FIGUEIRÊDO, L. P. de. Uso de Mysidopsis juniae na análise da toxicidade dos metais zinco e níquel. 2013. 82 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Marinhas Tropicais) - Instituto de Ciências do Mar, Universidade Federa do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Geovane Uchoa (geovane@ufc.br) on 2016-01-25T15:01:43Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lpdefigueiredo.pdf: 1295418 bytes, checksum: 0172dfb6e9252a5d21813552122c725b (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid(nadsa@ufc.br) on 2016-01-25T18:47:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lpdefigueiredo.pdf: 1295418 bytes, checksum: 0172dfb6e9252a5d21813552122c725b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T18:47:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lpdefigueiredo.pdf: 1295418 bytes, checksum: 0172dfb6e9252a5d21813552122c725b (MD5) Previous issue date: 2013 / Over the years, a range of pollutants has been released into the environment, forming complex mixtures and causing damage to the biota. Metals are among the most common pollutants that have a high toxicity effect. The present study aims to assess nickel and zinc toxicity, isolated and in mixtures, using the marine microcrustacea Mysidopsis juniae as a model. Three different protocols were applied: first the acute toxicity tests of metals isolated and in mixtures (10 organisms per jar with 1-8 days of life, triplicate, 96h, lethality assessed by calculating the LC50); second chronic toxicity tests based on growth (5 organisms per jar with <24 hours of life, quadruplicate, 7 days, length and dry weight were the endpoints); and finally chronic toxicity tests based on fecundity effects (5 organisms per jar with 10 days of life, quadruplicate, 7 days, the number of females with eggs was the endpoint). The mixtures data were analysed according to the conceptual models of Concentration Addition (CA) and Independent Action (IA). The LC50 for zinc and nickel was 0,24 ± 0,02 mg. L-1 and 0,18 ± 0,04 mg. L-1, respectively. The mixtures assays presented acute effect, the additive toxicity to any concentration tested, and the data model best described by CA. The lethality, length and dry weight of M. juniae were affected by chronic exposure to zinc and nickel, exception was the dry weight of nickel exposure that showed no significant difference. The length was the most sensitive endpoint analyzed. On the other hand, the reproductive effects could not be analysed due to the lethality overlapped this parameter in tests. Thus, the metals analyzed presented an additivity pattern which proved to be very sensitive to zinc and nickel, especially when evaluated in the short chronic protocol proposed in this work, which enables the use of the parameters and the specie in future studies. / Ao longo do anos, os mais variados poluentes vem sendo lançados no meio ambiente, isoladamente ou em misturas, causando danos a biota. Dentre os poluentes mais comuns estão os metais, muitos destes com elevada toxicidade. Assim, o presente trabalho teve como objetivo principal determinar a toxicidade dos metais zinco e níquel, isolados e em misturas, utilizando o microcrustáceo marinho Mysidopsis juniae como modelo. Para isso, foram utilizados 3 protocolos distintos: um para avaliar a toxicidade aguda dos metais isolados e em misturas (organismos de 1-8 dias de vida, triplicata, 10 organismo/réplica, 96h de duração e análise da letalidade através do cálculo da concentração letal a 50% dos organismos (CL50); outro para avaliar a toxicidade crônica com base no crescimento (organismos <24 horas de vida, quadruplicata, 5 organismo/réplica, 7 dias de duração e análise do comprimento e peso seco) e, um terceiro, para avaliar a toxicidade crônica com base nos efeitos sobre a fecundidade (organismos 10 dias de vida, quadruplicata, 5 organismo/réplica, 7 dias de duração e análise do número de fêmeas com ovos). Os dados das misturas foram trabalhados segundo os modelos conceituais de Adição da Concentração (CA) e Ação Independente (IA). A CL50 para o zinco e o níquel, isoladamente, foi de 0,24 ± 0,02 mg.L-1 e 0,18 ± 0,04 mg.L-1, respectivamente. Para os experimentos de misturas foi observado efeito na letalidade dos organismos, com toxicidade aditiva para todas as concentrações testadas, sendo os dados melhores descritos pelo modelo CA. A letalidade, o comprimento e o peso seco de M. juniae foram afetados pela exposição crônica ao zinco, enquanto que para o níquel apenas o peso seco não variou significativamente. O comprimento mostrou-se mais sensível do que os outros parâmetros analisados aos metais testados. Os efeitos na reprodução não foram analisados, uma vez que a letalidade se sobrepõe a esse parâmetro. Sendo assim, os metais analisados mostraram um padrão de aditividade em Mysidopsis juniae, que apresentou-se bastante sensível aos metais zinco e níquel, principalmente quando avaliado no protocolo crônico de curta duração, proposto neste trabalho, viabilizando a utilização desses parâmetros e dessa espécie em estudos futuros.

