Orientador: Susanne Rath / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-10T22:20:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_LeandroAlves_M.pdf: 1182437 bytes, checksum: 9e5bb63e48650f93fbbd8632bfc95f93 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Resíduos de agrotóxicos presentes em alimentos podem exceder os limites máximos de resíduos, quando as boas práticas agrícolas não são respeitadas. Conseqüentemente, a determinação dos resíduos de agrotóxicos é extremamente importante para avaliar o uso apropriado dessas substâncias e os riscos à saúde humana decorrentes da sua presença nos alimentos. A determinação de resíduos de agrotóxicos em alimentos requer etapas de preparo de amostras que consistem, geralmente de etapas de extração, remoção de interferentes e concentração do analito anterior análise cromatográfica. Para tanto, tem sido largamente empregada a extração em fase sólida. O objetivo do presente trabalho foi a síntese e caracterização de polímeros de impressão molecular (MIP) para uso em cartuchos de extração em fase sólida, visando a determinação de fenitrotiona (FNT) em tomates. O polímero foi sintetizado a partir do ácido metacrílico (monômero funcional), etileno glicoldimetilacrilato (reagente de ligação cruzada), 2'2azo-bis-iso-butironitrila (iniciador radicalar) em diclorometano (solvente porogênico), usando a FNT como molécula molde. Também foi sintetizado um polímero de controle (NIP). O MIP foi caracterizado por técnicas de infravermelho de transformada de Fourier, ressonância magnética nuclear do estado sólido, microscopia de varredura eletrônica e porosimetria de sorção de nitrogênio. O modelo de Langmuir-Freundlich foi o que apresentou o melhor ajuste para descrever a adsorção da FNT no polímero. O MIP foi empregado em cartuchos de extração em fase sólida e as etapas de condicionamento, carregamento, lavagem e eluição otimizadas. A extração em fase sólida molecularmente impressa foi aplicada na determinação de FNT em amostras de tomates, usando a cromatografia líquida de alta eficiência associada a um detetor de arranjo de diodos. A eficiência de extração, para amostras branco de tomates fortificadas com 5mg g de FNT, foi de 65 %. Nenhum interferente foi observado nos cromatogramas no tempo de retenção da FNT, indicando a seletividade do polímero / Abstract: Pesticide residues present in food can exceed maximum residue level when good agricultural practices are not followed. Consequently, the determination of pesticide residues is extremely important to evaluate the appropriate use of theses substances and risks to human health due to their presence in food. The determination of pesticide residues in food requires sample preparation steps that consist mainly of extraction, clean-up, and concentration of the analyte prior to chromatographic quantitation.. For this purpose, solid-phase extraction has been widely employed. The aims of this work were the synthesis and characterization of a molecularly imprinted polymer (MIP) to be employed as a sorbent in solid phase extraction cartridges for the determination of fenitrothiom (FNT) in tomatoes. The polymer was synthesized using FNT as the template molecule, methacrylic acid as the functional monomer, ethylene glycol dimethacrylate as the cross-linking monomer, and 2,2-azobis-isobutyronitrile as the initiator. Dichloromethane was used as the porogenic solvent. Also, a non-imprinted polymer was synthesized. The MIP was characterized using the following techniques: FT-IR, NMR, electronic microscopy and BET. The adsorption of FNT on the polymer was fitted to the Langmuir-Freundlich model. The polymer was used in the solid-phase extraction cartridges and the conditioning, sample loading, clean-up and elution steps were optimized. The molecularly imprinted solid phase extraction was used for the determination of FNT in tomatoes, using high performance liquid chromatography with a diode array detector. For extraction efficiency, for a fortified blank tomato sample (5 mg g FNT), was 65 %. No interferences were observed in the chromatograms at the retention time of FNT, indicating the selectivity of the polymer / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química

Orientadores: Roberto Funes Abrahão, Mauro Jose Andrade Tereso / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agricola / Made available in DSpace on 2018-08-11T08:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_MarcoAntonio_M.pdf: 27706944 bytes, checksum: 0bf278766f6564203372174d036732ec (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Esta pesquisa teve como objetivo principal a identificação dos fatores de risco de acidentes laborais em unidades de beneficiamento de tomate (UB). Realizou-se um estudo piloto em uma UB com a aplicação parcial do método da análise ergonômica do trabalho (AET). Em seis UB da região de Campinas foram feitas entrevistas abertas e semi-estruturadas, registros por meio de filmagem e fotos, observações diretas e sistemáticas de tarefas e medições de variáveis ambientais. A aplicação da AET permitiu a compreensão das dificuldades dos trabalhadores, relativas a aspectos de segurança laboral, fundamentado nas Normas Regulamentadoras (NR) e na Norma Brasileira 5413 (NBR). Os riscos foram classificados em físicos, químicos, biológicos, ergonômicos e de acidentes. Para cada risco identificado, foram apresentadas possíveis conseqüências e sugestões. Como produto deste trabalho, foi