Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-07T19:47:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Lygia dos Santos.pdf: 2337591 bytes, checksum: b38012def1bbf5adf52bdbd4060eed5b (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-15T21:25:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Lygia dos Santos.pdf: 2337591 bytes, checksum: b38012def1bbf5adf52bdbd4060eed5b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:25:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Lygia dos Santos.pdf: 2337591 bytes, checksum: b38012def1bbf5adf52bdbd4060eed5b (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / FACEPE / A solasodina, alcalóide esteroidal obtido principalmente de plantas do gênero Solanum, pertencente à família Solanaceae, que apresenta duas formas glicosiladas: solamargina e solasonina. A potente ação antitumoral da solasodina frente tumores malignos e benignos de pele, é decorrente da presença de uma mistura de glicosídeos presentes na molécula e já vem sendo comercializado como Curadem®. A porção glicosídica, portanto, viabiliza o reconhecimento de receptores de membrana induzindo sua internalização e viabilizando sua ação biológica. As limitações de rendimento na extração dos glicosídeos da solasodina permite a extração da aglicona em maior rendimento. Assim sendo, este trabalho visa o desenvolvimento de um nanosistema mais efetivo na entrega da solasodina e avaliação da ação antiproliferativa frente a diferentes linhagens celulares. Nanocápsulas furtivas contendo solasodina (SSD-NC) foram obtidas pelo método de precipitação de um polímero pré-formado e caracterizadas através da avaliação da morfologia por microscopia eletrônica de varredura, determinação do pH, tamanho médio, índice de polidispersão e carga de superfície de partículas. A atividade antiproliferativa da solasodina nanoencapsulada foi avaliada frente às linhagens celulares NIH 3T3 (fibroblastos normais), 4T1 (câncer de glândula mamária de murino) e MCF- 7 (câncer de tumor de mama). A citotoxidade das SSD-NCS foi determinada pelo método MTT após tratamento de 48 horas, utilizando concentrações de 100 a 0,78 μg/mL de SSD-NC. O mecanismo de morte celular avaliado através da marcação com anexina V e iodeto de propídio, a determinação do potencial de membrana mitocondrial e a fragmentação de DNA das células tratadas com SSD-NC (3,125 e 6,25 μg/mL) foram realizados por citometria de fluxo. As células 4T1 e MCF-7 apresentaram uma redução significativa dose e tempo-dependente na viabilidade, enquanto que as células NIH 3T3 apresentaram citoxidade reduzida até concentrações ≥ 25 μg/mL. Os valores de IC50 de SSD-NC nas linhagens 4T1 e MCF-7 foram de 5,31 e 4,14 μg/mL, respectivamente. Aumento na fragmentação do DNA das células 4T1 e na MCF-7 foi observado em função do aumento da concentração de SSD-NC. As células foram marcadas apenas pelo iodeto de propídio, demonstrando perda da permeabilidade da membrana celular, sugerindo necrose como mecanismo de morte celular. A análise do potencial de membrana mitocondrial revelou que o tratamento com SSD-NC induziu alterações na membrana dessas organelas, confirmando os resultados obtidos através do método MTT, onde as células apresentaram alteração em sua viabilidade. Estes achados sugerem que o tratamento das células 4T1 e MCF-7 com SSD-NC induz o processo de necrose associado a severas alterações morfológicas nas células. A encapsulação da solasodina apresentou um potencial efeito antiproliferativo, viabilizando futuros estudo in vivo da ação antitumoral. / Solasodine, a steroidal alkaloid obtained mainly from plants of the genus Solanum and Solanaceae family, is presented in two glycosylated forms: solamargine and solasonine. The potent antitumor action of solasodine against benign and malignant skin tumors is due to the presence of a mixture of glycosides present in its molecular structure, alredy being marketed as Curaderm®. A glycoside moiety, therefore, enables the recognition of membrane receptors and induces the cellular internalization allowing the biological activity. The extraction yield of solasodine glycosides is limited, but the extraction of aglycone occurs in higher yield. Thus, this study aims to develop and characterize more effective delivery nanosystems of solasodine and evaluate its antiproliferative activity against different cell lines. Stealth nanocapsules containing solasodine (SSD-NC) were obtained by the method of interfacial precipitation of a preformed polymer and characterized trough the morphology using scanning electron microscopy, and measurements of pH, particle size, polydispersity and surface charge. The antiproliferative activity of SSD-NC was evaluated against the cell lines NIH 3T3 (normal fibroblasts), 4T1 (murine breast cancer) and MCF-7 (human breast cancer) at concentrations ranging from 25.0 to 0.78μg/ml. The cytotoxicity of SSD-NC was determined by MTT assay after treatment of cells with concentrations varying from 25 to 0.78 μg/mL for 48 hours. The mechanism of cell death was evaluated by annexin V or propidium iodide staining, the mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation of cells using flow cytometry at the concentrations of 3.125 and 6.25 μg/mL. A significant reduction in the viability of 4T1 and MCF-7 cells was verified in a dose and time-dependent manner, whereas the normal cells NIH 3T3 showed a lower cytotoxicity up to concentrations ≥ 25 μg/mL. IC50 values of solasodine encapsulated against 4T1 and MCF-7 cells were 5.31 and 4.14 μg/mL, respectively. A slight increase in DNA fragmentation of 4T1 and MCF-7 cells was found with the increase in SSDNC concentrations. Cells were labeled only with propidium iodide, indicating loss of cell membrane permeability and suggesting necrosis as the death mechanism. Analysis of mitochondrial membrane potential showed that the treatment with SSD-NC induces changes in the organelle membranes, confirming the results of the MTT assay, where the cells presented alterations in viability. These findings suggest that treatment of 4T1 and MCF-7 cells with SSDNC induces necrosis process associated with severe morphological changes. Encapsulation of solasodine presented a potential antiproliferative effect, allowing future in vivo study of antitumor action.

