If Architecture can express the joy of birth and all the infinite aspects of human life, then Architecture can celebrate death as a final rite of passage. Can Architecture celebrate man's transition into the afterlife? How does this celebration translate literally into something tangible? How does this celebration translate figuratively into something tactile? / Master of Architecture

Yes / The synthesis and characterization of three aromatic oligoamides, constructed from the same pyridyl carboxamide core but incorporating distinct end groups of acetyl (Ac) 1, tert-butyloxycarbonyl (Boc) 2 and amine 3 is reported. Single crystal X-ray diffraction analysis of 1-3 and a dimethylsulfoxide (DMSO) solvate of 2 (2-DMSO), has identified the presence of a range of intra- and intermolecular interactions including N-H⋯N, N-H⋯O=C and N-H⋯O=S(CH3)2 hydrogen-bonding interactions, C-H⋯π interactions and off-set, face-to-face stacking π-π interactions that support the variety of slipped stack, herringbone and cofacial crystal packing arrangements observed in 1-3. Additionally, the cytotoxicity of this series of aromatic oligoamides was assessed against two human ovarian (A2780 and A2780cisR), two human breast (MCF-7 and MDA-MB-231) cancerous cell lines and one non-malignant human epithelial cell line (PNT-2), to investigate the influence of the terminal functionality of these aromatic oligoamides on their biological activity. The chemosensitivity results highlight that modification of the terminal group from Ac to Boc in 1 and 2 leads to a 3-fold increase in antiproliferative activity against the cisplatin-sensitive ovarian carcinoma cell line, A2780. The presence of the amine termini in 3 gave the only member of the series to display activity against the cisplatin-resistance ovarian carcinoma cell line, A2780cisR. Compound 2 is the lead candidate of this series, displaying high selectivity towards A2780 cancer cells when compared to non-malignant PNT-2 cells, with a selectivity index value >4.2. Importantly, this compound is more selective towards A2780 (cf. PNT-2) than the clinical platinum drugs oxaliplatin by > 2.6-fold and carboplatin by > 1.6-fold. / University of Bradford Development Fund; University of Birmingham - Birmingham Fellowship; UKRI Future Leaders Fellowship (MR/T041315/1); UKRI Future Leaders Fellowship (MR/S035486/2)

The impression existed that nurses were not always compassionate and caring when they had to nurse terminally ill patients and the question arose whether they were adequately trained for this task. This study focused on the most frequent diseases that cause the death of patients in a province of Angola, and set out to determine what preparation nurses in a specific hospital received to equip them to care for terminally ill patients. A quantitative approach was adopted, using an exploratory and descriptive design, and a self-developed questionnaire was applied as data-collection instrument for a sample of 100 medium- and basic level nurses in a specific hospital in a province of Angola. From the results of the study it was evident that the nurse respondents were well informed as to what it entailed to be terminally ill, which factors affected the patient's comfort, safety and self image needs but only half of the respondents indicated that they received training pertaining to palliative care. Recommendations were made in view of better preparing nurses to care for the terminally ill patient. / Health Studies / M.A. (Health Studies)

A very economical way of reducing the operational energy consumed by large commercial buildings such as an airport terminal is the automatic control of its active energy systems. Such control can adjust the indoor environment systems setpoints to satisfy comfort during occupancy or when unoccupied, initiate energy conservation setpoints and if necessary, shut down part of the building systems. Adjusting energy control setpoints manually in large commercial buildings can be a nightmare for facility managers. Incidentally for such buildings, occupancy based control strategies are not achieved through the use of conventional controllers alone. This research, therefore, investigated the potential of using a high-level control system in airport terminal building. The study presents the evolution of a novel fuzzy rule-based supervisory controller, which intelligently establishes comfort setpoints based on flow of passenger through the airport as well as variable external environmental conditions. The inputs to the supervisory controller include: the time schedule of the arriving and departing passenger planes; the expected number of passengers; zone daylight illuminance levels; and external temperature. The outputs from the supervisory controller are the low-level controllers internal setpoint profile for thermal comfort, visual comfort and indoor air quality. Specifically, this thesis makes contribution to knowledge in the following ways: It utilised artificial intelligence to develop a novel fuzzy rule-based, energy-saving supervisory controller that is able to establish acceptable indoor environmental quality for airport terminals based on occupancy schedules and ambient conditions. It presents a unique methodology of designing a supervisory controller using expert knowledge of an airport s indoor environment systems through MATLAB/Simulink platform with the controller s performance evaluated in both MATLAB and EnergyPlus simulation engine. Using energy conservation strategies (setbacks and switch-offs), the pro-posed supervisory control system was shown to be capable of reducing the energy consumed in the Manchester Airport terminal building by up to 40-50% in winter and by 21-27% in summer. It demonstrates that if a 45 minutes passenger processing time is aimed for instead of the 60 minutes standard time suggested by ICAO, energy consumption is significantly reduced (with less carbon emission) in winter particularly. The potential of the fuzzy rule-based supervisory controller to optimise comfort with minimal energy based on variation in occupancy and external conditions was demonstrated through this research. The systematic approach adopted, including the use of artificial intelligence to design supervisory controllers, can be extended to other large buildings which have variable but predictable occupancy patterns.

