Orientador: Renata Fracácio / Resumo: Poluentes metálicos são considerados substâncias potencialmente tóxicas capazes de interferir no sistema biológico, causando efeitos adversos no organismo exposto e em seus descendentes. Os efeitos de cádmio e de zinco em microcrustáceos são pouco descritos na literatura e a realização de estudos com concentrações semelhantes às detectadas nos ambientes naturais possibilita respostas mais próximas da realidade. Diante dessa questão, a presente pesquisa tem como objetivo avaliar os efeitos de metais, sobre Ceriodaphnia dubia, em exposição crônica (via água e alimento), por meio de testes ecotoxicológicos, avaliando-se os aspectos reprodutivos, viabilidade e recuperação biológica da geração F1. Foram realizados testes de toxicidade com duas diferentes concentrações dos metais Cd e Zn, sendo essas concentrações ambientalmente seguras para a proteção da vida aquática com base na legislação nacional vigente e concentrações detectadas em ambientes naturais brasileiros. Posteriormente, a geração F1 exposta por curto período foi mantida em condição livre de contaminante, seguindo-se a avaliação toxicológica por análise quantitativa e morfológica de neonatos, análise de metais em tecidos biológicos de C. dubia geração parental e F1. As análises das concentrações de Zn foram feitas em Espectrometria de Emissão Ótica com Plasma Indutivamente Acoplado (ICP OES), enquanto as de Cd em Espectrofotômetro de Absorção Atômica - Forno de Grafite/EEA, no entanto, para ambos os metais não foram detectados bioconcentração de elementos metálicos. Os resultados demostram que Zn e Cd alteram o padrão reprodutivo de C. dubia, causando toxicidade crônica, sendo assim, pode-se concluir que tanto as concentrações encontradas no meio ambiente, quanto às consideradas seguras para a proteção da vida ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Metallic pollutants are considered potentially toxic substances that can interfere with the biological system, causing adverse effects on the exposed organism and its descendants. The effects of cadmium and zinc in microcrustaceans are not very described in the literature and studies with similar concentrations to those found in natural environments allows closer to reality answers. Faced with this question, this research aims to evaluate the effects of metals on Ceriodaphnia dubia, in chronic exposure (via food and water) through ecotoxicological tests, by evaluating reproductive aspects, viability and biological recovery of the F1 generation. Toxicity tests were performed with two different concentrations of Cd and Zn, and these environmentally safe concentrations for the protection of aquatic life based on current national legislation and concentrations detected in Brazilian natural environments. Thereafter, the F1 generation was exposed for a short period kept contaminant-free condition, followed by the toxicological evaluation by quantitative and morphological examination of neonates, metals analysis of biological tissues of C. dubia parental and F1 generation. Analysis of the Zn concentrations were made in Spectrometry Optical Emission Inductively Coupled Plasma (ICP OES), while Cd in Atomic Absorption Spectrophotometer - Furnace Graphite / EEA, however, for both metals were not detected bioconcentration metallic elements. The results demonstrate that Zn and Cd alter the reproductive pattern C. dubia, causing chronic toxicity, and can therefore be concluded that both the concentrations found in the environment, for the considered safe for the protection of aquatic life committed reproducing the test organism as well as the development of the offspring. But when the F1 generation is placed in contaminant-free environment may be more ... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2008. / Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2009-09-22T17:02:54Z No. of bitstreams: 1 2008_SandraRLonghin_completa.pdf: 1902688 bytes, checksum: 664e6fc3291bfecdcc45c6794b75f0b3 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-06-30T20:37:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_SandraRLonghin_completa.pdf: 1902688 bytes, checksum: 664e6fc3291bfecdcc45c6794b75f0b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-30T20:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_SandraRLonghin_completa.pdf: 1902688 bytes, checksum: 664e6fc3291bfecdcc45c6794b75f0b3 (MD5) Previous issue date: 2008 / A presença de compostos farmacêuticos e de higiene pessoal no ambiente aquático tem sido objeto de preocupação entre a comunidade científica. Uma forma de aporte dessas substâncias ocorre por meio dos efluentes das indústrias farmacêuticas que possuem baixa biodegradabilidade e alta toxicidade. A preocupação com relação aos efluentes da produção industrial dos antibióticos beta-lactâmicos se deve ao fato de que os mesmos podem promover efeitos negativos como o desenvolvimento de organismos resistentes no ambiente aquático. O presente estudo avalia a eficiência dos Processos Oxidativos Avançados (POA) homogêneo UV, H2O2/UV, Fe2+/H2O2, Fe2+ H2O2/UV, Fe3+/ H2O2, Fe3+/ H2O2/UV e Fe2+/ H2O2/solar na degradação de amostras sintéticas dos antibióticos AMX e AMP. Para esses POA investigou-se o efeito de parâmetros como a concentração dos íons Fe+2, Fe+3, a concentração de H2O2, a ação da radiação UV e solar na degradação de AMX e AMP. O processo Fenton (Fe2+/H2O2) apresentou os melhores resultados mostrando-se bastante promissor. Esse processo é eficiente, simples e de baixo custo A avaliação da eficiência dos processos se deu por meio do acompanhamento da variação da concentração de AMX e AMP por espectrofotometria no UV, pela redução da DQO durante 60 min de reação e pela avaliação da presença de compostos carbônicos nos resíduos sólidos da degradação por espectrometria no IR. A toxicidade e a biodegradabilidade dos produtos formados pelo processo Fenton também foram objeto de estudo. A toxicidade foi avaliada pela influência