Orientador : Alba Regina Monteiro Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T17:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_AnaBeatrizAlbinode_M.pdf: 20623748 bytes, checksum: 8b7914190998688d407df885f1838601 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A úlcera é uma lesão produzida pelo desequilíbrio da secreção ácida e fatores protetores da mucosa gástrica. Esse desequilíbrio é originado por diversos fatores tais como: estilo de vida, tabagismo, presença da Helicobacter pylori e antiinflamatóriosnão-esteroidais. Por ser uma patologia de grande incidência, com tempo de tratamento prolongado e de constante recidiva, muitas vezes promovendo agravações que levam o paciente à cirurgia, novas drogas vem sendo isoladas e sintetizadas, a fim de atenuar e/ou abolir essa afecção. Várias são as fontes naturais fornecedoras de constituintes químicos com função antiulcerogênica, sendo que as plantas, devido a sua diversidade e utilização popular, destacam-se nesse as pecto. o nosso objeto de estudo é a espécie Croton cajucara, conhecida popularmente como sacaca, típica da região Amazônica, com centro de dispersão em Belém-PA. Estudos prévios demonstraram que a trans-desidrocrotonina (DHC), substância isolada das cascas da Croton cajucara, apresenta atividade antiulcerogênica eficaz, acompanhada de alta toxicidade (Souza Brito et al., 1998; Hiruma-Lima et al.' 1999; Jaime and Haun, 1999).A partir desses resultados isolamos a crotonina semi-sintética (4SRC) a partir da DHC, a fim de verificarmos se essa substância apresentava atividade antiulcerogênica similar, com uma diminuição da toxicidade. Não utilizamos a crotonina natural devido ao seu baixo rendimento. Ao avaliar os efeitos da 4SRC (50, 100 e 200 mg/kg) nos modelos de úlcera induzida por etanol, etanol/HCI e estresse, em camundongos Swiss e ratos Wistar machos, foi verificado uma atividade antiulcerogênica significativa, sugerindo uma possível ação antisecretora promovida pela substância. Por essa razão, foi avaliada a ação da 4SRC sobre os receptores colinérgicos e histaminérgicos. Ao observar o efeito da 4SRC sobre os receptores histaminérgicos em átrio direito de cobaio foi observado um deslocamento da curva à direita da curva-padrão (histamina), acompanhada de uma diminuição significativa da resposta máxima, o que sugere um comportamento de droga antagonista não-competitivo. Ao ser analisado a ação da 4SRC sobre os receptores muscarínicos, em fundo de estômago de rato, foi observado um deslocamento da curva à direita da curva-padrão (carbacol) sem diminuição da resposta máxima, sugerindo um comportamento de droga antagonista competitiva. A atividade da 4SRC (50, 100 ou 200 mg/kg) foi também avaliada no modelo de úlcera induzida por indometacina, no qual foi verificado significativa diminuição do índice de lesão ulcerativa nas doses de 100 e 200 mglkg, sugerindo que a 4SRC atue como estimulador da síntese de prostaglandina. Para verificarmos essa hipótese, avaliamos a ação da 4SRC (100 mglkg) sobre a síntese de prostaglandina e sobre a produção de muco livre, entretanto não foi observadas diferença significativaquando comparada ao grupo controle. A citotoxicidade da 4SRC foi avaliada em cultura de células V79 de pulmão de hamster chinês e cultura primária de hepatócitos de ratos Wistar, através dos testes de conteúdo de DNA (NAC), incorporação de vermelho neutro (NRU) e redução do sal tetrazoliumMTT. Ao avaliar a viabilidadede células V79 incubadas com diferentes concentrações de 4SRC foi observado que para os testes de NRU e MTT a substância apresentou uma ICso=500 JlM , e no de teste NAC uma ICso=200 JlM. Ao analisar a viabilidade dos hepatócitos de ratos Wistar após o tratamento com a 4SRC, observamos que a ICso=10-500JlM para os testes de NAC e MTT, e para o NRU uma ICso=120 JlM. Posteriormente as células V79 foram incubadas com o metabólito produzido pelos hepatócitos tratados com diferentes concentrações de 4SRC. Após 4h de incubação observamos uma ICso=500JlM para os testes de MTT e NRU, e umanICso=370JlM para o teste de NAC. Com a obtenção desses resultados é possível sugerir que a 4SRC atua através de um antagonismo em receptor histaminérgico e colinérgico, apresentando características de citotoxicidade menores que a DHC / Abstract: The ulcer is a lesion produced by unbalance of acid secretion and protector factors of gastric mucous. This unbalance is original by various causes as: tobacco, He/icobacter pylori, stress. Just be a pathology of large incidence, with prolonged time of treatment; many times aggravations promoting, witch lead the patient to surgery. New drugs being isolated and synthesized, in order to attenuate and/or to abolish this affection. The natures fountain are furnishers of chemist constituent, in special the plants, due its innumerable diversity and popular utilization. The object of this study is the Croton cajucara, known popularly as sacaca, typical of Amazon region, with dispersion center in Belém - PA. Previousstudies demonstrated that the trans-dehydrocrotonin (DHC), isolated substance of Croton cajucara bark, present efficacious antiulcerogenic activity, accompany of high toxicity (Souza Brito et aI., 1998; Hiruma-Lima et al., 1999; Jaime and Haun, 1999). From these results we isolated the semi-synthetic crotonin (4SRC) obtained of DHC, it to verify if this substance present similar antiulcerogenic activity, with a decrease toxicity. We didn't utilize the natural crotonin, due to its low revenue. To evaluate the 4SRC effects (50, 100 and 200 mg/kg) on ethanol, ethanol/HCl and stress-induced ulcer models, in Swiss and rats Wistar male. We verified a significative antiulcerogenic activity, suggesting a possible antisecretory action promoved by substance. For this reason, the 4SRC action was evaluated on cholinergic and histaminergic receptors. To observe the 4SRC effect on histaminergic receptors, we utilized isolated guinea pig right atria and observed a shift to the right in the concentration response curves to histamine, accompany