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Antígenos de larvas de Taenia crassiceps e Taenia solium em teste ELISA para diagnóstico da cisticercose bovina / Utilization of Taenia crassiceps and Taenia solium metacestodes antigens in ELISA test for the diagnosis of bovine cysticercosisMonteiro, Lílian Lameck 14 December 2004 (has links)
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Previous issue date: 2004-12-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study was carried out with the purpose to develop an serological diagnosis protocol of bovine cysticercosis for the ELISA test using two metacestodes antigens of Taenia crassiceps and three of Taenia solium. There were used 20 sera of experimentally infected cattle with T. saginata eggs, 60 of cattle with natural infection, diagnosed at slaughterhouses, five of cattle negative for cisticercose, reared in isolation, 55 of negative bovine in slaughterhouses and 10 of bovine with actinomicosis (n=2), actinobacilosis (n=1), fasciolosis (n=1) diagnosed at slaughterhouse and of experimentally infected cattle with Anaplasma marginale (n=3), Babesia sp. (n=2) and concomitant infection for Anaplasma marginale and Babesia bovis (n=1). There were used the total and fluid cistic antigens of T. Crassiceps metacestodes and escólex and membrane antigens of T. solium metacestodes in ELISA test, after previous characterization in polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) in gradient 5 to 20%. The better antigen concentration was 1 µg and the better sera and conjugated dilutions were 1:25 and 1:5.000, respectively. Although the T. solium antigens have provided the most sensibility values, the T. crassiceps antigens also showed good performance to the bovine cysticercosis diagnosis. Different control serum groups employed for the cut-off calculation had changed the ELISA test results. We can concluded that the ELISA test for antibodies detection presents deficiencies in the diagnosis of naturally infected animals that showed low sensibility (5 to 32%) for different antigens. However, for experimentally infected cattle, the sensibility was high, 75 to 90% for different antigens. The test could still be considered useful in the differentiation between the cisticercose and other diseases, due to its high specificity rates (81 to 100%). / A cisticercose bovina é uma zoonose que tem o ser humano como único hospedeiro definitivo. Além de sua importância para a Saúde Pública, esta parasitose acarreta prejuízos econômicos em matadouros, ao levar as carcaças acometidas a julgamento. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um teste de diagnóstico sorológico da cisticercose bovina pelo teste ELISA empregando dois antígenos de larvas de Taenia crassiceps e três de Taenia solium. Foram utilizados 20 soros de bovinos infectados experimentalmente com ovos de T. saginata, 60 de bovinos com infecção natural, diagnosticados em matadouros, cinco de bovinos negativos para cisticercose, criados sob isolamento, 55 de bovinos considerados negativos em matadouros e 10 de bovinos portadores de actinomicose (n=2), actinobacilose (n=1), fasciolose (n=1) diagnosticados em matadouro e de bovinos infectados experimentalmente com Anaplasma marginale (n=3), Babesia sp. (n=2) e infecção mista por Anaplasma marginale e Babesia bovis (n=1). Foram empregados os antígenos total e vesicular de larva de Taenia crassiceps e total, de escólex e de membrana de larva de Taenia solium no teste ELISA, após prévia caracterização em eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) sob gradiente 5 a 20%. Após a realização de ensaios de avaliação do desempenho do teste em duas etapas, sempre considerando o critério da amplitude da diferença entre densidades ópticas de soros-controle positivos e negativos, foram obtidos os resultados que se seguem. A concentração de 1 µg de antígeno por orifício foi a que proporcionou, na maioria das vezes, a maior diferenciação entre soros positivos e negativos com todos os cinco antígenos estudados. As diluições 1:25 de soros e 1: 5.000 de conjugado também foram as que se destacaram, à exceção do antígeno de líquido vesicular de larva de T. crassiceps, que teve melhor desempenho quando o conjugado foi diluído a 1:2.500 vezes. O leite desnatado foi a melhor substância bloqueadora dos sítios reativos remanescentes da placa. Embora os antígenos de larva de T. solium tenham proporcionado valores mais elevados de sensibilidade, os antígenos de larva de T. crassiceps também mostraram bom desempenho no diagnóstico de cisticercose bovina. A escolha de diferentes grupos de soroscontrole para o cálculo do ponto de corte interferiu de forma expressiva no desempenho do teste ELISA. Pode-se concluir que o teste ELISA para detecção de anticorpos apresenta deficiências no diagnóstico de animais destinados ao abate, em virtude de sua baixa sensibilidade (5 a 32%) para diferentes antígenos, quando se consideram soros de animais com infecção natural, geralmente discreta. No entanto, no caso de animais infectados experimentalmente, a sensibilidade se mostrou elevada, 75 a 90%, para diferentes antígenos. O teste ainda pode ser considerado útil na diferenciação entre a cisticercose e outras doenças, devido às suas elevadas taxas de especificidade (81 a 100%).
