Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-20T18:45:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoMarcadoresEstresse.pdf: 2490341 bytes, checksum: f36be88a6e75778aefed2902bdd89d55 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-25T13:26:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoMarcadoresEstresse.pdf: 2490341 bytes, checksum: f36be88a6e75778aefed2902bdd89d55 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-25T13:26:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoMarcadoresEstresse.pdf: 2490341 bytes, checksum: f36be88a6e75778aefed2902bdd89d55 (MD5) Previous issue date: 2014 / O vírus Caraparu (CARV) é membro do grupo C do gênero Orthobunyavirus (família Bunyaviridae). Os vírus do grupo C foram primeiramente descritos na região da Amazônia Brasileira na década de 1950. O CARV foi isolado em 1956 de um macaco sentinela no estado do Pará. Nos países da América do Sul, os bunyavírus do grupo C estão entre os agentes mais comuns de doença febril em humanos e têm causado notáveis surtos nas últimas décadas. Dentre os sintomas da infecção pelo CARV no homem, destacam-se febre, cefaléia, mialgia, náuseas e fraqueza. Já em camundongos, o CARV causa hepatite, o que leva a acreditar que, algum grau de lesão hepática possa também ocorrer nas infecções humanas. Apesar da doença em humanos ser há tanto conhecida, foram poucos os estudos subsequentes pautando esse vírus no que diz respeito a sua patogenia. Estudos têm demonstrado que na patogênese de algumas doenças virais ocorre um aumento no estresse oxidativo, que resumidamente, é um distúrbio no balanço oxidante-antioxidante que pode levar a um potencial dano celular. Muitas células podem tolerar um grau de estresse oxidativo, pois elas possuem antioxidantes tais como a Glutationa, Superóxido Dismutase (SOD) e Catalase (CAT). Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar a patogênese hepática do CARV em camundongos e o possível envolvimento do estresse oxidativo e defesas antioxidantes nessa patologia. Após a infecção subcutânea de camundongos BALB/c, o CARV foi detectado no fígado e a histopatologia revelou hepatite aguda. Elevados níveis séricos de aspartato e alanina aminotransferases (AST/ALT) e alta expressão hepática da citocina pró-inflamatória Fator de Necrose Tumoral Alpha (TNF-α) foram encontrados nos animais infectados. A infecção pelo CARV não alterou os biomarcadores de estresse oxidativo, mas aumentou o conteúdo de Glutationa e alterou a expressão e atividade das enzimas SOD e CAT. Este trabalho é o primeiro que mostra alterações na homeostase oxidativa após infecção pelo CARV e, pode, em parte, ajudar a explicar melhor a patogênese hepática deste vírus, assim como a patogênese de outros membros da família Bunyaviridae. ____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Caraparu virus (CARV) is a member of Group C of the Orthobunyavirus genus (Bunyaviridae family). Group C viruses were firstly described in the brazilian Amazon region during the 1950s. The CARV was first isolated in 1956 from a sentinel monkey in state of Pará. In the countries of South America, bunyavirus Group C are among the common agents of human febrile illness and have caused notable outbreaks in recent decades. Among the symptoms of CARV infection in human stand out fever, headache, myalgia, vomiting and weakness. Already in mice CARV causes hepatitis, which leads to believe that some degree of liver injury may also occur in human infections. Although the disease in humans is already known to a time, few subsequent studies basing this virus regarding its pathogenesis. Studies have shown that in the pathogenesis of some viral diseases there is an increase in oxidative stress that, briefly, is a disturbance in the oxidant-antioxidant balance leading to potential cellular damage. Most cells can tolerate a mild degree of oxidative stress because they have antioxidant molecules such as glutathione, superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT). Therefore, the purpose of this study was to examine the hepatic pathogenesis of CARV in mice and the possible involvement of oxidative stress and antioxidant defenses on this pathology. Following subcutaneous infection of BALB/c mice, CARV was detected in the liver and histopathology revealed acute hepatitis. Increased serum levels of aspartate and alanine aminotransferases (AST/ALT) and greater hepatic expression of the proinflammatory cytokine Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) were found in infected animals. The CARV-infection did not alter the biomarkers of oxidative stress but caused increased GSH content and altered expression and activity of SOD and CAT. This is the first report of an alteration of oxidative homeostasis upon CARV infection, which may, in part, explain the hepatic pathogenesis of this virus, as well as the pathogenesis of other Bunyaviridae members.