of significative decrease of maximum response, that suggest that this compound may act as an H2antagonist receptor. The 4SRC activity (50, 100 or 200 mg/kg) was appraised in the ulcer model induced by indomethacin, which we verficated decrease significative of u1cerative ,lesion index in the 100 and 200 mglkg, suggesting that 4SRC action as stimulator of synthesis andlor discharge of prostaglandin. For this reason, we verified the 4SRC action (100 mglkg) on prostaglandin synthesis on free mucus production, however we didn't observe significative difference, when it was compared to control group. The cytotoxic effect of semi-synthetic crotonin, expressed as cell viability, was assessed in a lung fibroblast cellline (V79) derived from Chinese hamsters that is commonly used for cytotoxicity studies (Souza Brito et al., 1998; Rodriguez and haun, 1999); and rat hepatocytes were isolated from male Wistar rats. After treatment, cell viability was determined by tetrazolium reduction (MTT), total acid content (NAC) and neutral red uptake (NRU) assays. To evaluate the V79 cell viability incubated with different 4SRC concentration was observed that to the NRU and MTT tests the substance presented a ICso=500j..tM,and in the NAC a ICso=200J-lM.To analyze the hepatocyte viability of Wistar rats after treatment with the 4SRC, we observed a ICso=10-500J-lMto the NAC and MTT tests and, to NRU, a ICso=120J-lM.Next stage, the V79 cells were incubated with the metabolites produced by hepatocytes treated with different 4SRC concentration. After 4 h incubation, we observed a ICso=500 J-lMto the MTT and NRU tests, and a ICso=370j..tMto NAC test. This results suggest that 4SRC act through of a histaminergic and cholinergic antagonism, presenting characteristics of citotocixity low than DHC / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Milton Ruiz Alves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T03:55:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Holzchuh_Nilo_D.pdf: 22618534 bytes, checksum: d3f6976da50d6a0325448c884a00600d (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O objetivo desta presente pesquisa foi avaliar os efeitos do uso tópico da mitomicina C a 0,02%, no epitélio íntegro da córnea de coelhos, sob o ponto de vista clínico, histopatológico e imuno-histoquímico. A mitomicina C (olhos esquerdo) e água destilada (olhos direito, controle) foram instiladas, 4 vezes ao dia, por 14 dias, nos olhos de 28 coelhos, em superfície ocular íntegra. A superfície ocular foi avaliada por exames biomicroscópicos seriados, durante os dias de instilação da droga. Os animais foram sacrificados no 15°, 50° e 100° dia de experimento. O exame histopatológico do epitélio corneano foi complementado por análise morfométrica, que pelo método de contagens de pontos, estudou área do epitélio, número de núcleos, relação núcleo-citoplasma, área da célula epitelial, área do núcleo e área do citoplasma, na região do limbo e central da córnea. O exame imuno-histoquímico do epitélio corneano foi realizado pelo emprego dos anticorpos monoclonais (AE1 e AE5) que reagem com as citoceratinas do epitélio da córnea. O uso de mitomicina C desencadeou discreta hiperemia conjuntival após o terceiro dia de instilação, desaparecendo 7 dias após a suspensão da droga. Não apresentou outro sinal clínico detectável na biomicroscopia. Não desencadeou alterações histopatológicas no epitélio corneano, observando-se a continuidade do epitélio, as células epiteliais se apresentaram dispostas de maneira ordenada, com número de camadas obedecendo a maturação normal e ausência de atipia celular. A análise morfométrica determinou alterações significativas em diferentes estruturas do epitélio, na região do limbo e central da córnea, principalmente nas áreas estimadas do epitélio, do citoplasma e do número de núcleos, verificando-se uma hipertrofia da célula epitelial, redução da relação núcleo-citoplasma e diminuição do número de núcleos. Estes valores voltaram próximos ao nível controle no 100° dia de avaliação. O uso da mitomicina C a 0,02%, não influenciou no padrão de diferenciação da célula epitelial da córnea. Os resultados desta investigação demonstraram baixo potencial tóxico do uso da mitomicina C, em superfície ocular íntegra de coelhos, nessa dosagem e concentração / Abstract: This study was performed to evaluate the effects of mitomycin C eye drops (0,2mg/ml) on the corneal epithelium of rabbits. It was investigated the changes in clinical examination, histopathologic and immunohistochemical analysis. Mitomycin C and distilled water (controls) were instilled 4 times daily for 14 consecutive days in the eyes with intact ocular surface. The ocular surface was evaluated by slit-lamp examination, during the days of the drug instillation. The animals in the 15th, 50th and 100th day of the experiment were sacrificed. The histopathologic analysis of the corneal epithelium was complemented by morphometry. It was studied the epithelium area, number of nuclei, number of round nuclei, nucleus-cytoplasm relation, epithelial cells area (nucleus and cytoplasm). The immunohistochemical studies used monoclonal antibodies to cytokeratins (AE1 and AE5). During the use of mitomycin C eye drops mild conjunctival hyperemia was detected. It disappeared 7 days after the drug suspension. There was no other clinical sign by slit-lamp examination. It didn't detect histopathologic alterations in the corneal epithelium, it was considered the epithelium continuity, maturation and atypical cells presence. The morphometric analysis was performed by point counting under light microscopy. It showed variations characterized by alteration of the epithelium area, the nucleus area and cytoplasm area, increase of the epithelial cell, alteration of the nucleus-cytoplasm relation and decrease of the nuclei number. The use of mitomycin C 0,02%, it didn't influence in the differentiation pattern of the cornea epithelial cell. The results of this investigation, in this study conditions, showed that mitomycin C 0,02%, instilled 4 times daily for 14 consecutive days, it was showed low toxic potential in intact ocular surface / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T12:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torsoni_AdrianaSouza_M.pdf: 20635048 bytes, checksum: a01b9994fce1e6c4b016aa22794ba653 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A farmacodinâmica vascular da síntese endógena de NO ficou conhecida devido ao efeito de drogas nitrovasodilatadoras. Esses agentes exógenos, tais como o nitroprussiato de sódio, agem como doadores de NO e exercem efeito hipotensivo in vivo direto promovendo diminuição na resistência vascular sistêmica decorrente de um aumento nos níveis de GMP cíclico. Nosso interesse reside na possibilidade de complexos de rutênio transnitrosilaminados servirem como veículo para a liberação controlada de NO em sistemas biológicos e, assim, produzir efeitos farmacológicos. O objetivo desse trabalho foi investigar o efeito hipotensor e a toxicidade de um novo complexo de rutênio, o t-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 devido a sua habilidade em liberar NO espontaneamente em solução aquosa. Medidas diretas de PA foram realizadas em ratos Wistar machos adultos cronicamente instrumentados. O efeito hipotensor foi determinado em ratos conscientes (n=10) submetidos a injeções endovenosas "in bolus" de trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 e nitroprussiato de sódio (NaNP). Concentrações de 0,0025 a 0,08 µmoles/Kg do complexo de rutênio induziram resposta hipotensora imediata (PAM controle 104 ± 4,1 mmHg) em uma faixa de ação de 7 a 27%, similar ao efeito observado para o NaNP (11a 32%). Uma correlação dose-efeito positiva foi observada. A toxicidade foi avaliada em cultura de células (IC50) e pela toxicidade aguda em camundongos (LD50). Estudos da citotoxicidade foram conduzidos em cultura de hepatócitos (células metabolizantes), V79 (células não metabolizantes) e V79 tratada com o complexo biotransformado pelos hepatócitos. Hepatócitos de rato foram isolados pelo método de perfusão com colagenase em duas etapas do fígado inteiro. A viabilidade celular foi avaliada por três ensaios, os quais são indicativos de citotoxicidade: redução do MTT, incorporação do vermelho neutro (VN) e conteúdo de ácidos nuclêicos (DNA). Esses ensaios permitiram a avaliação dos valores de IC50 para o trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 em células V79 e hepatócitos. Na cultura de hepatócitos valores de IC50 superiores a 3,0 mM foram obtidos para todos os ensaios realizados, sugerindo uma baixa toxicidade do complexo. Para cultura de células V79, nossos resultados mostraram efeito citotóxico similar para os três ensaios investigados, com valores de IC50 ao redor de 2,0 mM, mostrando ser este composto menos tóxico que o NaNP (IC50 ~ 0,056 mM). O produto da biorransformação foi avaliado e mostrou baixa toxicidade para os ensaios de DNA, MTT e alta toxicidade para o VN, i.e., o composto biotransformado modificou a integridade lisossomal. A toxicidade aguda foi avaliada e um valor de LD50 igual a 216 mg/Kg foi obtido indicando baixa toxicidade do complexo in vivo. / Abstract: The vascular pharmacology of endogenously synthesised NO is largely predicted by the known effects of nitrovasodilator drugs. These exogenous agents, such as sodium nitroprusside, act as NO donors and exert direct hypotensive effects in vivo promoting a decrease in systemic vascular resistance by increasing levels of cyclic GMP. We have been interested in the possibility that trans-nitrosylammine ruthenium complexes, might serve as vehicles for the controlled delivery of NO into a biological system and thus display useful pharmacological effects, promoting hypotensive effect. The aim of this work was to investigate the hypotensor effect and toxicity of a new ruthenium complex t-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 due to their ability to spontaneously NO release in aqueous solution. Direct measurements of blood pressure were performed in chronically instrumented adult male Wistar rats. The hypotensor effect was determined in conscious rats (n=10) submitted to in bolus intravenous doses of the trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 and sodium nitroprusside (NaNP). Concentration range of 0.0025 to 0.08 µmols/Kg induced hypotensive response (MAP control: 104 ±4.1 mmHg) immediately in action range of 7 to 27% similar to that observed for NaNP effect (11 to 32%). A positive dose-effect correlation was observed. The toxicity was evaluated on cell culture (IC50) and by acute dose in mice. Cytotoxicity studies were carried out on cultures of rat hepatocytes (metabolizant cells), V79 (non-metabolizant cells) and V79 treated with the supernatant of the biotransformed complex by hepatocytes. Hepatocytes were isolated from adult male Wistar rats by the two-step collagenase liver perfusion. Cell viability was evaluated by three endpoints which are indicative of cytotoxicity: MTT reduction, Neutral Red Uptake (NRU) and Nucleic Acid Content (DNA). These assays permit the evaluation of IC50 values of trans- [Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 on V79 and rat hepatocyte cells. On hepatocyte culture values higher than 3.0 mM were determined for all tests, suggesting a low toxicity for the complex. For V79 cultures our results showed a similar cytotoxic effects for the three studied endpoints with an IC50 ranging around 2.0 mM, showing be less toxic than NaNP. The biotransformated product was evaluted and showed low toxicity for DNA, MTT assays and high toxicity for NRU, i.e., the compound biotransformed changed the lysosomal integrity. The acute toxicity was carried out and a LD50 value of 216 mg/Kg was obtained indicating a low toxicity in vivo. / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-13T21:02:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Danielle Rocha do Val.pdf: 2561298 bytes, checksum: 87a6411a7d7f0d8d8a4e52ec8cebcd8e (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-18T14:59:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Danielle Rocha do Val.pdf: 2561298 bytes, checksum: 87a6411a7d7f0d8d8a4e52ec8cebcd8e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-18T14:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Danielle