 30 and 60 days. The epididymal weight of G3, at 15 and 30 days showed an improvement when related with G1 and G2 groups. The prostate and seminal gland weight in G2 and G3 had an improvement in weight when compared with G1 group, at 30 day. The pecan nut tea prevented a total Leydig cell volume reduction at 30 day post thermal injury. The total volume of seminiferous tubules was quickly recovered on G2 and G3 groups at 30 days than G1 group. The seminiferous tubule volume followed the same pattern of seminiferous tubule. Regarding to tunica propria and blood vessel, animals treated with pecan nut tea had a reduction of this parameter at 60 days. The total length of seminiferous tubules was maintained in animals that took continuously pecan nut tea. The plasmatic levels of testosterone were maintained at 15 days in G2 and G3 groups, and after that was noted a lower testosterone levels tendency at 30 and 60 days. By the other side, testosterone levels in animals of G1 group become higher gradually at 15 until 60 days. According to histopathological findings was noted that prior administration of pecan nut tea, before heat shock had better effect on recovery of spermatogenic process at 30 and 60 days. The treatment with pecan nut tea was able to prevent the TBARS increase and GSH depletion in testis. There weren’t significative changes on the plasmatic vitamin C levels, carbonil groups, catalase activity and protein content in the testis of animals. / O calor aplicado diretamente sobre o testículo tem fornecido novas informações sobre os mecanismos desencadeadores dos danos à espermatogênese. A casca da noz pecã [Carya illinoensis (Wangenh) K. Koch] é um sub-produto de origem vegetal de baixo custo e com elevado potencial antioxidante, constituída por polifenóis, taninos condensados, substâncias flavonóides e proantocianinas. O objetivo deste trabalho foi verificar se o chá de noz-pecã apresenta efeito preventivo e/ou restaurador contra as ações deletérias produzidas pelo calor no parênquima testicular, assim como avaliar a capacidade deste em acelerar a recuperação do processo espermatogênico. Foram utilizados 45 ratos Wistar machos (Rattus norvegicus, var. albinus) divididos em três grupos: G1- choque térmico, G2 - chá de noz-pecã pré-choque térmico e G3 - chá de noz-pecã pré e pós-choque térmico. Os animais foram avaliados aos 15, 30 e 60 dias pós-choque térmico quanto às alterações histopatológicas e histomorfométricas dos testículos, assim como, determinou-se níveis plasmáticos de testosterona. Parâmetros de estresse oxidativo (EO) foram avaliados no homogenato de testículo através da peroxidação lipídica (LPO), medida por meio da formação de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Grupo carbonil, glutationa reduzida (GSH), níveis de vitamina C (VIT C), atividade da catalase e conteúdo protéico também foram determinados. Neste trabalho foi constatada tendência de recuperação do peso testicular dos animais dos grupos G2 e G3 aos 30 e 60 dias. O peso epididimário dos animais do grupo G3, aos 15 e 30 dias apresentou uma melhora significativa em relação aos grupos G1 e G2. Os pesos da próstata e vesícula seminal em G2 e G3 aumentaram em relação ao grupo G1, aos 30 dias. A administração do chá da casca de noz-pecã preveniu a redução do volume total de células de Leydig no período de 30 dias pós-injúria. O volume total de túbulos seminíferos foi recuperado mais rapidamente nos grupos G2 e G3 aos 30 dias do que o grupo G1. O volume de epitélio seminífero seguiu o mesmo padrão do túbulo seminífero, porém aos 60 dias. No tocante à túnica própria e vasos sanguíneos, os animais tratados com chá tiveram redução volumétrica neste parâmetro aos 60 dias. O comprimento total dos túbulos seminíferos foi preservado nos animais que fizeram uso contínuo do chá de noz-pecã. Os níveis plasmáticos de testosterona foram mantidos aos 15 dias nos grupos G2 e G3, e posteriormente notou-se tendência de diminuição destes níveis aos 30 e 60 dias. Por outro lado, os níveis plasmáticos de testosterona nos animais do grupo G1 aumentaram gradativamente dos 15 aos 60 dias. De acordo com os achados histopatológicos, constatou-se que a administração prévia de chá de noz-pecã ao insulto térmico proporcionou uma melhor qualidade na recuperação do processo espermatogênico aos 30 e 60 dias. O tratamento com chá de noz-pecã foi capaz de prevenir o aumento do TBARS e diminuição do GHS nos testículos. Não houve diferença significativa nos níveis de VIT C, grupos carbonil, atividade da catalase e no conteúdo protéico dos testículos dos animais. Os resultados obtidos demonstraram que o tratamento com chá da casca de noz-pecã, tanto administrado previamente aos animais como depois da injúria térmica testicular apresentaram efeitos preventivos e restauradores da espermatogênese.