Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2005. / Härtill 4 uppsatser.

Thesis (M.Sc.) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv. / Härtill 1 uppsatser.

Thesis (M.A.)--Northern Kentucky University, 2008. / Made available through ProQuest. Publication number: AAT 1454478. ProQuest document ID: 1580779071. Includes bibliographical references (p. 25-27)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-09Bitstream added on 2014-06-13T19:53:58Z : No. of bitstreams: 1 rubio_ml_me_sjrp.pdf: 553575 bytes, checksum: e63be6b1c41d36a603fd12ca20a88442 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Paramyxoviridae, é um vírus envelopado com tamanho médio de 120 a 300nm, de simetria helicoidal, que apresenta um genoma de RNA fita simples não segmentado de polaridade negativa. Este genoma codifica 11 proteínas, dentre as quais as glicoproteínas de membrana que são responsáveis pela infectividade do vírus. A proteína F, em associação com a proteína G e SH, é responsável pela fusão da membrana viral à célula que será infectada, ou seja, esta proteína proporciona a entrada e instalação do vírus na célula. Conhecer a forma de interação das proteínas da membrana viral com a célula que será infectada é importante para propor um mecanismo de inibição deste processo de infecção viral. Existem evidências que os glicosaminoglicanos são potenciais inibidores da infecção causada por vários vírus. A hipótese é de que este processo de inibição ocorra devido à ligação dos glicosaminoglicanos às proteínas da membrana viral, mais especificamente na proteína G, que apresenta um domínio de ligação para heparina, impedindo desta forma, que o vírus se ligue na célula hospedeira e que inicie o processo de infecção. O objetivo deste trabalho foi verificar a atuação de glicosaminoglicanos como potenciais inibidores da infecção viral. Esta análise foi realizada por meio de experimento de cultivo de células Hep2 na presença dos glicosaminoglicanos heparina e dextrana sulfatada que foram inoculadas com o vírus sincicial respiratório do tipo A (RSVA) e analisados por meio das técnicas de PCR e Imunofluorescência Indireta. Os resultados mostraram que a heparina e a dextrana sulfatada apresentam efeito inibitório da infecção viral em cultivo de células Hep2. / The respiratory sincicial virus (RSV) is part of Pneumovirus genus of the Paramyxoviridae family, is an enveloped virus with average size of 120 to 300nm, helical symmetry, that presents a genome consisting of a single strand, no segmented, RNA negative. This genome codifies for 11 proteins including the membrane glycoproteins which are responsible for the infectivity of the virus. Protein F in association with protein G and SH is responsible for the fusion of the viral membrane with the cell that will be infected, that is, this protein provides the entrance and the virus to settle in the cell. To know the form of interaction of viral membrane proteins with the cell that will be infected is important to propose a mechanism to inhibit of this process of viral infection. Evidences exist that the glycosaminoglycans are potential inhibitors of the infection caused by some viruses. The hypothesis is that this process of inhibition occurs more specifically due to the interation between glycosaminoglycans and the proteins of the viral membrane, more specifically in protein G, that presents a domain of linking for heparin, avoiding the virus to bind to the host cell and initiating the infection process. The aim of this work was to verify the performance of glycosaminoglycans as inhibitors of the viral infection. This analysis was accomplished through experiments of Hep2 cell culture in the presence of these glycosaminoglycans (heparin and dextran sulfate) that was inoculated with the respiratory sincicial virus type A (RSVA) and analyzed through the technique of PCR and Indirect Imunofluorecence. The results had shown that the heparin and the dextran sulfate presented an inhibitory effect of the viral infection in Hep2 cells culture.