O treinamento físico (TF) promove adaptações no sistema hematopoiético e o sítio NH2-terminal da enzima conversora de angiotensina I (ECA) hidrolisa um tetrapeptídeo hemorregulador negativo, o Acetil-Seril-Aspartil-Lisil-Prolina (Ac-SDKP). O objetivo do presente estudo foi investigar se o sítio NH2-terminal da ECA participaria nas adaptações hematopoiéticas induzidas pelo TF. Realizamos duas séries de experimentos. A primeira para determinarmos qual protocolo de TF seria o mais adequado para estudar as adaptações eritropoiéticas e a segunda para estudar o papel do sítio NH2-terminal da ECA nessas adaptações. Série de experimentos 1: ratas Wistar foram divididas em 3 grupos: controle (C), que realizaram TF (60 min/d, 5dias/sem) de 10 semanas uma vez ao dia (T1) e que realizaram o mesmo TF por 8 semanas, seguido de uma semana 2 vezes ao dia e uma semana 3 vezes ao dia (T2). Série de experimentos 2: ratas Wistar foram divididas em 4 grupos: controle (C), controle tratadas com captopril (10 mg.kg-1.dia-1) (C-Cap), treinadas sob o protocolo T2 (T2) e treinadas sob o protocolo T2 tratadas com captopril (T2-Cap). Foram medidos: 1) a pressão arterial (PA) e a freqüência cardíaca; 2) a hipertrofia cardíaca e atividade da citrato sintase; 3) o consumo máximo de oxigênio, o tempo de exercício e a distância percorrida em teste máximo; 4) a atividade catalítica dos terminais da ECA; 5) a concentração plasmática e na fração extracelular da medula óssea de Ac-SDKP; 6) o número e a proliferação de células tronco hematopoiéticas (CTH) no sangue e medula; 8) a reticulocitose e meia-vida das hemácias. As diferenças observadas apresentaram p<0,05. Série de experimentos 1: o protocolo T2 induziu maiores adaptações fisiológicas, morfológicas e funcionais em comparação ao T1. O protocolo T2 foi eficaz em promover adaptações no sistema eritropoiético como aumento no número e na capacidade proliferativa de CTH, no percentual de reticulócitos e redução na meia-vida das hemácias. O protocolo T2 aumentou a atividade catalítica do sítio NH2-terminal da ECA e reduziu a concentração plasmática e na fração extracelular da medula óssea de Ac-SDKP, o que não foi observado em T1. Série de experimentos 2: o grupo T2 apresentou aumento na atividade NH2-terminal da ECA, que foi inibido no grupo T2-Cap. A inibição do sítio NH2-terminal da ECA não influenciou a PA nem afetou as respostas ao treinamento. O grupo T2 apresentou redução na concentração plasmática e na fração extracelular da medula óssea de Ac-SDKP, enquanto no grupo T2-Cap não houve redução do Ac-SDKP no plasma e houve atenuação da redução na fração extracelular da medula óssea. Houve aumento no número e na proliferação de CTH na medula óssea e no sangue no grupo T2 e este aumento foi parcialmente inibido no grupo T2-Cap. Houve aumento na reticulocitose no grupo T2 e inibição parcial deste aumento no grupo T2-Cap. A meia-vida das hemácias foi reduzida em 50% no grupo T2, enquanto no grupo T2-Cap houve atenuação da redução. Concluímos que o protocolo de treino T2 estimula a hematopoiese pelo aumento na atividade do sítio NH2-terminal da ECA, aumento este que inativa o tetrapeptídeo Ac-SDKP. / Physical