A imunidade inata mostra-se importante na defesa do hospedeiro contra a infecção por fungos, e dentro desse contexto macrófagos e neutrófilos (PMN) desempenham papel central na paracoccidioidomicose. O tratamento desta doença inclui o uso de antifúngicos que, além do prolongado tempo de administração, podem ter diversos efeitos colaterais. A laserterapia de baixa potência (LLLT- low level laser therapy) vem sendo utlizada como tratamento adjuvante para muitas enfermidades, e já foi demonstrado seu efeito ativador em neutrófilos, se fazendo necessário compreender melhor os mecanismos imunológicos envolvidos nesse processo. Neste trabalho avaliamos os efeitos da LLLT aplicada in vivo nas patas traseiras de camundongos, infectados pela via ―air pouch‖ subcutânea com a cepa virulenta do P. brasiliensis Pb18 ou a cepa de baixa virulência Pb265, visando atingir células em formação na medula. Grupos de animais não irradiados foram utilizados como controle. Após 8 dias de infecção as células da ―air pouch‖ foram coletadas e analisadas quanto ao número, concentração proteica, liberação de espécies reativas de oxigênio (ERO), atividade mitocondrial de PMN e perfil de migração e secreção das citocinas (GM-CSF, IFN- γ, IL-12, IL-4, IL-10 e IL-17) pelo exsudato celular. O tratamento de animais com LLLT aumentou a atividade mitocondrial, o conteúdo de proteínas e a liberação de ERO por parte dos PMN e diminuiu a secreção da IL-10 pelas células do exsudato na infecção com a cepa virulenta Pb18. Por sua vez, a infecção com a cepa de baixa virulência Pb265 também levou a um aumento na atividade mitocondrial, mas houve diminuição no conteúdo de proteínas e a liberação de ERO foi semelhante ao controle não irradiado. Não foi observada diferença na secreção das citocinas GM-CSF, IFN-γ, IL-12, IL-4 e IL-17 pelas células do exsudato estimuladas por ambas às cepas. Quanto à migração celular, os PMN constituem o principal tipo celular encontrado no local do inóculo, seguido pelos linfócitos e monócitos. O número de PMN foi diminuído no tratamento com LLLT quando o estímulo foi o Pb18 e aumentado quando foi o Pb265. Para os linfócitos ocorreu o inverso, no grupo estimulado com Pb18 o laser atuou aumentando esse tipo celular, e diminuindo quando o estímulo foi o Pb265. Já para os monócitos não houve alteração quando o estimulo foi o Pb18 e houve uma diminuição quando o estímulo foi o Pb265 no grupo tratado com LLLT. Os resultados sugerem que o tratamento com LLLT confere um potencial fungicida aos neutrófilos e uma maior resolução da infecção causada pela cepa virulenta Pb18. / Innate immunity is an important component of host defense against fungi, and in this context machophages and neutrophils (PMN) play a central role in paracoccidioidomycosis. The treatment of this disease includes the use of antifungals, which in addition to the prolonged administration time needed may cause many side effects. Low level laser therapy (LLLT) has been used as an adjuvant treatment for many ailments and its modulating effect on neutrophils has already been demonstrated; however it is necessary to better understand the mechanisms involved in this process. In this work, we evaluated the effects of LLLT applied ―in vivo‖ at the hind paws in mice, aiming the bone marrow. These mice were infected in the subcutaneous air pouch with Pb18 or Pb265 P. brasiliensis isolates. Unirradiated animals were used as controls. After 8 days of infection the cells of air pouch were collected and analyzed for the number, protein concentration and release of ROS, mitochondrial activity of PMN and migration profile and secretion of cytokines (GM-CSF, IFN-γ, IL-12, IL- 4, IL-10 and IL-17) by the cells present in the exudate. LLLT-treated animals showed increased mitochondrial activity, protein content and release of ROS by PMN and in the number of cells and decreased the secretion of IL-10 exudate cells obtained after inoculation with the virulent strain Pb18. In turn, the infection with the low virulence strain Pb265 also led to an increase in mitochondrial activity, but there was a decrease in protein concentration and the release of ROS was similar to that of the unirradiated controls.. No differences were observed in the secretion of the GM-CSF, IFN-γ, IL-12, IL-4 and IL-17 cytokines by exudate cells stimulated by any of the strains. Regarding cell migration, PMN