na determinação da dose letal para 50% dos organismos (DL50) em Artemia salina e pela inibição do crescimento radicular e alteração no ciclo celular mitótico do organismo Allium cepa. Os resultados observados para a redução da concentração dos analitos AMX e AMP foram acima de 95,0% para os POA Fenton e foto-Fenton após 60 min de reação. A redução da DQO observada para o processo Fenton atingiu 75% para AMX e 81% para AMP. O resíduo sólido resultante do processo de oxidação com Fe2+/H2O2 para AMX e AMP mostrou, para ambos os antibióticos, a presença de compostos carbônicos. As respostas para toxicidade dos produtos gerados resultaram para o sistema-teste Artemia salina um DL50=70% (v/v) após 48 h de ensaio, para AMX/Fenton e DL50= 50% (v/v), após 72 h, de ensaio para AMP/Fenton. No sistema-teste Allium cepa, a toxicidade avaliada pelo crescimento da raiz foi observada para soluções acima de 5% de diluição (v/v) tanto para AMX quanto para AMP. Quanto à genotoxicidade, os resíduos de degradação apresentaram para o sistema Allium cepa alterações no ciclo celular mitótico, o que indica toxicidade podendo promover mutação no conteúdo genético celular. A biodegradabilidade (DBO/DQO) dos resíduos do tratamento por Fe2+/H2O2 mostraram uma recalcitrância indicando a necessidade de tratamento combinado como químico/biológico para este efluente. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The presence of active pharmaceutical substances and personal-care products in aquatic environment has been a great concern for the scientific community. Pharmaceutical industries are one of the main sources of these types of compounds, which are characterized by low degradability and high toxicity. The antibiotic preparation may negatively affect living organisms in water bodies. However, some organisms in the water bodies may become resistant after their contact with the bioactive chemical wastes. In the present work the efficiency of some homogeneous Advanced Oxidation Process (AOP) UV, H2O2/UV, Fe2+/H2O2, Fe2+ H2O2/UV, Fe3+/ H2O2, Fe3+/ H2O2/UV e Fe2+/ H2O2/solar radiation was investigated toward the degradation of AMX and AMP. The effect of relevant experimental parameters Fe+2, Fe+3, H2O2 concentration and the UV radiation was investigate. The Fenton process (Fe2+/H2O2) offered the most promising results, mainly accounts of high degradation capacity higher than 97% at reaction time 60 min. This process is high operational, simplicity and low coast. The efficiency of Fenton process was available using UV-Vis spectral data and chemical oxygen demand (COD). The results showed that AOP Fenton and AOP photo-Fenton are able to reduce near 100% of the concentrations of AMX and AMP after 60 min of reaction. The reduction of COD using Fenton process reached 75% and 81% for AMX and AMP, respectively. Solid residues from AMX and AMP oxidation reactions produced by Fenton reagent was evaluated by infrared spectroscopy (IR). The IR results showed the presence of carbonic compounds for both antibiotics. Toxicity tests with Artemia salina and Allium cepa were performed because of fast answers related to the toxicity of by-products from oxidation process. Artemia salina was efficient for the AMX/Fenton and AMP/Fenton, which showed DL50= 70% (v/v), after 48 h, and DL50= 50% (v/v), after 72 h, respectively. Allium cepa was efficient for chemical solution greater than 5% dilution (v/v) for both AMX and AMP considering the effects of toxicity on roots growth. Allium cepa showed changes in the mitotic cellular cycle for both AMX and AMP under Fenton reagent. It indicates an eventual mutation in the cellular genetic content. The biodegradability (BOD/COD) of Fenton process residue was investigated and shows the low biodegradation for AMX residues.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-07-18T12:32:10Z No. of bitstreams: 1 2013_PaolinRocioCaceresVelez.pdf: 3507403 bytes, checksum: 3655b280cbad1eefeb53e98edde2620f (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-07-19T18:16:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PaolinRocioCaceresVelez.pdf: 3507403 bytes, checksum: 3655b280cbad1eefeb53e98edde2620f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-19T18:16:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PaolinRocioCaceresVelez.pdf: 3507403 bytes, checksum: 3655b280cbad1eefeb53e98edde2620f (MD5) / Alguns materiais, entre os quais o mineral vermiculita, estão sendo usados como absorventes de compostos orgânicos na água; entretanto, pouco é conhecido sobre a toxicidade atribuída a sua exposição. No presente trabalho, utilizou-se o peixe Danio rerio para avaliar os possíveis efeitos toxicológicos advindos da exposição aguda ao mineral Vermiculita Expandida (VE) e ao nanocompósito Vermiculita Expandida Magnética (VEM). Para tanto, utilizou-se biomarcadores histopatológicos e de genotoxicidade (fragmentação de DNA detectada por meio do teste do cometa, ensaio de micronúcleos e anormalidades nucleares). Foi realizada ainda, a caracterização morfológica da VE e da VEM por meio de Microscopia Eletrônica Transmissão e Varredura, cuja composição química foi determinada por Espectrometria de Energia Dispersiva de Raios X (EDS). Para a avaliação toxicológica, peixes adultos foram expostos a concentrações crescentes (0, 25, 50, 100, 150 e 200 mg/L) por 96 horas, constituindo os grupos experimentais VE (VE0, VE25, VE50, VE100, VE150, VE200) ou VEM (VEM0, VEM25, VEM50, VEM100, VEM150, VEM200). Cada subgrupo foi constituído por oito peixes, com posterior realização de duplicatas nas mesmas condições experimentais. Os peixes foram observados quanto à ocorrência de alterações clínicas e comportamentais, morbidade e mortalidade durante o período de exposição. Posteriormente, os peixes foram eutanasiados, o sangue foi coletado para a avaliação da genotoxicidade e os órgãos foram coletados para avaliação histopatológica. Após avaliação pela EDS e das micrografias, constatou-se que a VE apresentou