Tese (doutorado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-03-16T17:53:45Z No. of bitstreams: 1 2007_SelmaAparecidaSouzakuckelhaus.pdf: 5606121 bytes, checksum: 44dd25773a2f4d3a74f1adb28d4c2865 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-03-18T23:22:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_SelmaAparecidaSouzakuckelhaus.pdf: 5606121 bytes, checksum: 44dd25773a2f4d3a74f1adb28d4c2865 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-18T23:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_SelmaAparecidaSouzakuckelhaus.pdf: 5606121 bytes, checksum: 44dd25773a2f4d3a74f1adb28d4c2865 (MD5) / As doenças infecciosas estão entre as principais causas de mortalidade em todo o mundo e seu controle depende da existência de agentes antimicrobianos eficazes. O maior entrave para a manutenção da eficácia é o desenvolvimento de resistência dos agentes infecciosos às drogas antimicrobianas. A geração de resistência aos antimicrobianos tornou-se nas últimas décadas uma das grandes preocupações da Organização Mundial de Saúde que, desde então, tem estimulado as pesquisas, básica e aplicada, na busca por novas drogas que possam ajudar na luta constante contra os mecanismos de resistência. Todos os seres vivos estão continuadamente expostos a uma grande quantidade de potenciais agentes patogênicos e a capacidade para evitar as doenças depende, em grande parte, dos seus mecanismos de defesa. Tanto animais quanto plantas desenvolveram, ao longo da evolução, mecanismos inatos de defesa, tais como a produção de diferentes substâncias bioativas, que são identificadas, sobretudo, nos anfíbios. Dentre essas substâncias destacam-se os peptídeos com ação antimicrobiana, que exercem, in vitro, potente atividade lítica contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, protozoários e fungos filamentosos e, comumente, exibem baixa toxicidade para células de mamíferos. Esses peptídeos são caracterizados por apresentarem seqüências de 12 a 50 resíduos de aminoácidos e intensa carga positiva e, apesar da grande diversidade molecular, têm em comum suas configurações anfipáticas e propriedade de interação com membranas celulares. Os estudos realizados com a secreção cutânea de duas pererecas do gênero Phyllomedusa permitiram a descoberta de uma nova família de peptídeos antimicrobianos denominada filosseptinas (PSs) e, estudos preliminares realizados com a filosseptina-1 (PS-1) mostraram seu potencial antimicrobiano. Logo, considerando a diversidade funcional desses peptídeos e sua eficácia ao longo do processo evolutivo o objetivo desse estudo foi avaliar a toxicidade da PS-1 sobre células de mamíferos, in vitro e in vivo e sua atividade antiparasitária sobre L. (L.) amazonensis e P. falciparum, visando aplicações biomédicas e biotecnológicas. Observaram-se, com as maiores concentrações de PS- 1, efeitos tóxicos sobre células de mamíferos e com as menores concentrações capacidade imunomodulatória, por aumentar a adesão de macrófagos, influenciar a fagocitose, a produção de óxido nítrico e peróxido de hidrogênio por macrófagos de camundongo e, de fator de necrose tumoral por monócitos humanos. A PS-1 apresentou também grande atividade lítica sobre L. (L.) amazonensis e P. falciparum, sendo definidas como 1 ou 48μg/mL, respectivamente, as concentrações capazes de inibir o crescimento de, no mínimo 50% dos parasitos. Nossos resultados demonstraram que a PS-1 apresenta grande potencial para aplicações biomédicas, como modulador do sistema imunitário ou como agente antimicrobiano contra plasmódio e leishmânia. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Infectious diseases cause millions of deaths throughout the world and their control depends on the use of efficient antimicrobial agents. However, a major concern is the frequent development of resistance of the infectious agents to these products. The growing emergence of this phenomenon lead the World Health Organization to consider it as a major public health problem, and it has stimulated the development of novel products, mainly from nature, to fight the pathogens. It is well established that animals and plants produce many bioactive substances as defense mechanisms. This ability is particularly important among the amphibians. Some of these substances are represented by antimicrobial peptides, which are endowed with activity against bacteria and protozoa, and commonly exhibit low toxicity to mammalian cells. These antimicrobial peptides are