are the main cell type found at the inoculum site, followed by lymphocytes and monocytes. The number of PMN was decreased in the treatment with LLLT when the stimulus was Pb18 and increased when it was Pb265. For the lymphocytes the reverse occurred, in the group stimulated with Pb18 the laser acted increasing this cellular type, and decreasing when the stimulus was the Pb265. For monocytes, there was no change when the stimulus was Pb18 and there was a decrease when the stimulus was Pb265 in the group treated with LLLT. The results suggest that treatment with LLLT elicits a fungicidal activity to the PMN and higher resolution of the infection caused by the virulent Pb18 strain. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Co-orientador: Fernanda Gonçalves Basso / Banca: Gelson Luis Adabo / Banca: Carla Raquel Fontana Mendonça / Resumo:A idadedo indivíduo e a presença de inflamação podem influenciar o metabolismo celular, retardando o processo de reparo tecidual. Diferentes tratamentos, como a laserterapia de baixa potência (LBP) e a aplicação de fatores de crescimento são capazes promover bioestimulação celular através do aumento de sua proliferação e metabolismo. O objetivo deste estudo foi avaliar as atividades de fibroblastos obtidos da gengiva de indivíduos jovens e idosos (Estudo 1), a capacidade de resposta destas células expostas ao fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) (Estudo 2), bem como o efeito da LBP ou do fator de crescimento epidérmico (EGF) sobre a viabilidade e metabolismo destas células em cultura (Estudo 3). Culturas primárias de fibroblastos de gengiva de 6 pacientes (3 jovens - J; e 3 idosos - I) foram obtidas e semeadas em meio de cultura completo (DMEM), de acordo com cada protocolo proposto. No Estudo 1, fibroblastos em DMEM completo foram cultivados em placas de 24 compartimentos pelos períodos de 24, 48 ou 72 horas e submetidos a análise da viabilidade celular (MTT, n=36), produção de proteína total (PT, n=36) e síntese de colágeno Sirius Red (SR, n=36). No Estudo 2, após 24 horas do cultivo celular em placas de 96 compartimentos, o meio de cultura completo foi substituído por DMEM sem soro fetal bovino (SFB) acrescido ou não de TNF-α (100 ng/mL) e mantido em contato com as células por 24 horas adicionais. Então, as células foram analisadas quanto a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs, n=36), produção de óxido nítrico (NO, n=36) e síntese de quimiocina CCL5 (ELISA, n=36). No Estudo 3, fibroblastos cultivados em placas de 24 compartimentos foram tratados com EGF (100 μM) ou irradiados com laser de baixa potência (LASERTable, InGaAsP - 780 ± 3nm; 25mW). A viabilidade celular (Alamar Blue®, n=12), migração celular (Wound Healing, n=12)...(Resumo completo clicar acesso eletrônico) / Abstract: The age as well as the presence of inflammation can influence the cellular metabolism, slowing the tissue healing process. Different therapies, such as the application of growth factors and low level laser therapy (LLLT) are capable of biostimulating cells by increasing their proliferation and metabolism. The aim of this study was to evaluate: the functions of gingival fibroblasts obtained from young and elderly individuals (Study 1); the response of these cells exposed to tumor necrosis factor alpha - TNF-α (Study 2); and the effect of LLLT or epidermal growth factor - EGF on the viability and metabolism of these connective cell type (Study 3). Primary culture of gingival fibroblasts of 6 patients (3 young - Y and 3 elderly - E) were collected and cultured in complete culture medium (DMEM). In the Study 1 fibroblasts were seeded in 96-well plates in complete DMEM containing 10% of fetal bovine serum (FBS) for 24, 48 or 72 hours and subjected to evaluation of cell viability (MTT, n=36), total protein production (TP, n=36) and collagen synthesis (SR, n=36). In the Study 2, after 24-hour cell seeding, the complete DMEM was replaced by DMEM without FBS supplemented or not with TNF-α (100 ng/mL) which was kept in contact with cells for additional 24 hours. Then, the production of reactive oxygen TNF-α species (ROS, n=36), nitric oxide (NO, n=36) and synthesis of CCL5 chemokine (ELISA, n=36) were assessed. In the Study 3 fibroblasts were seeded in 24-well plates for 24 hours, and then exposed to EGF (100 μM) or submitted to low power laser irradiation (LASERTable device, InGaAsP - 780 ± 3nm; 25mW). Cell viability (Alamar Blue®, n=12), cell migration (Wound Healing, n=12), collagen synthesis (SR, n=12), and synthesis of vascular endothelial growth factor - VEGF (ELISA, n=12) were assessed 72 hours after the treatments. The data were statistical...(Complete abstract electronic access below) / Mestre

