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Made available in DSpace on 2014-09-09T12:27:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 174.pdf: 1434437 bytes, checksum: d0f5b3f583c5599b623f3257623452b8 (MD5) Previous issue date: 2003 / De acordo com reunião entre produtores e comitê de expertos da OMS, realizada em novembro de 1998, ficou estabelecida a necessidade do desenvolvimento de novas metodologias alternativas que atestem a atividade imunogênica de novas formulações de vacinas pertussis acelulares e de outras preparações sem a participação de estudos clínicos complementares. O aumento do número de notificações ocorrido nos últimos vinte anos, reforça a busca de modelos experimentais que assegurem a qualidade das vacinas disponíveis no mercado. No presente trabalho lotes de vacina pertussis celular e acelular foram testados pelos métodos de desafio intranasal (DIN) e ELISA. Os resultados alcançados foram comparados aos resultados obtidos pelo ensaio de desafio intracerebral (DIC). Em nossos estudos percebemos a existência variações intra e interlaboratoriais quanto aos resultados obtidos pelo método clássico de DIC. Análises estatísticas demonstraram que os métodos DIN e ELISA apresentaram repetibilidade e capacidade em discriminar os produtos testados. Somado a isto, foi possível uma acentuada redução no número de animais utilizados bem como no nível de estresse proporcionado aos mesmos. A reprodutibilidade dos ensaios sugere que os métodos podem ser utilizados como alternativa, também sob nossas condições, na verificação de consistência de produção lote a lote, análise prévia, além de auxiliar nos estudos visando melhor entendimento dos componentes envolvidos nos mecanismos de infecção e de resposta imune à infecção por Bordetella pertussis. / De acordo com reunião entre produtores e comitê de expertos da OMS, realizada em novembro de 1998, ficou estabelecida a necessidade do desenvolvimento de novas metodologias alternativas que atestem a atividade imunogênica de novas formulações de vacinas pertussis acelulares e de outras preparações sem a participação de estudos clínicos complementares. O aumento do número de notificações ocorrido nos últimos vinte anos, reforça a busca de modelos experimentais que assegurem a qualidade das vacinas disponíveis no mercado. No presente trabalho lotes de vacina pertussis celular e acelular foram testados pelos métodos de desafio intranasal (DIN) e ELISA. Os resultados alcançados foram comparados aos resultados obtidos pelo ensaio de desafio intracerebral (DIC). Em nossos estudos percebemos a existência variações intra e interlaboratoriais quanto aos resultados obtidos pelo método clássico de DIC. Análises estatísticas demonstraram que os métodos DIN e ELISA apresentaram repetibilidade e capacidade em discriminar os produtos testados. Somado a isto, foi possível uma acentuada redução no número de animais utilizados bem como no nível de estresse proporcionado aos mesmos. A reprodutibilidade dos ensaios sugere que os métodos podem ser utilizados como alternativa, também sob nossas condições, na verificação de consistência de produção lote a lote, análise prévia, além de auxiliar nos estudos visando melhor entendimento dos componentes envolvidos nos mecanismos de infecção e de resposta imune à infecção por Bordetella pertussis.

A eficácia da associação quádrupla (DPT + BCG) foi estudada através da proteção e comparação da soro conversão das vacinas, usando como adjuvante o hidróxido de alumínio e ou BCG. A potência da vacina pertussis foi avaliada pelo teste de proteção em camundongos e o BCG pelo teste de consumo de oxigênio e de vitalidade, sendo considerada satisfatória. Sendo os toxóides diftérico e tetânico considerados proteínas inertes e estáveis, suas potências não foram determinadas depois de associadas. Os níveis de anticorpos foram determinados para difteria e tétano pela reação imunoenzimática, para vacina pertussis pela reação de imunofluorescência e para o BCG pela conversão tuberculínica. Os níveis de conversão foram satisfatórios, revelando ser possível a associação sem prejuízo para nenhum dos antígenos. A associação DPT + BCG não causou reação local ou geral significante, possibilitando uma simplificação operacional. / The efficacy of the quadruple association (DPT + BCG) was studied though protection and comparison ot the conversion serum in vaccines using aluminium hydroxide or BCG as adjuvant. Both the protection power of the Pertussis vaccine evaluated by the protection test in mice and BCG by the oxygen uptake and counts of viable particles were considered satisfactory. Being difteria and tetanus toxoids considered inert and stable proteins, their protection wasn\'t determined after their combination. The antibody levels produced by the antigens were determined by the enzyme-linked immunosorbent assay to the difteria and tetanus toxoids, by the fluorescent antibody technique to the Pertussis vaccine and by the tuberculin conversion to the BCG. The conversion levels were satisfatory and there was no damage in their association. There was no meaningful local or general reaction in this association making an operational simplification possible.

