Orientador: Edson Luiz Lopes Baldin / Resumo: Bemisia tabaci (Gennadius) biótipo B (Hemiptera: Aleyrodidae) é um inseto polífago, que ocasiona grandes prejuízos em diversas culturas de importância econômica, incluindo o tomateiro (Solanum lycopersicum L.), onde pode provocar severos danos diretos e indiretos. O principal método de controle desta praga é a aplicação de inseticidas sintéticos, com impactos negativos para seres humanos e meio ambiente, além de favorecer a seleção de insetos resistentes. Em muitos estudos têm-se buscado técnicas alternativas e, ao mesmo tempo, mais seguras no controle da mosca-branca, com destaque para o uso de derivados botânicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a bioatividade de extratos de Annona mucosa (Jacq), A. sylvatica A.St.-Hil e A. muricata L. e compará-los com o inseticida botânico comercial Anosom® 1 EC (à base de acetogeninas, anonina 10.000 mg.L-1) e com o neonicotinoide tiametoxam (Actara® 250 WG) sobre ovos, ninfas e adultos de B. tabaci biótipo B em tomateiro, por meio de ensaios em laboratório, casa de vegetação e campo. Inicialmente, realizou-se um ensaio com ninfas (2º ínstar) e extratos das três espécies (500 mg.L-1) para identificar o solvente mais apropriado e a melhor estrutura da planta, a partir do qual foram selecionados o etanol e as sementes, respectivamente. Em seguida, foi avaliado o efeito dos extratos etanólicos de sementes de A. mucosa (ESAM), A. muricata e A. sylvatica (500 mg.L-1) sobre o comportamento de adultos do inseto. Os índices de infestação e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bemisia tabaci (Gennadius) biotype B (Hemiptera: Aleyrodidae) is a polyphagous insect pest that can cause direct and indirect damages to several crops of economic importance, including tomato (Solanum lycopersicum L.). Synthetic insecticides sprayings are the main method of control to silverleaf whitefly, with negative effects to human and environment, besides favoring the selection of insect resistant populations. Many studies have assessed alternative and safer tools to whitefly control, with emphasis on the use of botanical derivatives. The objective of this study was to evaluate the bioactivity of extracts of Annona mucosa (Jacq), A. sylvatica A.St.-Hil and A. muricata L. in comparison to Anosom® 1 EC commercial botanical insecticide (acetogenin based, annonin 10.000 mg.L-1) and the neonecotinoid thiamethoxam (Actara® 250 WG) on eggs, nymphs and adults of B. tabaci biotype B in tomato, under laboratory, greenhouse and field conditions. Initially, an experiment was carried out with nymphs (2nd instar) and extracts of the three species (500 mg.L-1) to identify the most appropriate solvent and the best plant structure, from which ethanol and seeds were selected, respectively. After, the effect of ethanolic extract from seeds of A. mucosa (ESAM), A. muricata and A. sylvatica (500 mg.L-1) on the behavior of insect adults was evaluated. The rates of infestation and deterrence to oviposition indicated an inhibitory effect with A. muricata extract. Subsequently, the possible systemic action of the extracts was evaluated, however no effects on the nymphal development and viability of the insects were verified. The ninficidal effect was evaluated at 7 and 10 days after the application of the extracts (500, 5.000 and 10.000 mg.L-1) and, due to the good potencial of ESAM, this treatment was selected for the sequence of tests, starting with the estimation of LC50 e LC90 (10.83 and 200.24 mg.L-1, respectivel ... / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-05-16T16:34:25Z No. of bitstreams: 1 2015_JosefaNeianeGoulartBatista.pdf: 1197579 bytes, checksum: 35d111a817d27403622bf10c4e105c6d (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-27T14:29:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_JosefaNeianeGoulartBatista.pdf: 1197579 bytes, checksum: 35d111a817d27403622bf10c4e105c6d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T14:29:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_JosefaNeianeGoulartBatista.pdf: 1197579 bytes, checksum: 35d111a817d27403622bf10c4e105c6d (MD5) / A Murcha Bacteriana (Ralstonia solanacearum) é uma das mais importantes doenças do tomateiro em regiões tropicais. Seu controle é difícil, a principal medida é evitar a entrada da bactéria no local de plantio, principalmente em cultivo protegido. O objetivo deste trabalho foi encontrar isolados de Pseudomonas fluorescentes provenientes da rizosfera de solanáceas do cerrado, para uso no controle biológico de R. solanacearum. Foram realizadas coletas de solo da rizosfera de diversas plantas da família Solanaceae, de onde foram obtidos 40 isolados de Pseudomonas spp. Esses isolados foram submetidos a teste in vitro pela metodologia de prospecção de antibiose pelo teste de dupla camada, onde verificou se que 33 isolados conseguiram inibir o crescimento de R. solanacearum. Os isolados que induziram os maiores diâmetros do halo de inibição, 12 (F 1.5, PEDRA, F 1.2, F 4.1, JOMG 1.1, JBR, T3, RJ 1.1, JOBA, PSD 9, JAL, JCP 8.1) e foram selecionados para os ensaios em casa de vegetação. Os ensaios em casa de vegetação foram divididos em dois, um com uma estirpe de R. solanacearum (UnB 1173), outro com a mistura de três estirpes do patógeno ( UnB, 1033, 1103 e 1173). Cinco isolados (RJ 1.1, F 4.1, JCP 1.1, PEDRA e JOBA) controlaram a doença no ensaio com uma estirpe do patógeno. Oito isolados (RJ 1.1, F 1.2, F 1.5, F 4.1, JCP 8.1, PSD 9, JOBA e JAL) controlaram a doença com a mistura de três estirpes do patógeno. Os isolados RJ 1.1, F 4.1, JAL, JOBA conseguiram controlar a doença nos dois ensaios, demonstrando assim potencial para uso no controle biológico da murcha bacteriana. / The bacterial wilt (Ralstonia solanacearum) is one of the most important tomato diseases in tropical regions. His control is difficult, the key measure is to prevent bacteria from entering the local planting, especially in protected cultivation. The objective of this study was to find fluorescent Pseudomonas isolated from the rhizosphere of the cerrado nightshade, for use in the biological control of R. solanacearum. Soil samples were collected from the rhizosphere of various plants of the Solanaceae family, from which they were obtained 40 isolates of Pseudomonas spp. These isolates were subjected to in vitro test methodology for prospecting antibiosis the double layer pattern, which found that 33 isolates were able to inhibit the growth of R. solanacearum. Isolates that induced the larger diameters of inhibition zone, 12 (F 1.5, STONE, F 1.2, F 4.1, JOMG 1.1, JBR, T3, RJ 1.1 JOBA, PSD 9, JAL, JCP 8.1) and were selected for the trials in the greenhouse. The tests in the greenhouse were divided into two, one with a strain of R. solanacearum (UNB 1173), another with a mixture of three strains of the pathogen (UNB, 1033, 1103 and 1173). Five isolates (RJ 1.1, F 4.1, JCP 1.1, PEDRA and JOBA) controlled the disease in the test with a strain of the pathogen. Eight isolates (RJ 1.1, F 1.2, F 1.5, F 4.1, JCP 8.1, PSD 9, JOBA and JAL) controlled the disease with the mixture of three strains of the pathogen. Isolated RJ 1.1, F 4.1, JAL, JOBA managed to control the disease in two trials, demonstrating potential for use in biological control of bacterial wilt.