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Amplificação de DNA circulante para o diagnóstico da cisticercose bovina /Menosso, Valéria Aparecida. January 2006 (has links)
Orientador: Germano Francisco Biondi / Resumo: A cisticercose bovina é resultante da ingestão de ovos de T. saginata proveniente de pastagens e águas contaminadas fornecidas aos animais. É causa de preocupações na área de saúde pública por ocasionar a teníase em humanos, mas causa sérios prejuízos na indústria agropecuária e aos pecuaristas, devido às condenações ou tratamentos de frio ou salga pelas quais as carcaças consideradas positivas são submetidas. O método de diagnóstico rotineiramente utilizado para a cisticercose bovina tem sido a inspeção post-mortem. Muitos pesquisadores têm desenvolvido métodos de diagnóstico antemortem, com especificidade e sensibilidade variadas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a aplicação da amplificação de DNA circulante de T. saginata, através da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), como ferramenta diagnóstica para cisticercose bovina. Para a realização da pesquisa foram utilizadas amostras de sangue de bovinos abatidos em frigoríficos sob S.I.F., segundo apresentarem ou não cisticercose. Inicialmente avaliaram-se cinco pares de oligonucleotídeos iniciadores através da determinação do limiar de detecção da PCR de cada um deles. Objetivou-se ainda estabelecer qual a fração do sangue experimentalmente contaminado resultaria em amplificação de fragmentos de DNA através da PCR, para posteriormente avaliar a aplicabilidade da PCR em amostras de sangue de bovinos naturalmente infectados com T. saginata. O melhor limiar de detecção foi observado com o uso do par de oligonucleotídeos iniciadores SCAR K, nas frações de sangue denominadas pellet e sobrenadante. As amostras de sangue de animais positivos para cisticercose na inspeção de rotina e submetidos a PCR não resultaram em amplificação do fragmento de DNA desejado, sugerindo que a baixa carga parasitária possa ter influenciado os resultados. / Abstract: Bovine cysticercosis is caused by the ingestion of T. saginata eggs from contaminated pastures and water provided to animals. It is a public health problem by causing the taeniasis in human beings, but it also causes serious damages in the agro-cattle industry and to the cattle raisers by de condemnation or treatment by coldness or salting of carcass detected as positive. Routinely bovine cysticercosis diagnosis has been the post-mortem inspection. Several researchers have developed ante-mortem diagnosis methods, with variable specificity and sensitivity. The present study aimed at evaluating the amplification of circulating DNA of T. saginata, by the Polymerase Chain Reaction (PCR), as a diagnostic tool to bovine cysticercosis. Blood samples from bovines slaughtered under Federal Meat Inspection abattoirs were taken according to the presence or absence of cyst forms. Initially, we evaluated five primers and established which blood fraction experimentally contaminated resulted in DNA fragment amplification by PCR. The best detection limit was observed with the use of the SCAR K primers, in the blood fractions denominated "pellet" and "supernatant". Blood samples of naturally infected animals considered positive in the routine inspection didn't result in the desired DNA fragment amplification by PCR. / Mestre
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Avaliação de frações antigênicas da forma metacestódea de Taenia saginata no imunodiagnóstico da neurocisticercose humanaOliveira, Heliana Batista de 16 May 2008 (has links)
Application of Taenia saginata metacestodes as alternative antigen is an important
alternative for neurocysticercosis (NC) serodiagnosis. The cross reaction with
Echinococcus granulosus infection occurred in homologous and heterologous antigens,
and could be avoid with different purified methods. This study analyzed antigen fractions
obtained from crude saline extract of T. saginata metacestodes purified by affinity
chromatography with the lectin jacalin (unbound and bound fraction), concanavalin A