Submitted by carla santos (biblioteca.cp2.carla@bahiana.edu.br) on 2018-07-31T14:08:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertac??a??o Mestrado Defesa OK pdf.pdf: 10518069 bytes, checksum: 4a06cb8253de8833bcb076ade8475d15 (MD5) / Approved for entry into archive by JOELMA MAIA (ebmsp-bibliotecacp2@bahiana.edu.br) on 2018-08-01T14:07:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertac??a??o Mestrado Defesa OK pdf.pdf: 10518069 bytes, checksum: 4a06cb8253de8833bcb076ade8475d15 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-01T14:07:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertac??a??o Mestrado Defesa OK pdf.pdf: 10518069 bytes, checksum: 4a06cb8253de8833bcb076ade8475d15 (MD5) Previous issue date: 2018-03-26 / Introdu????o: A genit??lia feminina saud??vel apresenta um ecossistema que se mant??m em equil??brio atrav??s das intera????es de fatores end??genos e ex??genos, podendo sofrer influ??ncia por situa????es como oscila????es hormonais e intercurso sexual. O Diodo Emissor de Luz (LED) ?? um dipositivo semicondutor que emite luz em diferentes comprimentos de onda, variando a cor e os efeitos gerados. O uso da luz azul em humanos ?? mais conhecido com finalidade antimicrobiana, j?? tendo sido utilizado em regi??o de face, mucosa g??stica e em mucosa vaginal. Objetivo: Testar a seguran??a e o efeito do LED azul 401 ?? 5nm em mucosa vaginal saud??vel. Materiais e M??todos: Trata-se de um estudo cl??nico fase I onde foram inclu??das 10 mulheres com idade entre 18 e 45 anos, com mucosa vaginal saud??vel, isto ??, sem sinais e sintomas de vulvovaginites, com achados de Citologia a Fresco t??picos e teste de hidr??xido de pot??ssio (KOH) negativo. Foram exclu??das mulheres em uso de marcapasso, com diagn??stico e/ou suspeita de neoplasias, dificuldade de responder a anamnese, doen??as neurol??gicas e/ou psiqui??tricas, gestantes e aquelas que iniciassem ou interrompessem uso de anticoncepcional oral (ACO) durante o estudo. Inicialmente foi feita anamnese e em seguida exame f??sico e coleta de secre????o vaginal para realiza????o de Teste de KOH e citologia a fresco. As volunt??rias que seguiram na pesquisa passaram por avalia????o de potencial hidrogeni??nico (pH) vaginal e parte do material coletado foi enviado ao laborat??tio para citologia onc??tica. As participantes foram submetidas a uma sess??o de LED azul 401 ?? 5 nm, com especulo introduzido no canal vaginal, durante 30 minutos. Entre 21 e 28 dias ap??s a terapia, a depender do ciclo menstrual da participante, a mesma foi novamente submetida a avalia????o com anamnese, verifica????o de pH vaginal e realiza????o de coleta de secre????o vaginal para an??lise de citologia onc??tica. Foi utilizado o programa Statistical Package for Social Sciences (SPSS) vers??o 14.0 para an??lise dos dados obtidos. Resultados: Inicialmente foram recrutadas 20 mulheres para participar do estudo, destas 10 foram exclu??das por n??o cumprirem os crit??rios de inclus??o. Das 10 mulheres mantidas na pesquisa, uma delas foi exclu??da na reavalia????o por ter interrompido uso de ACO. A m??dia de idade da amostra foi de 27 ?? 5,4 anos e a m??dia de ??ndice de massa corporal (IMC) 25,25 ?? 3,05 kg/m2 . N??o foram observadas modifica????es patog??nicas na microflora vaginal de nenhuma das participantes. Em rela????o ao pH vaginal, apenas 1 entre as 9 mulheres mantidas no estudo apresentou redu????o do valor (5.0 ??? 4.0). Al??m disso, n??o foram vistos efeitos adversos como dor ou calor em nenhuma das mulheres durante ou ap??s o uso da luz. Conclus??o: O presente estudo demonstrou que a utiliza????o do LED azul 401 ?? 5nm em mucosa vaginal de mulheres jovens nao ocasionou mudan??as patog??nicas em microflora e em valores de pH vaginal. Al??m disso, nao foi observado surgimento de efeitos adversos como dor, aquecimento ou inc??modo durante ou ap??s uso da luz nas participantes. Sugere-se assim a utiliza????o do LED azul 401 ?? 5npara verifica????o dos efeitos da luz em agentes patog??nicos vulvovaginais.

