La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie inflammatoire chronique qui touche les articulations synoviales. La PR se caractérise par une expansion pseudo-tumorale des cellules synoviales de types fibroblastiques (FLS) qui envahissent et détruisent les articulations. Le Facteur de Necrose Tumorale (TNF) alpha joue un rôle primordial dans cette pathologie et le blocage de son action constitue une thérapie efficace contre la PR. Il existe néanmoins des patients non-répondeurs aux anti-TNFs ce qui suggére la participation d'autres cytokines dans la PR. La Lymphotoxine (LT) alpha est le plus proche homologue du TNFalpha, mais son rôle dans la PR reste peu étudié et le potentiel thérapeutique de son blocage pour traiter la maladie doit encore être établi. La déplétion des FLS hyperprolifératives constitue une autre stratégie pour le traitement de la PR. L'utilisation des membres de la Famille du TNF, TRAIL et Fas ligand (FasL), a été proposée pour induire la mort cellulaire pa r apoptose des FLS dans les articulations synoviales. Toutefois, ces cytokines sont pleiotropiques et peuvent causer des effets secondaires. Nous avons caractérisé les effets de la LTalpha, de TRAIL et FasL dans les FLS pour mieux comprendre ses rôles dans la PR. Nos résultas montrent que les niveaux sériques de la LTalpha sont augmentés dans la PR comparés aux patients sains ou atteints d'arthrose. Toute comme le TNFalpha, la LTalpha induit la prolifération et l'activation des FLS. Ainsi, l'inhibition simultanée de la LTalpha et du TNFalpha pourrait fournir un avantage thérapeutique dans le cadre des traitements contre la PR. Nous avons par ailleurs démontré que TRAIL est un facteur protecteur en début de la PR mais a un rôle promoteur au cours de la maladie. Le double rôle de TRAIL est corrélé à l'expression de TRAIL récepteur 1. Enfin, nous avons montré que FasL joue un rôle non-apoptotique dans les FLS, en modulant leur prolifération. Pour cette raison, une thérapie basée sur TRAIL ou FasL demande une sensibilisation à l'apoptose des FLS. / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory disease affecting synovial joints. A hallmark of RA is the pseudo-tumoral expansion of fibroblast-like synoviocytes (FLS), which invade and destroy the joint. Blocking of Tumor Necrosis Factor (TNF) alpha is effective to treat RA. However, some patients are nonresponsive to anti-TNF therapies, suggesting the participation of other cytokines in RA. Lymphotoxin (LT) alpha is the closest homologous to TNFalpha, but little is known about its role in RA and therapeutic potential of blocking this cytokine to treat RA. Another strategy to treat RA is the depletion of hyperproliferative FLS. The TNF family members TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) and Fas ligand (FasL) have been proposed for targeting FLS in arthritic joints. However, these cytokines are pleiotropic and can thus cause unwanted effects. We aimed to characterize the effects of LTalpha, TRAIL and FasL in RA FLS and better understand their role in the pathog enesis of RA. Our results show that serum levels of LTalpha are increased in RA compared to osteoarthritis and healthy controls and LTalpha induces proliferation and activation of RA FLS to the same extent that TNFalpha. Thus, simultaneous blocking of LTalpha and TNFalpha appears to be of benefit for RA patients. Additionally, we demonstrated that TRAIL could be a protective factor in the initial phase of RA but subsequently has a disease-promoting role. The dual role of TRAIL is correlated to TRAIL receptor 1 expression of RA FLS. Moreover, we showed that FasL induces non-apoptotic effects in RA FLS, such as proliferation. Therefore, a TRAIL or FasL based therapeutic strategy in RA requires sensitization for apoptosis of FLS.