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:11:25Z : No. of bitstreams: 1 souza_avg_me_botfm.pdf: 5208360 bytes, checksum: d0caf95e74fc05f32950a4bbcec4f765 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Vírus Sincicial Respiratório humano (VSR) é o principal agente causal das Infecções Respiratórias Agudas (IRAs) em lactantes e pré-escolares. Apresenta dois subgrupos – A e B – sendo o primeiro responsável por quadros clínicos mais graves. Os RNA mensageiros virais codificam 11 proteínas conhecidas, das quais a proteína F é responsável pela fusão viral à célula e se apresenta na forma de F0 com peso molecular de 67kDa, podendo ser clivada em duas unidades: F2 de 20kDa e a F1 de 47kDa. A proteína F recombinante (Fr), expressa em E.coli (BL21A no vetor pET28a), foi cedida por pesquisadores da UNESP de São José do Rio Preto. Com intuito de produzir anticorpos monoclonais contra a proteína Fr para fins de diagnóstico laboratorial, inoculamo-la em camundongos isogênicos Balb/c. Durante o desenvolvimento do monoclonal, foi necessário a eliminação da contaminação de cultura por Mycoplasma ssp. Após ajuste de dose de inoculação e descontaminação do antígeno (hipótese: contaminação com endotoxinas provenientes de E.coli), seis clones secretores de anticorpos monoclonais foram produzidos (5 do tipo IgM e 1 do tipo IgG2a) e testados, simultâneamente, contra toxina bacteriana e proteína Fr (40μg/mL) por técnica de ELISA indireto. Paralelamente, testes por citometria de fluxo foram realizados, incubando-se os clones obtidos com E.coli (bactéria com membrana permeabilizada e in natura). Os clones (VIRSV2-87A74 e VIRSV2-87A80) apresentam um reconhecimento inespecífico de proteínas da E. coli e não foi possível caracterizar os clones obtidos em função da dificuldade de se obter novas amostras de proteína Fr. Para o futuro, os anticorpos obtidos deverão ser marcados com isotiocinato de fluoroceína e comporem um amplo teste epidemiológico em paralelo com o kit disponível em mercado respeitando a sazonalidade da doença. Novos ensaios para caracterização... / The Human Respiratory Syncytial Virus (HRSV) is the main cause of Acute Respiratory Insufficiency in suckling child and children below 5 years old. It has 2 subgroups – A and B – being the first one responsible for more dangerous clinical situations. The viral messenger RNA codifies 11 known proteins, which the F protein is responsible for the viral fusion and it is presented as F0 with molecular weight of 67kDa, but once is broke it generates two units: F2 with 20kDa and F1 with 47kDa. The recombinant F (Fr) protein were expressed on E.coli (BL21A, on vector pET28a), and it was given to us by researches from UNESP of São José do Rio Preto. Wishing to produce monoclonal antibodies (Mab) against Fr protein to laboratorial diagnosis, mice (Balb/c) were inoculated with de antigen (Fr protein). During the development of the Mab, it was necessary to eliminate, from the culture, Mycoplasma spp. After we adjusted the necessary amount to inoculate on the mice and eradicated the contamination of the antigen (hypotheses: there were endotoxins from the E.coli), six clones that secrete Mab were produced (5 of the kind IgM, and 1 of the kind IgG2a) and they were tested, simultaneously, against bacterium toxin and Fr protein (40μg/mL) using ELISA technique. Together, flow cytometry test were performed when we incubated the clones with E. coli (bacterium with permeable membrane and in natura). The clones (VIRSV2-87A74 and VIRSV2-87A80) presented an unspecific recognition for the proteins from E.coli and it was not possible to characterize the cells because we couldn´t get more samples of Fr protein. For the future, the Mab should be conjugated with FITC and then, they must be part of a wide epidemiologic test side by side from the commercial kit, always respecting the seasonal disease. New assays to characterize antibodies (like Western blotting and imunepreciptation) are already being done... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Clarice Weis Arns / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T10:06:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Spilki_FernandoRosado_D.pdf: 6085947 bytes, checksum: 7f34cc6e57c39e7467bfe62caa231676 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) é uma causa importante de doença respiratória em bovinos. O BRSV é um membro da família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae, pertencendo ao gênero Pneumovirus. Nos últimos quinze anos, evidências sorológicas e de isolamento do vírus revelaram que o BRSV está circulando no Brasil, causando doença clinicamente evidente ou formas subclínicas da infecção. Na primeira parte do presente trabalho, seis diferentes linhagens celulares foram examinadas quanto a sua susceptibilidade à infecção pelo BRSV, levando em conta a variabilidade entre diferentes isolados e características de crescimento do vírus. Chicken embryo related cells (CER), e células CRIB (MDBK-resistentes à infecção pelo Vírus da Diarréia Viral Bovina, BVDV) foram as mais apropriadas à multiplicação do vírus. Ambas as linhagens permitiram o cultivo do vírus em títulos de até 105,5 DICC50 (Doses Infectantes para 50% dos Cultivos Celulares por 100 IlL)...