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:29:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-10. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:33:15Z : No. of bitstreams: 1 000858275.pdf: 2667802 bytes, checksum: 013d2f3ce672b7dc45f5a07fb0084a29 (MD5) / A murcha bacteriana causada por Ralstonia solanacearum (Rs) é uma das principais doenças do tomateiro. Não existe no mercado brasileiro cultivares/híbridos com nível de resistência satisfatório ao patógeno. Os porta-enxertos com resistência são utilizados com finalidade de controlar a murcha bacteriana. O patógeno tem a capacidade de permanecer no solo por muitos anos e com isso, inviabilizar o cultivo. Também influenciam nas trocas gasosas, na atividade das enzimas envolvidas em mecanismos de defesa e na produtividade das plantas afetadas. Diante do exposto, os objetivos do trabalho foram: avaliar a atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), peroxidase (POD), polifenoloxidase (PPO) e fenilalanina amônia liase (PAL) como respostas bioquímicas ao estresse relacionado à defesa contra murcha bacteriana em tomateiro; avaliar a eficiência da enxertia no controle da murcha bacteriana; comparar as trocas gasosas das plantas enxertadas e não enxertadas com a doença, e avaliar a produtividade dessas plantas em ambiente protegido infestado com o patógeno. Para isso, conduziram-se três experimentos, sendo dois em casa de vegetação, na Faculdade de Ciências Agronômicas da UNESP - Câmpus de Botucatu, Botucatu - SP e o terceiro em ambiente protegido, na Fazenda Ituaú, no município de Salto - SP. No primeiro experimento, foram avaliadas as atividades enzimáticas (SOD, CAT, POD, PPO e PAL) nas folhas e caule das plantas enxertadas e não enxertadas, inoculadas com Rs em nove coletas que foram realizadas às 0, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144 e 288 horas após a inoculação. No segundo, avaliou-se a incidência da murcha bacteriana com 0, 5, 10, 15 e 20 dias após inoculação (DAI) e trocas gasosas com 0, 3, 6, 9 e 12 DAI em plantas enxertadas e não enxertadas inoculadas com Rs. No terceiro experimento, foi avaliada a incidência da murcha bacteriana aos 10, 20, 30, 40, ... / Bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum (Rs) is one of major disease on tomato. There is no market cultivars / commercial hybrids resistant to the pathogen. Rootstocks with resistance are used in order to control bacterial wilt (BW). The pathogen can survive in the soil for many years. Also, to influence gas exchange, in the activity of enzymes involved in defense mechanisms and productivity of the affected plants. The above, the objectives of the study were to evaluate the activity of the enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), peroxidase (POD), polyphenol oxidase (PPO) and phenylalanine ammonia lyase (PAL) as biochemical stress responses related to defense against bacterial wilt in tomato; evaluate the efficiency of grafting to control bacterial wilt; compare gas exchange of grafted and not grafted plants inoculated with BW and also check the productivity of these plants in plastic house with the pathogen. Three trial were conducted, two in a plastic house at the Faculty of Agricultural Sciences of Botucatu UNESP, and the third in a protected environment in Ituaú Farm in the Salto city. In the first trial, we evaluated the enzymatic activities (SOD, CAT, POD, PPO and PAL) in the leaves and stems of grafted and not grafted plants, inoculated with Rs in nine samples that were performed at 0, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144 and 288 hours after inoculation. In the second, we evaluated the incidence of bacterial wilt with 0, 5, 10, 15 and 20 days after inoculation (DAI) and gas exchange with 0, 3, 6, 9 and 12 DAI on grafted and not grafted plants inoculated with Rs . The third trial it was evaluated the incidence of bacterial wilt at 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 and 80 days after transplantat in grafted plants on three different rootstocks and non grafted plants at soil naturally infested with Rs. Based on the results were concluded: The enzymes SOD, CAT and PAL, to the leaves, and SOD, ...