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Coorientador: Edilson Ervolino / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Michel Reis Messora / Banca: Juliano Milanezi de Almeida / Banca: Mário Taba Júnior / Resumo: Este estudo imunoistoquímico avaliou a influência do aspirado de medula óssea (AMO) associado ou não à terapia com laser em baixa intensidade (LLLT) no processo de reparo de defeitos de tamanho crítico (DTC), criados cirurgicamente em calvárias de ratos. 64 ratos foram aleatoriamente distribuídos em 4 grupos: C (controle), AMO, LLLT e AMO/LLLT. Um DTC de 5 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido com coágulo sanguíneo somente. No Grupo AMO, o defeito preenchido com AMO. Nos grupos LLLT e AMO/LLLT, o defeito recebeu irradiação com laser (InGaAlP laser), foi preenchido com coágulo sanguíneo ou AMO, respectivamente, e irradiado novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 15 e 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para detecção do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), fator de transcrição relacionado à Runt (Runx2), proteína óssea morfogenética-2 (BMP-2), osteopontina (OPN) e osteocalcina (OCN). Um método semi-quantitativo foi usado para avaliar a imunomarcação para VEGF. As células PCNA-positivas, Runx2-positivas, BMP-2-positivas, OPN-positivas e OCN-positivas foram quantificadas. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente. Aos 15 dias pós-operatórios, o Grupo LLLT apresentou números de células OPN-positivas e OCN-positivas significativamente maiores que o Grupo C; o Grupo AMO apresentou números de células PCNA-positivas, Runx2-positivas, BMP-2-positivas e OPN-positivas significativamente maiores do que os grupos C e LLLT, além de número de células OCN-positivas significativamente maior que o controle; o Grupo AMO/LLLT apresentou imunomarcação para VEGF e números de células Runx2-positivas, OPN-positivas e OCN-positivas... / Abstract: This immunohistochemical study evaluated the influence of bone marrow aspirate (BMA) combined or not with low-level laser therapy (LLLT) on bone healing in surgically created critical-size defects (CSDs) in rat calvaria. 64 rats were randomly divided into 4 groups: C (control), BMA, LLLT and BMA/LLLT. A 5 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C, the defect was filled by blood clot only. In Group BMA, the defect was filled with BMA. In groups LLLT and BMA/LLLT, the defect received laser irradiation (InGaAlP laser), was filled with blood clot or BMA respectively, and irradiated again. Animals were euthanized at either 15 or 30 days postoperative. Vascular endothelial growth factor (VEGF), proliferating cell nuclear antigen (PCNA), runt-related transcription factor-2 (Runx2), bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), osteocalcin (OCN) and osteopontin (OPN) immunohistochemical staining were performed. A semi-quantitative method was used to evaluate VEGF immunolabeling. PCNA-positive, Runx2-positive, BMP-2-positive, OPN-positive and OCN-positive cells were quantified. Data were statistically analyzed. At 15 days postoperative, Group LLLT presented a significantly higher number of OPN-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA presented a significantly higher number of PCNA-positive, Runx2-positive, BMP-2-positive and OPN-positive cells than groups C and LLLT, and a significantly higher number of OCN-positive cells than control; Group BMA/LLLT presented significantly higher VEGF immunolabeling and number of Runx2-positive, OPN-positive and OCN-positive cells than Group C. At 30 days postoperative, Group LLLT presented significantly higher VEGF immunolabeling and number of OPN-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA presented a higher number of Runx2-positive, BMP-2-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA/LLLT presented... / Doutor

Orientador: Andrigo Barboza De Nardi / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Ana Lúcia de Carvalho Rosa Pascoli / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Banca: Roberta Carvalho Basile / Resumo: A enxertia cutânea é uma técnica cirúrgica simples e bastante útil para o reparo de feridas, principalmente nas quais existe dificuldade da aplicação do fechamento primário ou de outras técnicas reconstrutivas. Entretanto, para a sobrevivência do enxerto, é necessário que o leito da ferida esteja saudável e com a presença de um tecido de granulação saudável. Objetivou-se com este trabalho foi comparar diferentes ondas do laser de baixa intensidade e do óleo de girassol ozonizado como potenciais estimulantes da cicatrização em enxertos aplicados em feridas sem tecido de granulação em coelhos. Para isso, foram elaborados dois experimentos onde o primeiro comparou a laser de baixa intensidade (LBI) de onda contínua com a LBI pulsada (Capítulo 2), no qual 31 coelhos foram distribuídos em três grupos, grupo controle (GC), grupo laser onda contínua (GLC) e grupo laser onda pulsada (GLP). O segundo experimento comparou a LBI de onda contínua com a aplicação tópica de óleo de girassol ozonizado (OGO) (Capítulo 3) e 32 coelhos também foram distribuídos em três grupos, sendo grupo controle (GC), grupo laser (GL) e grupo ozônio (GO3). No primeiro experimento, os grupos GLC e GLP apresentaram evolução semelhante, com processo cicatricial satisfatório do enxerto em ambos, ao contrário do grupo GC. Tais resultados se mantiveram na avaliação microscópica, pois o GC apresentou correlação significativa com critérios ligadas à falha do enxerto. Já no segundo experimento, novamente ficou compro... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cutaneous grafting is a simple and useful surgical technique for the repair of wounds, especially in which there is a difficulty in applying the primary closure, or other reconstructive technique. However, for graft survival, it is necessary a healthy granulation tissue in the wound bed. The aim of this study was to compare differents waves of low level laser therapy (LLLT) and ozonated sunflower oil as potential healing stimulators in grafts applied rabbits in fresh wounds. Two trials were carried out in which the first one compared LLLT continuous wave with LLLT pulsed (Chapter 2) in 31 rabbits divided into three groups: control group (CG), continuous wave laser group (GLC) and pulsed wave laser group (GLP). The second trial compared LLLT continuous with ozonized sunflower oil (OGO) (Chapter 3), and 32 rabbits were also divided into three groups, being control group (GC), laser group (GL) and ozone group (GO3). In the first trial, the GLC and GLP groups showed similar evolution, with a satisfactory healing process in both, unlike the CG group. These results were maintained in the microscopic evaluation since the GC showed a significant correlation with criteria related to graft failure. In the second trial, the ineffectiveness of the donor bed without granulation tissue to provide an ideal environment for healing of the grafts was again demonstrated. The GL and GO3 groups presented superior evolution compared to the CG, although maceration occurred in the grafts of the anim... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A Terapia com Laser de Baixa Intensidade (TLBI) pode ser utilizada para tratar dores agudas e crônicas. Entender as vias da dor e as interações de fótons com tecidos neurais possibilitará compreender melhor essas terapias. A nocicepção pode ser autocontrolada por analgésicos endógenos, opióides naturais que bloqueiam a liberação de neurotransmissores excitatórios e, portanto, fazem uma inibição sensorial total e inespecífica. Sabe-se que a TLBI pode estimular a liberação desses analgésicos endógenos e inibir temporariamente o transporte axonal em fibras de pequeno diâmetro. Conhecer a fluência luminosa no interior do tecido neural é essencial para avaliar as hipóteses descritas, no entanto, devido à complexidade dos tecidos biológicos, calcular (ou simular) as interações da luz com os tecidos é impraticável. Para superar esse problema, desenvolvemos experimentos para estimar a fluência de luz em aplicação transcraniana de laser e mapeamos as propriedades ópticas do encéfalo de rato. Foi possível diferenciar tecidos encefálicos por suas características de atenuação da intensidade luminosa e estimar a profundidade da penetração da luz que pode ser de mais de 20 mm. Encontramos redução da dor evocada por pressão, calor, frio ou inflamação após TLBI transcraniana em camundongos. Para esse estudo comportamental, desenvolvemos um equipamento para avaliar o limiar de dor por aplicação de pressão nos animais, que opera com melhor precisão que os instrumentos comerciais. Os mecanismos de fotoneuromodulação foram investigados por quantificação de Trifosfato de Adenosina (ATP), imunofluorescência e marcação com hematoxilina-eosina de tecidos encefálicos que foram visualizados por microscópio confocal. A iluminação transcraniana aumentou a produção de ATP e de Fosfatase ácida prostática (um analgésico endógeno) e reduziu a quantidade do neurotransmissor glutamato, responsável pela condução da informação nociceptiva. Por outro lado, não observamos alteração na concentração de tubulina, um dos constituintes do citoesqueleto, e a marcação com hematoxilina-eosina revelou que não houve dano ao tecido decorrente da iluminação. Os achados apresentados nesse estudo atestam a relevância e eficácia da fotoneuromodulação proveniente de iluminação transcraniana com laser de 808 nm para suprimir a nocicepção em camundongos. Esse estudo é pioneiro na elucidação dos mecanismos de ação da fotoneuromodulação da dor in vivo. / Low-level Light therapy (LLLT) can treat acute and chronic pain. Getting knowledge about the pain pathways and the photon-neuron interactions may contribute to a better understanding of this therapy. The nociception may be self-controlled by endogenous analgesics, natural opioids that block the release of excitatory neurotransmitters, and thus make a total and nonspecific sensory inhibition. It is known that LLLT can stimulate the release of these endogenous analgesics, so it temporarily inhibits axonal transport in small diameter fibers. The knowledge of light fluence through neural tissue is essential to test the discussed assumptions. However, due to the complexity of biological tissues, the calculation (or simulation) of light-tissue interactions is impractical. In order to overcome this problem, we developed an experimental setup to estimate the light fluence in a transcranial LLLT and to map the optical properties of rat brains. It was possible to differentiate cerebral tissues and to estimate the depth of light penetration, which is more than 20 mm. We found a decrease in pain evoked either by pressure, heat, cold or inflammation after transcranial LLLT in mice. For this animal behavioral study, we developed an equipment to assess the pain threshold with pressure stimulus, which operates with better precision than commercial instruments. The LLLT mechanisms were investigated by Adenosine triphosphate ATP quantification, immunofluorescence and haematoxylin and eosin staining of brain tissues which were imaged by confocal microscopy. The transcranial irradiation increased ATP and prostatic acid phosphatase (an endogenous analgesic) production and reduced the amount of glutamate, the neurotransmitter responsible for conducting nociceptive information. There was no change in the concentration of tubulin, a constituent of the cytoskeleton, and the haematoxylin and eosin staining revealed no tissue damage due to the irradiation. This study is pioneer in elucidating the mechanisms of in vivo photoneuromodulation of pain.