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) is a major cause of respiratory disease in young cattle. The virus is a member of the Paramyxoviridae family, Pneumovirinae subfamily, belonging to the Pneumovirus genus. During the last fifteen years, serological evidence and isolation of the virus revealed that BRSV is circulating in Brazil, causing clinically evident respiratory disease or subclinical fonns of the infection. In the first part of the present work, susceptibility of six different cell lines to BRSV'"li infection in regard to viral isolate variability and growth characteristics of the virus were examined. Chicken embryo related cells (CER), and bovine CRIB cells (a bovine viral diarrhea virus-resistant clone ofMDBK cells) showed to be the most appropriate for virus multiplication. Both cells provided infectious virus titres ofup to 105,5 TCID50 (50% tissue culture infective doses per 100 flL)...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientadores: Clarice Weis Arns, Luciana Konecny Kohn / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T18:01:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martini_MatheusCavalheiro_M.pdf: 571995 bytes, checksum: 52ec8a0bed8fa3efd4434ec2a2e6a100 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Para avaliar a atividade antiviral dos extratos de plantas brasileiras foram eleitos o Metapneumovirus aviário (aMPV) e o vírus Respiratório sincicial bovino (BRSV) pertences à família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae, gêneros Metapneumovirus e Pneumovirus respectivamente. Tanto o aMPV quanto o BRSV são vírus semelhantes aos que causam doenças em humanos como o vírus respiratório sincicial humano (HRSV) e metapneumovírus humano (hMPV). O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antiviral de 12 diferentes espécies de plantas: Pterodon emarginatus Vogel.; Kielmeyera coriacea Mart. & Zucc.; Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen; Virola sebifera Aubl.; Gaylussacia brasiliensis (Spreng.) Meisn.; Maytenus ilicifolia (Schrad.) Planch.; Bursera aloexylon (Schiede ex Schltdl.) Engl.; Aspidosperma tomentosum Mart.; Copaifera langsdorffii Desf; Baccharis dracunculifolia DC.; Arrabideae chica (Humb. & Bonpl.) B.Verl.; Aniba rosaeodora Ducke (Lin 3). Para realizar os estudos antivirais foi utilizada concentrações máximas não tóxicas para as diferentes linhagens celulares utilizadas frente aos dois vírus. Para os ensaios antivirais foram utilizadas a linhagens CER (Chicken embryo related cells) e CRIB (bovine viral diarrhea virus-resistant clone of MDBK cells) para o aMPV e BRSV respectivamente. Os extratos brutos com atividade antiviral foram submetidos a uma curva concentração resposta com diferentes concentrações de extrato na presença de 100 DICC/mL de cada amostra viral através do ensaio colorimétrico MTT [3-(4,5- dimetiltiazol-z-yl)-2,5 difeniltertrazolim brometo] determinando assim a concentração antiviral 50% (EC50). Para determinar o mecanismo de ação dos extratos e os vírus nas células foram utilizados três diferentes tratamentos: (i) Pré-tratamento (célula tratada com extrato e posterior inoculação com a amostra viral); (ii) Pós-tratamento (célula inoculada com a amostra viral e depois tratada com o extrato); (iii) Virucida (extrato e vírus mantidos juntos e posterior inoculação na cultura celular). O extrato foi considerado ativo quando houve diminuição do título viral em 1,5 log em relação ao titulo viral controle. Os resultados mostraram que todos os extratos testados obtiveram concentrações não tóxicas para as diferentes linhagens celulares. Em relação à atividade antiviral o extrato da espécie Aspidosperma tomentosum apresentou atividade frente ao BRSV e aMPV, ambos no pré-tratamento. Os extratos das espécies Virola sebifera; Arrabidaea chica; Gaylussacia brasiliensis e Anniba rosaeodora apresentaram atividade antiviral para o aMPV no pós-tratamento. Nenhum extrato bruto apresentou atividade de "vírus-inativação" em relação aos vírus avaliados. Os demais extratos não apresentaram atividade antiviral significativa para nenhum destas espécies virais. O ensaio antiviral deste estudo poderá continuar sendo utilizado como triagem para outras espécies em busca de substâncias