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:25:05Z : No. of bitstreams: 1 000858281.pdf: 1201599 bytes, checksum: 31f0c505bf12e3a3d2d007d7337a28a8 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi verificar se o fungicida Fluxapiroxade também exerce os efeitos fisiológicos que a Boscalida e a Piraclostrobina. Estas estrobilurinas e carboxamidas atuam no metabolismo e desenvolvimento das plantas, bem como no aumento da produção e qualidade dos frutos de tomate (Solanum lycopersicum L.) híbrido Conquistador (SAKATA, 2015), em condições de ambiente protegido. O experimento foi conduzido em área experimental da Faculdade de Ciências Agronômicas da Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu-SP. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, em plantas de tomate com 5 tratamentos com fungicidas: testemunha, azoxistrobina (75g ha-1), boscalida (75g ha-1), piraclostrobina (75 g ha-1), fluxapiroxade (75g ha-1) e a formulação de fluxapiroxade (50g ha-1) + piraclostrobina (100 g ha-1). Foram realizadas 6 aplicações a intervalos de 7 dias, sendo a primeira aplicação realizada 3 dias após o transplante. O efeito dos tratamentos foi avaliado através das observações das seguintes características: produção e massa média do fruto, trocas gasosas, índice de clorofila nas folhas e atividade das enzimas peroxidase, superóxido dismutase, catalase e nitrato redutase. Os resultados obtidos, demonstram que os fungicidas testados apresentam efeitos fisiológicos positivos nas plantas de tomate cultivadas em ambiente protegido, pois aumentaram a produção de frutos, a atividade da enzima nitrato redutase, a atividade do sistema antioxidativo e o índice de clorofila, sendo que esses efeitos ficaram mais evidentes nas plantas tratadas com a piraclostrobina, boscalida e fluxapiroxade. / This experiment has the purpose to study the physiological effects of strobilurine and carboxamides in metabolism and development of plants, as increased production and fruit quality of hybrid Conquistador tomato (Solanum lycopersicum L.) in greenhouse conditions. This experiment was conduct in an experimental field of the School of Agronomical Sciences at the Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP Campus. The experimental design consisted in randomized blocks in tomato plants with 5 fungicide treatments: control, azoxystrobin (75 g ha-1), boscalid (75g ha-1), pyraclostrobin (75 g ha-1), fluxapyroxad (75g ha-1) and the formulation with fluxapyroxad (50g ha-1) + pyraclostrobin (100 g ha-1), 6 applications with 7 days intervals, the first being 3 days after transplantation. The effect of the treatments were evaluated through observation of the following characteristics: production of fruits and fruit weight, gas exchange, chlorophyll content in leaves and activity of peroxidase, superoxide dismutase, catalase and nitrate reductase. According to the obtain results, it is conclude that the fungicides have positive physiological effects on tomato plants grown in greenhouse conditions, which increased fruit production, the activity of the enzyme nitrate reductase, and the activity of the antioxidant system and chlorophyll index, and these effects were more evident in plants treated with pyraclostrobin, boscalida and fluxapyroxad.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T18:54:57Z : No. of bitstreams: 1 guimaraes_lrp_me_botfca.pdf: 1201666 bytes, checksum: 9ed042975a5d8cf990bd0a428bea82a1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A cultura do tomateiro apresenta grande importância econômica para o Brasil e está sujeita a várias doenças que, dependendo do nível de resistência genética do cultivar usado, podem limitar sua produção. Os Tospovirus são considerados agentes causais de uma das doenças mais importantes da cultura do tomateiro, o vira-cabeça, acarretando enormes prejuízos econômicos. Diante disso, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito de indutores de resistência na incidência de vira cabeça e na produção do tomateiro. Os experimentos foram executados na Fazenda Experimental da UNESP, Campus Botucatu, em área de histórico de ocorrência da doença. Foram utilizadas 3200 plantas de tomateiro cv. Saladinha Plus. As bandejas foram divididas em 2 grupos, onde a metade recebeu um pré tratamento pela aplicação de Piraclostrobina+Metiram (3 g/L H2O) + Boscalida (0,3 g/L H2O) na bandeja e a outra metade sem nenhum produto aplicado. Após o transplantio, foram aplicados os tratamentos, através da pulverização de Piraclostrobina+Metiram 200g p. c./100L, Piraclostrobina+Metiram 400g p. c./100L, Bacillus subtilis 400mL p. c./100L e o procedimento convencional no qual foi aplicado o produto a base de Metamidófos. As pulverizações foram realizadas em todos os tratamentos aos 20, 35, 50 e 65 dias após o transplantio (DAT). Durante a condução do experimento foi realizada a avaliação da incidência da doença aos 30, 45 e 60 DAT, contando o número de plantas doentes. Com os resultados obtidos nas avaliações foi calculada a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD). Para as análises bioquímicas (atividade de peroxidase, polifenoloxidase, teor de proteínas totais solúveis e poliaminas), o material vegetal foi coletado aos 30, 40, 45, 55, 60, 70 e 75 DAT. A colheita dos frutos foi realizada aos 80 DAT, sendo selecionadas... / The tomato crop has great economic importance in Brazil and is subject of several diseases, and depending on the level of genetic resistance of the cultivar used, it can limit its production. The Tospovirus are considered causal agents of one of the most important diseases of tomato crops, resulting in enormous economic damage. The objective of this work was to evaluate the effect of resistance induction in the tomato crop, as well as the incidence of tospovirus. The experiment was carried out in the Experimental Farm of UNESP Botucatu, in an area of historical occurrence of the disease. Were used 3200 tomato plants cv. Saladinha Plus. Trays were divided into 2 groups, where half received a pretreatment Pyraclostrobin+ metiram (3 g / L H2O) + Boscalida (0, 3 g / L H2O) in the tray and the other half didn’t receive any product. After transplanting, treatments were applied by spraying Pyraclostrobin + metiram 200g p. c./100L, Pyraclostrobin + metiram 400g p. c./100L, Bacillus subtilis 400mL p. c./100L by conventional procedure in which the product methamidophos was applied. The spraying was carried in all treatments at 20, 35, 50 and 65 days after transplanting (DAT). During the experiment, an evaluation of the disease incidence was performed at 30, 45 and 60 DAT, counting the number of diseased plants. With the results obtained in the evaluations, was calculated the area under the disease progress curve (AUDPC). To biochemical analysis (peroxidase, polyphenoloxidase, total soluble protein and polyamines), the plant material was collected at 30, 40, 45, 55, 60, 70 and 75 DAT. The fruit harvest was performed at 80 DAT, 20 plants were selected of each treatment, and the analyses of total production were carried out, including average fruit weight, fruit number per treatment, percentage of the number of green... (Complete abstract click electronic access below)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-04-13T14:02:07Z No. of bitstreams: 1 2017_MoanaLimaTavares.pdf: 3476137 bytes, checksum: 86b634a5033a3276f2eeb85ebea21d18 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-18T23:03:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_MoanaLimaTavares.pdf: 3476137 bytes, checksum: 86b634a5033a3276f2eeb85ebea21d18 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T23:03:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_MoanaLimaTavares.pdf: 3476137 bytes, checksum: 86b634a5033a3276f2eeb85ebea21d18 (MD5) / O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma das principais hortaliças cultivadas no mundo. O cultivo de tomateiro representa uma importante atividade econômica e social no Brasil. As viroses representam um grande desafio fitossanitário para as principais regiões produtoras desta hortaliça, sendo que os begomovírus, tospovírus e crinivírus destacam-se pela importância e alta incidência. Recentemente, houve relatos de ocorrência de um tobravírus em tomateiro no Brasil e a carência de informações sobre essa virose justifica uma alta demanda para a realização de estudos sobre esse importante grupo de vírus de plantas. Representantes do gênero Tobravirus apresentam o genoma constituído por RNA senso positivo e bipartido (RNA1 e RNA2). Os tobravírus são transmitidos planta a planta por nematoides de solo e raízes dos gêneros Paratrichodorus e Trichodorus (Família Trichodoridae), considerados seus vetores naturais. Este gênero é representado por apenas três espécies, Tobacco rattle virus (TRV), Pea early-browning virus (PEBV) e Pepper ringspot virus (PepRSV). Conhecido como vírus da mancha anelar do pimentão ou vírus da faixa amarela do tomateiro, o PepRSV foi descrito somente no Brasil, causando doenças nas culturas de pimenta, alcachofra, patchuli e tomate. O primeiro isolado a ser caracterizado foi proveniente de pimenta e é conhecido como isolado CAM (Campinas-SP). Em 2012, a ocorrência de dois isolados de PepRSV foi relatada em tomateiro rasteiro em Luziânia, GO, denominados LAV e Pivo4. O objetivo geral deste trabalho foi estudar a interação de PepRSV com plantas hospedeiras e construir clones infecciosos de PepRSV (isolado CAM e LAV). Dois isolados foram utilizados, CAM de pimentão e LAV, isolado de tomateiro. Inicialmente, estes isolados foram caracterizados biologicamente e um antissoro foi produzido (cap. 2). Adicionalmente, clones infecciosos foram construídos (cap. 3). No capítulo 2, o círculo de hospedeiro foi analisado a partir inoculação mecânica em plantas indicadoras e cultivares de tomateiro. Partículas virais foram purificadas visando a produção de anticorpos em coelhos. A presença das partículas purificadas foi confirmada em microscópio eletrônico de transmissão e o antissoro anti-CP foi produzido. No capítulo 3, descreve-se a construção de clones infeciosos de PepRSV isolado CAM e LAV através da extração de RNA total, seguido por uma RT-PCR do RNA1 e RNA2 que foram inseridos no vetor de clonagem pJL-89 por Gibson Assembly. Os clones de PepRSV (isolado CAM e LAV) gerados foram agroinfiltrados em plantas de N. benthamiana. Conclui-se com esse trabalho que foi possível a produção do antissoro policlonal anti-CP que foi utilizado como técnica de detecção sorológica para determinar o círculo de hospedeiros do isolado CAM de PepRSV (infectou sistemicamente 16 plantas distintas); PepRSV isolado CAM se transloca para o sistema radícular quando inoculado na parte aérea das hospedeiras Nicotiana tabacum ‘Samsun’, N. tabacum ‘TNN’, N. rustica, Capsicum chinense PI159236, C. annuum ‘Ikeda’, S. lycopersicum cv. Santa Clara, Chenopodium quinoa e Gomphrena globosa; as cultivares de tomateiro Santa Clara, AP533, N901, U2006, Money Maker e Gaucho são suceptíveis à infecção por PepRSV isolado CAM; foi detectado um novo isolado de PepRSV denominado Ag1. Finalmente, os clones infeciosos de dois isolados construídos se mostraram infectivos em plantas de N. benthamiana, viabilizando a realização de estudos aprofundados de replicação, transmissão e translocação. / The tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the main vegetables grown in the world. The cultivation of tomato represents an important economic and social activity in Brazil. Viruses represent a major phytosanitary problem for the major growing regions of this vegetable, being the begomovirus, tospovirus and crinivirus the ones with great importance and high incidence. Recently, there were reports of the occurrence of a tobravirus in Brazil and the lack of information about this virus disease justifies a high demand on starting a research on this important virus group. Members of the genus Tobravirus have the genome constituted by positive sense RNA in a bipartite genome (RNA1 and RNA2). Tobraviruses are transmitted plant-by-plant by soil nematodes of the genus Paratrichodorus and Trichodorus (family Trichodoridae), considered as their natural vectors. This genus is represented by only three species, Tobacco rattle virus (TRV), Pea early-browning virus (PEBV) and Pepper ringspot virus (PepRSV). Known as ‘vírus da mancha anelar do pimentão’ or ‘vírus da faixa amarela’, PepRSV is only described in Brazil, causing diseases in pepper, artichoke, patchuli and tomato plants. The first isolate characterized was from pepper and is known as isolate CAM (Campinas-SP). In 2012, the occurrence two isolates of PepRSV was reported in processing tomatoes in Luziânia, GO, denominated LAV and Pivo4 . The general objective of this work was to study the interaction of PepRSV with the host. Two isolates were used, CAM from pepper and LAV, collected in tomato in 2012. Initially, these isolates were characterized biologically and an antibody was produced (Chapter 2). Furthermore, infectious clones were constructed (Chapter 3). In the chapter 2, the host range was analyzed afer mechanical inoculation in indicator plants, and tomato cultivars. Viral particles were purified for the production of antibodies in rabbits. The presence of the purified particles was confirmed by transmission electron microscopy, and an atibody with good specificity was produced. In the chapter 3, PepRSV infectious clones were constructed by extracting total RNA, followed by an RNA-1 and RNA2 RT-PCR that were inserted into the pJL-89 cloning vector by Gibson Assembly and later were agro-infiltrated into susceptible plants. It was concluded that it was possible to produce anti-CP polyclonal antibody; the PepRSV CAM isolate infects 16 different plants systemically; PepRSV isolate CAM translocates to the root system when inoculated on the aerial part of the hosts Nicotiana tabacum 'Samsun', N. tabacum 'TNN', N. rustica, Capsicum chinense PI159236, C. annuum 'Ikeda', S. lycopersicum cv. Santa Clara, Chenopodium quinoa and Gomphrena globosa; the tomato cultivars AP533, N901, U2006, Money Maker and Gaucho were susceptible to infection by PepRSV isolated CAM; a new PepRSV isolate named Ag1 was detected; and finally the clones of PepRSV were infectious to N. benthamiana plants.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-01-05T14:35:38Z No. of bitstreams: 1 2016_MaurícioRossato.pdf: 3410176 bytes, checksum: deb7c72c5b63bb15ba465dfeee816c69 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-08T21:24:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_MaurícioRossato.pdf: 3410176 bytes, checksum: deb7c72c5b63bb15ba465dfeee816c69 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T21:24:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_MaurícioRossato.pdf: 3410176 bytes, checksum: deb7c72c5b63bb15ba465dfeee816c69 (MD5) / A murcha bacteriana, atualmente reconhecida como sendo causada por um complexo de espécies do gênero Ralstonia (Ralstonia solanacearum, R. pseudosolanacearum e R. syzygii) apresenta uma ampla diversidade, podendo ser dividida em raças, biovares, filotipos e sequevares. O objetivo deste trabalho foi: (i) ampliar os conhecimentos sobre o importante complexo de espécies de Ralstonia por meio da caracterização biológica, bioquímica e molecular do isolado CNPH-RS 488, que se mostrou capaz de suplantar a resistência da linhagem ‘Hawaii 7996’; (ii) gerar um novo protocolo de identificação de biovares por meio de técnicas moleculares, visando aumentar a eficiência do processo e reduzir os custos associados com o teste de biovar; (iii) identificar novas fontes de resistência em tomateiro à murcha bacteriana em germoplasma selvagem de Solanum, considerando o melhoramento antecipatório contra possíveis novos variantes do patógeno, como o isolado CNPH-RS 488; (iv) gerar informações sobre o patossistema Coffea – Ralstonia. No presente estudo, o isolado CNPH-RS 488 foi classificado quanto ao biovar e filotipo, e foram caracterizados o seu perfil de virulência, a capacidade de suplantar de resistência da linhagem ‘Hawaii 7996’, a produção de EPS e de biofilme, bem como a sensibilidade a antibióticos e sua gama de hospedeiras. Os sistemas de marcadores RAPD/SCAR em associação com a estratégia de bulk segregant analysis foram inicialmente empregados visando o desenvolvimento de primers específicos para identificação de biovares. Para a busca por novas fontes de resistência avaliou-se uma coleção de 75 genótipos de Solanum peruvianum em comparação com as linhagens controle ‘Hawaii 7996’ (resistente) e ‘L390’ (suscetível). Os genótipos foram inoculados com os isolados CNPH-RS 488 (biovar 2A) e CNPH-RS 489 (biovar 1). O status do cafeeiro como hospedeira do complexo de espécies de Ralstonia foi demonstrado em bioensaios com nove isolados em três cultivares de Coffea arabica, comparando com a resposta do tomateiro suscetível ‘San Vito’. A confirmação da capacidade de suplantação da resistência do ‘Hawaii 7996’ pelo CNPH-RS 488 não pôde ser explicada pelos testes de produção de exopolissacarídeo e biofilme. Foi também constatado que o isolado apresenta uma maior virulência sobre espécies mais resistentes como jiló e berinjela. Onze primers RAPD foram selecionados com potencial valor diagnóstico para identificação de biovares. Amplicons obtidos com quatro primers que geraram marcadores estáveis foram clonados e a informação de sequência foi utilizada para o desenho dos primers do tipo SCAR. Os primers J1-B1-B e SCAR-i18-B2A apresentaram especificidade parcial para isolados de biovar 1 e 2A, respectivamente. Para a biovar 3, foi empregada uma estratégia de subtração in silico que permitiu o desenho de um par de primers específico para a região do gene polS (codificador da enzima sorbitol desidrogenase). Sete genótipos dos 75 de S. peruvianum foram considerados como promissoras fontes para o melhoramento do tomateiro visando à resistência à murcha bacteriana. O cafeeiro se mostrou suscetível exclusivamente a isolados de R. pseudosolanacearum, indicando os potenciais riscos que a murcha bacteriana pode apresentar para a cafeicultura brasileira. O presente trabalho destaca que a existência de isolados capazes de