(unbound and bound fraction), concanavalin A using jacalina unbound fraction (unbound
and bound fraction) and N-acetil (unbound and bound fraction). The fraction were tested
for the detection of IgG antibodies by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and
immunoblot for the laboratory diagnosis of human NC. The application of T. saginata
metacestodes as an alternative antigen for use in ELISA and WB tests compared with the
metacestodes antigen of Taenia solium in CFS samples was also analyzed. Serum
samples were obtained from 142 individuals: 40 were diagnosed with NC, 62 presented
Taenia sp. and other parasitic diseases and 40 were apparently healthy individuals. The
CSF samples were obtained from 35 patients with definitive neurocysticercosis; and 35
patients with other neurological disorder. Among the fractions, unbound concanavalin A
demonstrated statically higher sensitivity and specificity by ELISA (90% and 93.1 %,
respectively). By Immunoblot, the concanavalin unbound showed 100% of sensitivity
and specificity, where only serum samples from patients with NC recognized the protein
of 64-68 kDa, so this antigen fraction may be used as specific antigen for diagnosis of
NC. The sensitivity and specificity of ELISA using antigen obtained from T. solium
applied to CSF samples results of 100%. When the tests were conducted using T.
saginata metacestodes, results were 100% and 94.3%, respectively. The 47-52, 64-68 and
70 kDa antigens were recognized by only CSF samples from patients with NC. The
results indicated that T. saginata metacestodes can be used as alternative antigen for NC
diagnosis using LCR samples. / A utilização de metacestódeos de Taenia saginata como antígeno alternativo constitui
uma importante ferramenta no sorodiagnóstico da neurocisticercose humana (NC). A
reatividade cruzada com indivíduos infectados por Echinococcus granulosus é comum
em antígenos homólogos e heterólogos, podendo ser evitada com diferentes métodos de
purificação. O presente estudo analisou as diferentes frações antigênicas obtidas, a partir
do extrato salino total de metacestódeos de T. saginata, por cromatografia de afinidade
em coluna de Jacalina (fração ligante e não ligante), de Concanavalina A (fração ligante e
não ligante), de Concanavalina A utilizando a fração não ligante de Jacalina (fração
ligante e não ligante) e Coluna de N-acetil (fração ligante e não ligante). As frações
foram avaliadas quanto a detecção de anticorpos IgG anti-metacestódeos de Taenia
solium nos testes ELISA e Immunoblotting. Foi avaliada a utilização do extrato salino
total de metacestódeos de T. saginata como antígeno alternativo nos testes ELISA e
Immunoblotting para detecção de anticorpos IgG no LCR. Foram obtidas 142 amostras de
soro, sendo 40 de pacientes com diagnóstico definitivo de NC, 62 de indivíduos
infectados por Taenia sp e por outros parasitos e 40 de indivíduos saudáveis. Foram
coletadas 70 amostras de LCR, sendo 35 de pacientes com diagnóstico definitivo de NC e
35 de indivíduos com outras manifestações neurológicas. Entre todas as frações
analisadas, a fração não ligante de Concanavalina A demonstrou maior sensibilidade e
especificidade pelo teste ELISA em amostras de soro (90% e 93,1%, respectivamente).
Pelo Immunoblotting esta mesma fração demonstrou 100% de sensibilidade e
especificidade, sendo que apenas pacientes com NC reconheceram a banda especifica de
64-68 kDa, indicando que esta fração antigênica pode se usada como antígeno especifico
no sorodiagnóstico da NC humana. A sensibilidade e especificidade do teste ELISA
utilizando o antígeno homólogo no LCR humano foi de 100%. Quando este teste foi
conduzido com o antígeno heterólogo obteve-se 100% de sensibilidade e 94,3% de
especificidade. Na reação de Immunoblotting as bandas antigênicas de 47-52, 64-68 e 70
kDa foram reconhecidas exclusivamente no LCR de pacientes com NC. Os resultados
conferem ao extrato salino de T. saginata sensibilidade e especificidade para ser
utilizado como antígeno alternativo para o diagnostico da NC no LCR. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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