characterized by the presence of 12 to 50 amino acids residues, high cationicity and, despite the great diversity of molecular structures, they are amphipathic and present the property to interact with cell membranes. Recently, our group identified a new family of antimicrobial peptides named phylloseptins, and the preliminary studies with phylloseptin-1 (PS-1) showed its potential as an antimicrobial agent. Considering the functional diversity of antimicrobial peptides and their efficacy throughout the evolutionary process, the objective of the present investigation was to evaluate the toxicity of PS-1 against mammalian cells, in vitro and in vivo, and its activity against two protozoa, L. (L.) amazonensis and P. falciparum, for future biomedical applications. Toxic effects of PS-1 were observed on mammalian cells exclusively with larger concentrations of the peptide, whereas with the smaller ones, immunomodulation was observed, affecting macrophage adherence, phagocytosis, production of hydrogen peroxide and nitric oxide by mouse peritoneal macrophages, and tumor necrosis factor by human monocytes. PS-1 showed strong activity against L. (L.) amazonensis and P. falciparum, and at concentrations of 1 or 48μg/mL, respectively, the peptide was able to inhibit 50% of these parasites, respectively. Our results showed that PS-1 presents an important potential for biomedical applications, both as an immunomodulatory product, and as an antimicrobial agent against plasmodium and leishmania species.

Orientador: Nelson Eduardo Duran Caballero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-25T17:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_DarcioGomes_D.pdf: 2064380 bytes, checksum: 09f18ba60b94c587e824579d8d5530a3 (MD5) Previous issue date: 1999 / Doutorado

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-10-23T19:18:43Z No. of bitstreams: 1 2017_LarizzaHellenSantanaMatos.pdf: 5243956 bytes, checksum: 709a3338ac77e8199576d4994ea2209b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-24T14:42:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_LarizzaHellenSantanaMatos.pdf: 5243956 bytes, checksum: 709a3338ac77e8199576d4994ea2209b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-24T14:42:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_LarizzaHellenSantanaMatos.pdf: 5243956 bytes, checksum: 709a3338ac77e8199576d4994ea2209b (MD5) Previous issue date: 2017-10-24 / O câncer é uma doença complexa e multifatorial que possui alta incidência e mortalidade em todo mundo. Os fármacos utilizados na terapia convencional apresentam inúmeros efeitos adversos e resistências, portanto existe a necessidade de desenvolvimento de novos antineoplásicos mais seguros e eficazes. O monastrol surgiu como uma opção para o tratamento do câncer e derivados diidropirimidinonas foram sintetizados e seu efeito antitumoral investigado. Os compostos 4p e 4bc apresentaram em estudos prévios atividade citotóxica contra linhagens de adenocarcinoma (MCF-7 e MDA-MB-231), sendo seletiva para as células tumorais. Diante dos resultados in vitro o presente estudo tem como objetivo a avaliação toxicológica aguda in vivo desses derivados e traçar o perfil da biodisponibilidade. Inicialmente foi avaliada a toxicidade após administração oral do 4p e 4bc, logo depois através de um estudo adicional pela via intravenosa apenas para o 4bc, não sendo observada morte, sinais clínicos de toxicidade em todas as doses e vias avaliadas. Com base nesse estudo para a exposição oral os compostos foram classificados como categoria 5 pela GHS. Também não foram reveladas alterações clinicamente relevantes no consumo de ração, água, ganho de peso e índice dos órgãos em ambos os estudos. Os exames histológicos e anatomopatológicos revelaram normalidade em todos os grupos dos ensaios. Através dos exames hematológicos e bioquímicos os parâmetros que se apresentavam fora da normalidade para a administração oral (Leucócitos, Monócitos, Contagem de plaquetas, Ureia) e intravenosa (Leucócitos, Monócitos, Contagem de plaquetas, Ureia e AST) foram relatados para todos os grupos, indicando não ser um efeito da exposição aos DHPMs. A diferença significativa e clinicamente relevante reportada entre todos os grupos tratados e os controles foi revelada após a administração pela via intravenosa do 4bc, para os parâmetros triglicerídeos e glicose. Não foram determinados os compostos no sangue após exposição aguda oral e intravenosa através da cromatografia líquida de