A eficácia da associação quádrupla (DPT + BCG) foi estudada através da proteção e comparação da soro conversão das vacinas, usando como adjuvante o hidróxido de alumínio e ou BCG. A potência da vacina pertussis foi avaliada pelo teste de proteção em camundongos e o BCG pelo teste de consumo de oxigênio e de vitalidade, sendo considerada satisfatória. Sendo os toxóides diftérico e tetânico considerados proteínas inertes e estáveis, suas potências não foram determinadas depois de associadas. Os níveis de anticorpos foram determinados para difteria e tétano pela reação imunoenzimática, para vacina pertussis pela reação de imunofluorescência e para o BCG pela conversão tuberculínica. Os níveis de conversão foram satisfatórios, revelando ser possível a associação sem prejuízo para nenhum dos antígenos. A associação DPT + BCG não causou reação local ou geral significante, possibilitando uma simplificação operacional. / The efficacy of the quadruple association (DPT + BCG) was studied though protection and comparison ot the conversion serum in vaccines using aluminium hydroxide or BCG as adjuvant. Both the protection power of the Pertussis vaccine evaluated by the protection test in mice and BCG by the oxygen uptake and counts of viable particles were considered satisfactory. Being difteria and tetanus toxoids considered inert and stable proteins, their protection wasn\'t determined after their combination. The antibody levels produced by the antigens were determined by the enzyme-linked immunosorbent assay to the difteria and tetanus toxoids, by the fluorescent antibody technique to the Pertussis vaccine and by the tuberculin conversion to the BCG. The conversion levels were satisfatory and there was no damage in their association. There was no meaningful local or general reaction in this association making an operational simplification possible.

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Objetivos: Analisar a temperatura axilar no estudo da vacina contra difteria, tétano, o componente pertussis e hemófilo (DTP/Hib), a frequência de febre e a associação dos eventos adversos. Analisar a metodologia para verificação da temperatura corpórea e febre utilizada em diferentes estudos clínicos com a vacina DTP/Hib. Materiais e métodos: Este trabalho é baseado em dados obtidos do Estudo de imunogenicidade e reatogenicidade de vacina combinada contra difteria, tétano, pertussis e hemófilo tipo b: validação clínica de produto produzido totalmente no Brasil, com 1000 lactentes, realizado no município do Rio de Janeiro, no ano de 2006. Foi analisada a temperatura axilar nos tempos 3, 6, 12, 24, 48 e 72 horas após a vacinação. Foram analisadas as associações entre os eventos adversos locais e eventos adversos sistêmicos. Resultados: A freqüência de febre foi de 53,4 por cento após a primeira dose, 39,9 por cento após a segunda dose e 31,5 por cento após a terceira dose nas 24 horas após a vacinação. A freqüência de febre foi diminuindo com a aplicação das doses. Não houve padrão de associação entre os eventos adversos locais e sistêmicos. A mediana da distribuição da temperatura axilar foi maior nostempos 6 e 12 horas após a vacinação. Conclusões: A definição de febre e as metodologias utilizadas nos estudos clínicos para verificar a temperatura corpórea ainda são heterogêneas, o que dificulta a comparabilidade entre eles. / Objectives: To analyze the axillary temperature in the study of the vaccine DTP/Hib (Martins et al., 2008), the frequency of fever and the association of the adverse events. To analyze the methodology for checking of the corporal temperature and fever used in different clinical trial with the vaccine DTP/Hib. Materials and methods: This work is based on obtained data of the “Study of immunogenicity and reactogenicity of vaccine combined against diphtheria, tetanus, pertussis and haemophylus type b: clinical validation of product produced totally in Brazil ”, with 1000 infants,carried out in the local authority of the Rio of January, in the year of 2006. The axillary temperature was analyzed in the times 3, 6, 12, 24, 48 and 72 hours after the