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Coorientador: Edilson Ervolino / Banca: Adriana Campos Passanezi Sant'Ana / Banca: Alvaro Francisco Bosco / Resumo: Este estudo avaliou, histoquimicamente e imunoistoquimicamente, a influência do plasma rico em plaquetas (PRP), da terapia com laser em baixa intensidade (LLLT) ou da associação de ambos na cicatrização de defeitos de fenestração periodontal (DFP) em ratos. DFP foram criados cirurgicamente na mandíbula de 80 ratos. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos: 1) C (controle) e 2) PRP - defeitos preenchidos com coágulo sanguíneo ou PRP, respectivamente; 3) LLLT e 4) PRP/LLLT - defeitos receberam aplicação da LLLT, foram preenchidos com coágulo sanguíneo ou PRP, respectivamente e irradiados novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 ou 30 dias pós-operatórios. As fibras colágenas imaturas e maduras foram avaliadas por análise histoquímica e suas porcentagens calculadas. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para fator de transcrição relacionado à Runt (Runx2), osteocalcina (OCN), osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP). Células Runx2-positivas foram quantificadas. Um método semi-quantitativo foi usado para avaliar a imunomarcação de OCN, OPN e ALP. Os dados foram analisados estatisticamente. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas porcentagens de fibras colágenas imaturas e maduras dos grupos experimentais quando comparadas ao grupo controle. Aos 10 dias, os grupos PRP e PRP/LLLT apresentaram número de células Runx2-positivas significativamente maior que o controle; o grupo PRP/LLLT apresentou padrões de imunomarcação de OCN e OPN significativamente maiores que o controle e não houve diferenças estatisticamente significativas no padrão de imunomarcação de ALP. Aos 30 dias, diferenças estatisticamente significativas não foram Resumo observadas nos padrões de imunomarcação de OCN, OPN e ALP entre os grupos experimentais... / Abstract: This study histochemically and imunoistochemically evaluated the influence of platelet-rich plasma (PRP), low-level laser therapy (LLLT), or their combination on the healing of periodontal fenestration defects (PFD) in rats. PFD were surgically created in the mandible of 80 rats. The animals were randomly divided into 4 groups: 1) C (Control) and 2) PRP - defects were filled with blood clot or PRP, respectively; 3) LLLT and 4) PRP/LLLT - defects received laser irradiation, were filled with blood clot or PRP, respectively, and then irradiated again. Animals were euthanized at either 10 or 30 days post-operative. Immature and mature collagen fibers were histochemically evaluated and their percentages were calculated. Runtrelated transcription factor 2 (Runx2), osteocalcin (OCN), osteopontin (OPN) and alkaline phosphatase (ALP) immunohistochemical staining were performed. Runx2-positive cells were quantified. A semi-quantitative method was used to evaluate OCN, OPN, and ALP immunolabeling pattern. Data were statistically analyzed. Statistically significant differences were not observed in the percentages of immature and mature collagen fibers when each experimental group was compared to control. At 10 days, PRP and PRP/LLLT groups presented a significantly higher number of Runx2-positive cells than control; PRP/LLLT presented significantly higher OCN and OPN immunolabeling than control; and statistically significant differences were not observed in the ALP immunolabeling. At 30 days, statistically significant differences were not observed in the OCN, OPN and ALP immunolabeling among the experimental groups... / Mestre

Orientador: Mauro Pedrine Santamaria / Banca: Camila Borges Fernandes / Banca: Maria Aparecida Neves Jardini / Resumo: A retração gengival é um problema altamente prevalente, podendo atingir até 100% dos indivíduos com mais de 50 anos de idade. Para lidar com as recessões, diversas técnicas cirúrgicas foram desenvolvidas. A que apresenta melhores resultados é a técnica de retalho posicionado coronariamente (RPC), feita de forma isolada ou associada ao enxerto de tecido conjuntivo (ETC). No entanto, existem na literatura diversos estudos que demonstram que os pacientes fumantes têm um pior prognóstico no tratamento de recessões gengivais quando comparados aos pacientes não fumantes. Assim, há a necessidade de testar novas abordagens que aumentem a previsibilidade do tratamento das recessões gengivais para esse grupo de pacientes. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar influência da terapia com laser de baixa intensidade associado à técnica de enxerto de tecido conjuntivo para recobrimento radicular em pacientes fumantes. Para tal, foi realizado um ensaio clínico duplo cego, controlado, randomizado seguindo as normativas do CONSORT-STATEMENT 2010. Foram selecionados 28 pacientes fumantes apresentando retração gengival que foram divididos nos grupos teste: enxerto de tecido conjuntivo associado à aplicação de laser de baixa intensidade e o grupo controle: enxerto de tecido conjuntivo associado à aplicação SHAM de laser em indivíduos fumantes. Foram avaliadas a taxa de recobrimento, estética e conforto dos pacientes aos, 3 e 6 meses após o procedimento. Encontramos médias de recobrimento parcial de 69% e 70% e de recobrimento total de 22% e 21%, respectivamente para os grupos teste e controle. Não havendo diferenças estatisticamente significantes entre os grupos em nenhum dos parâmetros avaliados. Baseado nos resultados desse estudo pode-se concluir que a aplicação de LBI não aumentou a porcentagem de recobrimento radicular completo e melhora da estética e dor pós-operatoria em pacientes fumantes / Abstract: Gingival recession is a highly prevalent problem and can reach up to 100 % of individuals over 50 years of age. To cope with recessions, various surgical techniques have been developed. As with the best results is the technique of coronally advanced flap (CAF), taken in isolation or associated with connective tissue graft (CTG). However, in the literature there are several studies that show that smokers have a worse prognosis in the treatment of gingival recession compared to non- smokers. Thus there is the need to test new approaches that increase the predictability of the treatment of gingival recession for this group of patients. Therefore, the aim of this study is to evaluate the influence of therapy with lowintensity laser technique associated with connective tissue graft for root coverage in smokers. To do so, double- blind clinical trial, controlled following the regulations of the CONSORT STATEMENT - 2010 will be conducted. We selected 28 patients with gingival recession smokers who were divided into test groups: connective tissue graft associated with the application of low intensity laser and the control group: connective tissue graft associated with laser SHAM application in smokers. The rate of coverage, aesthetics and comfort of patients at 45 days, 2, 3 and 6 months will be evaluated after the procedure We find means of partial coverage of 69% and 70% and total coverage of 22% and 21% respectively for the test and control groups. No statistically significant differences between groups in all evaluated parameters. Based on the results of this study it can be concluded that the application of LILT did not increase the percentage of complete root coverage and improved aesthetics and post-operative pain in smokers / Mestre

Resumo: Este estudo avaliou, histomorfometricamente, o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em ratos e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP), Laser de Baixa Intensidade (LBI) ou a associação de ambos. Defeitos de fenestração periodontal foram realizados na mandíbula de 80 ratos, divididos em 4 grupos: Grupo C (Controle) - o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo; Grupo PRP - o defeito foi preenchido com PRP; Grupo LBI - o defeito recebeu a aplicação de LBI, foi preenchido com coágulo sangüíneo e irradiado novamente; Grupo PRP/LBI - o defeito recebeu a aplicação de LBI, foi preenchido com PRP e irradiado novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 e 30 dias pós-operatórios. A porcentagem de preenchimento ósseo (NO), densidade do novo osso (DNO), formação de novo cemento (NC) e a extensão remanescente do defeito (ERD) foram histometricamente avaliadas. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, Tukey, p < 0,05). Aos 10 dias, o Grupo PRP apresentou ERD significativamente menor que o Grupo C. Aos 30 dias, o Grupo PRP apresentou NO e DNO significativamente maiores que o Grupo C. Todos os espécimes do Grupo C, aos 10 e 30 dias, apresentaram ausência total de formação de cemento. Já os espécimes dos grupos LBI, PRP e PRP/LBI apresentaram, aos 30 dias, significativa neoformação de cemento. LBI, PRP e PRP/LBI promoveram formação de cemento em defeitos de fenestração periodontal aos 30 dias. O PRP acelerou a regeneração óssea aos 10 dias e resultou em densidade e volume ósseos significativamente maiores que o LBI e o controle aos 30 dias. A associação PRP/LBI não foi vantajosa quando comparada ao uso isolado dessas terapias / Abstract: This study histomorphometrically analyzed the influence of platelet-rich plasma (PRP), low-level laser therapy (LLLT) or their combination on the healing of surgically created periodontal fenestration defects in rats. Periodontal fenestration defects were created in the mandible of 80 rats divided into 4 groups: Group C (control) - the defect was filled by blood clot only; Group PRP - the defect was filled with PRP; Group LLLT - the defect received laser irradiation, was filled with blood clot and then irradiated again; Group PRP/LLLT - the defect received laser irradiation, was filled with PRP and then irradiated again. Animals were euthanized at either 10 or 30 days postoperatively. The percentage of bone fill (NB) and density of newly formed bone (DNB), new cementum formation (NC) and the extension of the remaining defect (ERD) were histometrically