construída uma lista de verificação (checklist) detalhada, com várias questões objetivas, relativas aos aspectos de segurança do trabalho em unidades de beneficiamento do tomate / Abstract: This research's main objective was the identification of the risk factors of labour (work-related) accidents in tomato processing unities (UB). A pilot study was carried out in a UB, where the Ergonomic Work Analysis (EWA) method was partially applied. Open and semi-structured interviews, photografic and filmed registers, direct observations and systematic observations of tasks had been carried through in six Campinas region's UB. The EWA application allowed the understanding of the workers' difficulties, relative to aspects of workplace safety, analysed on the grounds of Labour Laws (NR) and Brazilian Standard 5413 (NBR). The risks were classified in Physical, Chemical, Biological, Ergonomic and of Accident. For each identified risk, were presented the possible consequences and suggestions. As a product of this work, it was built a detailed checklist, containing many objective questions, relative to the aspects of workplace safety in tomato processing unities / Mestrado / Planejamento e Desenvolvimento Rural Sustentável / Mestre em Engenharia Agrícola

O tomate (Solanum lycopersicum) é uma das culturas de maior importância econômica atual, além de ser espécie modelo para estudos genéticos em plantas para a qual há diversos recursos genéticos e genômicos bem caracterizados. Tanto o fruto fresco quanto os produtos derivados do tomate constituem fonte de diversos antioxidantes, incluindo a vitamina E (VTE). Em plantas, a síntese dos compostos com atividade de VTE, tocoferóis e tocotrienóis, deriva dos precursores das vias do metileritritol fosfato e do chiquimato. O entendimento dos mecanismos responsáveis pela síntese, transporte e acúmulo da VTE em plantas cultivadas é de grande interesse devido sua implicação para saúde humana e na fisiologia vegetal. Loci para caracteres quantitativos (QTL) para o conteúdo de α-tocoferol em frutos maduros foram previamente mapeados nos cromossomos 6 e 9 em uma população de linhagens introgredidas (ILs) que combinam fragmentos cromossômicos da espécie selvagem Solanum pennellii no fundo genético de S. lycopersicum. Neste trabalho, após busca sistemática em banco de dados de sequências expressas, foram identificados 41 loci envolvidos estruturalmente na biossíntese de VTE em tomate. A análise da distribuição cromossômica desses loci revelou que a maioria dos genes que codificavam enzimas para a rota central do tocoferol estavam localizados nos cromossomos 7, 8 e 9. A variação do conteúdo dos isômeros de tocoferol (α, β, γ e δ) em fruto maduros das ILs foi acessada com intuito de se mapear QTL para cada uma das isoformas. Os perfis metabólicos obtidos permitiram descrever 12 QTL, que corroboram aqueles previamente descritos, além de identificar outros novos nos cromossomos 7 e 8. A análise integrada dos dados metabólicos, genômicos e genéticos levou à proposição de 16 loci candidatos que podem afetar o conteúdo de tocoferol em tomate. A comparação das sequências codificantes desses genes revelou polimorfismos de nucleotídeos e aminoácidos entre os alelos de S. lycopersicum e S. pennellii. Em conjunto, esses resultados representam um importante passo para o entendimento dos determinantes genéticos envolvidos na variação natural do conteúdo de VTE em frutos de tomate. / Tomato (S. lycopersicum) is one of the most important worldwide crops, besides being a relevant model species for plant genetics studies in plants for which there are many genetic and genomic resources well characterized. Both, fresh fruits and tomato-derived products are source of several antioxidants, including vitamin E (VTE). In plants, the synthesis of VTE compounds, tocopherol and tocotrienol, derives from precursors of the shikimate and methylerythritol phosphate pathways. Understanding the mechanisms underlying synthesis, transport and accumulation of VTE in crops are of great interest because of its implications for human health and its role in plant physiology. Quantitative trait loci (QTL) for α-tocopherol content in ripe fruit for chromosome 6 and 9 have been mapped previously in a population of introgression lines (ILs) containing chromosome segments of the wild species Solanum pennellii in the genetic background of the S. lycopersicum. In this work, after a systematic survey in expressed sequences database, 41 loci involved structurally on VTE biosynthesis were identified. The analysis of chromosome distribution of these loci revealed that the majority of genes that encode enzymes for the tocopherol core pathway were located on chromosomes 7, 8 and 9. The variation of tocopherol isomers content (α, β, γ and δ) in ripe fruits of ILs was addressed in order to identify QTL for each isoform. The metabolic profiles obtained allowed to describe 12 QTL that corroborate those previously described while novel ones were identified in chromosome 7 and 8. The integrated analysis at the metabolic, genetic and genomic levels lead to propose 16 candidate loci putatively affecting tocopherol content in tomato. A comparative analysis revealed polymorphisms at nucleotide and amino acid levels between S. lycopersicum and S. pennellii candidate alleles. Together, these results represent an important step for understanding the genetic determinants of VTE natural variation in tomato fruit.