suplantar a resistência do tomateiro, como o CNPH-RS 488, e isso implica em potenciais riscos da disseminação dos mesmos pelo país, podendo inviabilizar as cultivares de tomateiro atualmente disponíveis no mercado e que usam a linhagem ‘Hawaii 7996’ como parental. Estudos adicionais sobre esse variante do patógeno serão necessários bem como o desenvolvimento de programas de melhoramento com novas fontes de resistência efetivas contra isolados com um perfil de virulência similar ao apresentado pelo CNPH-RS 488. / The bacterial wilt is currently recognized as being caused by a complex of three species: Ralstonia solanacearum, R. pseudosolanacearum, and R. syzygii. The causal agents of the bacterial wilt display a wide diversity, being classified in races, biovars, phylotypes, and sequevars. The objective of the present thesis was: (i) add new information about this important bacterial complex via biological, biochemical and molecular characterization of the isolate R. solanacearum CNPH-RS 488, which was found to be able to break down the resistance of the tomato (Solanum lycopersicum) inbred line ‘Hawaii 7996’; (ii) develop a new protocol for molecular characterization of biovars, focusing on making a faster and cheaper biovar identification test; (iii) search for new sources of resistance to bacterial wilt disease within a germplasm collection of wild Solanum (section Lycopersicon) species, using the preemptive breeding and developing new resistant cultivar to new and atypical strains like the CNPH-RS 488; (iv) study and characterize a new pathosystem: Coffea – Ralstonia. Studies with the isolate R. solanacearum CNPH-RS 488 involved different approaches: (1) determination of its biovar and phylotype; (2) determination of its virulence profile, including the capability of breaking down the resistance of ‘Hawaii 7996’; (3) production of exopolysaccharides (EPS) and biofilm; (4) antibiotic sensitivity, and (5) host range. The RAPD/SCAR marker systems in association with bulk segregant analysis was the strategy initially employed aiming to develop biovar-specific PCR-based markers. The search for new sources of resistance to bacterial wilt was carried using 75 Solanum peruvianum accessions and two standard lines ‘Hawaii 7996’ (resistant) and ‘L390’ (susceptible). Bioassays were carried out with two isolates, CNPH-RS 488 (biovar 2A) and CNPH-RS 489 (biovar 1). For the study of coffee as a host of the Ralstonia species complex, plants of three C. arabica cultivars were inoculated with a collection of nine isolates and their reactions were compared with that of the susceptible standard (tomato ‘San Vito’). The ‘Hawaii 7996’-resistant breaking ability of the isolate CNPH-RS 488 could not be explained by EPS and biofilm production. In addition, it was found that this isolate displayed a wider virulence profile being also able to infect accessions of scarlet eggplant and eggplant (which are naturally more tolerant to bacterial wilt). Eleven RAPD primers with potential diagnostic value for biovar were selected. Four stable amplicons (generated by four RAPD primers) were gel-purified and cloned. The sequence information was used for the design of SCAR-like primers. The primers J1-B1-B and SCAR-i18-B2A displayed partial specificity to isolates biovar 1 and 2A, respectively. For the biovar 3, it was employed the in silico subtraction technique, which allowed the design of a polS (sorbitol dehydrogenase) gene-specific primer. Seven out of the 75 S. peruvianum accessions were considered as promising sources for future use in tomato breeding programs to bacterial wilt resistance. Coffee accessions were susceptible exclusively to R. pseudosolanacearum isolates, indicating the potential risk of the bacterial wilt for the Brazilian coffee production. The present work emphasizes the existence of isolates (such as the CNPH-RS 488), which are able to break down the major sources of resistance available in tomato breeding programs. The present work also points out the potential risks of the spread of isolates with similar virulence profile across the country, which may preclude the employment of ‘Hawaii 7996’ as parental material. More studies on these variants will be necessary aiming to help the tomato breeding programs in the search for new sources of resistance to isolates with virulence profiles similar to CNPH-RS 488.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-graduação em Fitopatologia, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2015-10-28T14:48:53Z No. of bitstreams: 1 2015_AmandadeMeloGonçalves.pdf: 3250475 bytes, checksum: b74e9154c26b83ec3861fe69fcd4370b (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-11-06T13:51:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_AmandadeMeloGonçalves.pdf: 3250475 bytes, checksum: b74e9154c26b83ec3861fe69fcd4370b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-06T13:51:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_AmandadeMeloGonçalves.pdf: 3250475 bytes, checksum: b74e9154c26b83ec3861fe69fcd4370b (MD5) / O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma das principais hortaliças cultivadas no Brasil. A cultura pode ser afetada por diversas doenças, dentre elas destaca-se a murcha de fusário, que já foi relatada na maioria dos países onde o tomateiro é cultivado. O fungo Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) infecta tanto espécies cultivadas como espécies selvagens de tomateiro, onde coloniza as raízes e invade o sistema vascular, causando amarelecimento, murcha e posterior morte da planta. Três fatores de resistência têm sido identificados e caracterizados em espécies de Solanum (Lycopersicon) e incorporados em cultivares e híbridos comerciais. Os isolados de Fol têm sido agrupados em três raças, de acordo com a habilidade de infectar e causar doença em um conjunto de acessos diferenciadores contendo os loci de resistência I, I-2 e I-3. A identificação e caracterização genética de novas fontes e de novos alelos de resistência, bem como o estabelecimento de uma plataforma de seleção