principalmente em sua composição oxigênio, magnésio e alumínio e que a VEM apresentou como elementos principais tais constituintes e sobretudo o ferro. Por meio da Microscopia Eletrônica Transmissão verificou-se que as nanopartículas de ferro estavam adsorvidas sobre a superfície da VE, apresentando diâmetro médio de 10,00±2,76nm. O teste de cometa indicou um aumento significativo da fragmentação apenas para o grupo exposto a maior concentração da VE em relação ao controle (p≤0,05). Por outro lado, em todos os grupos tratados com VEM observou-se um aumento significativo de fragmentação de DNA quando comparados ao grupo controle (p˂0,001). Quanto à ocorrência de anormalidades nucleares ou de micronúcleos não foram observadas diferenças significativas entre os grupos experimentais, assim como, não foram observadas alterações histológicas significativas. Entretanto, no lúmen intestinal, nos enterócitos e células caliciformes foram observadas a presença da VE e da VEM nos grupos expostos quando comparados com os grupos controles. Os resultados da fragmentação do DNA sugerem que VE causa fragmentação do DNA na maior concentração (VE200), entretanto, esse efeito genotóxico foi observado em todos os grupos expostos à VEM, sendo um indicativo de que a presença de nanopartículas de ferro teria a capacidade de influir na toxicidade observada. Entretanto, estudos adicionais devem ser realizados para comprovação destes resultados. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Some materials, including the mineral vermiculite, are used as absorbents of organic compounds in water; however, little is known about the toxicity assigned to its exposure. In this study, we use Danio rerio to assess the toxicological effects by acute exposure to the mineral expanded vermiculite (EV) and the nanocomposite magnetic expanded vermiculite (MEV). For that, we used histopathological and genotoxicological (DNA fragmentation by comet assay, micronucleus test and nuclear abnormalities) biomarkers. Transmission and Scanning Electron Microscopy was used to characterize the EV and MEV, and Spectrometry Energy Dispersive X-ray (EDS) was employed to determine their chemical composition. Adult fishes were exposed independently to EV and MEV at increasing concentrations (0, 25, 50, 100, 150 e 200 mg/L) during 96 hours for toxicological evaluation. At each concentration, eight fishes were used and duplicates were performed under the same experimental conditions. The occurrence of clinical and behavioral alterations, morbidity and mortality during the exposure were observed. Subsequently, fishes were euthanized and blood was collected for genotoxicological evaluation and organs were collected for histopathological evaluation. EDS revealed mostly the presence of oxygen, magnesium and aluminum in EV and MEV respectively. Nonetheless, more iron was observed in MEV than EV. The iron nanoparticles (10.00 ± 2.76 nm) were adsorbed onto the surface of EV. Comet assay revealed statistically significant differences between the highest concentration of EV and control group (p≤0.05), however, all groups exposed to MEV showed statistically significant differences in relation to the control group (p˂0.001). Both micronucleus and nuclear abnormalities tests showed no significant differences between the control group and the exposed groups for both EV and MEV. Significant histological changes in gills, liver or gut were not observed among the experimental groups. However, fishes of exposed groups showed that enterocytes and goblet cells contained EV and MEV. These results suggest that EV (EV200) promoted DNA fragmentation, as observed by the comet assay. Genotoxicological effects were observed in all groups exposed to MEV, indicating that the presence of nanoparticles would be able to influence the toxicity observed, although further studies should be performed to corroborate these results.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-13T19:42:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-19T17:27:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-19T17:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / CAPES / Nitro-heterocíclicos e tiossemicarbazonas são compostos que despertam o interesse da comunidade científica por apresentarem importantes propriedades citotóxicas e antineoplásicas, entre outras. Neste sentido, com o presente estudo se propôs a avaliar o potencial antitumoral de nove novos derivados 5-nitrotiofeno-tiossemicarbazônicos em diferentes linhagens de células tumorais humanas, assim como seus possíveis mecanismos de ação associados. Os ensaios de citotoxicidade com o método do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio) frente a sete linhagens de células neoplásicas (HEp-2, HL-60, HT-29, K-562, MCF-7, MOLT-4 e NCIH-292) e células mononucleares do sangue periférico humano utilizando o reagente alamar blue. A análise morfológica foi realizada através de microscopia óptica, por coloração com hematoxilina/eosina. Os estudos de mecanismos de ação foram feitos através dos testes de inibição da topoisomerase II, despolarização de membrana mitocondrial e análise do ciclo celular. O estudo de docking foi realizado usando o sitio ativo da enzima Ribonucleotídeo Redutase, PDB id: 4X3V com auxílio do programa Autodock. Os resultados dos testes de citotoxicidade, revelaram que oito compostos foram capazes de promover a inibição do crescimento celular com percentual superior a 80% em pelo menos uma das linhagens avaliadas, com destaque para o composto LNN-05 que exibiu citotoxicidade frente ao maior número de linhagens com valores de CI50 entre 0,5 e 1,9 μg/mL. No teste do Alamar Blue, os derivados avaliados apresentaram CI50 > 4,0 μg/mL em células saudáveis, mostrando-se menos tóxicos que a doxorrubicina. Os testes de atividade hemolítica em eritrócitos humanos também indicaram ausência de hemólise em 100% para os compostos testados até a concentrações máxima avaliada (250 μg/mL). A