com potencial medicinal. As diferentes atividades de ação dos extratos sugerem a ocorrência de mecanismo de ação distinto entre os vírus avaliados / Abstract: To evaluate the antiviral activity of extracts from Brazilian plants two different viruses were elected Avian metapneumovirus (aMPV) and bovine respiratory syncytial virus (BRSV) members of the family Paramyxoviridae, subfamily Pneumovirinae, Pneumovirus and Metapneumovirus genera respectively. Both viruses are similar to those that cause humans diseases such as respiratory syncytial virus (HRSV) and human metapneumovirus (hMPV). The purpose of this study was to assess the antiviral activity of 12 different plant species: Pterodon emarginatus Vogel; Kielmeyera coriácea Mart. & Zucc.; Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen; Virola sebifera Aubl.; Gaylussacia brasiliensis (Spreng.) Meisn.; Maytenus ilicifolia (Schrad.) Planch. ex. Reiss; Bursera aloexylon (Schiede ex Schltdl.) Engl.; Aspidosperma tomentosum Mart.; Copaífera langsdorffii Desf.; Baccharis dracunculifolia DC.; Arrabideae chica (Humb. & Bonpl.) B.Verl.; Aniba rosaeodora Ducke. (Lin 3). To perform the antiviral assay we used non toxic maximum concentrations of the plants extracts with different cell lines used against the two viruses. The cell lines used were CER (Chicken embryo related cells) and CRIB (bovine viral diarrhea resistant clone of MDBK cells) for AMPV and BRSV, respectively. The extracts with antiviral activity were subjected to a concentration response curve with varying concentrations of extract in the presence of 100 TCID / mL of each viral sample by colorimetric MTT assay [3 - (4,5- dimethylthiazol-z-yl) -2 , 5-diphenyltetrazolium bromide] to identify the antiviral 50% concentration (EC50). To define the mechanism of action of extracts and viruses in cells three different treatments were used: (i) pre-treatment (cells treated with plants extracts and subsequent inoculation with a viral sample), (ii) Post-treatment (cells inoculated with the viral sample and afterwards treated with the extract), (iii) Virucidal (viruses and plants extracts were kept together and after that inoculated into cell cultures). The extract was considered active when there was a decrease of virus titers by 1.5 log in contrast to the control viral titer. The results revealed that all tested extracts had no toxic concentrations for the different cell lines and detected the antiviral activity of the extract of the species Aspidosperma tomentosum against the BRSV and aMPV, both in the pretreatment conditions. The extracts of the species Virola sebifera; Arrabidaea chica; Gaylussacia brasiliensis and Anniba rosaeodora (Lin 3) exhibited antiviral activity for aMPV after treatment. The other extracts showed no significant antiviral activity for any of these viral species. The antiviral test of this study may still be used as screening for other species in search for substances with medicinal potential. The varied action activities of the extracts suggest that the occurrence of distinct mechanism of action between the viruses evaluated / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Emilio Carlos Elias Baracat, Clarice Weis Arns / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T23:20:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Riccetto_AdrianaGutLopes_D.pdf: 18036035 bytes, checksum: 951a577babe97ac325d8f7e4a0ea459c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Infecções respiratórias agudas são a causa mais comum de internação hospitalar em pediatria.O Vírus Sincicial Respiratório (VSR) é o principal agente destas infecções, com apresentação clínica de bronquiolite ou pneumonia. Os casos graves ocorrem principalmente em pacientes prematuros, com pneumopatias crônicas, cardiopatias e imunodeficiências. Uma proporção de pacientes internados necessita de ventilação pulmonar mecânica invasiva (VPMI). O acompanhamento após a fase aguda mostra frequentemente obstrução respiratória recorrente. Objetivos: Descrever as características epidemiológicas e clínicas de lactentes menores de 12 meses, hospitalizados com doença respiratória aguda baixa, determinando fatores associados à ventilação mecânica e à infecção pelo VSR, e as características evolutivas tardias desta população. Casuística e métodos: Estudo de corte prospectivo, realizado de 01 de abril a 30 de setembro de 2004, em dois hospitais universitários da região de Campinas, São Paulo, Brasil. Foram avaliados 152 lactentes de 0 a 12 meses internados com