Os pesticidas têm sido largamente empregados na agricultura para controle de pragas, doenças e ervas daninhas. O uso intensivo de pesticidas nas culturas de tomates, desrespeitando as boas práticas agrícolas, tem causado preocupações quanto à provável contaminação do produto final e muitos métodos multirresíduos têm sido empregados para avaliar e determinar os níveis de resíduos em amostras de alimentos. Para tanto, o objetivo deste estudo foi a validação do método usando QuEChERS no preparo de amostra e LC-MS/MS para a quantificação de resíduos de 61 pesticidas de diferentes classes químicas em tomate. A detecção foi realizada utilizando espectrômetro de massas no modo MRM dinâmico, o tempo de análise foi de 13 min com coluna analítica recheada com partículas de 1,8 \'mü\'m de partícula. Dos 61 pesticidas estudados, 46 estão de acordo com os parâmetros de validação da Comissão Européia e Anvisa, 15% dos pesticidas validados apresentaram efeito matriz médio e as recuperações ficaram entre 87 e 116% e coeficiente de variação de 5 a 17%. Mais de 85% dos compostos investigados apresentaram limites de detecção igual ou menor que 5 \'mü\'g kg-1 e de quantificação igual ou menor que 10 \'mü\'g kg-1. Foram analisadas 58 amostras de tomate coletadas em supermercados da cidade de Piracicaba, SP, Brasil. Doze compostos foram detectados em trinta e cinco amostras (60% do total analisado), todos abaixo do limite máximo de resíduos permitido no Brasil para acefato, acetamiprido, azoxistrobina, benalaxil, bromuconazol, diflubenzurom, imidacloprido, iprodiona, procloraz e tiametoxam, e 15 amostras positivas para metamidofós e 1 para oxamil, que não possuem uso autorizado para a cultura de tomate. Foi realizado um estudo de lavagem de tomates contaminados com produtos formulados (8 pesticidas) com água, solução com 10% de vinagre e com 10% de bicarbonato de sódio e analisada a casca e polpa, para avaliar a capacidade de remoção de cada procedimento. Todos os tratamentos de lavagens (n=3) diferiram estatisticamente para todos os pesticidas avaliados (n=8), com exceção do fipronil, para o qual as lavagens com solução de 10% de bicarbonato de sódio e água não apresentaram diferença no nível de significância de 5%. A lavagem com água ou outras soluções antes do consumo é indicada para a redução de resíduos de pesticidas em tomate e a retirada da casca também contribui para essa redução / Pesticides have been widely used in agriculture to control pests, diseases and weeds. The intensive use of pesticides in tomato crops disrespecting good agricultural practices have been causing concerns about the possible contamination of the final product and many multiresidue methods have been used in order to evaluate and determine the levels of residues in food samples. Therefore, the aim of this study was validate the method using QuEChERS sample preparation and LC-MS/MS for quantification of 61 pesticides residues from different chemical classes in tomato. Detection was performed using mass spectrometry in dynamic MRM mode, run time had 13 min and analytical column packed with 1,8 \'mü\'m particles. Of the 61 pesticides studied, 46 are in accordance with the validation parameters of the European Commission and ANVISA, 15% of the validated pesticides presented matrix effect, recoveries were between 87 and 116% and coefficient of variation 5 to 17%. More than 85% of the compounds investigated showed limits of detection less or equal than 5 \'mü\'g kg-1 and the limits of quantification less or equal than 10 \'mü\'g kg-1. 58 real samples of tomato were analyzed and collected in supermarkets in Piracicaba, SP, Brazil. Twelve compounds were detected in thirty-five samples (60% of the total analyzed), all below the maximum residue limit allowed in Brazil for acephate, acetamiprid, azoxystrobin, benalaxyl, bromuconazole, diflubenzuron, imidacloprid, iprodione, prochloraz and thiamethoxam, and 15 positive samples of methamidophos and 1 for oxamyl, which are not authorized to use at the culture of tomatoes. A wash study was conducted with spiked tomatoes using formulated products (8 pesticides) with water, 10% acetic acid, 10% sodium bicarbonate solution and analyzed concentration in the peel and pulp, in order to evaluate the capacity to remove pesticides in each procedure. All wash treatments (n= 3) differed significantly for all pesticides evaluated (n= 8), with the exception of fipronil, which the washing with 10% of sodium bicarbonate solution and water no showed difference in the level of significance 5%. The washing with water or other solutions before consumption is indicated for the reduction of pesticide residues in tomatoes and the peeling also contributes to this reduction