avaliação morfológica por microscopia óptica, demonstrou que as células de K-562 apresentaram características de morte celular por apoptose, quando tratadas com o derivado LNN-05 nas concentrações de 0,7, 1,4 e 2,8 μg/mL. Contudo, os estudos de mecanismo de ação conduzidos com o derivado LNN-05 indicaram que sua atividade não se dá por inibição da enzima topoisomerase II. No entanto, a avaliação do potencial transmembrânico e a análise do ciclo celular evidenciaram que o LNN-05, na concentração de 2,8 μg/mL, causa despolarização mitocondrial em 64,2 ± 2,5%; e indução de parada do ciclo celular na fase G1 em células K-562, na dose de 1,4 μg/mL com acúmulo de 86,1% de células nesta fase. Estudo de docagem molecular indicou que os compostos se ligam à enzima ribonucleotídeo redutase, através dos resíduos Glicina50, Valina51, Treonina52, Metionina14 e principalmente, a Arginina21 e que o melhor ligante potencial é o composto LNN-03 com Evalue = -7,84 Kcal/mol, sendo LNN-05 um dos derivados com menor afinidade de ligação com Evalue = -6,39 Kcal/mol. Com base nesses resultados foi possível identificar que derivados 5-nitrotiofeno-tiossemicarbazônicos possuem promissor potencial citotóxico em células neoplásicas humanas, porém estudos adicionais para elucidação dos possíveis mecanismos de ação ainda necessitam ser conduzidos para completo entendimento de seus modos de ação. / Nitro-heterocyclic and thiosemicarbazone are compounds that have aroused the scientific community interest due to, but not limited to its cytotoxic and antineoplastic activities. In this regard, we propose in this project to evaluate the antitumor potential of nine new 5-nitrothiophene-thiosemicarbazone derivatives against several human cancer cell lines, as well as its possible mechanisms of action. The cytotoxicity tests to evaluate the derivatives activity were the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] test for the seven cancer cell lines (HEp-2, HL-60, HT-29, K-562, MCF-7, MOLT-4 and NCIH-292), and peripheral blood mononuclear human cells utilizing the alamar blue test. To analyse the cells morphology, cells were stained with hematoxylin/eosin dyes and visualized through optical microscopy. The mechanism of action studies was accessed via topoisomerase II inhibition, mitochondrial depolarization and cell cycle analysis. Docking analysis using the active site of the ribonucleotide reductase enzyme, PBD id:4X3V was performed utilizing the Autodock software. The results obtained from the MTT test demonstrated that eight compounds were capable of inhibit cell growth more than 80% in at least one of the cell lines, with a highlight for the LNN-05 compound which exhibited cytotoxic activity against most of the cell lines with the lowest IC50 value (0.5 and 1.9 μg/mL). In the alamar blue test, the derivatives showed IC50 value > 9.0 μg/mL against non-cancer cells (peripheral blood mononuclear cells), which means that the compounds are less toxic than doxorubicin. The haemolytic activity test using human erythrocyte also indicated absence of haemolysis for all tested compounds with a maximum dose of 250 μg/mL. The morphological evaluation showed that K-562 cells presented characteristics of cellular death by apoptosis, when treated with the derivative LNN-05 at 0,7, 1,4 e 2,8 μg/mL concentrations. The mechanism of action studies was carried out using the LNN-05 derivative and the analysis suggests that its activity is not by the inhibition of the topoisomerase II enzyme. However, the evaluation of the transmembrane potential and the cell cycle analysis revealed that LNN-05 causes mitochondrial depolarization of 64.2 ± 2.5% at the concentration of 2.8 μg/mL and cell cycle arrest in G1 phase, totalizing 86.1 ± 0.3% at 1.4 μg/mL against K-562 cells. The docking analysis indicated that the compounds bind to the enzyme through the residues of glicine50, valine51, threonine52, methionine14, and mainly arginine21. In addition, the best ligand was LNN-03 with Evalue = -7.84 Kcal/mol, and LNN-05 one of the weakest ligand with Evalue = -6.39 Kcal/mol. Concerning this study, we could identify that the 5-nitrothiophene-thiosemicarbazone derivatives have promising cytotoxic potential against human neoplastic cells; however, further studies are needed to fully elucidate the mechanisms of action of the tested derivatives.

Orientador: Alba R. M. Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T09:34:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_DeniseAparecidade_M.pdf: 1891538 bytes, checksum: 9531d707782ea16a1bb6911bddf290db (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Estudos recentes mostraram a eficácia dos derivados de E/Z-3-(4'-bromo-[l, l' -bifenil]-4-il)-( 4-X-fenil)-N,N -dimetil-2-propeno-1-amina sobre as três formas do protozoário Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas. O derivado não-substituído (X=H) foi um dos mais ativos e menos tóxicos desta série. Neste trabalho, o composto (X=H) foi preparado e seus isômeros Z e E foram isolados por cromatografia de camada delgada preparativa para a realização dos ensaios biológicos. O isômero Z foi mais ativo que o E sobre formas tripomastigotas do T. cruzi. Nos ensaios de quantificação de DNA (DNA) e de redução do sal de tetrazólio (MTT), usando células fibroblásticas V79, o isômero Z foi o mais tóxico. No método de incorporação do corante vermelho neutro, a mistura isomérica e os isômeros isolados apresentaram toxicidades equivalentes. Os compostos foram mais tóxicos neste método em comparação com MTT e DNA. O isômero E foi o mais tóxico na avaliação da toxicidade aguda sobre a bactéria Escherichia coZi e sobre camundongos. Não houve alteração comportamental em camundongos tratados com a mistura I isomérica, em relação ao controle, no ensaio do Campo Aberto. Os estudos da atividade do composto (X=H) sobre o fungo Trichophyton rubrum e sobre epimastigotas do T. cruzi, sugerem a inibição da biossíntese do ergosterolcomo um possível