Title A Project of Educational Bicycle Trail in Kokořínsko Protected Landscape Area. Objective The aim of this work is to create a project of Educational bicycle trail in Protected Landscape Area (PLA) Kokořínsko, create an information brochure, which could be distributed to tourist information centres in the region. Methods The discussion with employees of Kokořínsko PLA and collection of information on existing bicycle trails, bicycle tracks, educational trails, natural and cultural assets in the area. Classification and verification of collected data. Using the information obtained for creating an Educationl bicycle trail. Presenting a summary in an information brochure. Assessment of the project via questionaires. Results The result of this work is a proposal of two educational cycle trails with possible combinations in Kokořínsko in form of an information brochure. The brochure includes educational texts connected to the areas on the trail, photographs and maps. Keywords Kokořínsko, Educational trail, bicycle trail, bicycle track, protected landscape area (PLA).

Derzeit gibt es keine wirksame Therapie gegen das maligne Melanom. Der Todesligand TRAIL erscheint als eine vielversprechende Krebstherapie. Trotzdessen weisen Melanomzellen sowohl eine bestehende als auch induzierbare TRAIL-Resistenz auf. In der vorliegenden Arbeit wurde die Überwindung der TRAIL-Resistenz durch drei Kinaseinhibitoren untersucht.Das Indirubin-Derivat 8-Rha-β ist in der Lage, die Sensitivität von Melanomzellen für die Todesliganden zu erhöhen und die Resistenz für TRAIL und CD95-Agonisten zu überwinden. Die Behandlung mit 8-Rha-β vermittelt sowohl die Aktivierung des extrinsischen als auch intrinsischen Signalweges. Der Tumorsuppressor p53 zeigte sich als Hauptregulator dieser proapoptotischen Änderungen und ist der Transaktivator der proapoptotischen Proteine, welche durch das 8-Rha-β heraufreguliert wurden. Die Anwendung eines Melanommodells von TRAIL-sensitiven und resistenten Zelllinien konnte eine Sensitivierung für TRAIL mittels des Kinaseinhibitors BMS-345541 aufzeigen. Die Behandlung von BMS-345541 resultierte alleine in einer frühen Bax-Aktivierung, was in den Konformationsänderungen, veränderten Phosphorylierungen und der Translokation von Bax beobachtet werden konnte. Die synergistischen Effekte resultierten aus der Aktivierung von Bid durch TRAIL, welches Bcl-2 inhibiert und der Aktivierung von Bax durch BMS-345541. Mutiertes BRAF wurde als der kritische Faktor für das kutane Melanom identifiziert. In dieser Arbeit wird ein pan-RAF-Inhibitor, L-779,450, verwendet. Dieser Inhibitor sensitiviert ebenfalls für eine TRAIL-induzierte Apoptose. Die Apoptose war mit der Aktivierung des intrinsischen Signalweges verbunden. L-779,450 allein induziert keine Apoptose, aber resultiert in einer Aktivierung von Bax und der Hochregulation von Bim. Die hier identifizierten Kinaseinhibitoren könnten bei der Behandlung des malignen Melanoms helfen, um die TRAIL-Resistenz zu überwinden und die Wirksamkeit TRAIL-vermittelter Therapieformen zu optimieren. / Until today efficient therapies are lacking for metastatic melanoma. The death ligand TRAIL appears as promising in cancer treatment; however, melanoma cells reveal both preexisting and inducible TRAIL resistance. In the present study the mechanisms of TRAIL-induced apoptosis by three kinase inhibitors were investigated. The indirubin derivative 8-Rha-β is able to enhance melanoma cell sensitivity for death ligands and overcomes resistance to TRAIL and CD95 agonists. Indirubin activated the extrinsic and intrinsic apoptosis pathways. The tumor suppressor p53 by its ability to transactivate proapoptotic proteins appeared as master regulator of these proapoptotic changes which was upregulated by indirubin. Applying a melanoma model of TRAIL-sensitive and resistant cell lines, efficient sensitization for TRAIL is demonstrated for the kinase inhibitor BMS-345541. Of note, BMS-345541 alone resulted in early Bax activation, seen by conformational changes, altered Bax phosphorylation and Bax translocation. The synergistic effects resulted from Bid activation in response to TRAIL, which inhibits Bcl-2, and the activation of Bax through BMS-345541. Mutated BRAF represents a critical oncogene in melanoma. Here, we investigated effects of the pan-RAF inhibitor L-779,450, which resulted in strong enhancement of apoptosis in combination with TRAIL. Apoptosis coincided with activation of mitochondrial pathways. Apoptosis induction by L-779,450/TRAIL was dependent on Bax. Thus, activation of Bax by L-779,450 alone was demonstrated by Bax conformational changes. Furthermore, the BH3-only protein Bim was upregulated in response to L-779,450. This identified specific role of these kinase inhibitors, which are able to enhance melanoma cell sensitivity for TRAIL could be helpful for treatment of malignant melanoma to overcome the TRAIL-resistance and to optimize the efficiency of recent therapies.