training (PT) promotes changes in the hematopoietic system and the NH2-terminal active site of angiotensin-converting enzyme I (ACE) hydrolyzes a tetrapeptide, negative hemoregulador, the acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline (Ac-SDKP). The purpose of this study was to investigate whether the NH2-terminal active site of ACE plays a role in the hematopoietic changes induced by PT. We conducted two series of experiments. The first in prder to determine which PT protocol would be more appropriate to study the erythropoietic adaptations and the second to study the role of the NH2-terminal site of ACE in these adaptations. Experiment series 1: female Wistar rats were divided into 3 groups: control (C), submitted to PT (60 min/d, 5d/week) for 10 weeks once a day (T1) and submitted to the same TF for 8 weeks, followed by a week 2 times a day and a week 3 times a day (T2). Experiment series 2: female Wistar rats were divided into four groups: control (C), control treated with captopril (10 mg.kg-1.day-1) (C-Cap), trained under the protocol T2 (T2) and trained under protocol T2 treated with captopril (Cap-T2). We measured: 1) blood pressure (BP) and heart rate, 2) cardiac hypertrophy and citrate synthase activity, 3) the maximum oxygen consumption, exercise time and distance in maximal test, 4) catalytic activity ACE terminals, 5) plasma and bone marrow extracellular fraction concentration of Ac-SDKP, 6) the number and proliferation of hematopoietic stem cells (HSC) in the blood and marrow, 8) reticulocytosis and erythrocyte life-spam. The observed differences presented p <0.05. Experiment series 1: T2 protocol induced greater physiological, morphological and functional compared to T1. T2 protocol was effective in causing changes in the erythropoietic system such as increase the number and proliferative capacity of HSC, the percentage of reticulocytes and reduced erythrocyte life-spam. The protocol T2 increased the catalytic activity of the NH2-terminal site of ACE and decreased plasma and bone marrow extracellular fraction concentration of Ac-SDKP, which was not observed in T1. Experiment series 2: the T2 group showed an increase in the activity of the NH2-terminal ACE, which was inhibited in group T2-Cap. Inhibition of the NH2-terminal site of ACE did not influence or affect the BP responses to training. The T2 group showed a reduction in plasma and bone marrow extracellular fraction of Ac-SDKP, whereas in the T2-Cap there was no reduction of Ac-SDKP in plasma and there was attenuation of the reduction in the extracellular fraction of bone marrow. There was an increase in the number and proliferation of HSC in bone marrow and blood in the T2 group and this increase was partially inhibited in group T2-Cap. There was an increase in reticulocytosis in group T2 and partial inhibition of the increase in T2-Cap group. The erythrocyte life-spam was reduced by 50% in T2, while in the T2-Cap group there was attenuation of the reduction. We conclude that the training protocol T2 stimulates hematopoiesis by increasing the activity of the NH2-terminal site of ACE, an increase that inactivates the tetrapeptide Ac-SDKP.