mecanismo de ação tripanossomicida / Abstract: The abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Maria Edwiges Hoffmann / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T13:25:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fanan_Simone_M.pdf: 3709051 bytes, checksum: f6eaf9d25517cc0dc4912e984bd7a64a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A melatonina, honnônio produzido pela glândula pineal, apresenta um gr-ande interesse na atualidade, devido à demonstração de sua ação antioxidante tanto in vitro como in vivo. Neste trabalho, foi investigado o potencial de risco genético e toxicológico da melatonina em culturas de células, e sua atividade antimutagênica. A mutagenicidade da melatonina foi determinada pelo teste de Ames, na presença e na ausência de ativação metabólica (fração S9), nas linhagens de Salmonella typhimurium TA97, Tal00 e TA102. A exposição das culturas por 30 minutos, à diferentes concentrações de melatonina (29-1160 _g/placa) não induziu nenhum aumento significativo do número de colônias revertentes, tanto na presença como na ausência de ativação metabólica. A melatonina mostrou, também, uma reversão dose-dependente (29 ¿ 232 _g/placa) dos efeitos mutagênicos causados pelo H2O2 (0,5 mM), na linhagem T A1O2. A atividade citotóxica da melatonina para fibroblastos de hamster chinês (linhagem V79) foi determinada pela medida de seus efeitos sobre a viabilidade e proliferação celular. A melatonina não alterou a viabilidade celular, medida pela redução do MTT, na faixa de concentração entre 0,0001 a 1 mM. A exposição das células por 30 minutos a diferentes concentrações de melatonina (0,01 - 5 mM) não causou inibição significativa do crescimento celular, no período de 24 horas subsequente ao tratamento. Entretanto, a exposição das células por 24 horas a concentrações de melatonina entre 0,5 a 5 mM causou inibição significativa do crescimento celular, de fonna dependente da dose. A melatonina mostrou ser um antioxidante altamente eficiente em solução, inibindo a oxidação degradativa da desoxirribose, induzida pelo sistema H2O2/Fe+3/NTA, de forma dependente da dose. Este hormônio foi 10 vezes mais eficiente que a glutationa e 200 vezes mais que o manitol, ao sequestrar os radicais hidroxila. Porém, o trolox foi 15 vezes mais eficaz que a melatonina. Entretanto, ao avaliar crescimento celular em fibroblastos V79, a melatonina (0,001 mM) mostrou uma proteção apenas parcial (50+ 7%) do efeito inibitório induzido por H2_ (50 µM). Contudo, a melatonina não protegeu a membrana mitocondrial de fibroblastos V79 contra os ataques dos oxidantes H2O2 e HPC (2,5 mM), como demonstrado pela ausência de proteção no ensaio do MTT. Já em eritrócitos humanos, ela mostrou ser um antioxidante eficiente contra a peroxidação lipídica, induzida pelo H2O2 (5 mM), apresentando um efeito protetor dose-dependente. Estes resultados indicam que a melatonina não é mutagênica e, além disso, inibe a mutação induzida pela H2O2 . A análise da toxicidade da melatonina pelas células V79 mostrou que a melatonina é citotóxica somente quando presente em altas concentrações e por tempo prolongado. A melatonina mostrou ser um eficiente antioxidante em sistema livre de células, em cultura de fibroblastos V79 apresentou proteção apenas parcial contra os efeitos da H2O2 . Entretanto, em eritrócitos mostrou eficiente proteção contra danos de membrana induzidos por este oxidante / Abstract: The melatonin, hormone produced 1>y the pineal gland,presents _ great interest at the present time due to the demonstration of its antioxidant action as in vitro as in vivo. In this work, the potential of toxicological risk of the melatonin was investigated in bacterias and in mammal cells,and its antioxidant activity was examined in cell tree systems, in human fibroblast V79 and in erythrocyte. The mutagenicity of the melatonin was determined by Ames Test, in the presence and in the absence of metabolic activation (S9-traction), in the strains of Salmonella typhimurium TA97, TA100 and TA102. The exposition of cultures by 30 minutes, to different melatonin concentrations (29 to 1,160 µg/plate) didn't induce any significant increase of the number of reverted colonies, after 48 hours of cultivation, so much in the presence as in the absence of metabolic activation. The melatonin also showed, a dose dependent reversion (29 to 232 µg/plate) ofthe mutagenics effects caused by the hydrogen peroxide (0.5 mM), in the TA102 straip.. Theçytotmric activity of the melatonin to V79 Chinese hamster fibroblasts was determined by the measure of its effects on proliferation. The melatonin didn't chage the cellular viability mesured by the reduction of MTT, in the concentration range trom 0.0001 to 1 mM. The exposition of the cells for 30 minutes to different melatonin concentrations (0.01 -5 mM) didn't caus_significant iphibitionof the cellular growth, in the period of subsequent 24 hours of treatment. However, the exposition of the cells for 24 hours to increasing melatonin concentrations between 0.5 and 5 mM, caused significant inhibition in the cellular growth, in dependent way of the dose. The .melatonin,showed to be ahighly efficient antioxidant in solution, inhibiting thedegradative oxidation of the deoxyribose, induced by the system H2O2/Fe3+/NTA, in a dependent way to the dose. This honnone was more than 10 times efficient than the glutathione and 200 times more efficient than the manit04 when scaveng the hydroxil radical. Even so, the trolox was more than 15 times effective than the melatonin. However, when evaluating cellular growth in fibroblasts V79, the melatonin just showed a partial protection (50+ 7%) ofthe inhibition effect induced by H2O2 (50µM), in _low concentration (0.001 mM). However, the melatonin up to lmM didn't protect the mitochondrional membrane of fibroblasts V79 against the attacks of the hydrogen peroxide and cumene hydroperoxide (2.5 mM), as demonstrated by the absence of protection