vaccination. The associations were analyzed between the adverse local events and adverse systemic events. Results: The frequency of fever was 53.4 % after the first dose, 39.9 % after the second dose and 31.5 % after the third dose in 24 hours after the vaccination. The frequency of fever was lessening with the application of the doses. There was no standard of association between the adverse local events and systemic adverse events. The medium one of the distribution of the axillary temperature was bigger in the times 6 and 12 hours after the vaccination. Conclusions: The definition of fever and the methodologies used in the clinical studies to check the corporal temperature they are still heterogeneous what makes difficult the comparability between them.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:12:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 923.pdf: 446016 bytes, checksum: ce60c7bd328008f26953973df0a8713d (MD5) Previous issue date: 2007 / As vacinas são consideradas bastante seguras, mesmo assim alguns eventos adversos podem estar associados a uma vacinação prévia. Desde 1998, o programa de imunizações brasileiro implantou um sistema de vigilância com o objetivo de orientar a notificação e investigação dos eventos adversos pós-vacinação. Com o objetivo de analisar o desempenho desse sistema no município do Rio de Janeiro, foi realizado um estudo descritivo exploratório dos eventos adversos após aplicação de vacina combinada contra difteria, pertussis e tétano (DPT), contra Haemophilus influenzae tipo b (Hib) e combinada DPT/Hib (Tetra) a partir das notificações realizadas no período de 1998 a 2005. A população do estudo foi composta de crianças de dois meses até seis anos e onze meses de idade que apresentaram evento adverso confirmado após terem recebido alguma das vacinas estudadas. Foram analisados variáveis relativas a sexo, idade, tipos de evento, tempo entre a aplicação da vacina e a ocorrência do evento e da notificação, além da sua distribuição espacial. (...) O sistema oficial de vigilância apresentou uma boa cobertura nas diferentes regiões do Município, embora a proporção de eventos adversos por doses aplicadas seja inferior à relatada por estudos que realizaram vigilância ativa, denotando certa subestimação, compatível com os demais estudos de vigilância passiva. Um aspecto a ser melhorado é o acompanhamento adequado dos casos até seu encerramento, diminuindo o percentual de pendentes.

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:10:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 98.pdf: 3463846 bytes, checksum: 8603b620b9560561e10f307f624ab539 (MD5) Previous issue date: 2008 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 98.pdf: 3463846 bytes, checksum: 8603b620b9560561e10f307f624ab539 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Dentre os efeitos induzidos pela toxina pertussis (TP) em mamíferos, ocupa um lugar de destaque o fenômeno conhecido por sensibilização aos efeitos biológicos e letais da histamina, cuja intensidade e constância proporcionaram o estabelecimento de um ensaio in vivo de controle de qualidade para avaliação da segurança de vacinas contra a pertussis (coqueluche) e tríplice bacteriana contra a difteria, tétano e coqueluche (DTP). O ensaio de sensibilização à histamina (ESH) em camundongos NIH fêmeas mostrou-se altamente sensível à toxina pertussis de referência NIBSC 90/518 (TPR) detectando níveis tão baixos quanto 20 ng de TP/dose. Todas as 5 vacinas DTP de um produtor nacional noESH apresentaram níveis de TP ativa que variaram entre 84 a 147 ng/mL, valores inferiores ao valor limite de 1789 ng/mL obtido para a vacina pertussis de referência NIBSC 66/303 (VPR), logo, todas as vacinas foram aprovadas para uso humano. Embora o ESH tenha sido conclusivo quanto à alta especificidade à TP, o elevado número de animais, no mínimo, 40 por ensaio, acarretando alto custo e o sofrimento dos animais são fatores limitantes que dificultam o uso rotineiro como ensaio de controle de qualidade da vacina DTP. O objetivo do nosso estudo foi desenvolver uma metodologia in vitro em preparações de íleo isolado de cobaias Short Hair fêmeas (250 a 300 g) fornecidas pelo CECAL/FIOCRUZ /Rio de Janeiro para avaliação do fenômeno de sensibilização à histamina pela TPR. Todos os experimentos foram aprovados de acordo com as diretrizes estabelecidas pela CEUA/FIOCRUZ. Curvas concentração-efeito à histamina em íleos isolados de cobaias foram analisadas e os parâmetros de concentração efetiva média(CE50), concentração efetiva máxima (CEmax) e de constante de dissociação no equilíbrio do complexo droga-receptor (Kd) para histamina foram determinados [...]