A enzima L-asparaginase (ASNase) de Escherichia coli é amplamente utilizada para tratar a leucemia linfoblástica aguda (LLA). No entanto, a enzima nativa pode ativar o sistema imune do hospedeiro causando reações alérgicas. A forma peguilada da enzima (PEG-ASNase) não só reduz o efeito imunológico, mas também possui a vantagem de aumentar sua meia-vida plasmática devido à menor degradação por proteases. Não obstante, a conjugação de PEG à ASNase é de forma aleatória e resulta em elevado grau de polidispersão. Nesse trabalho, um protocolo de peguilação N-terminal sítio-específica para a enzima ASNase foi desenvolvido, empregando-se metoxi-polietilenoglicol carboximetil N-hidroxisuccinimidil ester (mPEG-NHS, MW = 10 kDa). Os parâmetros de reação investigados foram a força iônica do tampão, o pH e o tempo de reação para otimizar o rendimento e minimizar a polidispersão. Os resultados confirmaram a ocorrência da reação de peguilação e baixa polidispersão. A força iônica do tampão favoreceu a conjugação N-terminal em 100 mM de tampão fosfato salino (PBS). Também observamos que o aumento do pH e tempo de reação estão diretamente relacionados com o aumento de formas polipeguiladas. O maior rendimento de monoPEG-ASNase, 42%, correspondeu à condição de reação de pH 7,5, tempo de reação de 30 min e razão PEG:enzima de 25:1. A monoPEG-ASNase foi purificada em coluna aniônica forte com gradiente linear de NaCl até 170 mM e a fração monopeguilada foi eluída em NaCl 78 mM com grau de pureza de 70% (rendimento de 55%). A cromatografia de exclusão por tamanho aumentou a pureza da monoPEG-ASNase para 99% (rendimento final de 45%). A monoPEG-ASNase, 190 ± 10 kDa, manteve sua atividade específica por 21 dias à 4ºC, enquanto que a enzima não peguilada (controle), 146 ± 6 kDa, teve uma queda de aproximadamente 52% na atividade específica em 7 dias à 4ºC. Um estudo de cinética enzimática foi realizado e obtivemos valores de kM semelhantes para as formas da enzima nativa e monopeguilada, 20 &#181;M e 35 &#181;M respectivamente. A monoPEG-ASNase apresentou-se mais resistente às proteases plasmáticas asparagina endopeptidase e catepsina B, por 84 h à 37 °C e apresentou ser citotóxica para células leucêmicas (MOLT-4 e Reh). Portanto, a peguilação N-terminal sítio-específica resultou em uma nova variante da ASNase que reteve grande parte de seu poder catalítico e pode ser considerada promissora para o emprego no tratamento da LLA. / The enzyme L-asparaginase (ASNase) from Escherichia coli is widely used to treat acute lymphoblastic leukemia (LLA). However, it can activate the host causing allergic reactions. Hence, the pegylated form of the enzyme (PEG-ASNase) not only reduces the immune effect but also increases plasma half-life. Nonetheless, the available PEG-ASNase is randomly pegylated and, consequently, with high degree of polydispersity. In this work we developed a site-specific N-terminus pegylation protocol for ASNase using methoxy-polyethylene glycol carboxymethyl N-hydroxysuccinimidyl ester (mPEG-NHS, MW = 10 kDa). Reaction parameters investigated were ionic strength, pH and reaction time to optimize yield and minimize polydispersity. Results confirmed pegylation and low polydispersity. Buffer ionic strength favored N-terminal conjugation at 100 mM phosphate buffer saline (PBS). Additionally, pH and reaction time were found to increase polyPEGylated species. The highest yield of monoPEG-ASNase, 42%, corresponded to reaction conditions of pH 7.5, reaction time of 30 min and PEG:ASNase ratio of 25:1. The monoPEG-ASNase was purified in a strong anionic column with NaCl linear gradient up to 170 mM and monoPEG-ASNase was eluted with 78 mM NaCl, 70% pure (55% yield). Size exclusion chromatography was further performed and increased monoPEG-ASNase purity to 99% (45% final yield). The monoPEG-ASNase, 190 ± 10 kDa was stable for 21 days at 4ºC while nonpegylated ASNase (control), 146 ± 6 kDa, lost 52% of its activity within 7 days at 4ºC. Enzyme kinetics were studied and similar kM values were obtained for both native and monoPEG-ASNase, 20 &#181;M and 35 &#181;M respectively. The monoPEG-ASNase demonstrated to be resistant to the plasma proteases asparaginyl endopeptidase and cathepsin B, 84 h at 37 °C and also was cytotoxic to leukemic cells (MOLT-4 and Reh). Therefore, site-specific N-terminus pegylation of ASNase resulted in a novel enzyme variant with preserved catalytic activity and, therefore, promising for the treatment of LLA.