assistida por marcadores desses fatores já caracterizados, seriam importantes contribuições no sentido de aumentar a eficiência dos programas de melhoramento, permitindo, inclusive, que os melhoristas antecipem potenciais problemas relacionados ao surgimento de novas raças de Fol. Um dos principais objetivos dos modernos programas de melhoramento para resistência a doenças é o estabelecimento de sistemas de marcadores moleculares para caracterizar tanto a diversidade dos patógenos como para identificar regiões genômicas contendo alelos de resistência na planta hospedeira. Essas ferramentas moleculares fornecem uma visão mais completa do patossistema de interesse para o melhorista uma vez que possibilitam: (1) a caracterização em larga escala de um grande número de genótipos do patógeno e de genitores contrastantes da planta hospedeira; (2) a seleção de isolados representativos do patógeno para uso em sistemas efetivos de seleção e (3) a identificaçãode genes ou regiões genômicas da planta hospedeira contendo fatores de resistência. Neste contexto, os objetivos do presente trabalho foram: estudar a diversidade genética-molecular de isolados das três raças de Fol e buscar marcadores moleculares do tipo raça-específicos (Capítulo 2). Nesse trabalho, uma coleção de isolados de Fol foi caracterizada utilizando uma combinação de primers do tipo raça-específicos descritos na literatura com sendo capazes de discriminar isolados das três raças de Fol e também isolados F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici. A diversidade entre as raças foi avaliada utilizando primers universais buscando polimorfismos que serviram de base para o desenho de novos primers raça-específicos. Estes estudos são de grande valor no diagnóstico e na identificação de diferentes isolados de forma rápida e eficaz. Outro objetivo foi a caracterização genética de populações segregantes obtidas a partir de cruzamentos entre genótipos suscetíveis e resistentes às diferentes raças, visando identificar e validar novos marcadores associados a resistência a murcha de fusário em tomateiro (Capítulos 3 e 4). Para isso, as populações F2 foram inoculadas, com uma suspensão de esporos do patógeno, por meio de corte e imersão de raízes, e avaliadas quanto à resistência por meio de uma escala de notas. O DNA genômico de plantas resistentes e suscetíveis em populações segregantes para as raças 1 e 3 de Fol foi extraído e usado como molde em diferentes sistemas de marcadores, visando identificar polimorfismos ligados as essas duas características em estudo. Além disso, primers já descritos foram avaliados nas populações segregantes, para validar sua ligação aos loci de resistência. Esse aporte de informações de genômica e bioinformática tem aumentado a eficiência e oferecido uma maior segurança no processo de seleção de plantas superiores dentro dos programas de melhoramento. / The tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the main vegetable crops grown in Brazil, being affected by a variety of diseases under open field and protected crop conditions. Fusarium wilt has been reported in most countries where tomatoes are cultivated. The causal agent is the fungus Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), which is able to infect both cultivated and wild tomato species. This fungus colonizes the roots and invades the vascular system, causing yellowing, wilting, and plant death. Three resistance loci (I, I-2 and I-3) have been characterized in wild species of Solanum (section Lycopersicon) and incorporated into commercial cultivars. The Fol strains have been grouped into three races, according to their ability to infect and cause disease in a set of differential accessions carrying one of these three resistance loci. Identification and genetic characterization of new resistance alleles and the establishment of a marker-assisted selection platform of the already known alleles can increase the efficiency of breeding programs, allowing the breeders to anticipate potential problems related to the emergence of new races of Fol. A major objective of breeding programs is the identification of molecular markers linked to resistance alleles that allow the characterization of a large number of genotypes, selection of parental inbred lines and detection of genes of agronomic interest. Thus, the objectives of the present study were to survey the diversity of a collection of Fol races and the search for Fol race-specific molecular markers (Chapter 2). The collection of Fol isolates was characterized using race-specific primers previously reported in the literature. These primers can separate the three races of Fol as well as isolates belonging to F. oxysporum sp. radicis-lycopersici. However, this distinction has only been possible by the combination of marker systems. In this context, the diversity among races was evaluated using universal primers looking for polymorphisms that were the basis for the design of new race-specific primers. These studies are of great value in the diagnosis and identification of different strains quickly and effectively. Another objective was the genetic characterization of segregating populations obtained from crosses between genotypes susceptible and resistant to different races, aiming to validate and identify new markers associated with resistance to fusarium wilt in tomato, (Chapters 3 and 4). For this reason, distinct F2 populations were inoculated with a suspension of spores of the pathogenvia root dipping method and evaluated using a disease severity scale. The resistant and susceptible plants were evaluated in the search for polymorphisms to be used in the design of markers linked to resistance factors to Fol race 1 (gene I) and Fol race 3 (gene I-7). In addition, primers previously described were evaluated in the segregating populations to validate their linkage with these resistance loci. This genomic information and bioinformatics will be important contribution aiming to increase the selection efficiency multi-race resistance plants within the breeding programs.