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-05-20T12:31:27Z No. of bitstreams: 1 Marcio Botelho Pedrosa.pdf: 1800527 bytes, checksum: 11a367f2109b6bdb35c4c412d6888313 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T12:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcio Botelho Pedrosa.pdf: 1800527 bytes, checksum: 11a367f2109b6bdb35c4c412d6888313 (MD5) Previous issue date: 2015-08-06 / The advancement of technology and the significant increase in radio networks and telecommunications, causes, increasingly, people are exposed and immersed in electromagnetic fields, the effects appear to be controversial and parameter-dependent, and short-term can not represent an imminent risk when applied in a controlled manner, however, as these will behave with the immersion chronic forms in our daily lives is inconclusive and without sufficient studies. On the other hand, the short-wave electromagnetic fields (27.12 MHz) represent an alternative in treatment with electrotherapies for pains and inflammatory processes that affect millions of people worldwide. This work conducted application of short wave field into three groups of Wistar rats divided by daily exposure times of 15, 30 and 60 consecutive days and controls was studied the effects of electromagnetic fields may generate the testes and on spermatogenesis. With such irradiation observed changes primarily on Leydig cells and a variation in testosterone dose between groups, as well as a reduction in long-term prostate weight. Although no alterations in testicular weights and no indication of lesions histopathology with optical microscopy. / O avanço da tecnologia e o aumento significativo das redes de radiofrequências e telecomunicações, faz com que, cada vez mais, as pessoas fiquem expostas e imersas em campos eletromagnéticos, cujos efeitos aparentam ser controversos e parâmetro-dependentes, e a curto prazo podem não representar um risco iminente quando aplicados de forma controlada, no entanto, como estes comportar-se-ão com a imersão de formas crônicas em nosso cotidiano é inconclusivo e sem estudos suficientes. Por outro lado, os campos eletromagnéticos de ondas curtas (27,12 MHz) representam uma alternativa nos tratamentos com eletroterapias para algias e processos inflamatórios, que atingem milhares de pessoas pelo mundo. Este trabalho realizou aplicação do campo de ondas curtas em três grupos de ratos wistar divididos pelos tempos de exposição diário em 15, 30 e 60 dias consecutivos e seus controles, foi estudado os efeitos que os campos eletromagnéticos podem gerar nos testículos e sobre a espermatogênese. Com esta irradiação observou-se mudanças principalmente sobre as células de Leydig e uma variação na dosagem de testosterona entre os grupos, bem como uma diminuição do peso da próstata a longo prazo. Embora não tenham ocorridas alterações nos pesos testiculares e nenhum indicativo de lesões na análise histopatológica com a microscopia óptica.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-09T15:06:51Z No. of bitstreams: 1 Simone Regina Barros de Macedo.pdf: 2548752 bytes, checksum: 90acee3c721461fe6680346a6a39a92a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T15:06:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simone Regina Barros de Macedo.pdf: 2548752 bytes, checksum: 90acee3c721461fe6680346a6a39a92a (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Chemical sterilization is an efficient, inexpensive and suitable for sterilization programs on a large scale domestic animals. It is believed that the injection of intratesticular zinc-based solution promotes an inflammatory reaction, and this reaction may affect spermatogenesis, taking the animal sterility. By virtue of this inflammatory reaction cause discomfort to animals, it is recommended the use of analgesics and anti-inflammatories to minimize undesirable side effects. However, the use of these drugs may inhibit the desired sterilizing agent. Therefore, the present study aimed to investigate whether the administration of anti-inflammatory steroidal, non-steroidal inhibit the effect of sterilizing solution based zinc gluconate on testicular function of rats. Therefore, 72 animals at 90 days of age were kept in vivarium conditions at Department of Morphology and Physiology, Federal Rural University of Pernambuco. These animals were divided into six groups: control / saline (G1), control / DMSO + dipyrone (G2), dipyrone (G3); Celecoxib + dipyrone (G4), dipyrone, meloxicam + + (G5); dipyrone + dexamethasone + (G6). The animals were anesthetized and injected intratesticular solution based on zinc gluconate (Infertile®). Treatment with anti-inflammatories and anti pain were conducted using a single dose per day for 7 consecutive days. After 7, 15 