diagnóstico inicial de doença respiratória aguda baixa. Realizou-se avaliação clínica e pesquisa do VSR, por imunofluorescência direta (EFD), em secreção nasofaríngea Os pacientes foram divididos em dois grupos, de acordo com a necessidade de VPMI e presença do VSR, comparando-se os fatores prognósticos. Seis a 12 meses após a internação hospitalar, os pacientes com IFD positiva para VSR e os submetidos à VPMI foram convocados e avaliados quanto à presença de sibilância recorrente. A associação entre fatores de risco e desfecho estudado foi analisada por Risco Relativo (RR) e intervalos de confiança (IC95%). Para comparação de proporções foi utilizado o teste Qui-quadrado e teste Exato de Fischer. Para comparação das medidas contínuas entre dois grupos foi aplicado o teste de Mann-Whitney. O nível de significância adotado para os testes estatísticos foi de 5%. Resultados. A pesquisa de VSR foi realizada em 149 lactentes, com positividade de 17,4% (26 pacientes) Vinte e um pacientes (13,8%) foram submetidos à VPMI e os fatores significativamente associados ã VPMI foram: idade menor de 3 meses (RR=2,35, IC95%: 1,06-5,22) e tempo de aleitamento materno menor que um mês (RR=3,15, IC95%: 1,35-7,35). Na comparação dos grupos com e sem a presença de VSR os fatores associados à infecção foram: idade gestacional abaixo de 35 semanas (RR=4,17, IC95%:2,21-7,87), peso ao nascer menor de 2500g (RR=2,69, IC95%: 1,34-5,37) e escolaridade materna menor que 5 anos (RR=2,28, IC 95%: 1,13-4,59). Na evolução clínica em seguimento ambulatorial, 26 de 41 convocados compareceram (63,4%), destes 19,2% eram não sibilantes, 57,7% eram sibilantes intermitentes e 23,1% sibilantes persistentes. Na comparação entre os grupos não sibilantes e sibilantes intermitentes, ocorreu diferença significativa na variável hospitalização após a alta, ocorrendo apenas no segundo grupo de pacientes. Na comparação entre os grupos não sibilantes e sibilantes persistentes leves/moderados, não ocorreram diferenças significativas nas variáveis analisadas. Conclusões: A incidência do VSR foi de 17,5% entre os lactentes internados com doença respiratória aguda baixa. Os fatores associados à VPM1 foram: idade menor que 3 meses e tempo de aleitamento materno menor que 1 mês Os fatores associados à aquisição do VSR foram idade gestacional abaixo de 35 semanas, peso ao nascer menor de 2500g e escolaridade materna menor que 5 anos. Na evolução clínica tardia, os lactentes com pesquisa positiva para VSR e os lactentes submetidos à VPMI apresentaram-se como sibilantes intermitentes, sem necessidade de corticoterapia inalatória e com maior número de hospitalizações após a alta / Abstract: In pediatrics, acute respiratory infections are the most common cause of hospitalization. The Respiratory Syncytial Virus (RSV) is the main agent responsible for these infections that are clinically manifested as bronchiolitis or pneumonia Severe cases occur mostly in premature patients who have chronic pneumopathies, cardiopathies and immunodeficiencies. Some of the hospitalized patients require invasive mechanical ventilation (IMV) Follow up after the acute phase often demonstrates recurring respiratory obstruction. Objectives: to describe the epidemiological and clinical characteristics of infants under the age of 12 months hospitalized with acute lower respiratory tract infections, determine factors related to mechanical ventilation and RSV as well as delayed evolutional characteristics of this population. Methods and Cases: This was a prospective cohort study conducted from 2001 April to 2001 September at two university hospitals in the region of Campinas, Sao Paulo. An evaluation was performed of 152 infants aged 0 to 12 months, hospitalized with an initial diagnosis of acute lower respiratory tract diseases Direct Immunofluorescence Assay (DFA) was used to perform a clinical research and assess RSV in the nasopharyngeal secretion. The patients were divided into two groups according to the need for IMV as well as the presence of RSV and their prognostic factors were compared. Six to twelve months after hospitalization, patients with DFA positive for RSV as well as patients who were subjected to IMV were recalled and checked for the presence of recurrent wheezing. The relation between risk factors and outcome was analyzed by applying Relative Risk (RR) and Confidence Intervals (CI 95%). The chi-square test and the Fisher Exact test were used for comparing proportions. Continuous measures were compared using the