Nas últimas décadas, o rápido avanço do setor aeroportuário nacional decorrente do crescimento econômico e populacionais expos os gargalos de infraestrutura e da malha aeroviária brasileira ficando os aeroportos limitados a polos habitacionais mais estruturados. O aumento do fluxo de passageiros transportados no setor aéreo neste período tem compelido o planejamento e construção no setor público para a ampliação dos terminais aeroportuários de passageiros denominados no meio aeronáutico como TPS. A observação do impacto e interação entre as decisões do projeto arquitetônico, quantidade e dinâmica das informações, normas e legislação nacional e internacional, que estão constantemente sendo atualizadas e desbalanceadas, geram fatores determinantes no processo projetual e construtivo. A motivação na elaboração desta tese é preencher uma lacuna quanto a escassez de estudos no Brasil que enfoquem especificamente o processo de projeto arquitetônico nos TPS. Para realizar a pesquisa foi utilizado o método Design Science Research (DSR), visando auxiliar projetistas de arquitetura e coordenadores de projeto na gestão de projetos de terminais aeroportuários regionais de passageiros. O desenvolvimento da tese foi baseado na análise de terminais aeroportuários de passageiros domésticos e regionais brasileiros fruto da experiência do autor na área, na revisão bibliografia nacional e internacional deste tipo de edificação. Como resultado foi criado um termo de referência estruturado, para o planejamento do processo de projeto arquitetônico contemplando elementos para gestão de requisitos de programa, do fluxo de projeto, da coordenação e da compatibilização do projeto arquitetônico com os demais projetos específicos, legislações, normas, agentes, instituições, concessões e órgãos públicos fornecendo diretrizes básicas para o processo de projetos de TPS. / In the last decades, the rapid advancement of the national airport sector, due to the economic and population growth, exposed the infrastructure and the Brazilian air transportation route, making the airports limited to the housing poles with better structure. The increase in the transported passenger flow on the airline sector, in this moment, has compelled the planning and construction of the public sector for the expansion of the airport passenger terminals, named in the aeronautical environment as TPS. The observation of the impact and the interaction between the decisions of the architectural design, amount and dynamic of the informations, national and international rules and legislation, which are continually being updated and unbalanced, create determining factors in the design and constructive process. The motivation on the elaboration of this thesis is to fill the gap, regarding the scarcity of studies in Brazil which aim specifically the process of architectural design on the TPS. To make the research the Design Science Research (DSR) method was used, aiming to help architecture designers and design coordinators on the project management of regional airport passenger terminals. The thesis development has been based on the analysis of domestic and Brazilian regional airport passenger terminals, which is a result of the author expertise on the area, on the national and international literature review of this sort of building. A structured terms of reference was created as a result, for the planning of the process of architectural design contemplating elements for the management of program requirements, design flow, coordination and compatibility of the architectural design with the other specific designs, legislation, rules, agents, institutions, concessions, and public agencies, providing basic guidelines for the process of TPS design.

O objetivo da pesquisa é investigar a relação entre a estrutura da cidade e a implantação de terminais de ônibus em São Paulo, tendo em vista o papel definidor do ambiente urbano na definição de sua tipologia. Através de análise histórica, busco compreender o surgimento deste com as iniciativas de estruturação de um sistema de ônibus integrado. A hipótese é que o terminal, apesar de poder se tornar um poderoso agente de estruturação e transformação urbana, e estimular a criação de uma rede de centralidades no território urbanizado, segue a lógica espacial e antiurbana do urbanismo funcionalista, de maneira a desagregar socioespacialmente seu entorno. O trabalho se propõem a compreender a estruturação dos tipos arquitetônicos implantados para os terminais de ônibus urbanos a partir da década de 1970, através da análise morfotipológica dos terminais de ônibus urbanos Bandeira, Princesa Isabel e Lapa. Neste sentido, o trabalho visa compreender: (1) o papel da infraestrutura de mobilidade como agente de indução do espaço urbano na formação de centralidade e urbanidade; e, (2) a estruturação da tipologia arquitetônica do terminal de ônibus. / The objective of the research is to investigate the relationship between the city structure and the bus terminal in São Paulo, considering the defining role of the urban environment in the definition of its typology. Through historical analysis, I try to understand the emergence of this with the initiatives of structuring an integrated bus system. The hypothesis is that the terminal, despite being able to become a powerful agent for urban structuring and transformation, and to stimulate the creation of a network of centralities in the urbanized territory, follows the spatial and anti-urban logic of the urban functionalism in order to disaggregate socio-spatial environment. The work proposes to understand the structuring of the architectural types implanted for the urban bus terminals from the 1970\'s, through the morpho-typological analysis of the urban bus terminals Bandeira, Princesa Isabel and Lapa. In this sense, the work aims to understand: (1) the role of the mobility infrastructure as an agent of induction of the urban space in the formation of centrality and urbanity; and, (2) the structuring of the architectural typology of the bus terminal.