. / Among the effects induced by pertussis toxin (PT) in mammalian species, a prominence place is occupied by the phenomenon known as sensitization to the biological and lethal effects of the histamine, whose intensity and constancy promoted the establishment of an in vivo quality control assay to evaluate the safety of the pertussis vaccine (PV) against whooping cough and the triple bacterial vaccine, (DPT) against diphtheria, whooping cough and tetanus. The histamine sensitization assay (HSA) performed with NIH female mice was highly sensitive to reference pertussis toxin NIBSC 90/518 (RPT), detecting levels as low as 20 ng of administered RPT/dose, which caused 50% lethality. All five samples of DPT vaccines from one Brazilian producer presented active PT levels in the range of 84 and 147 ng/ml by the HSA, inferior to the limit value of 1789 ng/mL obtained for reference pertussis vaccine NIBSC 66/303 (RPV), thus all the vaccines were approved for use. Although the HSA has been conclusive in relation to its high specificity for RPT, the large number of mice used (at least 40 per assay) results in high costs and the suffering of the mice are limiting factors that make its routine use as a DPT vaccine quality control assay difficult. The aim of our study was to develop an in vitro methodology in ileum segments from female Short Hair guinea pigs (250-300 g) maintained in the animal facilities of the Oswaldo Cruz Foundation in Rio de Janeiro (FIOCRUZ), Brazil, to evaluate the histamine sensitization phenomenon by RPT. All experiments were approved in accordance with the guidelines of the Committee for Ethics in Animal Use of the FIOCRUZ. Concentration effects curves for histamine in guinea pig ileum were studied and the parameters of mean effective concentration (EC50), maximum effective concentration (ECmax) and dissociation constant of drug-receptor complex (Kd) were determined. No increase in ileum contractile response to histamine was detected in relation to control PBS 4 days after intraperitoneal treatment of guinea pigs with doses and dilutions corresponding to mean histamine sensitization dose (HSD50) obtained in NIH female mice of RPT (40 ng), RPV and of 5 DPT vaccines (0.26 IU). In all the ten assays performed on the experimental group, the data followed normal distribution, the variances were homogeneous and no significant differences occurred between assays. With doses 10 times higher than the HSD50 of RPT (400 ng) and of RPV (2.6 IU), analysis of the data showed the same behavior above. Contrary to the anticipated results, histamine EC50 and Kd values in ileum of guinea pigs treated in vivo with RPT were significantly higher than the control and RPV (p< 0.05) with no alteration in ECmax (p= 0.3672). In vitro 15 min treatment of guinea pig ileum with 30 ng/ml of RPT reduced the ECmax to about half in relation to control (p= 0.0028), with no significant reduction in the mean values of histamine EC50 and Kd (p= 0.09). In contrast, in vitro 15 min treatment of ileum with 40 ng/ml of RPT significantly reduced histamine ECmax (p< 0.0069), EC50 (p= 0.0261) and Kd (p= 0.0479) in relation to control ileum. In vitro 15 min treatment with PBS (390 and 520 µL in 13 mL of Tyrode) did not significantly alter the mean values of histamine EC50 (p=0.4043 and p= 0.1035), ECmax (p= 0.2366 and p= 0.2708) or KD (p= 0.4564 and p= 0.1158) in relation to control without treatment, demonstrating no effect of the control solvent (PBS) on ileum contractile response by histamine. In conclusion, increased histamine sensitization in female guinea pig ileum after in vitro treatment of 30 and 40 ng/ml of RPT was demonstrated.