Orientador: Ricardo Antunes de Azevedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:30:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_GuilhermeJoseGoncalves_D.pdf: 1076114 bytes, checksum: a6b5c1c85b9d597d9f61d04b0e962d8c (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-28T20:33:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_InfluênciaSuplementaçãoCafeina.pdf: 25302484 bytes, checksum: 36134eb93fcec49c878f070d4b0c917a (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-30T18:26:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_InfluênciaSuplementaçãoCafeina.pdf: 25302484 bytes, checksum: 36134eb93fcec49c878f070d4b0c917a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-30T18:26:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_InfluênciaSuplementaçãoCafeina.pdf: 25302484 bytes, checksum: 36134eb93fcec49c878f070d4b0c917a (MD5) Previous issue date: 2012 / Devido à utilização da cafeína como suplemento por atletas; sua relação com o estresse oxidativo gerado pelo exercício físico; e do alto consumo de café no Brasil, de sua importância como fonte de compostos bioativos na dieta, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a suplementação de cafeína influencia na performance física de ratas submetidas ao treinamento físico e sua relação com o estresse oxidativo. Para isso, foram realizados 2 experimentos, sendo o primeiro realizado com 40 ratas da linhagem Fischer, divididas em 4 grupos com 10 animais cada. Os grupos foram: C-controle, CC-controle+cafeína, T-treinado, TC-treinado+cafeína. Os animais dos grupos C e T receberam dieta AIN-93M e os animais dos grupos CC e TC, dieta AIN-93M + cafeína (12 mg/Kg/dia). No segundo experimento, foram utilizadas 28 ratas, sendo divididas nos mesmos 4 grupos com 7 animais cada. A dose de cafeína utilizada foi de 15 mg/Kg/dia. Nos 2 experimentos, os animais praticaram natação 5 dias/semana, 30 minutos/dia, durante 7 semanas e com aumento progressivo da carga, de 1 a 5% do peso corporal. Para os animais do 2º experimento, foram realizados dois testes de exaustão, sem carga. O primeiro após 30 dias de dieta suplementada ou não com cafeína e o segundo, no final do experimento. Esses animais foram submetidos ao teste do lactato, onde nadaram com carga de 7,5% do peso corporal. A ingestão alimentar, o ganho de peso foram monitorados semanalmente e após 7 semanas, os animais foram sacrificados, o sangue e os órgãos foram coletados para dosagens bioquímicas e de estresse oxidativo. Os resultados do primeiro experimento mostraram que os efeitos da cafeína foram: aumento da ingestão alimentar; elevação do peso relativo do fígado, do músculo gastrocnêmio, da gordura abdominal e dos níveis de PON (paraoxonase). Os resultados do segundo experimento mostraram que a suplementação da dieta com cafeína não aumentou o tempo de natação e a concentração de lactato sanguíneo não chegou à sua estabilização. Quanto aos seus efeitos, a cafeína foi responsável por elevar o ganho de peso; aumentar a massa muscular; elevar os níveis de TBARS (Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico) no músculo gastrocnêmio, a catalase no músculo sóleo e a proteína carbonilada no fígado. Quando associada ao grupo controle, a cafeína reduziu a proteína carbonilada no músculo gastrocnêmio e reduziu a atividade da catalase no fígado e rins quando associada ao grupo treinado. Além disso, quando associada ao grupo treinado elevou as concentrações de creatinina e glutationa e a atividade da catalase no coração. A adição de 12 mg de cafeína/kg na dieta de ratas Fischer mostrou um efeito positivo sobre a atividade da PON (paraoxonase) e a dose de 15 mg/kg apresentou uma ação tecido específica para as defesas antioxidantes. __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Caffeine has been used as a supplement by athletes and has association with oxidative stress that is generated by exercise, and due the high consumption of coffee in Brazil and its importance as a source of bioactive compounds in the diet, the aim of this study was to evaluate if caffeine supplementation influences on physical performance of rats subjected to physical training and its association with oxidative stress. Two experiments were carried out. The first one used 40 female Fischer rats, divided into 4 groups of 10 animals each. The groups were: C-control, CC-control+caffeine, T-trained, TC-trained+caffeine. The animals in groups C and T were fed with AIN-93M diet and animals of CC and CT groups with AIN-93M+caffeine (12 mg/kg/day) diet. In the second experiment, 28 female Fischer rats were used, divided in the same groups of seven animals each. The caffeine level used in the diet was 15 mg/kg/day. In the two experiments, the animals practiced swimming 5 days/week, 30 min/day during 7 weeks and the load was progressively increasing from 1 to 5% of body weight. In the animals of the second experiment, two exhaustion tests without load were performed. The first test was in 30 days of diet supplemented or not with caffeine, and the second at the end of the experiment. These animals were submitted to the lactate testing, they swam with a load of 7.5% of body weight. Food intake, weight gain was monitored weekly and after seven weeks, the animals were sacrificed, blood and organs were collected for biochemical and oxidative stress assays. The results of the first experiment showed that the effects of caffeine were: increasing food intake, raising the relative weights of liver, gastrocnemius muscle, abdominal fat and levels of PON. The results of the second experiment showed that supplementing the caffeine in the diet did not increase the swimming time and blood lactate concentration did not reach its stabilization. As to its effects, caffeine was responsible for raising the weight gain, increase muscle mass, increase levels of TBARS in the gastrocnemius muscle, catalase in the soleus muscle and protein carbonyl in the liver. When associated to the control group, caffeine reduced the protein carbonyl in gastrocnemius muscle and as well as the activity of catalase in the liver and kidneys when associated with the trained group. Moreover, when associated with the trained group increased creatinine concentrations and glutathione and catalase activity in the heart. The addition of 12 mg caffeine/kg in the diet of female Fischer rats showed a positive effect on the activity of PON and addition of 15 mg/kg showed an response tissue-specific in the antioxidant defenses.

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Enzimas são substâncias naturais que têm a função de promover reações químicas importantes para o adequado funcionamento do nosso organismo. Uma enzima-chave na degradação de toxinas produzidas pelo organismo chama-se superóxido dismutase. Quando esta enzima não é produzida, ocorre acúmulo de um composto tóxico denominado ânion radical superóxido no organismo, levando ao surgimento de várias doenças degenerativas. A suplementação de superóxido dismutase a pacientes que não produzem essa enzima é uma estratégia de tratamento que apresentar várias limitações. O presente estudo de mestrado dedicou-se a encontrar formas de produzir um sistema sintético capaz de imitar a ação da superóxido dismutase como alternativa de tratamento mais eficaz. Esse sistema consistiu em partículas esféricas extremamente pequenas contendo cério (um elemento químico presente no mineral monazita), aprisionadas no interior de uma rede altamente organizada de lipídio e água. Essa rede foi fundamental para dificultar a imediata dissolução das partículas em água, o que impediria sua utilização para os fins pretendidos. Cerio foi escolhido por ser capaz de doar e receber facilmente um elétron após formar ligação com o elemento oxigênio. Essa característica é fundamental para que possa atuar na degradação do ânion radical superóxido. A partir dos resultados obtidos, foi possível demonstrar que o sistema é ativado na presença de um componente químico presente apenas em locais no organismo onde a ação da enzima superóxido dismutase é necessária. Ensaios realizados de forma simplificada em laboratório mostraram que o sistema é capaz de imitar a ação da superóxido dismutase após ser ativado. Isto abre perspectivas promissoras para um tratamento inteligente e adaptável às necessidades do paciente no contexto de doenças causadas pela falta de superóxido dismutase no organismo. É importante ressaltar que este estudo de mestrado deteve-se no desenvolvimento e compreensão aprofundada dos aspectos químicos e físicos do sistema, podendo ser classificado como ciência básica. Ainda há um longo caminho a ser percorrido antes que esse sistema possa estar disponível no arsenal terapêutico dos médicos.