Orientador: Rumy Goto / Banca: Giuseppina Pace Pereira Lima / Banca: Romulo Fujito Kobori / Banca: Roberto Botelho Ferraz Branco / Banca: Igor Otavio Minatel / Resumo: A murcha bacteriana causada por Ralstonia solanacearum (Rs) é uma das principais doenças do tomateiro. Não existe no mercado brasileiro cultivares/híbridos com nível de resistência satisfatório ao patógeno. Os porta-enxertos com resistência são utilizados com finalidade de controlar a murcha bacteriana. O patógeno tem a capacidade de permanecer no solo por muitos anos e com isso, inviabilizar o cultivo. Também influenciam nas trocas gasosas, na atividade das enzimas envolvidas em mecanismos de defesa e na produtividade das plantas afetadas. Diante do exposto, os objetivos do trabalho foram: avaliar a atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), peroxidase (POD), polifenoloxidase (PPO) e fenilalanina amônia liase (PAL) como respostas bioquímicas ao estresse relacionado à defesa contra murcha bacteriana em tomateiro; avaliar a eficiência da enxertia no controle da murcha bacteriana; comparar as trocas gasosas das plantas enxertadas e não enxertadas com a doença, e avaliar a produtividade dessas plantas em ambiente protegido infestado com o patógeno. Para isso, conduziram-se três experimentos, sendo dois em casa de vegetação, na Faculdade de Ciências Agronômicas da UNESP - Câmpus de Botucatu, Botucatu - SP e o terceiro em ambiente protegido, na Fazenda Ituaú, no município de Salto - SP. No primeiro experimento, foram avaliadas as atividades enzimáticas (SOD, CAT, POD, PPO e PAL) nas folhas e caule das plantas enxertadas e não enxertadas, inoculadas com Rs em nove coletas que foram realizadas às 0, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144 e 288 horas após a inoculação. No segundo, avaliou-se a incidência da murcha bacteriana com 0, 5, 10, 15 e 20 dias após inoculação (DAI) e trocas gasosas com 0, 3, 6, 9 e 12 DAI em plantas enxertadas e não enxertadas inoculadas com Rs. No terceiro experimento, foi avaliada a incidência da murcha bacteriana aos 10, 20, 30, 40, ... / Abstract: Bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum (Rs) is one of major disease on tomato. There is no market cultivars / commercial hybrids resistant to the pathogen. Rootstocks with resistance are used in order to control bacterial wilt (BW). The pathogen can survive in the soil for many years. Also, to influence gas exchange, in the activity of enzymes involved in defense mechanisms and productivity of the affected plants. The above, the objectives of the study were to evaluate the activity of the enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), peroxidase (POD), polyphenol oxidase (PPO) and phenylalanine ammonia lyase (PAL) as biochemical stress responses related to defense against bacterial wilt in tomato; evaluate the efficiency of grafting to control bacterial wilt; compare gas exchange of grafted and not grafted plants inoculated with BW and also check the productivity of these plants in plastic house with the pathogen. Three trial were conducted, two in a plastic house at the Faculty of Agricultural Sciences of Botucatu UNESP, and the third in a protected environment in Ituaú Farm in the Salto city. In the first trial, we evaluated the enzymatic activities (SOD, CAT, POD, PPO and PAL) in the leaves and stems of grafted and not grafted plants, inoculated with Rs in nine samples that were performed at 0, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144 and 288 hours after inoculation. In the second, we evaluated the incidence of bacterial wilt with 0, 5, 10, 15 and 20 days after inoculation (DAI) and gas exchange with 0, 3, 6, 9 and 12 DAI on grafted and not grafted plants inoculated with Rs . The third trial it was evaluated the incidence of bacterial wilt at 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 and 80 days after transplantat in grafted plants on three different rootstocks and non grafted plants at soil naturally infested with Rs. Based on the results were concluded: The enzymes SOD, CAT and PAL, to the leaves, and SOD, ... / Doutor

Orientador: João Domingos Rodrigues / Banca: Amanda Cristina steves Amaro / Banca: Cacilda Marcia Duarte Rios Faria / Resumo: O objetivo deste trabalho foi verificar se o fungicida Fluxapiroxade também exerce os efeitos fisiológicos que a Boscalida e a Piraclostrobina. Estas estrobilurinas e carboxamidas atuam no metabolismo e desenvolvimento das plantas, bem como no aumento da produção e qualidade dos frutos de tomate (Solanum lycopersicum L.) híbrido Conquistador (SAKATA, 2015), em condições de ambiente protegido. O experimento foi conduzido em área experimental da Faculdade de Ciências Agronômicas da Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu-SP. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, em plantas de tomate com 5 tratamentos com fungicidas: testemunha, azoxistrobina (75g ha-1), boscalida (75g ha-1), piraclostrobina (75 g ha-1), fluxapiroxade (75g ha-1) e a formulação de fluxapiroxade (50g ha-1) + piraclostrobina (100 g ha-1). Foram realizadas 6 aplicações a intervalos de 7 dias, sendo a primeira aplicação realizada 3 dias após o transplante. O efeito dos tratamentos foi avaliado através das observações das seguintes características: produção e massa média do fruto, trocas gasosas, índice de clorofila nas folhas e atividade das enzimas peroxidase, superóxido dismutase, catalase e nitrato redutase. Os resultados obtidos, demonstram que os fungicidas testados apresentam efeitos fisiológicos positivos nas plantas de tomate cultivadas em ambiente protegido, pois aumentaram a produção de frutos, a atividade da enzima nitrato redutase, a atividade do sistema antioxidativo e o índice de clorofila, sendo que esses efeitos ficaram mais evidentes nas plantas tratadas com a piraclostrobina, boscalida e fluxapiroxade. / Abstract: This experiment has the purpose to study the physiological effects of strobilurine and carboxamides in metabolism and development of plants, as increased production and fruit quality of hybrid Conquistador tomato (Solanum lycopersicum L.) in greenhouse conditions. This experiment was conduct in an experimental field of the School of Agronomical Sciences at the Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP Campus. The experimental design consisted in randomized blocks in tomato plants with 5 fungicide treatments: control, azoxystrobin (75 g ha-1), boscalid (75g ha-1), pyraclostrobin (75 g ha-1), fluxapyroxad (75g ha-1) and the formulation with fluxapyroxad (50g ha-1) + pyraclostrobin (100 g ha-1), 6 applications with 7 days intervals, the first being 3 days after transplantation. The effect of the treatments were evaluated through observation of the following characteristics: production of fruits and fruit weight, gas exchange, chlorophyll content in leaves and activity of peroxidase, superoxide dismutase, catalase and nitrate reductase. According to the obtain results, it is conclude that the fungicides have positive physiological effects on tomato plants grown in greenhouse conditions, which increased fruit production, the activity of the enzyme nitrate reductase, and the activity of the antioxidant system and chlorophyll index, and these effects were more evident in plants treated with pyraclostrobin, boscalida and fluxapyroxad. / Mestre