O tomate é a segunda hortaliça mais produzida no mundo, superada apenas pela batata, com participação efetiva na dieta humana. O seu valor como alimento traz um paradoxo. Ao mesmo tempo em que é elogiado por ser considerado um alimento funcional, com propriedades nutracêuticas, sofre críticas pela forma como é normalmente produzido, sob pesadas quantidades de fertilizantes sintéticos e pesticidas. Há muitas causas de variação que podem alterar a composição dos frutos. Neste sentido, o presente trabalho procurou coletar amostras em um universo que engloba diferentes fatores, incluindo cultivares para o consumo in natura e para o processamento industrial, sistemas de cultivo convencional e orgânico, regiões geográficas e tipos de solo. O objetivo geral foi caracterizar o tomate quanto aos elementos químicos visando a identificação daqueles de interesse agronômico ou nutricional e o estabelecimento das faixas de concentrações para frutos produzidos sob as fontes diversas de variação. Objetivos específicos envolveram estudos de representatividade amostral e de influência dos estádios de maturação e do solo na composição química dos frutos. Os tomates das cultivares AP 533, Colibri e T-92 foram coletados em propriedades localizadas em municípios do estado de São Paulo. A determinação dos elementos químicos foi feita pelo método primário de análise por ativação neutrônica instrumental (INAA). A qualidade do procedimento analítico foi verificada por meio da exatidão e da reprodutibilidade dos resultados com o emprego de materiais de referência. O estudo de representatividade amostral revelou que o número necessário de amostras para representar o tomate no campo foi inferior a 12, considerando um erro máximo admitido pelo analista de 15%. A variabilidade intra-amostral foi avaliada por meio de 12 repetições analíticas de uma mesma amostra e os resultados indicaram a homogeneidade do material. Os elementos químicos Br, Ca, Co, Cs, Fe, K, La, Na, Rb, Sr e Zn foram determinados nas amostras de polpas, sementes e solos. A análise de frutos nos estádios de maturação verde maduro e rosado indicou maiores concentrações de Ca, Fe, K, Na, Rb e Sr nos tomates rosados, enquanto Br, Co, Cs e Zn não apresentaram diferenças significativas (p < 0,05). Os solos das seis propriedades estudadas apresentaram composição química bastante diferenciada. Contudo, não foram observadas correlações das concentrações de elementos químicos encontradas nas amostras de polpa e de solo. Os resultados da caracterização química dos tomates permitiram realizar importantes inferências com relação ao comportamento dos elementos químicos. K e Ca foram os nutrientes mais abundantes na polpa e na semente. As concentrações de Br, Co, Cs, Rb e Sr na polpa diferiram significativamente (p < 0,05) tanto entre sistemas de cultivo como entre cultivares. Fe, K, Na e Zn na polpa não foram afetados pelos sistemas de cultivo, sendo as diferenças encontradas intrínsecas para cada cultivar. As polpas e as sementes dos tomates das três cultivares não apresentaram diferenças para Ca. Br permitiu a separação entre tomates orgânicos e convencionais, com concentrações maiores em tomates convencionais. Análises multivariadas revelaram que as amostras de polpa possuem uma tendência de agrupamento por categorias, tanto em termos de cultivar como de sistema de cultivo, embora esse último fator tenha apresentado resultados menos evidentes. Por outro lado, as sementes apresentaram maior tendência de agrupamento pelo fator cultivar / The tomato is the second most cultivated vegetable after the potato, having an effective participation in the human diet. Its food value remains paradoxical. At same time it is recognized as a functional food with nutraceutical properties, the tomato receives criticism due to the way it is usually cultivated, i.e. under heavy amounts of synthetic fertilizers and pesticides. There are many causes of variation that may change the fruit composition. In this aspect, the current work aimed at collecting samples in a universe that comprises different factors, including cultivars for fresh market and for processing, conventional and organic cultivation systems, geographical regions and soil types. The main objective of this work was the chemical element characterization of tomato in view of the identification of elements of agronomical and nutritional interest and establishing concentration ranges for the fruits produced under different sources of variation. The specific objectives comprehended studies of sample representativeness and studies of the influence of ripening stages and soil on the chemical composition of tomato fruits. Tomatoes from the cultivars AP 533, Colibri and T-92 were sampled in farms located in cities of São Paulo State. The determination of the chemical elements was carried out by using the primary method of measurement instrumental neutron activation analysis (INAA). The quality of the analytical procedure was evaluated by means of accuracy and reproducibility of reference materials results. The study of sample representativeness showed that the required number of 12 samples to represent the tomato in the field, considering 15% as the maximum deviation allowed by the analyst. The within-sample variability was evaluated by means of 12 analytical portions taken from one sample. The results demonstrated the homogeneity of the material. The chemical elements Br, Ca, Co, Cs, Fe, K, La, Na, Rb, Sr and Zn were determined in the samples of