Mann Whitney test. The significance level adopted for statistical tests was 5%. Results: RSV research was conducted on 149 infants, revealing 17.4% positivity (26 patients). Twenty-one patients (13 8%) were subjected to IMV' and factors significantly associated were age below three months (RR=2.35, IC 95%: 1.06-5.22) and breastfeeding period less than one month (RR=3.15; IC95%: 1.35-7.35). When both groups were compared with and without the presence of RSV, the factors associated with infection were: gestational age less than 35 weeks (RR=4 17, IC95%: 2.21-7.87), birth weight less than 2,500g (RR=2.69, 1C95%: 1.34 -5.37) and maternal education less than five years (RR=2 28, IC 95%: 1 13-4.59). Only 26 (63.4%) out of 41 patients reported for follow up of clinical evolution. Of these, 19.2% were non-sibilants, 57.7% were intermittent sibilants and 23.1% were persistent sibilants When the non-sibilant groups were compared with the intermittent sibilants, a significant difference was observed in relation to the variable - hospitalization after discharge, which only occurred in the second group. No significant difference was observed regarding the variables analyzed when non-sibilant groups were compared with moderate/mild persistent sibilants. Conclusions: The incidence of RSV was 17.5% in infants hospitalized with acute lower respiratory tract infections. Factors associated with IMV were age below three months and breastfeeding period less than one month Factors associated with acquisition of RSV were: gestational age less than 35 weeks, birth weight below 2,500 gm; maternal education level less than five years. Delayed clinical evolution revealed that infants who were positive for RSV and infants subjected to IMV demonstrated intermittent wheezing with no need for inhalation corticotherapy and also a higher number of hospitalizations after discharge / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O vÃrus sincicial respiratÃrio (VSR) destaca-se como patÃgeno importante de infecÃÃes das vias aÃreas inferiores (IVAI) infantis, principalmente no primeiro ano de vida. Este estudo teve como objetivos: determinar a prevalÃncia do VSR em casos de infecÃÃes respiratÃrias agudas (IRAs) em crianÃas atendidas no Hospital Infantil Albert Sabin, em Fortaleza - CE, entre janeiro de 2001 e julho de 2004; descrever o padrÃo de sazonalidade de circulaÃÃo do VSR ao longo do perÃodo de estudo; observar caracterÃsticas clÃnico-epidemiolÃgicas dessas infecÃÃes; caracterizar antigenicamente os VSR circulantes nos perÃodos epidÃmicos de 2003 e 2004 e determinar a taxa de isolamento do VSR em cultura de cÃlulas HEp-2 a partir de amostras coletadas em 2002, 2003 e 2004 e estocadas a â20ÂC. Aspirados de nasofaringe foram coletados de crianÃas com atà sete dias de inÃcio dos sintomas de IRA e submetidos à reaÃÃo de imunofluorescÃncia indireta (IFI). Amostras coletadas em 2002, 2003 e 2004, armazenadas a â20ÂC, foram inoculadas em monocamadas de cÃlulas HEp-2. Nos 43 meses de estudo, o VSR foi identificado em 21,0% (409/1950) dos espÃcimes clÃnicos coletados. A circulaÃÃo do vÃrus foi inicialmente observada nos meses de janeiro ou fevereiro e os Ãltimos casos foram registrados em julho ou agosto de cada ano de estudo. O pico dessas infecÃÃes foi observado nos meses de marÃo a julho, sendo associado à estaÃÃo chuvosa da cidade. As infecÃÃes causadas pelo VSR foram mais freqÃentes em crianÃas de sexo masculino e naquelas com atà dois anos de idade. Bronquiolite e pneumonia foram as sÃndromes clÃnicas mais associadas ao vÃrus. DispnÃia, dor de garganta, coriza, espirros e cianose foram os sinais e sintomas clÃnicos associados significativamente nas IRAs causadas pelo VSR. Cerca de 9,5% (39/409) das crianÃas infectadas apresentaram problemas associados, como prematuridade, cardiopatia e doenÃas pulmonares congÃnitas. Entre os fatores de risco associados a essas infecÃÃes, destacou-se a exposiÃÃo à IRA no domicÃlio. Cepas de VSR A e B co-circularam nos perÃodos epidÃmicos analisados, sem uma predominÃncia significativa de qualquer grupo antigÃnico. Cerca de 29,8% (122/409) das amostras positivas para VSR, estocadas a â20ÂC, foram inoculadas em monocamadas de cÃlulas HEp-2. O percentual de isolamento variou de 0,0%, em amostras coletadas em 2002, a 36,8%, em 2004. Nossos resultados confirmam a importÃncia do VSR como agente etiolÃgico de IRAs, especialmente IVAI, em crianÃas jovens. A ocorrÃncia do VSR na cidade de Fortaleza mostrou um padrÃo sazonal regular associado Ãs