Rocha do Val.pdf: 2561298 bytes, checksum: 87a6411a7d7f0d8d8a4e52ec8cebcd8e (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / FACEPE / As disfunções temporomandibulares (DTM) abrangem uma série de problemas clínicos que envolvem os músculos mastigatórios e/ou articulação temporomandibular (ATM) e estruturas associadas, sendo a segunda fonte mais comum de dor orofacial. Apesar da farmacoterapia diversa para tratamento das DTMs, nenhuma das intervenções terapêuticas disponíveis na atualidade é curativa, limitando-se, portanto a aliviar os sinais e sintomas da doença. Avaliar a segurança e a atividade antinociceptiva e anti-inflamatória de um composto semissintético derivado de Tephrosia toxicaria Pers. Realizou-se processo de hidrogenação da 5- hidroxi-6”,6”-dimetilcromeno-[2”,3”:7,8]-flavanona para obtenção 5-hidroxi-6”,6”-dimetilcromano-[2”,3”:7,8]-flavanona (PHO). Para avaliar os efeitos sistêmicos da administração subaguda, camundongos machos e fêmeas receberam diariamente PHO (10 μg/kg; per.os ou i.p.) durante 14 dias. O grupo controle recebeu solução salina durante o mesmo período. No 15º dia foi realizada eutanásia para avaliação de parâmetros bioquímicos e posterior análise histopatológica dos órgãos. Na toxicidade aguda camundongos machos e fêmeas em jejum receberam PHO (1, 10 e 100 mg/kg; per.os ou i.p.) ou solução salina, e foram observados por um período de 48 h. Para avaliação se o efeito farmacológico da PHO (10 μg/kg; per.os) interferia na atividade motora dos animais foi realizado o teste do rota rod em ratos. Avaliou-se ainda o efeito anti-inflamatório e antinociceptivo de PHO no modelo de hipernocicepção inflamatória induzida por formalina na ATM. Ratos foram pré-tratados (per.os.) com PHO (0,1, 1 ou 10 μg/kg) 60 min antes da injeção de formalina (1,5%) intraarticular (i.art.). O grupo Sham recebeu solução salina (i.art.) e o grupo Formalina recebeu formalina (1,5%) (i.art.). A resposta comportamental nociceptiva foi avaliada durante um período de observação de 45 min. Os tecidos periarticulares foram coletados para dosagem de TNF-α, IL-1β, IL-8, IL-10 pelo método ELISA e avaliação da expressão de ICAM-1 e CD55. Além disso, foram realizados os ensaios da análise da permeabilidade vascular. Em outra série de experimentos investigamos o envolvimento da via HO-1 e NO/GMPc/PKG/K+ATP no efeito antinoceceptivo de PHO. A partir do processo de hidrogenação, obteve-se 5-hidroxi-6”,6”-dimetilcromano-[2”,3”:7,8]-flavanona (PHO) que gerou o depósito de patente do nosso grupo sob número de registro: BR1020130287938 no INPI. PHO 10 μg/kg durante 14 dias não alterou a variação ponderal, o peso úmido dos órgãos e parâmetros bioquímicos em relação ao grupo salina. No teste de toxicidade aguda não ocorreu nenhuma morte em todas as doses administradas.No teste do Rota-rod não houve alteração motora nos grupos tratados com o composto. PHO 10 μg/kg) reduziu (p <0,05) a hipernocicepção inflamatória, quando comparado ao grupo formalina. Reduziu o extravasamento plasmático, os níveis TNF-α, IL-1β, IL-8 e aumentou IL-10 nos tecidos periarticulares quando comparado ao grupo formalina (p <0,05). A expressão de ICAM-1 e CD55 foi reduzida após a administração de PHO quando comparado ao grupo não tratado (p <0,05). O efeito antinociceptivo de PHO é multimodal, não atuando pela via do HO-1/GMPc/PKG, porém dependendo da integridade das vias do NO e canais K⁺ sensíveis a ATP. PHO posssui atividade antinociceptiva e anti-inflamatória, Não apresentando toxicidade, com valor biotecnológico para o tratamento de dor orofacial. / Temporomandibular disorders (TMD) encompass clinical conditions involving masticatory muscles and/or the temporomandibular joint (TMJ) as well as the associated structures. Even with the drug therapy available for the TMD treatment, none of the interventions are definitive since the treatments only relieve the symptoms associated with these disorders. To evaluate the safety, antinociceptive and anti-inflammatory activities of a semi-synthetic molecule derived from Tephrosia toxicaria Pers. 5-hydroxy-6”,6”-dimethyl chroman-[2”,3”:7,8]-flavone underwent hydrogenation, producing 5-hydroxy-6”,6”-dimethyl chromone - [2”,3”:7,8]-flavone (PHO). To evaluate systemic effects, male and female mice received daily PHO (10 μg/kg; per.os or i.p.) for 14 days. Negative control groups received saline solution. Animals were euthanised on day 15 to assess biochemical parameters and histopathological analysis of the organs. In the acute toxicity assay, male and female received PHO (10 μg/kg; per.os or i.p.) or saline solution, and were observed for 48 hours. PHO (10 μg/kg; per.os) was also assayed for motor impairment in the rota-rod test in rats. The anti-inflammatory and antinociceptive effects of PHO were assayed in the formalin-induced TMJ inflammatory hypernociception. Rats were pre-treated (per.os.) with PHO (0.1, 1 or 10 μg/kg) 60 min before intra-articular formalin (1.5%) injection. Sham groups received saline solution intra-articular injection. Nociceptive responses were evaluated during 45 minutes. Periarticular tissues were excised for TNF-α, IL-1β, IL-8, IL-10 levels (ELISA) and ICAM-1/CD55 expression. Further, the Evans blue vascular permeability assay was carried out. In another series of experiments, we investigated the involvement of the HO-1 and NO/GMPc/PKG/K+ATP pathways in the PHO nociceptive effects. 5-hydroxy-6”,6”-dimethyl chromone - [2”,3”:7,8]-flavone was patented under the registration number (BR1020130287938) at INPI. PHO 10 μg/kg did not alter body mass, wet organ weight, and biochemical parameters after 14 days. In the acute toxicity test, no death episode occurred at the tested doses. The rota-rod test showed no motor impairment. PHO (10 μg/kg) reduced (p<0.05) inflammatory hypernociception, vascular permeability, TNF-α, IL-1β, IL-8 levels, and promoted IL-10 level increase in the periarticular tissues. ICAM-1/CD55 expression was reduced after PHO administration. The PHO antinociceptive effect is polymodal, not acting via the HO-1/GMPc/PKG pathway, but depending on the NO and ATP-sensitive K⁺ channels integrity. PHO possesses antinociceptive and anti-inflammatory activities as well as it is not toxic in animals. This product, thus, presents biotechnological relevance in the treatment of orofacial pain.