pulp, seeds and soils. The analysis of fruits at mature green and pink stage indicated higher concentrations of Ca, Fe, K, Na, Rb and Sr in the tomatoes at pink stage, while Br, Co, Cs and Zn did not show any significant difference (p < 0.05). The soils from the six studied farms presented different chemical compositions. However, no correlations were observed between the chemical element concentrations found in the samples of pulp and soil. The results of chemical characterization of tomatoes allowed making important inferences with relation to the chemical elements behavior. K and Ca were the most abundant nutrients in the pulp and seeds. Br, Co, Cs, Rb and Sr concentrations in the pulp showed significant differences (p < 0.05) for both cultivation systems and cultivars. Fe, K, Na and Zn concentrations in the pulp were not affected by the cultivation systems, being the differences found intrinsic to each cultivar. The pulp and seeds from the tomatoes of the three cultivars did not present any significant difference for Ca. Br allowed the discrimination of organic and conventional tomatoes, the later showing the higher concentrations. Multivariate analysis of the pulp results revealed a trend in clustering by categories, both in terms of cultivars and cultivation system, although the later showed less clear results. On the other hand, the seeds presented higher trend in clustering by the cultivar factor

O tomate constitui-se uma das hortaliças mais exploradas cientificamente, devido à sua importância comercial. O tomate pode, através de processamento adequado, dar origem a inúmeros produtos, alguns deles de elevado consumo no Brasil. Depois da boa aceitação do tomate cereja pelo consumidor, um novo segmento de mini-tomate, chamado Grape, começa a despontar nos mercados brasileiros. O destaque é o híbrido Sweet Grape, que está agradando ao gosto do consumidor e animando agricultores que aderiram às experiências com a nova cultivar. Seu teor de sólidos solúveis chega a 10 °Brix e tem menos acidez, comparado a outras variedades, as quais contem entre 4 e 5 °Brix. Nesse trabalho foi avaliado o processo produtivo do tomate seco, a partir de mini-tomates sweet grape, congelados desidratados em secador solar e convencional, visando obter um alimento seguro do ponto de vista microbiológico, físico-quimica, instrumental cor e aceitabilidade) Os tomates cereja tipo Sweet Grape, foram secos até teores de umidade entre 35% e 0%, e observadas suas mudanças em relação aos tomates in natura , e seu comportamento nos períodos de armazenamento após processados de 0, 30, 60 e 90 dias, verificando assim a sua estabilidade. Foi ainda caracterizado o fruto in natura e submetido a um précongelamento para uma previa perda de água facilitando a secagem. A avaliação da qualidade do produto foi realizada através das análises microbiológicas, físico-químicas, composição centesimal e sensorial. Houve diferença significativa entre os secadores, elétrico e solar, para todos os parâmetros analisados, porém não houve alteração significativa para o período de armazenamento. Em relação à avaliação sensorial, o tomate seco ao sol obteve melhor aceitação entre os provadores / The tomato is one of the vegetables are more scientifically investigated, due to its commercial importance. The tomato can, through appropriate processing, giving rise to numerous products, some of high consumption in Brazil. After the good acceptance by consumers of cherry tomatoes, a new segment of mini-tomato, called Grape, begins to emerge in the Brazilian markets. The highlight is the hybrid Sweet Grape, which is pleasing to the taste of consumers and encouraging farmers adhered to experiment with new cultivars. Your soluble solids content reaches 10 ° Brix and has less acidity compared to other varieties, which contain between 4 and 5 ° Brix. In this study we evaluated the production process of dried tomato, from mini-sweet grape tomatoes, frozen and dehydrated in conventional solar dryer was used to obtain a food safe from microbiological point of view,. physico-chemical, instrumental color and acceptability) Cherry Tomatoes Sweet Grape type, have been dried to moisture contents between 35% and 50%, and observed their changes for tomatoes in nature, and their behavior during periods of storage after processed 0, 30, 60 and 90 days, thus confirming its stability. It was further characterized the fresh fruit and undergo a pre-freeze to a predicted loss of water facilitating drying. Assessing the quality of the product was carried out by microbiological, physicochemical, chemical composition and sensory. There were significant differences between the dryers, electric and solar, for all parameters analyzed, but no significant change for the period of storage. Regarding the sensory evaluation, the sun-dried tomatoes the best won acceptance among judges