chuvas. A conservaÃÃo de amostras a â20ÂC nÃo impossibilitou o isolamento em cultura de cÃlulas atà um ano apÃs seu congelamento. / Respiratory syncytial virus (RSV) is detached as an important pathogen of lower respiratory tract infections (LRTI) in children, mainly in the first year of life. This study had as purposes: to determine the prevalence of RSV in cases of acute respiratory infections (ARIs) in children served in Albert Sabin Children Hospital, in Fortaleza â CE, over the period of January 2001 to July 2004; describe the seasonality pattern of RSV circulation along the study period; observe characteristics clinical-epidemiological of these infections; characterize antigenically the circulating RSV in the epidemic period from 2003 to 2004 and determine the isolation rate of RSV in HEp-2 cells culture from samples collected in 2002, 2003, and 2004 and stored at â20ÂC. Aspirated from nasopharynx were collected from children with up to seven days from the beginning of ARIs symptoms and submitted to the reaction of indirect immunofluorescence (IIF). Samples collected in 2002, 2003, and 2004, and stored at â20ÂC, were inoculated in monolayers of HEp-2 cells. During the 43 months of study, RSV was identified in 21.0% (409/1950) of the clinical specimens collected. Virus circulation was initially observed during the months of January or February and the last cases were recorded in July or August of each year of study. The peak of these infections was observed from March to July, associated with the rainy season of the city. The infections caused by RSV were more frequent in male children and those with up to two years of age. Bronchiolitis and pneumonia were the clinical syndromes more associated with the virus. Dyspnea, throat pain, coryza, sneezes and cyanosis were the significant clinical signs and symptoms in ARIs caused by RSV. About 9.5 % (39/409) of the infected children presented problems associated, such as prematurity, heart diseases and congenital pulmonary diseases. Among the risk factors associated with these infections, was pointed out the exposure to ARIs in the domicile. Strains of RSV A and B co-circulated during the epidemical periods analyzed, without a significant predominance of any antigenical group. About 29.8 % (122/409) of the positive samples for RSV, stored at â20ÂC, were inoculated in monolayers of HEp-2 cells. The isolation percentage varied from 0.0 %, in samples collected in 2002, to 36.8 %, in 2004. Our results confirm the importance of the RSV as etiological agent of ARIs, especially LRTI, in young children. The occurrence of RSV in the city of Fortaleza showed a regular seasonal pattern associated with the rains. The conservation of samples at â20ÂC did not make impossible the isolation in cells culture up to one year after freezing.

The molecular mechanisms underlying susceptibility to severe respiratory syncytial virus (RSV) infection remain poorly understood. Herein, we report on the role of osteopontin (OPN) in regulation of RSV infection in human epithelial cells and how interleukin-1 beta (IL-1β), a cytokine secreted soon after RSV infection, when persistently expressed can induce OPN expression leading to increased viral infection. We first compared OPN expression in two human epithelial cell lines: HEK-293 and HEp-2. In contrast to HEp-2, HEK-293 expresses low levels of pro-caspase-1 resulting in decreased IL-1β expression in response to RSV infection. We found a correlation between low IL-1β levels and a delay in induction of OPN expression in RSV-infected HEK-293 cells compared to HEp-2. This phenomenon could partially explain the high susceptibility of HEp-2 cells to RSV infection versus the moderate susceptibility of HEK-293 cells. Also, HEK-293 cells expressing low levels of pro-caspase-1 exhibit decreased IL-1β expression and delayed OPN expression in response to RSV infection. HEK-293 cells incubated with human rIL-1β showed a dose-dependent increase in OPN expression upon RSV infection. Also, incubation with rOPN increased RSV viral load. Moreover, HEp-2 cells or mice infected with a mucogenic RSV strain RSV-L19F showed elevated levels of OPN in contrast to mice infected with the laboratory RSV strain rA2. This correlated with elevated levels of OPN following infection with RSV-L19F compared to rA2. Together, these results demonstrate that increased OPN expression is regulated in part by IL-1β, and the interplay between IL-1β and OPN signaling has a pivotal role in the spread of RSV infection.