Le trail running, course nature de distances, dénivelés et technicités variables, est une discipline récente à la popularité croissante. La performance en trail dépend de nombreux facteurs génétiques, énergétiques, techniques, stratégiques et motivationnels. Parmi ces facteurs, le coût énergétique de la locomotion fait débat. Les études de cette Thèse s'attachent aux corrélations plat/montée de cette variable, au calcul d'un coût en pente à partir d'un coût à plat, à l'influence de la modification forcée de la fréquence de foulée sur l'énergie consommée, et à l'impact de la fatigue générée par un ultra trail sur le coût à plat et en montée. La prise en compte des contraintes musculaires et biomécaniques en trail d'une part, des facteurs influençant l'économie de course d'autre part, ainsi que des résultats de notre principale étude de terrain, nous laissent émettre l'hypothèse que le coût énergétique et ses variations pre/post course à plat/montée, ne sont pas des indicateurs de performance de l'activité. La force, l'endurance de force et le pacing, en plus de la puissance aérobie et de l'endurance, sont les variables testées les mieux corrélées à la performance en ultra trail / Trail running is a discipline with increasing popularity over the last 2 decades. Trail performance depends on many genetic, energetic, technical, strategic and motivational factors. Among these factors, the energy cost of locomotion is debated. The studies in this Thesis focus on the level/graded correlations of this variable, on the calculation of an uphill cost from a level cost, on the influence of a forced modification of stride frequency on running economy, and on the impact of fatigue generated by an ultra trail on level and uphill costs. Taking account of the muscular and biomechanical constraints on the one hand, and the factors influencing the running economy on the other hand, as well as the results of our main field study, we hypothesize that energy cost and its pre/post fatigue variations, are not performance indicators of the activity. Force, endurance of force and pacing, in addition to aerobic power and endurance, are the tested variables best correlated to ultra trail performance

The purpose of this travel cost study is to determine how rider behaviors and site characteristics influence repeat visits for equestrian trail riding in Kentucky. Primary data was collected via a survey developed and administered to trail riders in person and online. The average surveyed trail rider tends to be female, about 46 years old, with some higher education, and an annual household income of $65,000. She makes 11 trips to a specified site per year, 8 of which are daytrips, usually in the fall, and traveling 132 miles round trip. From other information gathered, an index of trail characteristics was developed to identify positive attributes of trails. To account for overdispersion of the number of visits per year, a negative binomial distribution in the estimation was used. The primary variables significant to explaining repeat visits to a site include distance in miles, the index of characteristics, and gender. Given consumer surplus estimates of $800 per equestrian it is recommended that established trails maximize desired characteristics. For new trail development it is recommended that trail characteristics are maximized and that they are built closer to the urban areas of the state since most riders are coming from these areas.