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Objetiva elucidar quais mecanismos de antagonismo são responsáveis pelo biocontrole da murcha-de-esclerócio e que fatores estão envolvidos na promoção de crescimento em tomateiro por meio de rizobactérias. Os testes foram realizados in vivo e in vitro, em que se verificaram: a capacidade de produção de enzimas líticas, antibiose por meio de compostos voláteis e difusíveis, colonização de raízes, produção de sideróforos, metalismo de carbono, produção de ácido indol acético, fixação biológico de nitrogênio, solubilização de fosfato de cálcio e promoção de crescimento do tomateiro em condições de casa-de-vegetação / This research was aiming to elucidate the antagonism mechanisms responsible for the biocontrol of southern blight and the elements involved in growth promotion in tomato by rhizobacteria. The experimental assays were performed in vivo and in vitro, and the following characteristics evaluated: production of lytic enzymes, antibioses by volatiles and diffusible compounds, root colonization, siderophores production, carbon sources metabolism, indole acetic acid production, nitrogen fixation, calcium phosphate solubilization and tomato growth promotion in greenhouse conditions

Fitoplasmas, procariotos sem parede celular e habitantes de floema, têm causado danos consideráveis em diversas culturas comercialmente importantes. A associação desses fitopatógenos com várias doenças que ocorrem em espécies hortícolas têm sido comumente registradas tanto no território brasileiro como em outras regiões do mundo. Em áreas de plantio comercial, na região de Piracicaba-SP e Bragança Paulista-SP, plantas de tomate e berinjela apresentando porte reduzido, clorose foliar acentuada, produção exagerada de pequenos ramos, desenvolvimento anormal do cálice, encurtamento de entre-nós, redução no tamanho de folhas, flores e frutos, que podem ser traduzidos em sintomas de enfezamento, foram observadas evidenciando infecção por fitoplasma. Através da técnica de duplo PCR utilizando os oligonucleotídeos universais R16 mF1/mR2 e R16 F2n/R2, fragmentos de DNA de 1,2 Kb foram amplificados de amostras sintomáticas, demonstrando a presença de fitoplasma nos tecidos das plantas. Nenhum fragmento foi detectado em plantas sadias. O exame de tecidos do floema de plantas sintomáticas, submetidos ao microscópio eletrônico de transmissão, revelou a presença de corpúsculos pleomórficos no interior dos vasos, corroborando com os resultados da detecção através de PCR. O uso de oligonucleotídeos específicos para identificação demonstrou a ocorrência de fitoplasmas afiliados ao grupo 16SrIII, tanto em tomate quanto em berinjela. Análises de RFLP, usando as enzimas de restrição AluI, MseI, HpaII, KpnI, RsaI, HhaI e MboI, confirmaram a ocorrência de fitoplasmas do referido grupo em ambas as espécies vegetais. Para confirmar os resultados de RFLP, os fragmentos de DNA de 1,2 Kb dos fitoplasmas presentes em tomate e berinjela, amplificados com o par de iniciadores R16 F2n/R2, foram clonados em Escherichia coli para a determinação de suas seqüências de nucleotídeos. Os fragmentos clonados sequenciados foram comparados, por homologia de nucleotídeos, entre si e com isolados cujas seqüências já haviam sido depositadas no “GenBank”. O resultado do sequenciamento revelou heterogeneidade das seqüências do gene 16S rDNA ocorrendo em alguns isolados, demonstrando e confirmando a variabilidade genética de organismos do grupo 16SrIII presentes no Brasil. / Phytoplasmas are cell wall-less prokaryotes and phloem- inhabitants. They caused considerable damages in some commercially important crops in the Brazilian territory and others regions of the world. It has been observed in the region of Piracicaba and Bragança Paulista, São Paulo State, commercial fields of eggplant and tomate showing reduced size, extensive chlorosis, proliferation of axillary buds, abnormal development of calyx, internode shortening and small leaves, flowers and fruits. These symptoms can be translated by stunting, making clear the phytoplasma infection. Presence of phytophasm was confirmed by nested PCR assay with the universal primer R16 F2N/R2 where DNA fragments of 1.2 kb were amplified from symptomatic samples. No fragments was observed in healthy plants. Analysis of symptomatic plant’s phloem tissue when submitted to electron microscope of transmission, disclosed the presence of pleomorphic bodies inside the tissues, corroborating with the results of detection by PCR assay. The use of specific primers for groups demonstrated the phytoplasmas occurrence associated to the 16SrIII group, in both tomato and eggplant. RFLP analyses using AluI, MseI, HpaII, KpnI, RsaI, HhaI and MboI restriction enzymes confirmed the occurrence of phytoplasmas on 16SrIII group in both plant species with typical stunting symptoms. The products of 1.2 kb of tomato and eggplant isolates amplified with the pair of primers R16 F2n/R2, were cloned in Escherichia coli to determine nucleotides sequence and to confirm the RFLP results. The nucleotide sequences were compared by homology and with isolates whose sequence have been already deposited in the “GenBank”. The results revealed 16S rRNA sequence heterogeneity occurring in some isolates showing the genetic variability of group 16SrIII phytoplasma in Brazil.