evaluated. Data were statistically analyzed (analysis of variance; Tukey p < 0.05). At 10 days, Group PRP presented ERD significantly lower than Group C. At 30 days, Group PRP presented NB and DNB significantly greater than Group C. Cementum formation was not observed in any specimen of Group C at either 10 or 30 days. The specimens of groups LLLT, PRP and PRP/LLLT showed significant formation of new cementum at 30 days. LLLT, PRP and PRP/LLLT promoted new cementum formation in periodontal fenestration defects at 30 days. PRP enhanced bone regeneration at 10 days and resulted in bone volume and density significantly greater than LLLT and control at 30 days. The combination PRP/LLLT did not show additional effects when compared to the use of each therapy separately / Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Michel Reis Messora / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Mestre

Orientador: Maeli Dal Pai / Coorientador: Francis Lopes Pacagnelli / Banca: Adriana Pertile / Banca: Thiago Luiz de Russo / Banca: Selma Maria Michelin Matheus / Banca: Ines Cristina Giometti / Resumo: Pesquisas recentes na área de fisioterapia buscam elucidar as alterações envolvidas na regeneração do músculo esquelético após a aplicação de recursos terapêuticos. Neste contexto, a aplicação da Laserterapia de Baixa Intensidade tem se mostrado eficaz para melhorar o processo de regeneração muscular, entretanto, o tipo de laser, os parâmetros de radiação, período avaliado e os mecanismos moleculares envolvidos no processo de regeneração demonstram resultados discrepantes. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da Laserterapia de Baixa Intensidade, tipo (AsGa), comprimento de onda de 904 nm, 7 dias após a lesão e verificar se o tipo de laser e a dose escolhida tem influência no processo de regeneração muscular. Foram utilizados nesse estudo trinta ratos Wistar, machos, adultos (três meses de idade), peso corporal médio de 210-340g. Os animais foram randomizados em três grupos: Grupo Controle (C, n= 10), Grupo lesado não tratado (L, n=10) e o Grupo lesado e tratado (LT, n= 10). Após anestesia dos animias, a lesão muscular foi induzida por congelamento (criolesão) na região central do ventre do músculo tibial anterior (TA) de ambos os membros posteriores, por meio de uma haste de ferro previamente imersa em nitrogênio líquido. Como recurso terapêutico foi utilizado o laser de AsGa, comprimento de onda de 904 nanômetros. As aplicações do laser foram iniciadas 24 horas após a lesão, diariamente, com densidade de energia de 69 J/cm², (48 segundos), durante cinco dias, em dois pontos na área da lesão. Aos 7 dias, os animais foram pesados e mortos; o músculo TA de ambos membros posteriores foi retirado e processado para as análises morfológica e molecular. O músculo TA esquerdo foi congelado em nitrogênio líquido e cortes histológicos obtidos em criostato foram submetidos às coloraçõe s Hematoxilina e Eosina (para análise morfológica) e Picrosirius (para análise do colágeno). O músculo TA... / Abstract: Recent research in the field of physiotherapy has aimed to elucidate the main changes involved in skeletal muscle regeneration after application of therapeutic resources. In this context, the application of Low Level Laser Therapy has proven to be effective at improving the muscle regeneration process. However, the type of laser, irradiation parameters, evaluation period and molecular mechanisms involved in the regeneration process present conflicting results. The aim of this study was to evaluate the effects of Low Level Laser Therapy, type GaAs at 904 nm, during the muscle regeneration process, for seven days after the lesion, and verify whether both the GaAs laser and chosen dose influence the muscle regeneration process. Thirty Wistar male adult rats (three-month old), mean body weight 210 - 340 g were used in this study. The animals were randomized into three groups: Control Group (C, n=10), Untreated Lesion Group (L, n=10) and Treated Lesion group (TL, n=10). After anesthetizing the animals, muscle lesion was induced by freezing (cryoinjury) in the middle belly portion of the tibialis anterior muscle (TA) of both hind limbs, using an iron rod previously immersed in liquid nitrogen. A GaAs laser, with a wavelength of 904 nm was used as a therapeutic resource. Daily laser applications were initiated 24 hours after lesion, with an energy density of 69 J/cm2, (48 seconds), for five consecutive days, at two points in the lesion area. On the seventh day, the animals were euthanized and weighed; the TA muscles from both hindlimbs were removed and processed for morphological and molecular analysis. The left TA muscle was frozen in liquid nitrogen and histological sections obtained in a cryostat were submitted to Hematoxylin and Eosin (for morphological analysis) and Picrosirius (for collagen analysis) staining. The right TA muscle was used for the analysis of gene expression of MyoD, myogenin, TNF-α and TGF-β by using the Polymerase... / Doutor