FLIP (FLICE inhibitory protein) est une protéine anti-apoptotique qui a des identités de séquence partagées avec la protéine pro-apoptotique caspase-8. FLIP se trouve en compétence avec caspase-8 pour se fixer sur la protéine adaptatrice FADD, ce qui empêche l’activation de caspase-8 bloquant ainsi l'apoptose. Lors du développement des molécules interférant avec des protéines anti-apoptotiques, la recherche d'inhibiteurs de la protéine FLIP qui est surexprimée dans un très grand nombre de cancers, a échoué. Cela s'explique en partie par le fait que peu d'information structurelle de FLIP est actuellement disponible TRAIL est une cytokine de la famille TNFα. Elle est décrite pour activer des voies de signalisation conduisant à la mort cellulaire par apoptose. TRAIL a montré un grand intérêt dans la thérapie anticancéreuse, grâce à sa capacité d’induire la mort des cellules tumorales sans aucun effet sur les cellules normales. Cependant, l’efficacité de TRAIL est limitée par plusieurs mécanismes moléculaires. Un de ces mécanismes est la surexpression de FLIP qui fait compromettre l’utilisation thérapeutique de TRAIL. Le but principal de ce projet est de développer des nouvelles molécules capables d’inhiber la protéine FLIP dans les cellules tumorales, sans aucun effet sur la protéine homologue caspase-8. Après modélisation des protéines FLIP et caspase-8 sur la base de la structure cristallographique de FLIP viral et FADD respectivement, des premières expériences d’ancrage ou “docking” utilisant une banque de composés chimiques du «National Cancer Institute NCI » ont été réalisées. Les 9 molécules les plus intéressantes, étant comme sélectives pour FLIP et non caspase 8, ont été sélectionnées et testées sur des lignées de cancer de poumons surexprimant la protéine FLIP. Une co-administration de chacune des molécules inhibitrices de FLIP avec TRAIL a été faite pour vérifier la restauration de la voie apoptotique dans les cellules cancéreuses. Un test moléculaire de « Pull down assay » a été fait afin de confirmer l’inhibition de l’interaction de FLIP avec FADD. Finalement, l’évaluation de l’activité enzymatique des caspases a été étudiée pour vérifier la réactivation de la voie apoptotique après la combinaison de TRAIL avec les inhibiteurs de c-FLIP. En conclusion, la combinaison de TRAIL avec les inhibiteurs de FLIP aboutit à la restauration de la voie apoptotique dans des cellules cancéreuses. Ces composés nouvellement identifiés, peuvent servir ultérieurement comme des potentiels éléments des stratégies utilisées dans le domaine du traitement du cancer. / FLIP (FLICE Inhibitory Protein) is an anti-apoptotic protein which shares sequencesimilarity with the pro-apoptotic protein caspase-8. FLIP competes with caspase-8 for binding to the adaptor protein FADD (Fas-associated death domain), thus it inhibits caspase-8 activation, thereby blocking apoptosis. During the development of molecules interfering with anti-apoptotic proteins, searching for inhibitors of FLIP protein which is overexpressed in a very large number of cancers, has failed. This is partly due to the fact that little FLIP structural information is available at present. TRAIL is a member of TNFα superfamily. It has been described to activate the apoptotic signaling pathways. TRAIL showed great interest in anti-cancer therapy, due to its ability to induce tumor cell death without any effect on normal cells. However, the efficacy of TRAIL is limited by several molecular mechanisms. One of these mechanisms is the overexpression of FLIP which is able to compromise the therapeutic use of TRAIL. The main goal of this project is to develop novel inhibitory molecules able to interfere with FLIP in tumor cells without any effect on the homologous protein caspase 8. After the construction of FLIP and caspase-8 proteins on the basis of the crystallographic structure of the viral FLIP and FADD respectively, the first docking experiments using a chemical library of the National Cancer Institute NCI have been carried out. The most interesting molecules, being selective for FLIP versus caspase 8, were selected and tested on lung cancer cell lines that overexpress FLIP protein. Co-administration of FLIP inhibitors with TRAIL was performed to verify the restoration of the apoptotic pathway in cancer cells. A molecular test of "Pull down assay" was done in order to confirm the inhibition of the FLIP/FADD interaction. Finally, the evaluation of caspases activity was carried out to confirm the reactivation of the apoptotic machinery after TRAIL/FLIP-inhibitors combination. In conclusion, the combination of TRAIL with FLIP inhibitors resulted in apoptosis restoration in resistant tumor cells. These newly identified compounds may serve later as potential elements in cancer treatment field.