As superóxido dismutases são metaloenzimas amplamente distribuídas entre os organismos e desempenham um importante papel na defesa celular contra os danos provocados por espécies reativas de oxigênio mediados pelo radical superóxido, um subproduto do metabolismo oxidativo. As SODs são classificadas em quatro grupos, dependendo de seu cofator metálico, em CuZnSOD; MnSOD, FeSOD e NiSOD. Além de sua função intrínseca, as SODs estão implicadas em outros processos com a adesão e a sinalização celular e na patogenicidade. Em particular, a participação das SODs em processos patogênicos tem se mostrado muito ampla, abrangendo os mais variados sistemas patógeno-hospedeiro. Visando estudar o processo de penetração do fungo filamentoso Metarhizium anisopliae em carrapatos, as enzimas com atividade SOD foram descritas e parcialmente caracterizadas, apresentando três tipo de atividade: CuZn, Mn e Fe.Para melhor caracterizar as SODs de M. anisopliae, neste trabalho purificamos e caracterizamos a CuZnSOD. A enzima apresenta uma massa presumida em géis desnaturantes de ~20 KDa. A etapa de cromatografia de gel filtração foi substituída, com sucesso, por uma cromatografia de afinidade, apresentando ganho no rendimento total de 92%, em relação ao rendimento final encontrado na purificação utilizando-se resina Sephacel Sephadex G-150. Em relação à amostra inicial (P95%), o fator de purificação foi de 140% maior. Padronizamos um ensaio enzimático de quantificação e discriminação da atividades SODs, que se mostrou adequado e eficaz para a detecção de SODs em extratos celulares brutos e/ou fracionados. Nos ensaios espectrofotométricos, a CuZnSOD purifica de M. anisopliae foi inibida por 2 mM de KCN. Inibição da atividade em presença de 2 mM de peróxido de hidrogênio também foi observada. PMSF (2 mM) e cloreto de mercúrio (5 mM) inibiram a atividade da enzima, indicando que pode estar ocorrendo uma inibição inespecífica através de resíduos de serina e cisteínas não reativos, presente na enzima. A purificação de cada uma das SODs descritas para M. anisopliae, é um passo importante para a elucidação da função destas enzimas durante processo metabólicos e no processo de infecção de M. anisopliae em seus hospedeiros. A produção de anticorpos mono- e policlonais contra estas proteínas,e sua posterior aplicação na determinação da localização celular de cada uma, é um destes passos. Além disso, pode facilitar o isolamento de genes que codificam para as SODs, possibilitando a obtenção de mutantes e/ou linhagens transgênicas e estudos da expressão destas proteínas.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:44:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: desenvolver um modelo experimental de carcinogênese em colo de rato induzido pelo azoximetano e estabelecer um padrão de ação protetora do hexafosfato de inositol, pela expressão da enzima superóxido dismutase em foco de cripta aberrante. Métodos: 48 ratos Wistar, adultos, machos, foram mantidos em observação por seis semanas. GI (n=12) recebeu injeções de solução salina subcutânea durante a terceira e quarta semanas, enquanto que o GII (n=12), no mesmo período, recebeu azoximetano (AOM) na dose 20mg.Kg-1 subcutânea. O GIII (n=12) recebeu inositol hexafosfato 1% (IP6) na água de beber durante as seis semanas, enquanto que o GIV, além do IP6 na água de beber, recebeu também as injeções subcutâneas de AOM durante a terceira e quarta semanas. Ao término da sexta semana os animais sofreram a eutanásia e foram coletados segmentos de intestino grosso à cerca de um centímetro da transição íleocólica. Fragmentos foram preparados e submetidos à coloração imunoistoquímica para de anticorpo primário anti-SOD1 (superóxido dismutase1) e anticorpo secundário antirato, revelador de cor DAB (diamino-benzidina) com obtenção de expressão SOD1 na coloração marrom. A porcentagem da expressão de SOD em FCA (foco de cripta aberrante) foi quantificada por meio de processamento de imagem assistida por computador (ImageLab). Os resultados foram submetidos aos testes de análise de variância (ANOVA) e estabelecido o nível de 5% (p≤0,05) para rejeição da hipótese de nulidade. Resultados: a porcentagem média da expressão da SOD no GI (16,0 ± 3,7) foi semelhante ao GIII (16,9 ± 3,1) mostrando que a solução salina (controle) e o IP6 não provocaram alterações em FCA; o grupo II (26,7 ± 3,5) mostrou uma significante porcentagem de expressão da SOD em FCA, demonstrando sua capacidade de provocar lesões pré-malignas em cólon de roedores; por outro lado este estímulo de indução carcinogênica foi protegido pela administração de IP6 representada pelos resultados do GIV (20,9 ± 3,3). Conclusões: O estímulo carcinogênico