A enzima L-asparaginase (ASNase) de Escherichia coli é amplamente utilizada para tratar a leucemia linfoblástica aguda (LLA). No entanto, a enzima nativa pode ativar o sistema imune do hospedeiro causando reações alérgicas. A forma peguilada da enzima (PEG-ASNase) não só reduz o efeito imunológico, mas também possui a vantagem de aumentar sua meia-vida plasmática devido à menor degradação por proteases. Não obstante, a conjugação de PEG à ASNase é de forma aleatória e resulta em elevado grau de polidispersão. Nesse trabalho, um protocolo de peguilação N-terminal sítio-específica para a enzima ASNase foi desenvolvido, empregando-se metoxi-polietilenoglicol carboximetil N-hidroxisuccinimidil ester (mPEG-NHS, MW = 10 kDa). Os parâmetros de reação investigados foram a força iônica do tampão, o pH e o tempo de reação para otimizar o rendimento e minimizar a polidispersão. Os resultados confirmaram a ocorrência da reação de peguilação e baixa polidispersão. A força iônica do tampão favoreceu a conjugação N-terminal em 100 mM de tampão fosfato salino (PBS). Também observamos que o aumento do pH e tempo de reação estão diretamente relacionados com o aumento de formas polipeguiladas. O maior rendimento de monoPEG-ASNase, 42%, correspondeu à condição de reação de pH 7,5, tempo de reação de 30 min e razão PEG:enzima de 25:1. A monoPEG-ASNase foi purificada em coluna aniônica forte com gradiente linear de NaCl até 170 mM e a fração monopeguilada foi eluída em NaCl 78 mM com grau de pureza de 70% (rendimento de 55%). A cromatografia de exclusão por tamanho aumentou a pureza da monoPEG-ASNase para 99% (rendimento final de 45%). A monoPEG-ASNase, 190 ± 10 kDa, manteve sua atividade específica por 21 dias à 4ºC, enquanto que a enzima não peguilada (controle), 146 ± 6 kDa, teve uma queda de aproximadamente 52% na atividade específica em 7 dias à 4ºC. Um estudo de cinética enzimática foi realizado e obtivemos valores de kM semelhantes para as formas da enzima nativa e monopeguilada, 20 &#181;M e 35 &#181;M respectivamente. A monoPEG-ASNase apresentou-se mais resistente às proteases plasmáticas asparagina endopeptidase e catepsina B, por 84 h à 37 °C e apresentou ser citotóxica para células leucêmicas (MOLT-4 e Reh). Portanto, a peguilação N-terminal sítio-específica resultou em uma nova variante da ASNase que reteve grande parte de seu poder catalítico e pode ser considerada promissora para o emprego no tratamento da LLA. / The enzyme L-asparaginase (ASNase) from Escherichia coli is widely used to treat acute lymphoblastic leukemia (LLA). However, it can activate the host causing allergic reactions. Hence, the pegylated form of the enzyme (PEG-ASNase) not only reduces the immune effect but also increases plasma half-life. Nonetheless, the available PEG-ASNase is randomly pegylated and, consequently, with high degree of polydispersity. In this work we developed a site-specific N-terminus pegylation protocol for ASNase using methoxy-polyethylene glycol carboxymethyl N-hydroxysuccinimidyl ester (mPEG-NHS, MW = 10 kDa). Reaction parameters investigated were ionic strength, pH and reaction time to optimize yield and minimize polydispersity. Results confirmed pegylation and low polydispersity. Buffer ionic strength favored N-terminal conjugation at 100 mM phosphate buffer saline (PBS). Additionally, pH and reaction time were found to increase polyPEGylated species. The highest yield of monoPEG-ASNase, 42%, corresponded to reaction conditions of pH 7.5, reaction time of 30 min and PEG:ASNase ratio of 25:1. The monoPEG-ASNase was purified in a strong anionic column with NaCl