Título original: Caracterização de chorume e possibilidades de tratamentos para descarte / Orientador: Dejanira de Franceschi de Angelis / Resumo: O chorume produzido em aterros sanitários é o resultado da decomposição físico-química e microbiológica dos resíduos urbanos, podendo variar muito em sua composição. Para se desenvolver tratamento e descarte eficientes e seguros há a necessidade de caracterização, desenvolvimento de técnicas adequadas de tratamento e estudo sobre o impacto do descarte dos resíduos destes tratamentos no ambiente. Este trabalho testou tratamento microbiológico com microrganimos isolados do chorume e com microalgas; tratamento com adsorventes como carvão ativado, hidrotalcita e sementes de M. oleifera; aprofundou estudos sobre a introdução dos resíduos do tratamento com hidrotalcita no ambiente. Foram feitas análises físico-químicas, microbiológicas, respirométricas e de toxicidade com o chorume bruto, tratado e com o lodo do tratamento. A caracterização do chorume constatou pequeno número de bactérias heterotróficas e fungos indicando condições desfavoráveis para crescimento microbiológico. Coliformes totais e E. coli alcançaram valores médios de 17900 e 890 NMP/100mL, respectivamente. As análises físico-químicas do lixiviado indicaram valores elevados para condutividade, cor, turbidez, DQO, DBO5, amônia, boro, sódio e cloretos. Os tratamentos biológicos não se mostraram eficientes na remoção dos parâmetros exigidos pela legislação, devido às altas concentrações de sais, amônia e matéria orgânica recalcitrante. O tratamento com hidrotalcita produziu os melhores resultados, para remoção de condu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The leachate produced in landfills is the result of physicochemical and microbiological decomposition of urban waste and its composition can vary widely. In order to develop efficient and safe treatment and disposal, there is a need for characterization, development of adequate treatment techniques and study of the impact of these treatment residues on the environment. This work tested microbiological treatment with microorganisms isolated from landfill leachate and with microalgae; treatment with adsorbents like activated carbon, hydrotalcite and M. oleifera seeds and deepened studies about introduction of residues of treatment with hydrotalcite in the environment. Physical-chemical, microbiological, respirometric and toxicity analysis were performed with the treated and raw leachates and with the sludge of treatment. The leachate characterization revealed a small number of heterotrophic bacteria and fungi. Total coliforms and E. coli reached mean values of 17900 and 890 NMP/100 mL, respectively. The physicochemical analysis indicated high conductivity, color, turbidity, COD, BOD5, ammonia, boron, sodium and chlorides. The biological treatments were not efficient in removing the parameters required by the legislation due to high concentrations of salts, ammonia and recalcitrant organic matter.Treatment with hydrotalcite produced the best results to remove conductivity (51%), turbidity (58%), BOD5 (95%), boron (40%) and ammonia (35%), also removed COD (43%) and color (70%) bu... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Sergio Antonio De Bortoli / Coorientador: Alessandra Marieli Vacari / Banca: Roberto Marchi Goulart / Banca: Raphael de Campos Castilho / Resumo: Um dos principais problemas para o cultivo de brássicas é o dano causado pela traça-das-crucíferas, Plutella xylostella (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Plutellidae), o que implica na aplicação de grandes volumes de agrotóxicos. Diversos inseticidas são empregados no controle de P. xylostella. Indoxacarbe foi o primeiro inseticida bloqueador de canais de sódio comercializado, com mecanismo de ação diferente do DDT e dos piretroides, apresentando várias vantagens, como baixa toxicidade aos organismos benéficos. Porém, aplicações frequentes de inseticidas para controle de P. xylostella, combinado com fatores biológicos da praga, podem favorecer a seleção de indivíduos resistentes. Até o momento, P. xylostella desenvolveu níveis de resistência a 95 ingredientes ativos, existindo na literatura mais de 55 relatos de resistência para o indoxacarbe, em sete países de diferentes continentes, inclusive no Brasil. Nesse sentido, este estudo objetivou determinar os efeitos subletais e residuais do indoxacarbe em duas populações de P. xylostella, sendo uma coletada no campo e outra de laboratório (suscetível), avaliando e comparando a toxicidade desse inseticida em diferentes concentrações e analisando o comportamento destas duas populações e assim formar uma base teórica para melhorar o manejo desta praga. Foram realizados bioensaios com duas populações (PC- de campo e PL- de laboratório-suscetível) de P. xylostella com o inseticida indoxacarbe na dose comercial (100mg.L-1), avaliando os ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The main problem for brassica crops is the damage caused by the diamondback moth, Plutella xylostella, which has led to the application of large volumes of pesticides. Several insecticides are employed in the control of P. xylostella. Indoxacarbe was the first commercially available sodium channel blocker insecticide, with a different mechanism of action than DDTs and pyrethroids, has several advantages, such as low toxicity to beneficial organisms. However, frequent applications of these insecticides to control P. xylostella, combined with biological factors of the pest are favoring the selection of resistant individuals. So far P. xylostella has developed levels of resistance to 95 active ingredients and there are in the literature more than 55 reports of resistance to indoxacarb in seven countries on different continents, including Brazil. In this sense, the objective was to determine the residual and sublethal effects of indoxacarb in two populations of P. xylostella, one collected in the field and the other in the laboratory (susceptible), evaluating and comparing the toxicity of this insecticide in different concentrations and analyzing the behavior of these two populations and thus form a theoretical basis to improve the management of this pest. Bioassays were performed with two populations (PC- field and PL- laboratory) of P. xylostella with the insecticide in commercial dose indoxacarb (100 mg.L-1), evaluating the effects of residual products 1, 3, 7, 14 and 21 days after spray. LC50 was also estimated and the sublethal effects of this product applied and evaluated after 48 h were evaluated using the sublethal concentrations of LC5 (0.37 and 1.01 mg.L-1), LC15 (0.87 and 2.06 mg. L-1) and LC25 (1.44 and 3.16 mg.L-1) for PL and PC populations by analyzing some biological characteristics of the individuals. The commer... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ederio Dino Bidoia / Banca: Marcia Nitschke / Banca: Adriano Pinto Mariano / Banca: Roberta Barros Lovaglio / Banca: Maria Aparecida Marin Morales / Resumo: Grande atenção vem sendo dada a contaminação por hidrocarbonetos resultante das atividades da indústria petroquímica. Dentre as tecnologias utilizadas na remediação e tratamento de áreas impactadas, a biodegradação vem despontando como um dos principais campos de pesquisa em microbiologia, se apresentando como uma técnica bastante eficaz. Dessa forma, o presente trabalho visou estudar a biodegradação de gasolina, óleo diesel e dos compostos benzeno, tolueno, etilbenzeno e o-xileno (BTE(o-)X) por Pseudomonas putida CCMI 852 com plasmídeo TOL pWW0, com aplicação de biossurfactante, para aumentar a biodisponibilidade de compostos hidrofóbicos, produzido por Pseudomonas aeruginosa LBI a partir do soro de ricota, como fonte de carbono e com avaliação da toxicidade com sementes de alface (Lactuca sativa) e genotoxicidade com sementes de cebola (Allium cepa), antes e após a biodegradação. Foi observado um potencial de produção de biossurfactantes do tipo ramnolipídios em soro de ricota como substrato alternativo para produção, com rendimento de 0,45 g L-1 . O monitoramento da biodegradação dos hidrocarbonetos, foi realizado por ensaios colorimétricos utilizando os indicadores redox DCPIP e TTC e a quantificação foi realizada por cromatografia gasosa acoplada com espectrometria de massa (CG/MS). Os testes colorimétricos foram eficientes e bastante eficaz para verificar a atividade bacteriana, indicando o potencial do microorganismo em degradar esses compostos, fato este que comprovou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Great attention has been given to the contamination by hydrocarbons from the petrochemical industry. Among the technologies used in the remediation and treatment of impacted areas, biodegradation has emerged as a very effective technique, which is now among the main research fields in microbiology. Thus, this thesis aimed to study the biodegradation of benzene, toluene, ethylbenzene and o-xylene (BTE(o-)X) by Pseudomonas putida CCMI 852 with the TOL pWW0 plasmid, as well as biosurfactant application to increase the bioavailability of hydrophobic compounds produced by Pseudomonas aeruginosa LBI using ricotta serum as the source of carbon. The evaluation of toxicity with lettuce seeds (Lactuca sativa) and genotoxicity with onion seeds (Allium cepa), before and after biodegradation, was also considered. The potential production of rhamnolipidic biosurfactants in ricotta whey as an alternative substrate yielded 0.45 g L-1. Monitoring the biodegradation of hydrocarbons was performed by colorimetric assays using the both DCPIP and TTC redox indicators. Quantification was performed by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC / MS). The colorimetric tests were efficient and quite effective to verify the bacterial activity, indicating the potential of the microorganism to degrade these compounds. This fact was evidenced by GC / MS analysis. The plasmid TOL pWW0 found naturally in the bacterial line P. putida CCMI 852, gives the cells the ability to degrade hydrocarbons present in gasoline more easily relative to diesel oil. P. putida CCMI 852 was not able to metabolize benzene, nor individually, or in mixtures, indicating that the route of degradation of this specific strain is the TOL route. In the BTE(o-)X mixture, benzene caused a negative effect on the degradation of toluene, which had a degradation rate of 33.5% lower than its individual ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Renata Fracácio / Banca: Leonardo Fernandes Fraceto / Banca: Cleoni dos Santos Carvalho / Resumo: O uso de sedimentos formulados em laboratório vem sendo largamente adotado e recomendado por organizações de proteção ambiental e outras entidades internacionais de importância, como U.S.EPA, OECD e ASTM, devido, principalmente, à sua fácil reprodutibilidade por diferentes laboratórios e por ser livre de organismos e contaminantes indesejados no estudo. Visando a representatividade de ambientes lóticos tropicais, este estudo propôs analisar diferentes formulações de sedimento para a aplicação em estudo toxicológico de interferentes endócrinos (IE), sendo eles o 17β-estradiol (E2) e 17α-etinilestradiol (EE2). Foram avaliados os parâmetros oxigênio dissolvido, dureza e pH de 5 formulações de sedimento durante um período de 15 dias e a adaptação da espécie bentônica Hyalella azteca com relação aos parâmetros sobrevivência, crescimento e reprodução. A toxicidade do E2 e EE2, ambos à concentração de 30 ng/L, foi verificada sobre o organismo nectônico Ceriodaphnia dubia, exposto por 8 dias em solução extraída da formulação de sedimento que continha menor quantidade de matéria orgânica, contaminada em laboratório. Os parâmetros avaliados foram sobrevivência e reprodução, sendo utilizados os métodos estatísticos de Kruskal- Wallis, teste t e teste t por bioequivalência. O comportamento químico dos compostos foi analisado quanto ao tempo de degradação em ambiente com sedimento formulado (após 2, 24 e 48 horas de contato) e à capacidade de retenção ao sedimento após 2 horas de contato através de