and 30 days the animals were heparinized, anesthetized and perfused testis and epididymis were collected for qualitative analysis of the lesions and blood plasma for testosterone measurement using the method of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Regarding the histopathological lesions, the most frequent in the testes were the presence of inflammation, tubular necrosis, dystrophic calcification, congestion, edema and subcapsular tubular degeneration and atrophy of the epididymis duct, collagen deposition, and neovascularization and inflammatory infiltrate. As for the animals that underwent intratesticular injection of zinc gluconate, we found an average reduction of 74, 66 and 53% of testosterone levels in the respective experimental periods 7, 15 and 30 days. In this sense, found that intratesticular injection of Infertile® was effective on sterilization even after use of anti-inflammatory therapy. Thus anti-inflammatory steroidal and non-steroidal administered in this experiment for 7 days post-testicular infiltration can be used in chemical sterilization protocol to reduce nociceptive effects in animals infiltrate. However, the anti-inflammatory effect of dexamethasone interfered in action desired Infertile® in the first 15 days. Associations meloxicam / dipyrone and celecoxib / dipyrone may be therapy and anti-inflammatory analgesic of choice among the studied chemical sterilization protocols. / A esterilização química constitui uma alternativa eficiente, de baixo custo e adequada para programas de esterilização em grande escala de animais domésticos. Acredita-se que a injeção intratesticular da solução à base de zinco promove uma reação inflamatória e, esta reação pode comprometer a espermatogênese, levando o animal à esterilidade. Em virtude de essa reação inflamatória gerar desconforto aos animais, preconiza-se o uso de analgésicos e anti-inflamatórios para minimizar efeitos colaterais indesejáveis. Contudo, a utilização desses fármacos poderia inibir o efeito desejado do agente esterilizante. Portanto, o presente trabalho teve por objetivo investigar se a administração de anti-inflamatórios esteroidais, não-esteroidais inibem o efeito esterilizante da solução à base de gluconato de zinco sobre a função testicular de ratos Wistar. Para tanto, 72 animais com 90 dias de idade foram mantidos em condições de biotério no Departamento de Morfologia e Fisiologia da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Esses animais foram divididos em seis grupos experimentais: controle/ solução salina (G1); controle/ DMSO + dipirona sódica (G2); dipirona sódica (G3); Celecoxibe + dipirona sódica (G4); meloxicam + dipirona sódica + (G5); dexametasona + dipirona sódica + (G6). Os animais foram anestesiados e submetidos à injeção intratesticular de solução à base de gluconato de zinco (Infertile®). Os tratamentos com anti-inflamatórios e antiálgico foram realizados através de uma dose única por dia, durante 7 dias consecutivos. Após 7, 15 e 30 dias os animais foram heparinizados, anestesiados e perfundidos, sendo coletados testículos e epidídimos para análise qualitativa das lesões e plasma sanguíneo para dosagem de testosterona utilizando o método de ensaio imunoenzimático (ELISA). Com relação às lesões histopatológicas, as mais frequentes nos testículos foram à presença de processo inflamatório, necrose tubular, calcificação distrófica, congestão, degeneração tubular e edema subcapsular e nos epidídimos atrofia de ducto, deposição de colágeno, neovascularização e infiltrado inflamatório. Quanto aos animais que foram submetidos à injeção intratesticular de gluconato de zinco, constatou-se redução média de 74, 66 e 53 % dos níveis de testosterona nos respectivos períodos experimentais 7, 15 e 30 dias. Neste sentido, Constatou-se que a injeção intratesticular de Infertile® foi eficiente em promover esterilização mesmo após utilização de terapia anti-inflamatória. Assim anti-inflamatórios esteroidais e não-esteroidais administrados, neste experimento, durante 7 dias pós-infiltração testicular podem ser utilizados no protocolo de esterilização química para reduzir os efeitos álgicos nos animais infiltrados. Contudo, o efeito anti-inflamatório da dexametasona interferiu na ação desejada do Infertile® nos 15 primeiros dias. As associações meloxicam/dipirona ou celecoxibe/dipirona podem ser a terapia antiálgica e anti-inflamatória de eleição dentre os protocolos de esterilização química estudados.