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 47.pdf: 882272 bytes, checksum: 401f86c677016c9683a9566630f091be (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Produtos biológicos, tais como soros hiperimunes e vacinas, podem ser definidos como produtos derivados ou produzidos a partir de organismos vivos. Isso implica que suas características podem variar de um lote para outro. Conseqüentemente, um minucioso controle da qualidade na liberação de lotes é requerido para garantir que esses produtos sejam seguros e eficazes. O ensaio de potência com animais é um dos ensaios preconizados para garantir a qualidade das vacinas e soros hiperimunes. Somente para realização do ensaio de potência para o produto final de vacinas e soros antidiftéricos (SAD) e antitetânicos (SAT), são utilizados no INCQS cerca de 5.000 animais por ano, desses aproximadamente 4.500 animais são utilizados na etapa de soroneutralização e o restante na etapa de imunização. Neste contexto, e baseado nos princípios dos 3Rs, o objetivo deste trabalho foi padronizar e validar o método imunoenzimático de inibição da ligação da toxina (ToBI) capaz de avaliar a potência de SAD, SAT e de vacinas bacterianas combinadas: tétano-difteria uso adulto (dT) e uso infantil (DT) e tétano-difteria-pertussis (DTP), como alternativa da etapa de soroneutralização do ensaio de controle de potência. Os resultados encontrados indicam que o método proposto apresenta linearidade, especificidade e precisão (intra e inter-ensaio) satisfatórias e que é um ensaio confiável, rápido e conveniente para avaliar a potência de componentes diftérico e tetânico presentes em vacinas e soros hiperimunes. Além disso, reduz drasticamente o número de animais usados, o tempo na liberação de laudos e os custos associados ao controle da qualidade destes produtos. O método ToBI apresenta potencial para a substituição do ensaio em animais na determinação de potência de vacinas e soros antidiftéricos e antitetânicos... / Produtos biológicos, tais como soros hiperimunes e vacinas, podem ser definidos como produtos derivados ou produzidos a partir de organismos vivos. Isso implica que suas características podem variar de um lote para outro. Conseqüentemente, um minucioso controle da qualidade na liberação de lotes é requerido para garantir que esses produtos sejam seguros e eficazes. O ensaio de potência com animais é um dos ensaios preconizados para garantir a qualidade das vacinas e soros hiperimunes. Somente para realização do ensaio de potência para o produto final de vacinas e soros antidiftéricos (SAD) e antitetânicos (SAT), são utilizados no INCQS cerca de 5.000 animais por ano, desses aproximadamente 4.500 animais são utilizados na etapa de soroneutralização e o restante na etapa de imunização. Neste contexto, e baseado nos princípios dos 3Rs, o objetivo deste trabalho foi padronizar e validar o método imunoenzimático de inibição da ligação da toxina (ToBI) capaz de avaliar a potência de SAD, SAT e de vacinas bacterianas combinadas: tétano-difteria uso adulto (dT) e uso infantil (DT) e tétano-difteria-pertussis (DTP), como alternativa da etapa de soroneutralização do ensaio de controle de potência. Os resultados encontrados indicam que o método proposto apresenta linearidade, especificidade e precisão (intra e inter-ensaio) satisfatórias e que é um ensaio confiável, rápido e conveniente para avaliar a potência de componentes diftérico e tetânico presentes em vacinas e soros hiperimunes. Além disso, reduz drasticamente o número de animais usados, o tempo na liberação de laudos e os custos associados ao controle da qualidade destes produtos. O método ToBI apresenta potencial para a substituição do ensaio em animais na determinação de potência de vacinas e soros antidiftéricos e antitetânicos. Entretanto, para efeitos regulatórios, se faz necessária a realização de um estudo colaborativo, envolvendo laboratórios de diversos segmentos, para conclusão da validação da metodologia considerando os parâmetros já avaliados nessa etapa.