linear gradient up to 170 mM and monoPEG-ASNase was eluted with 78 mM NaCl, 70% pure (55% yield). Size exclusion chromatography was further performed and increased monoPEG-ASNase purity to 99% (45% final yield). The monoPEG-ASNase, 190 ± 10 kDa was stable for 21 days at 4ºC while nonpegylated ASNase (control), 146 ± 6 kDa, lost 52% of its activity within 7 days at 4ºC. Enzyme kinetics were studied and similar kM values were obtained for both native and monoPEG-ASNase, 20 &#181;M and 35 &#181;M respectively. The monoPEG-ASNase demonstrated to be resistant to the plasma proteases asparaginyl endopeptidase and cathepsin B, 84 h at 37 °C and also was cytotoxic to leukemic cells (MOLT-4 and Reh). Therefore, site-specific N-terminus pegylation of ASNase resulted in a novel enzyme variant with preserved catalytic activity and, therefore, promising for the treatment of LLA.

O treinamento físico (TF) promove adaptações no sistema hematopoiético e o sítio NH2-terminal da enzima conversora de angiotensina I (ECA) hidrolisa um tetrapeptídeo hemorregulador negativo, o Acetil-Seril-Aspartil-Lisil-Prolina (Ac-SDKP). O objetivo do presente estudo foi investigar se o sítio NH2-terminal da ECA participaria nas adaptações hematopoiéticas induzidas pelo TF. Realizamos duas séries de experimentos. A primeira para determinarmos qual protocolo de TF seria o mais adequado para estudar as adaptações eritropoiéticas e a segunda para estudar o papel do sítio NH2-terminal da ECA nessas adaptações. Série de experimentos 1: ratas Wistar foram divididas em 3 grupos: controle (C), que realizaram TF (60 min/d, 5dias/sem) de 10 semanas uma vez ao dia (T1) e que realizaram o mesmo TF por 8 semanas, seguido de uma semana 2 vezes ao dia e uma semana 3 vezes ao dia (T2). Série de experimentos 2: ratas Wistar foram divididas em 4 grupos: controle (C), controle tratadas com captopril (10 mg.kg-1.dia-1) (C-Cap), treinadas sob o protocolo T2 (T2) e treinadas sob o protocolo T2 tratadas com captopril (T2-Cap). Foram medidos: 1) a pressão arterial (PA) e a freqüência cardíaca; 2) a hipertrofia cardíaca e atividade da citrato sintase; 3) o consumo máximo de oxigênio, o tempo de exercício e a distância percorrida em teste máximo; 4) a atividade catalítica dos terminais da ECA; 5) a concentração plasmática e na fração extracelular da medula óssea de Ac-SDKP; 6) o número e a proliferação de células tronco hematopoiéticas (CTH) no sangue e medula; 8) a reticulocitose e meia-vida das hemácias. As diferenças observadas apresentaram p<0,05. Série de experimentos 1: o protocolo T2 induziu maiores adaptações fisiológicas, morfológicas e funcionais em comparação ao T1. O protocolo T2 foi eficaz em promover adaptações no sistema eritropoiético como aumento no número e na capacidade proliferativa de CTH, no percentual de reticulócitos e redução na meia-vida das hemácias. O protocolo T2 aumentou a atividade catalítica do sítio NH2-terminal da ECA e reduziu a concentração plasmática e na fração extracelular da medula óssea de Ac-SDKP, o que não foi observado em T1. Série de experimentos 2: o grupo T2 apresentou aumento na atividade NH2-terminal da ECA, que foi inibido no grupo T2-Cap. A inibição do sítio NH2-terminal da ECA não influenciou a PA nem afetou as respostas ao treinamento. O grupo T2 apresentou redução na concentração plasmática e na fração extracelular da medula óssea de Ac-SDKP, enquanto no grupo T2-Cap não houve redução do Ac-SDKP no plasma e houve atenuação da redução na fração extracelular da medula óssea. Houve aumento no número e na proliferação de CTH na medula óssea e no sangue no grupo T2 e