alta eficiência e ensaio de luminescência. Os resultados sugerem baixa toxicidade aguda pelas vias avaliadas, sendo necessária a continuidade dos estudos e toxicidade e avaliar mais profundamente o perfil farmacocinético dos derivados 4p e 4bc. / Cancer is a complex and multifactorial disease that has a high incidence and mortality worldwide. Drugs used in conventional therapy have numerous adverse effects and resistance. The development safer and more effective antineoplastic agents. Monastrol emerged as an option for the treatment of cancer and dihydropyrimidinone derivatives were synthesized and its antitumor effect investigated. Compounds 4p and 4bc showed selective cytotoxicity for tumor cells in previous studies against adenocarcinoma (MCF-7 and MDA-MB-231) lines. In view of the in vitro results, the present study has as its objective the acute toxicological evaluation in vivo of these derivatives and to trace the bioavailability profile. Initially toxicity was assessed following oral administration of 4p and 4bc, and then further study by intravenous route only for 4bc, and no clinical signs of toxicity were observed at all doses and routes evaluated. Based on this study for oral exposure the compounds were classified as category 5 by the GHS. Further analysis showed no clinically relevant changes in feed intake, water intake, weight gain and organ index. Histological and anatomopathological studies revealed normality in all groups of the trials. Hematological and biochemical tests revealed abnormal parameters for oral administration (Leukocytes, Monocytes, Platelet Count, Urea) and intravenous (Leukocytes, Monocytes, Platelet Count, Urea and AST) were reported for all groups, indicating not to be an effect of exposure to DHPMs. The significant and clinically relevant difference reported between all treated groups and controls was revealed following intravenous administration of 4bc for the triglycerides and glucose parameters. No compounds were determined in the blood after acute oral and intravenous exposure through high performance liquid chromatography and luminescence assay. The results suggest low acute toxicity by the routes evaluated, and the continuity of the studies and toxicity is necessary and more deeply evaluate the pharmacokinetic profile of derivatives 4p and 4bc.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-21Bitstream added on 2014-06-13T18:32:18Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_dc_me_jabo.pdf: 335525 bytes, checksum: 6290737730ffac1a4d1fcdac98f3ce60 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Avermectinas, derivados de um complexo natural de lactonas macrocíclicas obtidas a partir de fermentação do fungo Streptomyces avermitilis, são amplamente utilizadas no controle de endo e ectoparasitoses. A abamectina tem sido recomendada mundialmente apenas para bovinos acima de quatro meses de idade. Estudos farmacocinéticos apontam diferenças plasmáticas entre avermectinas convencionais e aquelas de longa ação. O objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade da formulação Abamectina 1% e da formulação de ação prolongada Ivermectina 2,25% + Abamectina 1,25% em diferentes concentrações, para bovinos com idade inferior a trinta dias. Foram utilizados 35 bezerros, machos, HPB, distribuídos em sete grupos: GI - solução fisiológica (controle); GII - 200 mcg/kg; GIII - 400 mcg/kg; GIV - 600 mcg/kg de Abamectina; GV - 450 mcg/kg de Ivermectina + 250 mcg/kg de Abamectina; GVI - 900 mcg/kg de Ivermectina + 500 mcg/kg de Abamectina; GVII - 1350 mcg/kg de Ivermectina + 750 mcg/kg de Abamectina. Todos os bovinos foram submetidos a exames clínicos, duas vezes por dia, durante 14 dias. Foram colhidas amostras de sangue e de líquor nos dias 0, 1, 7 e 14 pós-tratamento. Foram mensurados os seguintes parâmetros bioquímicos do sangue: proteína total e as enzimas AST, GGT e Fosfatase alcalina. No líquor foram quantificados: Coloração e aspectos, pH, densidade, celularidade, proteínas totais, glicose, e as enzimas CK. ALT e LDH. Em relação aos parâmetros clínicos verifica-se que embora ocorresse alterações estatisticamente significativas, estas não podem ser correlacionadas com a aplicação da droga. Assim como as mudanças verificadas nos parâmetro bioquímicos do soro e do liquor. / Avermectin, derivatives of a natural complex of gotten macrocyclical lactonas from fermentation of Streptomyces avermitilis, widely are used in the control of endo and ectoparasites. The