Carotenoides são pigmentos encontrados em grande abundancia em frutos do tomateiro. A capacidade de sequestro de radicais destes pigmentos faz do tomate uma excelente opção para inclusão de compostos nutricionais pela dieta. Embora a síntese de carotenoides seja reconhecida como uma das respostas da cascata de eventos que levam ao amadurecimento, pouco se sabe a respeito de sua influência neste processo. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi determinar se o conteúdo e a composição de carotenóide nos frutos acarretam alterações na conservação e na suscetibilidade dos frutos ao fungo B. cinerea. Foram utilizadas linhagens quase isogênicas (NILs) ao Micro Tom (MT) carregando as mutações, Beta carotene (B), tangerine (t), yellow flesh (r) e Delta carotene (Del). A caracterização dessas variações alélicas revelou, não apenas alterações no conteúdo de carotenoides, mas também outros efeitos pleiotrópicos relacionados ao amadurecimento, parâmetros de qualidade, espessura da cutícula e propriedades nutricionais dos frutos. Em face disso, subsequentemente investigamos se o diferencial conteúdo e composição de carotenóides nas referidas NILs altera a suscetibilidade dos frutos ao fungo Botrytis cinerea. A caracterização do amadurecimento demonstrou que o pico climatérico dos frutos do mutante r foi antecipado, assim como a transição para o estádio breaker. De modo contrário, a alteração na coloração da epiderme do mutante t foi atrasada, reafirmando suspeitas de outros autores que sugeriram que a enzima carotenoide-isomerase é necessária para a síntese de carotenoides no escuro. O conteúdo de ácido ascórbico também foi contrastante entre estes genótipos, sendo que no mutante r a sua concentração foi elevada, enquanto em t sua concentração foi reduzida. A perda de massa dos frutos foi menor no mutante Del, no entanto, esta característica não esteve relacionada a espessura da cutícula, que foi maior em B. A inoculação com B. cinerea por meio de ferimentos na pele dos frutos revelou menor suscetibilidade do mutante t, e em menor amplitude, do mutante Del. Ainda, o mutante t também se mostrou menos suscetível à inoculação do patógeno sobre frutos intactos. A maior espessura da cutícula de B não reduziu sua suscetibilidade ao fungo, que infectou os tecidos preferencialmente através da cicatriz do pedúnculo. A interação com B. cinerea desencadeou a produção de etileno e de espécies reativas de oxigênio (EROs), assim, é provável que a capacidade de sequestro de radicais livres tenha contribuído para a redução da suscetibilidade em t e Del, que mostraram menor produção de superóxido. Juntos, estes resultados sugerem que a modulação na atividade de enzimas da carotenogênese pode servir como ferramenta para obtenção de frutos com diferente vida útil durante o armazenamento pós-colheita de tomate. / Carotenoids are pigments found in great abundance in tomato fruits. The radical sequestration capacity of these pigments makes tomato an excellent option for inclusion of nutritional compounds in diet. Although the synthesis of carotenoids is recognized as one of the cascade responses that trigger ripening, little is known about its influence in this process. Thus, the aim of this study was to determine if the content and composition of carotenoids in the fruits alters the conservation and the susceptibility of the fruits to the B. cinerea fungus. Micro Tom (MT) near-isogenic lines (NILs) harboring the mutations Beta carotene (B), tangerine (t), yellow flesh (r) and Delta carotene (Del) has been used. The characterization of these allelic variations revealed not only changes in the carotenoid content but also other pleiotropic effects related to maturation, quality parameters, cuticle thickness and nutritional properties of fruit. In this way, we subsequently investigated whether the differential content and composition of carotenoids in NILs alters fruit susceptibility to the fungus Botrytis cinerea. The ripening characterization showed that the climacteric peak of the fruits of the r mutant was anticipated, as well as the transition to the breaker stage. Conversely, the change in epidermal coloration of mutant t was delayed, reaffirming suspicions of other authors who suggested that the carotenoid-isomerase enzyme is required for the synthesis of carotenoids in the dark. The ascorbic acid content was also contrasting among these genotypes, and in the r mutant its concentration was high, while at t its concentration was reduced. The fruit mass loss was lower in Del mutant, however, this characteristic was not related to cuticle thickness, which was higher in B. Wound-inoculation with B. cinerea revealed less susceptibility of the mutant t, and in a lesser extent, the mutant Del. Further, mutant t was also less susceptible to pathogen inoculation on intact fruits. The greater thickness of the cuticle of B did not reduce its susceptibility to the fungus, which infected the tissues preferentially through the scar of the peduncle. The interaction with B. cinerea triggered the production of ethylene and reactive oxygen species (ROS), so the free radical scavenging capacity probably contributed to the reduction of t and Del susceptibility, which showed lower production of superoxide. Together, these results suggest that modulation in carotenogenesis enzyme activity may serve as a tool to obtain fruit with different shelf-life during post-harvest tomato storage.