FAK (kinase d’adhésion focale) est une protéine tyrosine kinase cytoplasmique, qui a un rôle clé dans la cascade de signalisation médiée par les intégrines et les récepteurs aux facteurs de croissance. Elle régule de nombreux processus cellulaires et le dérèglement de ce système est impliqué dans de nombreuses pathologies, en particulier dans les cancers. L’implication de FAK aux différentes étapes de la progression tumorale ne peut plus être remise en question, pourtant aucun inhibiteur n’est utilisé aujourd’hui en clinique. D’autre part certaines zones d’ombre restent encore dans les différents rôles de FAK et des inhibiteurs sélectifs devraient permettre de les étudier. Nous avons donc choisi de développer une première famille d’inhibiteurs de FAK de type diarylamino-1,3,5-triazinique à partir des données structurales pour accéder à une petite banque de composés. L’étude de cette première série et notamment les résultats de co-cristallisation nous ont permis de concevoir quatre nouvelles familles, plus originales d’inhibiteurs de l’activité kinase de FAK, dont le meilleur composé présente une CI50 de 35 nM. Les meilleurs inhibiteurs de FAK obtenus présentent un fort potentiel anti-angiogénique sur les cellules HUVEC en termes de croissance et formation de microvaisseaux. Certains dérivés possèdent un fort effet anti-tumoral, de l’ordre de 20 nM pour les meilleurs, sur plusieurs modèles cellulaires cancéreux (ex: glioblastome, cancer du côlon, …). Par ailleurs, certains de nos inhibiteurs de FAK ont montré une restauration de la sensibilité à TRAIL (Tumor-necrosis-factor Related Apoptosis Inducing Ligand) des cellules cancéreuses résistantes (PANC-1, MCF-7 et SKOV-3). / FAK (Focal Adhesion Kinase) is a non-receptor protein tyrosine kinase. FAK participates in growth factor receptor-mediated and integrin signaling pathway and plays essential roles in many cellular functions and the dysfunction of this system is involved in many pathologies, in particular in cancer. The implication of FAK in the various stages of the tumoral progress is widely studied but no inhibitors are used in therapy today. And some roles of FAK need to be clarify ant that why we need to develop selective inhibitors of FAK. As a part of our research program aimed at the development for new inhibitors of FAK, we have synthesized a series of novel diarylamino-1,3,5-triazine derivatives. The study of this first series in particular the structural studies allowed us to design four new families, more original of FAK inhibitors with an IC50 of 35 nM for the best compounds. This compounds show a high angiogenic potential on HUVEC cells and anti-tumor activity on a variety of cellular models (eg : colon, brain). Besides, some of our inhibitors of FAK restores sensitivity to TRAIL-induced apoptosis in resistant cancer cells line (PANC-1, MCF-7 and SKOV-3).

The purpose of this study was to determine how to attract participants from all over Sweden to partake in the John Bauer Trail Run and increase the awareness of it employing a well planned cross-media strategy. To achieve this purpose a thorough study of litterature and research within the areas cross-media and marketing have been done. The method that was chosen for the study was a small-N-study which is a more quantitative type of case study. Eleven different running events have been examined and interviewed to collect the empirical data. The answers that the interviews produced have been analyzed in combination with the studied litterature and this has resulted in a cross-media strategy for John Bauer Trail Run. The key elements of this strategy is that they should have different purposes for their different marketing channels, some more brand oriented and some more call-to-action. These specific purposes should be taken in consideration each time an advert or a message is to be published in the channel and the content should be adapted accordingly. The results of the study are mainly applicable to John Bauer Trail Run but parts of it can be applied to other trail running-events with similar goals as well. This study was limited by the appointed time and resources regarding how many units that has been studied and that only one method was applied.