este aumento foi parcialmente inibido no grupo T2-Cap. Houve aumento na reticulocitose no grupo T2 e inibição parcial deste aumento no grupo T2-Cap. A meia-vida das hemácias foi reduzida em 50% no grupo T2, enquanto no grupo T2-Cap houve atenuação da redução. Concluímos que o protocolo de treino T2 estimula a hematopoiese pelo aumento na atividade do sítio NH2-terminal da ECA, aumento este que inativa o tetrapeptídeo Ac-SDKP. / Physical training (PT) promotes changes in the hematopoietic system and the NH2-terminal active site of angiotensin-converting enzyme I (ACE) hydrolyzes a tetrapeptide, negative hemoregulador, the acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline (Ac-SDKP). The purpose of this study was to investigate whether the NH2-terminal active site of ACE plays a role in the hematopoietic changes induced by PT. We conducted two series of experiments. The first in prder to determine which PT protocol would be more appropriate to study the erythropoietic adaptations and the second to study the role of the NH2-terminal site of ACE in these adaptations. Experiment series 1: female Wistar rats were divided into 3 groups: control (C), submitted to PT (60 min/d, 5d/week) for 10 weeks once a day (T1) and submitted to the same TF for 8 weeks, followed by a week 2 times a day and a week 3 times a day (T2). Experiment series 2: female Wistar rats were divided into four groups: control (C), control treated with captopril (10 mg.kg-1.day-1) (C-Cap), trained under the protocol T2 (T2) and trained under protocol T2 treated with captopril (Cap-T2). We measured: 1) blood pressure (BP) and heart rate, 2) cardiac hypertrophy and citrate synthase activity, 3) the maximum oxygen consumption, exercise time and distance in maximal test, 4) catalytic activity ACE terminals, 5) plasma and bone marrow extracellular fraction concentration of Ac-SDKP, 6) the number and proliferation of hematopoietic stem cells (HSC) in the blood and marrow, 8) reticulocytosis and erythrocyte life-spam. The observed differences presented p <0.05. Experiment series 1: T2 protocol induced greater physiological, morphological and functional compared to T1. T2 protocol was effective in causing changes in the erythropoietic system such as increase the number and proliferative capacity of HSC, the percentage of reticulocytes and reduced erythrocyte life-spam. The protocol T2 increased the catalytic activity of the NH2-terminal site of ACE and decreased plasma and bone marrow extracellular fraction concentration of Ac-SDKP, which was not observed in T1. Experiment series 2: the T2 group showed an increase in the activity of the NH2-terminal ACE, which was inhibited in group T2-Cap. Inhibition of the NH2-terminal site of ACE did not influence or affect the BP responses to training. The T2 group showed a reduction in plasma and bone marrow extracellular fraction of Ac-SDKP, whereas in the T2-Cap there was no reduction of Ac-SDKP in plasma and there was attenuation of the reduction in the extracellular fraction of bone marrow. There was an increase in the number and proliferation of HSC in bone marrow and blood in the T2 group and this increase was partially inhibited in group T2-Cap. There was an increase in reticulocytosis in group T2 and partial inhibition of the increase in T2-Cap group. The erythrocyte life-spam was reduced by 50% in T2, while in the T2-Cap group there was attenuation of the reduction. We conclude that the training protocol T2 stimulates hematopoiesis by increasing the activity of the NH2-terminal site of ACE, an increase that inactivates the tetrapeptide Ac-SDKP.