O tomateiro (Solanum lycopersicum) tornou-se importante ferramenta para estudos de genética e fisiologia nos últimos anos, devido à disponibilidade de mutantes, incluindo aqueles com alterações hormonais. Nesta cultura, a cultivar ornamental miniatura de tomateiro Micro-Tom (MT) tem sido utilizada como modelo genético em vários estudos, visto que produz frutos e sementes viáveis em vasos de apenas 50-100 ml de substrato, completando o ciclo em setenta a noventa dias. Este trabalho foi feito com o intuito de gerar informações que possam colaborar para a compreensão dos mecanismos que determinam a sensibilidade das raízes ao estresse hídrico. Para tal, foram criados duplos mutantes hormonais homozigóticos da cultivar MT, sendo posteriormente usados para verificar o papel das interações hormonais ABA-Etileno no controle do crescimento da raiz sob condições de estresse osmótico. O estudo é relevante pelo fato de que o entendimento dos mecanismos de controle hormonal no crescimento radicular poderá auxiliar a pesquisa de melhoramento genético para a obtenção de plantas tolerantes à seca, o que representaria avanço na agricultura, principalmente para regiões de clima árido e semiárido. Os experimentos foram realizados no Laboratório de Controle Hormonal do Desenvolvimento Vegetal da ESALQ-USP, onde foram produzidos genótipos de cinco duplos mutantes: diagetropica/sitiens (dgt/sit), diagetropica/epinastic (dgt/epi), diagetropica/Never ripe (dgt/Nr), sitiens/epinastic (sit/epi) e Never ripe/sitiens (Nr/epi) em homozigose em BC6Fn. Sementes germinadas de (MT) e de mutantes de sitiens (sit), Never ripe (Nr) e o duplo mutante Nrsit foram colocadas em tratamento com PEG 6000 em diferentes potenciais osmóticos. Também foram realizados experimentos com ácido cloro-2-etil fosfônico (CEPA), um liberador de etileno (Ethrel), e o inibidor da síntese do mesmo, o aminoetoxivinil glicina (AVG), sendo avaliados os parâmetros como crescimento radicular, caulinar, razão raiz/hipocótilo e conteúdo relativo de água (CRA). Observouse que baixos potencias osmóticos inibem mais o caule que a raiz, e que o estresse osmótico moderado (-0.6 MPa) favoreceu o crescimento da raiz e da razão raiz/hipocótilo em MT, principalmente em sit e, em menor extensão, na raiz de Nr/sit. Esse crescimento não foi observado em Nr. No mutante sit, em -1.1 MPa, observou-se inchaço radicular semelhante ao provocado pela presença de etileno. Em menor extensão, esse inchaço também foi observado no duplo mutante Nr/sit. Quando adicionado Ethrel, houve inibição do crescimento radicular em sit e MT, sendo também observado um pouco de inibição no mutante insensível a etileno, Nr. Em estresse moderado (-0.6 MPa), a inibição foi mais severa do que em água para MT, mas não para sit, até a dose de 1 µM. A inibição do etileno causada pelo AVG resultou em uma maior diferença entre água e -0.6 MPa, sendo o último mais inibido. Pode-se concluir que, em condições de déficit hídrico moderado, há aumento radicular e da razão/hipocótilo quando comparados a condições normais de suprimento de água. Tais constatações são importantes porque podem ajudar no desenho de práticas agronômicas que podem levar a maior economia de água, bem como aumento da eficiência de uso de água pelas plantas. / Tomato (Solanum lycopersicum) has become a very important model for genetic and physiological studies in the last years, due to the presence of various mutants, including those with hormonal alterations. The ornamental dwarf tomato cv. Micro-Tom (MT) has been largely used because of its ability to produce viable fruits and seeds in pots of just 50-100 ml, completing its life cycle in seventy to ninety days. In an attempt to gain insights on the mechanisms that regulate plant growth under physiologic stress, homozygote hormonal double mutants of the MT were created and later on screened for the role of hormonal interactions in the control of root growth under osmotic stress. The experiment was conducted at ESALQ-USP Hormonal Control of Plant Development Laboratory, where genotypes of five double mutants namely diagetropica/sitiens (dgt/sit), diagetropica/epinastic (dgt/epi), diagetropica/Never ripe (dgt/Nr), sitiens/epinastic (sit/epi) and Never ripe/sitiens (Nr/epi) were produced in BC6Fn homozygosis. Germinated seeds of MT and the mutants sitiens (sit), Never ripe (Nr) and the double mutant Nr/sit were treated with PEG 6000 at different osmotic potentials. There were also experiments with chloro-2-ethyl phosphonic acid (CEPA), an ethylenereleaser (Ethrel) and the inhibitor of ethylene synthesis aminoethyoxyvinyl glycine (AVG). The parameters evaluated were radicle and hypocotyls growth, root/hypocotyl ratio and relative water content (RWC). The stem was more inhibited than the root at moderate osmotic stress (-0.6 MPa), which resulted in elevated root/hypocotyl ratio for MT, sit and, in lesser extent, Nr/sit. This pattern was not observed in Nr. A root swelling similar to that caused by ethylene was observed in sit at -1.1 MPa. This swelling was less evident in the double mutant Nr/sit. When added Ethrel, there was inhibition of root growth in sit and MT. A discrete root inhibition was also observed in the ethyleneinsensitive Nr mutant. In moderate osmotic stress (-0.6 MPa), root inhibition was more severe than in water for MT, but not for sit, until 1 µM Ethrel. The AVG application increased this difference between water and PEG 6000 treatments. It can be concluded that, in moderate water deficit, the root growth and root/hypocotyl ratio were increased, when compared to normal water supply. These findings are important, since they can provide for the better design of agronomic practices and crop improvement aiming at the enhancement of water use efficiency.