do AOM proporcionou um modelo de carcinogênese em colo de rato Wistar que foi protegido pela administração do IP6, sendo que a expressão da SOD em FCA mostrou-se um parâmetro imunoistoquímico confiável para representar as lesões pré-neoplásicas em FCA. / Objective: to develop an experimental model of carcinogenesis in Wistar rats induced by the azoximethane and to establish a pattern of protecting action of the inositol hexafosfate, for the expression of the enzyme superoxide dismutase in foci of aberrant crypts. Methods: 48 Wistar male rats, adults, were maintained in observation by six weeks. GI (n=12) received injections of subcutaneous saline solution during the third and fourth weeks, while GII (n=12), in the same period, received 20mg.Kg-1 of subcutaneous azoximetano (AOM). GIII (n=12) received inositol hexafosfato 1% (IP6) in the drinking water during the six weeks, while GIV, besides IP6 in the drinking water, also received the subcutaneous injections of AOM during the third and fourth weeks. At the end of the sixth week large intestine segments were collected to the about a centimeter of the ileo-colic transition. Fragments were prepared and submitted to the imunohistochemical process to antibody primary anti-SOD1 (superoxide dismutase1) and antibody secondary anti-rat, color discloser DAB (diamino-benzidina) with expression obtaining SOD1 in the brown coloration. The percentage of the expression of SOD in FCA (focus of aberrant crypt) was quantified through image processing attended by computer (ImageLab). The results were submitted to the tests of variance analysis (ANOVA) and established the level of 5% (p≤0.05) for rejection of the nullity hypothesis. Results: the medium percentage of the expression of SOD in GI (16.0 ± 3.7) was similar to GIII (16.9 ± 3.1) showing that the saline solution (controls) and IP6 didn't provoke alterations in FCA; the group II (26.7 ± 3.5) showed a significant percentage of expression of SOD in FCA, demonstrating the capacity to provoke preneoplasic lesions in colon of rodents; on the other hand this promotion of carcinogenic induction was protected by the administration of IP6 showed by the results of GIV (20.9 ± 3.3). Conclusions: The carcinogenic action of AOM provided a carcinogênese model in colon of Wistar rat that was protected by the administration of IP6, and the expression of SOD in FCA was a histochemical parameter reliable to represent the preneoplasic lesions in FCA. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Enzimas são substâncias naturais que têm a função de promover reações químicas importantes para o adequado funcionamento do nosso organismo. Uma enzima-chave na degradação de toxinas produzidas pelo organismo chama-se superóxido dismutase. Quando esta enzima não é produzida, ocorre acúmulo de um composto tóxico denominado ânion radical superóxido no organismo, levando ao surgimento de várias doenças degenerativas. A suplementação de superóxido dismutase a pacientes que não produzem essa enzima é uma estratégia de tratamento que apresentar várias limitações. O presente estudo de mestrado dedicou-se a encontrar formas de produzir um sistema sintético capaz de imitar a ação da superóxido dismutase como alternativa de tratamento mais eficaz. Esse sistema consistiu em partículas esféricas extremamente pequenas contendo cério (um elemento químico presente no mineral monazita), aprisionadas no interior de uma rede altamente organizada de lipídio e água. Essa rede foi fundamental para dificultar a imediata dissolução das partículas em água, o que impediria sua utilização para os fins pretendidos. Cerio foi escolhido por ser capaz de doar e receber facilmente um elétron após formar ligação com o elemento oxigênio. Essa característica é fundamental para que possa atuar na degradação do ânion radical superóxido. A partir dos resultados obtidos, foi possível demonstrar que o sistema é ativado na presença de um componente químico presente apenas em locais no organismo onde a ação da enzima superóxido dismutase é necessária. Ensaios realizados de forma simplificada em laboratório mostraram que o sistema é capaz de imitar a ação da superóxido dismutase após ser ativado. Isto abre perspectivas promissoras para um tratamento inteligente e adaptável às necessidades do paciente no contexto de doenças causadas pela falta de superóxido dismutase no organismo. É importante ressaltar que este estudo de mestrado deteve-se no desenvolvimento e compreensão aprofundada dos aspectos químicos e físicos do sistema, podendo ser classificado como ciência básica. Ainda há um longo caminho a ser percorrido antes que esse sistema possa estar disponível no arsenal terapêutico dos médicos.