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-07T15:17:13Z No. of bitstreams: 1 Thiago Augusto Pereira Moraes.pdf: 1403494 bytes, checksum: 178fa823d17d452549f791d6c6584857 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-07T15:17:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thiago Augusto Pereira Moraes.pdf: 1403494 bytes, checksum: 178fa823d17d452549f791d6c6584857 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / It was objectified to use increasing doses of pentoxifylline on the critical period of the testicular development of Wistar rats, aiming to keep high levels of AMPc in the Sertoli cells and to increase the intrinsic income of spermatogenesis and sperm production in adult rats. There were used 37 neonate Wistar rats, which were submitted to many treatments during first 21 days of life, according to experimental groups: control (n=10), 1mg/kg (n=10), 5mg/kg (n=9) and 10mg/kg (n=8) of pentoxifylline. The animal weight was obtained daily, in this period, on the control and treated groups. On the second experiment, it was used 39 adult Wistar rats, which were submitted to many treatments, between 90 and 150 days of life. in accordance with the experimental group: control (n=9), 15mg/kg (n=10), 30mg/kg (n=10) and 60mg/kg (n=10) of pentoxifylline. The animal weight was carried through daily, in this period, on the control and treated groups. At the 90 days (Exp. 1) and 150 days (Exp. 2) of the experimental period, the rats of each group were submitted to anesthesia and intracardiac perfusion. Later, the testis, epididimes and seminal vesicle were removed and weighted. The testis were fragmented (2mm) and put in perfusion solution. For studies with light microscope, the fragments were processed routinely for inclusion in plastic resin with glycol methacrylate. Histologic cuts (4 μm) were stained in blue of toluidine/borate of sodium (1%) and analyzed. On the Experiment 1, the testis weight of animals treated with 5mg/kg was higher (13%) than those observed in the animals treated with biggest dose. The seminal vesicle of the animals treated with 5mg/kg presented increase of 17% and 26% in weight in relation to the 1mg/kg and control groups, respectively. The net weight of testis had significant reduction in the group treated with 10 mg/kg when compared to the group treated with 5mg/kg. The seminiferous tubule and epithelium volumes increased in the group of 5mg/kg when compared to the control and 10mg/kg groups. The number of Sertoli cell per transversal section had significant reduction in the groups treated with 5mg/kg and 10mg/kg when compared to control and 1mg/kg groups. Spermatides rounded by transversal section had numerical reduction in the group treated with 10mg/kg when compared with animals treated with 1mg/kg. The index of Sertoli cell (ICS) significantly increased in the animals treated with 5mg/kg in comparison to the control group. On the animals that received increased doses of pentoxifylline between 90 and 150 days of life, the higer doses of pentoxifylline had decrease of testicular parenchyma on the lume of seminiferous tubules and increased the proper tunic theses tubules. On the intertubular compartment, the highest doses of this PDE’s inhibitor increased the conjutive tissue volume and decreased the lymphatic space. The volumetry of Leydig cells increased on the treated groups with the doses of 30 and 60 mg/kg de pentoxifyllina when compared with animals treated with lower doses. The number of spermatogonia A increased on the 30 and 60 mg/kg when compared to control group. In accordance with the results, the use of the pentoxifylline during the critical period of the neonatal testis development in Wistar rats was not capable to induce increase in the population of Sertoli cells, as well the pentoxifylline during 60 days in adult Wistar rats was not capable to increase the intrinsic income of spermatogenesis and sperm production. / Objetivou-se estudar a influência da pentoxifilina no desenvolvimento testicular durante o período neonatal e no processo espermatogênico de ratos Wistar adultos. Foram utilizados 37 ratos neonatos Wistar, os quais foram submetidos aos diversos tratamentos, durante os primeiros 21 dias de vida, de acordo com o grupo experimental: controle (n=10), 1mg/kg (n=10), 5mg/kg (n=9) e 10mg/kg (n=8) de pentoxifilina. Para o segundo experimento, foram utilizados 39 ratos Wistar adultos, os quais foram submetidos aos diversos tratamentos, entre 90 e 150 dias de vida, de acordo com o grupo experimental: controle (n=9), 15mg/kg (n=10), 30mg/kg (n=10) e 60mg/kg (n=10) de pentoxifilina. A pesagem dos animais foi realizada diariamente, nos grupos controle e tratados de cada experimento. Para a realização das análises histológicas e histométricas, os ratos de cada experimento foram submetidos à heparinização e anestesia e, posteriormente, submetidos à perfusão intracardíaca com solução fisiológica de NaCl a 0,9%, acrescida de heparina sódica e nitroprussiato. Após a lavagem do sistema vascular, os animais foram perfundidos com solução fixadora de glutaraldeído a 4%, em tampão