quantificação por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC-MS). Os resultados mostraram que os sedimentos formulados contendo menores proporções de matéria orgânica (1 e 3% em massa) tiveram melhor estabilização em relação ao pH e também boa aceitação pela espécie H. azteca. Porém, o ambiente composto pelo mesmo sedimento não foi ideal para testes com C. dubia... / Abstract: The use of laboratory-formulated sediments have been widely adopted, and recommended by environmental protection organizations and other international agencies as USEPA, OECD, and ASTM, mainly for easy reproducibility by different laboratories, and for being free of unwanted contaminants and indigenous organisms. Aiming at the representation of tropical lotic environments, different sediment formulations were analyzed for use in toxicology studies of endocrine disruptors (EI), namely 17β-estradiol (E2) and 17α-ethinyl estradiol (EE2). Five different formulations were evaluated regarding dissolved oxygen, water hardness and pH over a period of 15 days, and on the adaptation of the benthic species Hyalella azteca regarding survival, growth, and reproduction parameters. The toxicity of E2 and EE2, both at the concentration of 30 ng/L, was observed in the nektonic organism Ceriodaphnia dubia, exposed to a solution extracted from spiked formulated sediment containing a minor amount of organic matter in a 8-days test. Survivability and reproduction parameters were evaluated using Kruskal-Wallis, t-test and bioequivalence t-test statistical methods. Chemical behavior of the compounds was analyzed regarding environmental degradation time in formulated sediment (after 2, 24, and 48 hours of contact), and sediment retention capacity after 2 hours of contact by quantification by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Results showed that the formulated sediments which contained smaller fractions of organic matter (1% and 3% dry weight) had better stabilization in relation to pH, and good acceptance by the species H. azteca. However, the formulated sediment environment was not ideal for C. dubia, which was therefore replaced by filtered interstitial water for E2 and EE2 tests. There was a statistically significant reduction in the number of newborns when exposed to control sediment and contaminants (Kruskal-Wallis, t-test, and bioequivalence ... / Mestre

Orientador: Renata Fracácio Francisco / Resumo: A contaminação dos ambientes aquáticos por metais é uma preocupação mundial, pois são elementos bioacumulativos e persistentes. Diversos desses compostos possuem a capacidade de alterar o sistema endócrino (denominados interferentes endócrinos - IE), sendo o cádmio (Cd) e o zinco (Zn) suspeitos dessa atuação, segundo a literatura. Para verificação dessa potencialidade algumas análises biológicas são indicadas como: 1) a realização do teste de dessorção no auxílio ao posterior cálculo do fator de bioconcentração (FBC), para detecção do real valor incorporado do contaminante pelo organismo e predição dos efeitos tóxicos causados; 2) análises histológicas de órgãos como as gônadas e o fígado e 3) análise de vitelogenina (VTG) no fígado de machos. Dessa forma o objetivo deste trabalho foi averiguar a atuação endócrina dos metais Cd e Zn em concentrações permitidas em ambientes aquáticos para a proteção da vida aquática por meio de: a) estudo do tempo de dessorção de Cd e Zn da parte externa do organismo; b) determinação do FBC de Cd e Zn em D. rerio após exposição crônica; c) avaliação da possibilidade de Cd e Zn provocarem alterações histológicas em gônada e fígado de machos e fêmeas de D. rerio e d) análise da capacidade de Cd e Zn em induzir a produção de VTG no fígado de machos de D. rerio. Para a realização do teste de dessorção, organismos adultos de D. rerio, foram expostos por 72 horas a Cd (1 µg de Cd/L) e Zn (180 µg de Zn/L) seguindo-se a lavagem do organismo-teste em ácido nítrico 2% por diferentes tempos (0h; 5; 60; 90; 120; 150 e 180 minutos) e posterior construção da curva de dessorção. As análises de FBC, histologia e histoquímica foram realizadas após exposição crônica (21 dias) em regime semi-estático, com troca total da solução a cada ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The contamination of aquatic environments by metals is a global concern because they are bioaccumulative and persistent elements. Several such compounds have the ability to change the endocrine system (called endocrine disruptors - ED), and cadmium (Cd) and zinc (Zn) that suspicious activity, according to the literature. To verify the potential some biological analyzes are given as: 1) the realization of the desorption test to aid the subsequent calculation of bioconcentration factor (BCF), for determining the real corporate value of the contaminant by the body and prediction of toxic effects; 2) histological analysis of organs such as the gonads and liver and 3) analysis of vitellogenin (VTG) in the liver of males. Thus the aim of this study was to determine the endocrine actions of Cd and Zn in allowed concentrations in aquatic environments for the protection of aquatic life through: a) study time desorption of Cd and Zn from outside the body; b) determination of CBF of Cd and Zn in D. rerio after chronic exposure; c) assessment of the possibility of Cd and Zn cause histological changes in the liver and gonads of males and females of D. rerio d) analysis of the ability of Cd and Zn in inducing the production of VTG in the liver of males of D. rerio. To perform the desorption test, adult organisms of D. rerio were exposed for 72 hours Cd (1 µg/L of Cd) and zinc (180 µg/L of Zn) followed by washing of the organism under test 2% nitric acid for different times (0 h, 5, 60, 90, 120, 150 and 180 minutes) and subsequent construction of desorption curve. The analyses of BCF, histologic and histochemical were performed after chronic exposure (21 days) under semi-static system, with complete exchange of the solution every 72 hours in separat concentrations allowed by national legislation (1 µg of Cd/L and 180 µg of Zn/L) and international ... (Complete abstract electronic access below) / Mestre