As superóxido dismutases são metaloenzimas amplamente distribuídas entre os organismos e desempenham um importante papel na defesa celular contra os danos provocados por espécies reativas de oxigênio mediados pelo radical superóxido, um subproduto do metabolismo oxidativo. As SODs são classificadas em quatro grupos, dependendo de seu cofator metálico, em CuZnSOD; MnSOD, FeSOD e NiSOD. Além de sua função intrínseca, as SODs estão implicadas em outros processos com a adesão e a sinalização celular e na patogenicidade. Em particular, a participação das SODs em processos patogênicos tem se mostrado muito ampla, abrangendo os mais variados sistemas patógeno-hospedeiro. Visando estudar o processo de penetração do fungo filamentoso Metarhizium anisopliae em carrapatos, as enzimas com atividade SOD foram descritas e parcialmente caracterizadas, apresentando três tipo de atividade: CuZn, Mn e Fe.Para melhor caracterizar as SODs de M. anisopliae, neste trabalho purificamos e caracterizamos a CuZnSOD. A enzima apresenta uma massa presumida em géis desnaturantes de ~20 KDa. A etapa de cromatografia de gel filtração foi substituída, com sucesso, por uma cromatografia de afinidade, apresentando ganho no rendimento total de 92%, em relação ao rendimento final encontrado na purificação utilizando-se resina Sephacel Sephadex G-150. Em relação à amostra inicial (P95%), o fator de purificação foi de 140% maior. Padronizamos um ensaio enzimático de quantificação e discriminação da atividades SODs, que se mostrou adequado e eficaz para a detecção de SODs em extratos celulares brutos e/ou fracionados. Nos ensaios espectrofotométricos, a CuZnSOD purifica de M. anisopliae foi inibida por 2 mM de KCN. Inibição da atividade em presença de 2 mM de peróxido de hidrogênio também foi observada. PMSF (2 mM) e cloreto de mercúrio (5 mM) inibiram a atividade da enzima, indicando que pode estar ocorrendo uma inibição inespecífica através de resíduos de serina e cisteínas não reativos, presente na enzima. A purificação de cada uma das SODs descritas para M. anisopliae, é um passo importante para a elucidação da função destas enzimas durante processo metabólicos e no processo de infecção de M. anisopliae em seus hospedeiros. A produção de anticorpos mono- e policlonais contra estas proteínas,e sua posterior aplicação na determinação da localização celular de cada uma, é um destes passos. Além disso, pode facilitar o isolamento de genes que codificam para as SODs, possibilitando a obtenção de mutantes e/ou linhagens transgênicas e estudos da expressão destas proteínas.

As superóxido dismutases são metaloenzimas amplamente distribuídas entre os organismos e desempenham um importante papel na defesa celular contra os danos provocados por espécies reativas de oxigênio mediados pelo radical superóxido, um subproduto do metabolismo oxidativo. As SODs são classificadas em quatro grupos, dependendo de seu cofator metálico, em CuZnSOD; MnSOD, FeSOD e NiSOD. Além de sua função intrínseca, as SODs estão implicadas em outros processos com a adesão e a sinalização celular e na patogenicidade. Em particular, a participação das SODs em processos patogênicos tem se mostrado muito ampla, abrangendo os mais variados sistemas patógeno-hospedeiro. Visando estudar o processo de penetração do fungo filamentoso Metarhizium anisopliae em carrapatos, as enzimas com atividade SOD foram descritas e parcialmente caracterizadas, apresentando três tipo de atividade: CuZn, Mn e Fe.Para melhor caracterizar as SODs de M. anisopliae, neste trabalho purificamos e caracterizamos a CuZnSOD. A enzima apresenta uma massa presumida em géis desnaturantes de ~20 KDa. A etapa de cromatografia de gel filtração foi substituída, com sucesso, por uma cromatografia de afinidade, apresentando ganho no rendimento total de 92%, em relação ao rendimento final encontrado na purificação utilizando-se resina Sephacel Sephadex G-150. Em relação à amostra inicial (P95%), o fator de purificação foi de 140% maior. Padronizamos um ensaio enzimático de quantificação e discriminação da atividades SODs, que se mostrou adequado e eficaz para a detecção de SODs em extratos celulares brutos e/ou fracionados. Nos ensaios espectrofotométricos, a CuZnSOD purifica de M. anisopliae foi inibida por 2 mM de KCN. Inibição da atividade em presença de 2 mM de peróxido de hidrogênio também foi observada. PMSF (2 mM) e cloreto de mercúrio (5 mM) inibiram a atividade da enzima, indicando que pode estar ocorrendo uma inibição inespecífica através de resíduos de serina e cisteínas não reativos, presente na enzima. A purificação de cada uma das SODs descritas para M. anisopliae, é um passo importante para a elucidação da função destas enzimas durante processo metabólicos e no processo de infecção de M. anisopliae em seus hospedeiros. A produção de anticorpos mono- e policlonais contra estas proteínas,e sua posterior aplicação na determinação da localização celular de cada uma, é um destes passos. Além disso, pode facilitar o isolamento de genes que codificam para as SODs, possibilitando a obtenção de mutantes e/ou linhagens transgênicas e estudos da expressão destas proteínas.