fosfato de sódio, pH 7,2 e 0,01M. Posteriormente, os testículos, epidídimos e vesícula seminal foram removidos e pesados. Os testículos foram seccionados em fragmentos de 2mm e refixados na mesma solução de perfusão. Para os estudos ao microscópio de luz, os fragmentos foram processados rotineiramente para inclusão em resina plástica à base de glicol metacrilato. Cortes histológicos de 4 μm de espessura foram corados em azul de toluidina/borato de sódio a 1% e analisados. Em relação ao primeiro experimento, o peso testicular dos animais tratados com 5mg/kg foi maior 13,3% do que o observado nos animais tratados com a maior dose. O número de células de Sertoli por secção transversal sofreu redução significativa nos grupos tratados com 5mg/kg e 10mg/kg em relação aos grupos controle e tratado com 1mg/kg. O índice de célula de Sertoli (ICS) aumentou significativamente nos animais tratados com 5mg/kg em comparação ao grupo controle. Em se tratando do segundo experimento, as maiores doses de pentoxifilina promoveram redução no volume do parênquima testicular alocado no lume dos túbulos seminíferos e aumentaram a túnica própria destes túbulos. A volumetria das células de Leydig aumentou nos grupos tratados com as doses de 30 e 60mg/kg de pentoxifilina quando comparada com os animais tratados com a menor dose. Conclui-se que a utilização da pentoxifilina durante o período crítico do desenvolvimento testicular neonatal em ratos Wistar não foi capaz de induzir aumento na população das células de Sertoli, assim como a utilização da pentoxifilina durante 60 dias em ratos Wistar adultos não foi capaz de aumentar o rendimento intrínseco da espermatogênese e produção espermática.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_juliano_lacava_pereira.pdf: 1194037 bytes, checksum: 9990bc185909cc08288cd6230c0a9be6 (MD5) Previous issue date: 2011-07-18 / Several recombinant proteins have been studied as immunocontraception agents in mammals, among them the Gonadotropin-releasing hormone (GnRH). Nevertheless, due to its low molecular weight, GnRH needs to be conjugated with a carrier protein. Among the eukaryotic platforms the yeast Pichia pastoris, which are able of promoting post-translational modifications to expressed recombinant protein. The aim of this study was to clone and express the GnRH/LTB chimera in P. pastoris, and to test it as an immunocontraceptive. In order to accomplish this, sequences of P. pastoris codons usage were synthesized and cloned into the plasmid pPICZαB. The plasmid containing the sequence were propagated and transformed into yeast by electroporation. The transformed colonies were selected by resistance to antibiotics and confirmed by Colony Blotting. The selected clone was cultivated, induced and the protein expressed in supernatant. The protein was concentrated and used as a vaccine antigen. BALB/c males mice were vaccinated twice 15 apart with 100µg de LTB/GnRH adjuvanted with aluminum hydroxide. The immune response was evaluated by ELISA, showing seraconversion in vaccinated animals. The sperm concentration in the control group was 16.93 x 107 and 8.00 x 107 sperm/mL in the immunized group. Vaccination caused a reduction of spermatogenesis (p < 0,05), vacuolization and disorganization of the seminiferous tubules. We concluded that the yeast was able to express the recombinant protein LTB/GnRH, and it demonstrated immunocontraceptive potential in mice. / Diversas proteínas recombinantes estão sendo pesquisadas para utilização na imunocontracepção de mamíferos. Entre elas, o hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH), entretanto devido ao seu baixo peso molecular há necessidade de associá-lo a uma molécula carreadora. Dentre as plataformas eucarióticas, encontra-se a levedura Pichia pastoris que tem possibilitado expressão e modificações pós-traducionais das proteínas recombinantes. O objetivo deste trabalho foi clonar e expressar a quimera LTB/GnRH em P. pastoris, visando sua utilização como imunocontraceptivo. Para tanto, sequências com os códons preferenciais de P. pastoris da proteína foram sintetizadas e clonada no plasmídeo pPICZαB. O plasmídeo foi propagado e transformado na levedura por eletroporação. As colônias transformadas foram selecionadas por resistência antibiótica e confirmadas por Colony Blotting. O clone selecionado foi cultivado e após indução expressou a proteína no sobrenadante. A proteína foi concentrada e utilizada como antígeno vacinal. Camundongos BALB/c machos foram vacinados com duas doses de 100µg de LTB/GnRH adsorvidas em hidróxido de alumínio com intervalo de 15 dias. A resposta imune foi avaliada por ELISA, mostrando soroconversão nos animais imunizados. A concentração espermática no grupo controle foi 16,93 x 107 e no grupo imunizado 8,00 x 107 espermatozóides/mL. A imunização induziu a redução da espermatogênese (p < 0,05), vacuolização nos túbulos seminíferos e desorganização testicular. Concluiu-se que a levedura foi capaz de expressar a proteína LTB/GnRH recombinante e a mesma apresentou potencial imunocontraceptivo em camundongos.