related to the inhibition of the MTT reduction induced by these oxidizers. Yet in human erythrocytes, it showed to be an efficient antioxidant against lipid peroxidation, induced in the membrane by hydrogen peroxide (5 mM), presenting a dose-dependent protecting effect. These results indicate that melatonin is not mutagenic; besides, it inhibits mutations induced by H2O2 . The analysis of melatonin toxicity through the cells V79 showed that melatonin is citotoxic, on1y when it is present in high concentrations, for a long time. Melatonin showed to be na efficient antioxidant in a cell ftee system, but in cultures of fibroblasts V79 it showed just a partial protection against the effects of H2O2 . However, in erythrocytes, it showed an efficient protection against membrane injuries caused by this oxidant / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Nelson Eduardo Duran Caballero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-24T04:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reginatto_Valeria_D.pdf: 2819317 bytes, checksum: 5838a5798232d7fa6cc84b10de5913aa (MD5) Previous issue date: 1998 / Doutorado

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-10-05T21:01:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf: 1181753 bytes, checksum: 89a37733de8897f3c823b8580482186d (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-22T19:51:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf: 1181753 bytes, checksum: 89a37733de8897f3c823b8580482186d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-22T19:51:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf: 1181753 bytes, checksum: 89a37733de8897f3c823b8580482186d (MD5) Previous issue date: 2017-02-14 / CAPES / CNPq / FACEPE / Moléculas com propriedades biológicas são extraídas de diversos organismos, a exemplo de plantas, como a Crataeva tapia, que pertence à família Caparidaceae, e da qual foi purificada uma lectina denominada CrataBL, com diversas propriedades, entre elas, antitumoral e anti-inflamatória. Mas apesar de suas propriedades promissoras, a aplicação dessa lectina encontra problemas como a degradação por fluidos biológicos e a rápida eliminação da corrente sanguínea. No propósito de obter uma nova formulação para superar esses problemas e de obter dados preliminares sobre a toxicidade da formulação e da lectina, a mesma foi encapsulada em lipossomas e foram avaliadas a toxicidade do nanossistema e da CrataBL frente a eritrócitos, além da avaliação da toxicidade da lectina em diferentes ensaios biológicos. A lectina foi purificada por cromatografia clássica de troca catiônica e os lipossomas preparados pelo método de congelamento/descongelamento. Os lipossomas exibiram tamanho médio de partícula de 168 ± 0,56 nm com uma distribuição de tamanho estreita e monodispersa (PDI = 0,407) e potencial zeta de 31,55 ± 0,77. A eficiência de encapsulação foi de 73 ± 5,72 %. No ensaio hemolítico a lectina, a fração e o extrato apresentaram os seguintes graus de hemólise (0,55; 0,68; 0,72 e 0,88 %), (1,38; 1,47; 1,67 e 1,87 %), (1,02; 1,08; 1,12 e 1,15 %), para as seguintes concentrações (50; 300; 600 e 1000 μg / mL). A lectina encapsulada apresentou (0,34; 0,91; 0,93; 1,25 e 5,37 %), para (62,5; 125; 250; 500 e 1000 μg / mL). A lectina apresentou atividade citotóxica e genotóxica significativa apenas em 1000 μg / mL, porém muito baixa em relação ao controle positivo, e não apresentou atividade mutagênica nas concentrações testadas. No ensaio embriotoxida a lectina apresentou mortalidade de 94% dos embriões, apenas em 500 μg / mL. No cercaricida, a lectina em 300 e 400 μg / mL, apresentou 100% das cercárias vivas e móveis, e em 500 μg / mL, menos de 50% das cercárias mortas, a fração e extrato apresentaram em 300 e 400 μg / mL, toxicidade média: 50-90 % de cercárias mortas, e 500 μg / mL, 90 % ou mais das cercárias mortas. Portanto, a CrataBL foi encapsulada com alta eficiência e tamanho de partícula de 168 nm, ideal para atividade antitumoral. A formulação lipossomal não apresentou atividade hemolítica, assim como a lectina livre, que também não apresentou ação mutagênica. Sendo esses dados importantes para futuras aplicações antitumorais in vivo. No ensaio com embriões e cercárias, a lectina apresentou toxicidade para os diferentes organismos apenas em 500 μg / mL. / Molecules with biological properties are extracted from some organisms, an example of plants, such as a Crataeva tapia, which belongs to the family Caparidaceae, and the quality of a recipe called CrataBL, with several properties, including antitumor and anti-inflammatory. But despite its promising properties, the application of this lectin encounters problems such as degradation by biological fluids and rapid elimination of the bloodstream. The purpose of obtaining a novel formulation to overcome the problems and to obtain preliminary data on the toxicity of the formulation and the lectin, a fiction encapsulated in liposomes and evaluated forces, a nanosystem and CrataBL toxicity to erythrocytes, besides the evaluation of lectin toxicity in different biological assays. The lectin was completed by classical cation exchange chromatography and the liposomes prepared by the freeze / thaw method. Liposomes exhibited a 168 ± 0.56 nm portion average size with a narrow and monodispersed size distribution (PDI = 0.407) and zeta potential of 31.55 ± 0.77. An encapsulation efficiency of 73 ± 5.72%. (0.55, 0.68, 0.72 and 0.88%), (1.38, 1.47, 1.67 and 1.16, 1.67, 1.67, 1.67, 1, 87%), (1.02, 1.08, 1.12 and 1.15%) for the following concentrations (50, 300, 600 and 1000 μg / ml). An encapsulated lectin presented (0.34, 0.91, 0.93, 1.25 and 5.37%), to (62.5, 125, 250, 500 and 1000 μg / mL). The lectin presented significant cytotoxic and genotoxic activity only at 1000 μg / mL, but very low in relation to the positive control, and did not present the mutagenic activity at the tested concentrations. In the embryotoxid assay the lectin presented mortality of 94% of the embryos, only in 500 μg / mL. Without cercaricide, a lectin at 300 and 400 μg / mL presented 100% of the live and mobile cercariae at 500 μg / mL, less than 50% of the dead cercariae, a fraction and extract showed at 300 and 400 μg / mL, toxicity mean: 50-90% of dead cercariae, and 500 μg / mL, 90% or more of the cercariae deaths. Thus, a CrataBL was encapsulated with high efficiency and part size of 168 nm, ideal for antitumor activity. A liposomal formulation showed no hemolytic activity, as well as a free lectin, and also did not present mutagenic action. These data are important for future in vivo antitumor applications. In the test with embryos and cercariae, one lectin showed toxicity to the different organisms only in 500 μg / mL.