TRAIL (Tumor necrosis factor-Related Apoptosis-Inducing Ligand) induit l’apoptose des cellules cancéreuses de manière sélective, tout en épargnant les cellules saines. TRAIL peut aussi activer des voies de signalisation de survie cellulaire dans des cellules cancéreuses résistantes à l’induction de la mort programmée après traitement. Les cellules cancéreuses que nous avons étudiées sont caractérisées par un phénotype de mort cellulaire fractionnée en réponse à TRAIL, c’est-à-dire que seule une fraction de la population meurt en présence de TRAIL, alors que l’autre fraction active la survie cellulaire. Lors de notre étude nous avons montré que les récepteurs de TRAIL jouent un rôle particulièrement important dans l’engagement de ces cellules vers l’une ou l’autre de ces voies. De telles recherches permettront de mieux appréhender la complexité de la signalisation TRAIL-dépendante, et de proposer des thérapies combinées qui réduiront la progression tumorale induite par TRAIL. / Tumor necrosis factor-Related Apoptosis-Inducing Ligand (TRAIL) gives a promise for cancer selective therapy as it exclusively induces apoptosis in tumor cells while sparing normal tissues. TRAIL also activates pro-survival pathways in cancer cells resistant to TRAIL-induced cell death. In this study we used clonal populations of cancer cells that respond in fractional killing upon TRAIL treatment: only a fraction of a clonal cancer cell population dies while another survives, activates non-apoptotic cascades and proliferates. We found that TRAIL receptors play an important role in the bifurcation of TRAIL signaling in populations of cancer cells that respond in fractional killing upon TRAIL challenge. These results will provide insights for evaluating whether combined therapies targeting components promoting the activation of pro-survival signaling would allow the use of rhTRAIL/DR5 agonistic antibodies to activate TRAIL-mediated killing while avoiding TRAIL-induced tumor progression.

TRAIL (TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand) et CD40 Ligand, membre de la superfamille (SF) du TNF (Tumor Necrosis Factor) apparaissent comme des cibles attractives pour la thérapie ciblée du cancer. Une caractéristique commune des membres de la SF-TNF est la structure homotrimérique du ligand qui oligomérise les récepteurs pour induire la signalisation cellulaire. Cette interaction multivalente entre ligands et récepteurs est déterminante dans l’induction de la réponse cellulaire. L’objectif de cette thèse est de i) développer des ligands multivalents de TRAIL-R2 et CD40 afin d’améliorer leur efficacité anti-tumorale puis de les associer dans des stratégies anti-tumorales innovantes et ii) de caractériser les interactions entre ces ligands et les récepteurs à la surface de la cellule pour comprendre l’impact de l’oligomerisation sur l’initiation de l’apoptose au niveau membranaire.Ainsi nous avons utilisé des peptides cycliques spécifiques du récepteur de TRAIL-R2 (TRAILmim/DR5) que nous avons multimérisés sur des plateformes chimiques innovantes. Nous nous sommes également intéressés à l’état d’oligomérisation des récepteurs avant leur contact avec le ligand dans le but de mieux comprendre les interactions multivalentes. Enfin, nous avons caractérisé à l’aide de la technique de résonance plasmonique de surface et d’un biocapteur basé sur la fluorescence les interactions entre ces ligands multivalents et le récepteur TRAIL-R2. Ces travaux nous ont donc montré la nécessité d’analyser les interactions entre ligands et récepteurs directement à la surface de la cellule pour améliorer le développement de ligands pro apoptotiques efficaces. / TRAIL (TNF- Related Apoptosis Inducing Ligand) and CD40Ligand, members of the superfamily (SF) of TNF (Tumor Necrosis Factor), appear as attractive targets for cancer therapy. A common feature of members of the TNF-SF is the homotrimeric structure that oligomerized their receptors to induce cell signaling. This multivalent interaction between ligands and receptors is crucial for apoptosis induction.The aims of this thesis is to i) develop multivalent ligands of TRAIL -R2 and CD40 to enhance their antitumor efficacy and to associate them in innovative strategies and ii) to characterize the interactions between ligands and receptors at cell surface to understand the impact of oligomerization on the initiation of apoptosis at membrane level.We used cyclic peptides specific of TRAIL-R2 (TRAILmim/DR5) that we multimerized on innovative chemical scaffolds. We also interested in the state of receptor oligomerization before their contact with the ligand in order to better understand the multivalent interactions. Finally, we characterized using the technique of surface plasmon resonance and biosensor based fluorescence interactions between multivalent ligands and TRAIL- R2.In this work we showed the need to analyze the interactions between ligands and receptors directly on the surface of the cell to improve the development of effective pro -apoptotic ligands.