In our environment there are many compounds which can negatively influence humans and wildlife. Every day, a vast number of environmental pollutants are released into our environment and there is no way to avoid their exposure. Some of these compounds can even mimic endogenous hormones and interfere with our endocrine system (so called endocrine disruptors), which is the key regulatory system controlling almost all physiological processes in human and animal bodies. Also the reproductive system is largely regulated by various hormones, and their proper function is crucial for gamete formation, fertilization and embryo development. Environmental pollutants are therefore considered as one of the possible causes of increased infertility in human population. This prompted us to study the effect of two endocrine disruptors (tetrabromobisphenol A - TBBPA, and zearalenone - ZEA) on the male mouse reproductive system in vivo. According to our results, TBBPA is able to induce apoptosis as well as changes in the expression of selected testicular genes and sperm protamination. Our results also suggest that permanent exposure to TBBPA slightly enhances its effect in the next generation, depending on whether the parents have been affected or not. We hypothesized that differential protamination of the sperm DNA...

Les capacités d’auto-renouvellement ou de différenciation progressive en gamètes des cellules souches spermatogoniales (SSC) sont indispensables à la production de spermatozoïdes tout au long de la vie des individus de sexe mâle. Les travaux réalisés au cours de la thèse ont eu pour objectif de mieux comprendre les mécanismes cellulaires et moléculaires potentiellement impliqués dans le contrôle du devenir des SSC chez les poissons téléostéens. Grâce à une nouvelle lignée de poisson-zèbre transgénique exprimant la GFP sous le contrôle d’un nouveau fragment promoteur du gène vasa, nous avons caractérisé une sous-population de spermatogonies indifférenciées composés de doublets asymétriques. L’ensemble de nos observations suggère que ces doublets asymétriques constituent un pool de cellules souches recrutées pouvant soit poursuivre leur différenciation spermatique soit participer à la dynamique de renouvèlement du stock de SSC.Une approche de séquençage à haut débit des transcrits exprimés au sein des spermatogonies indifférenciées fluorescentes et des cellules de Sertoli met en évidence la diversité des voies de régulation paracrine potentiellement impliquées dans le contrôle du devenir des SSC (molécules d’adhésion cellulaire, cytokines, facteurs de croissance…). Les analyses phylogénétiques montrent que certaines de ces voies de régulation sont conservées chez les Gnathostomes alors que d’autres ont été perdues chez les tétrapodes ou les mammifères seulement. Une approche comparée initiée chez la truite arc-en-ciel confirme l’intérêt générique des données acquises chez / By their ability to self-renew or differentiate into gametes, the spermatogonial stem cells (SSCs) are essential for sperm production throughout the life of male. The work done during the thesis had for objective the understanding of the cellular and molecular mechanisms potentially involved in the fate of the SSC in the teleost fish. With a new line of transgenic zebrafish expressing GFP under the control of a new gene promoter fragment vasa, we characterized a subpopulation of undifferentiated spermatogonia composed of asymmetric doublet. The observation of the GFP protein indicates that these doublets can fragment to generate isolated spermatogonia. Transplantation of fluorescent spermatogonial cells into the abdominal cavity of a recipient embryo shows that these cells have all functional properties of SSC. All our observations suggest that asymmetric doublet constitute a pool of stem cells with bivalent fate:they can continue their sperm differentiation or participate in the dynamic renewal of SSC pool. A rnaseq based transcritpome analysis of transcripts expressed in undifferentiated spermatogonia fluorescent and Sertoli cells highlights the diversity of paracrine regulatory pathways potentially involved in the control of the SSC (cell adhesion molecules, cytokines, growth factors, primary metabolites). Phylogenetic analyzes show that some of these regulatory pathways are well conserved among all Gnathostomes while others were lost in tetrapods or mammals only. A comparative approach initiated in rainbow trout generic confirms the interest of the data acquired in th