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-30Bitstream added on 2015-04-09T12:47:36Z : No. of bitstreams: 1 000817489.pdf: 1268930 bytes, checksum: 26ee30b87bdf495b35fd877730980728 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O uso de sedimentos formulados em laboratório vem sendo largamente adotado e recomendado por organizações de proteção ambiental e outras entidades internacionais de importância, como U.S.EPA, OECD e ASTM, devido, principalmente, à sua fácil reprodutibilidade por diferentes laboratórios e por ser livre de organismos e contaminantes indesejados no estudo. Visando a representatividade de ambientes lóticos tropicais, este estudo propôs analisar diferentes formulações de sedimento para a aplicação em estudo toxicológico de interferentes endócrinos (IE), sendo eles o 17β-estradiol (E2) e 17α-etinilestradiol (EE2). Foram avaliados os parâmetros oxigênio dissolvido, dureza e pH de 5 formulações de sedimento durante um período de 15 dias e a adaptação da espécie bentônica Hyalella azteca com relação aos parâmetros sobrevivência, crescimento e reprodução. A toxicidade do E2 e EE2, ambos à concentração de 30 ng/L, foi verificada sobre o organismo nectônico Ceriodaphnia dubia, exposto por 8 dias em solução extraída da formulação de sedimento que continha menor quantidade de matéria orgânica, contaminada em laboratório. Os parâmetros avaliados foram sobrevivência e reprodução, sendo utilizados os métodos estatísticos de Kruskal- Wallis, teste t e teste t por bioequivalência. O comportamento químico dos compostos foi analisado quanto ao tempo de degradação em ambiente com sedimento formulado (após 2, 24 e 48 horas de contato) e à capacidade de retenção ao sedimento após 2 horas de contato através de quantificação por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC-MS). Os resultados mostraram que os sedimentos formulados contendo menores proporções de matéria orgânica (1 e 3% em massa) tiveram melhor estabilização em relação ao pH e também boa aceitação pela espécie H. azteca. Porém, o ambiente composto pelo mesmo sedimento não foi ideal para testes com C. dubia ... / The use of laboratory-formulated sediments have been widely adopted, and recommended by environmental protection organizations and other international agencies as USEPA, OECD, and ASTM, mainly for easy reproducibility by different laboratories, and for being free of unwanted contaminants and indigenous organisms. Aiming at the representation of tropical lotic environments, different sediment formulations were analyzed for use in toxicology studies of endocrine disruptors (EI), namely 17β-estradiol (E2) and 17α-ethinyl estradiol (EE2). Five different formulations were evaluated regarding dissolved oxygen, water hardness and pH over a period of 15 days, and on the adaptation of the benthic species Hyalella azteca regarding survival, growth, and reproduction parameters. The toxicity of E2 and EE2, both at the concentration of 30 ng/L, was observed in the nektonic organism Ceriodaphnia dubia, exposed to a solution extracted from spiked formulated sediment containing a minor amount of organic matter in a 8-days test. Survivability and reproduction parameters were evaluated using Kruskal-Wallis, t-test and bioequivalence t-test statistical methods. Chemical behavior of the compounds was analyzed regarding environmental degradation time in formulated sediment (after 2, 24, and 48 hours of contact), and sediment retention capacity after 2 hours of contact by quantification by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Results showed that the formulated sediments which contained smaller fractions of organic matter (1% and 3% dry weight) had better stabilization in relation to pH, and good acceptance by the species H. azteca. However, the formulated sediment environment was not ideal for C. dubia, which was therefore replaced by filtered interstitial water for E2 and EE2 tests. There was a statistically significant reduction in the number of newborns when exposed to control sediment and contaminants (Kruskal-Wallis, t-test, and bioequivalence ...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-27T11:52:38Z No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-27T11:54:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-27T11:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / O câncer é definido como um conjunto de mais de cem doenças caracterizado por desordens celulares ocasionadas por múltiplas alterações genéticas que conduzem a um desequilíbrio na proliferação e morte celular. No Brasil, as estimativas para o ano de 2012 e 2013 apontam a ocorrência de aproximadamente 518.510 casos novos de câncer, dentre os quais, o mais incidente será o câncer de pele não melanoma. Devido a tantos efeitos colaterais das terapias convencionais no tratamento das neoplasias, a terapia fotodinâmica (TFD) desponta como uma alternativa segura e altamente eficaz no tratamento de diversos tipos de câncer. A sua alta eficácia decorre da indução direta de morte das células neoplásicas, da destruição da microvasculatura tumoral e do reforço da imunidade antitumoral. A TFD é realizada combinando-se o oxigênio molecular, luz de comprimento de onda específico e um fotossensibilizante. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma nanoemulsão (nanoA) à base de óleo de açaí como fotossensibilizante para uso na TFD e investigar os efeitos biológicos in vitro e in vivo no tratamento de câncer de pele não-melanoma. Para formulação da nanoA, foi utilizado água, óleo e surfactante Tween 80 e utilizou-se o método de temperatura de inversão de fase (PIT). Para a avaliação dos aspectos morfológicos e coloidais da nanoA utilizou-se recursos de microscopia eletrônica de transmissão e aparelho de dispersão dinâmica de luz Zetasizer, respectivamente. As propriedades fotofísicas foram avaliadas com leituras dos espectros de absorbância e fluorescência em espectrofotômetro. A nano A apresentou pico de absorção e emissão na região do vermelho,o que é bom para fotossensibilizantes a serem aplicados na TFD já que corresponde à janela óptica tecidual. O diâmetro hidrodinâmico obtido foi de 117,5 nm, o diâmetro médio de 74 nm, o índice de polidispersividade de 0,144 e potencial zeta de -0.536mV; características essas que viabilizam o uso da nanoA em sistemas biológicos devido a monodispersividade e pequeno diâmetro, favorecendo a retenção e permeação no tumor (EPR). A capacidade de geração de espécies reativas de oxigênio foi medida através do método de decaimento por benzofurano, comprovando a atividade fotoquímica do óleo, viabilizando seu uso como fotossensibilizante na TFD. A avaliação in vitro consistiu em análises de incorporação e distribuição da nanoA em células de carcinoma epidermóide humano A431 e em fibroblasto humano Detroit, assim como na avaliação da citotoxicidade das linhagens submetidas a diferentes concentrações da nanoA na ausência e na presença de luz. A linhagem normal mostrou-se inerte à incubação com a nanoA enquanto que a tumoral foi mais sensível nos menores tempos de exposição à nano tanto no escuro quanto pós-irradiação. O tempo necessário à incubação foi de quinze minutos e de irradiação equivalente à 10 minutos. A avaliação in vivo consistiu em análises clínica e histopatológica de tumores induzidos por injeção ortotópica de células A431 em camundongos nude, tratados com três sessões de TFD além de análises sanguíneas. Tanto a terapia quanto o fármaco sozinho apresentaram atividade antitumoral. A TFD foi responsável por 33% de regressão total enquanto que a nanoemulsão sozinha por 16% de regressão total e 33% de regressão parcial. Estes resultados indicam que esta inédita nanoemulsão é em potencial um novo fármaco para aplicação antitumoral, considerando a alta resistência do carcinoma estudado e a grande eficácia do tratamento alcançado. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is defined as a set of more than hundred diseases characterized by cellular disorders caused by multiple genetic alterations that leads to imbalance between cell proliferation and death. In Brazil, approximately 518,510 new cases of cancer have been estimated from 2012 to 2013, majority being of non melanoma form of skin cancer. Due to so many side effects of the conventional therapies in the treatment of the neoplasias, the photodynamic therapy (PDT) emerges as a safe and highly efficient alternative in the treatment of several types of cancer. This high efficiency results from the straight induction of death of cancer cells , from the destruction of the tumor vasculature and to the reinforcement of the antitumor immunity. PDT is employed with combination molecular oxygen, specific wavelength and photosensitizers. So, the objective of this work was to develop a nanoemulsion (nanoA) with açai oil as a photosensitizer for the application in PDT and investigates the biological effects in vitro and in vivo to evaluate the efficacy in the treatment of non melanoma skin cancer. For This formulation used water, oil and Tween 80 surfactant by the method of phase inversion temperature (PIT). For morphological and colloidal evaluation of nanoA transmission electronic microscopy, scanning electronic microscopy and dynamic dispersal of light Zetasizer were used. The photo-physical properties were evaluated with readings of the spectrum of absorbance and fluorescence in a spectrophotometer. The peak of absorption and emission was in the red region, which is good for application in PDT. The hydrodynamic diameter obtained was 117.5 nm, the middle diameter was 74 nm, the polydispersity index was 0.144 and the zeta potential was -0.536 mV. These features enabled the use of nanoA in biological systems, due to the monodispersity and small diameter favoring the permeation and retention in the tumor (EPR). The capacity of generation of reactive oxygen species was measured through the decline method for benzofuran proving the photochemical activity of the oil, enabling it´s use as a photosensitizer in PDT. The in vitro evaluation consisted of analyses of internalization and distribution of the nanoA in human epidermoid carcinoma cells A431 and in human fibroblast Detroit, as well as of evaluation the cytotoxicity of the cell line subjected to different concentrations of nanoA in the absence and in the presence of light. The normal cell line appeared inert to the incubation with the nanoA whereas the tumoral was more sensitive. The time necessary for nanoemulsion association on cells was fifteen minutes. The in vivo evaluation of the effects of nano A consisted of clinic and histopathological analyses of ortotopic induced tumor by injection of A431 cells in nude mice, treated with three sessions of PDT. As much as drug therapy alone showed antitumor activity. PDT was responsible for 33 % of total regression while the nanoemulsion alone for 16 % of total regression and 33 % of partial regression. These results indicate that this nanoemulsion is good as photosensitizer and a potential new antitumor drug for application in squamous cell carcinoma (SCC), considering the high resistance of this carcinoma and the great efficiency of the treatment.