abamectin has been recommended world-wide only for bovines above of four months of age. Farmacocinéticos studies point plasmatic differences between conventional avermectins and those of long action. The objective of this work was to evaluate the toxicity of the formularization Abamectin 1% and of the formularization of drawn out action I contend Ivermectin 2.25% + Abamectin 1.25% in different concentrations, for bovines with inferior age the thirty days. 35 year-old calves, males, HPB, distributed in seven groups had been used: GI - physiological solution (control); GII - 200 mcg/kg of Abamectin; GIII - 400 mcg/kg of Abamectin; GIV - 600 mcg/kg of Abamectin; GV - 450 mcg/kg of Ivermectin + 250 mcg/kg of Abamectin; GVI - 900 mcg/kg of Ivermectin + 500 mcg/kg of Abamectin; GVII - 1350 mcg/kg of Ivermectin + 750 mcg/kg of Abamectin. All the bovines had been submitted the clinical examinations, two times per day, during 14 days. Samples of blood and líquor in days 0, 1, 7 and 14 had been harvested post-cure. The following parameters had been to mensurar biochemists of the blood: total protein and the enzymes AST, GGT and alkaline Fosfatase. In the liquor they had been quantified: Coloration and aspects, pH, total density, cells, proteins, glucose, and enzymes CK. ALT and LDH. In relation to the clinical parameters one verifies that even so it occurred significant alterations statistics, these cannot be correlated with the application of the drug. As well as the changes verified in the parameter biochemists of the serum and the liquor.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-22T16:35:44Z No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T14:22:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T14:22:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) Previous issue date: 2009-07-16 / Toxinas Cry de Bacillus thuringiensis (Bt) são proteínas inseticidas utilizadas para controle de insetos. Elas agem por ingestão e são ativadas por proteases e interagem com receptores específicos localizados na superfície da célula hospedeira, resultando na lise de células do intestino médio. Este trabalho está dividido em quatro capítulos. No primeiro, foi feita uma revisão sobre Bacillus, ecologia e modo de ação, e insetos-praga do algodão. O segundo capítulo descreve a seleção e o estudo do conteúdo de genes cry de estirpes de B. thuringiensis com atividade para Anthonomus grandis. O terceiro capítulo descreve a clonagem, sequenciamento e expressão da toxina Cry1Ba da estirpe S601 de B thuringiensis, que é tóxica para A. grandis. A ligação da toxina Cry1Ba6 a proteínas localizadas na borda escovada de células do intestino médio de A. grandis foi analisada e descobriu-se que a proteína Cry1Ba6 se liga a duas proteínas (62 e 65 kDa) com atividade de fosfatase alcalina (ALP). Este trabalho é o primeiro relato da localização de receptores de toxina Cry em células do intestino médio de A. grandis. Finalmente, o capítulo quatro mostra como outras toxinas (Cry1Ia e Cry10A) expressas em Bt, com atividade já descrita para A. grandis interagem com BBMVs de A. grandis e S. frugiperda. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cry toxins from Bacillus thuringiensis (Bt) are isecticidal proteins used for insect control. They actin by ingetion and are activated by host proteases and interact with specific receptors located on the host cell surface, resulting in midgut epithelial cells lysis. This work is divided in four chapters. In the first, a review was done o Bacillus, ecology and action mode, and cotton insect-pests. The second chapter describes the selection and study of the content of cry genes of B. thuringiensis strains with activity against nthonomus. grandis. The third chapter describes cloning, sequencing and expression of a cry1Ba toxin gene from the B. thuringiensis S601 strain which is toxic to A. grandis. The binding of Cry1Ba6 toxin to proteins located on the midgut brush border membrane of A. grandis was analyzed and it was found that Cry1Ba6 binds to two proteins (62 and 65 kDa) that showed alkaline phosphatase (ALP) activity. This work is the first report that shows the localization of Cry toxin receptors on the midgut cells of A. grandis. Finally, the chapter four shows how other toxins (Cry1Ia and Cry10A) expressed in Bt, which previously had activity described to A. grandis, interact with A. grandis and S. frugiperda BBMVs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2010-03-24T21:50:33Z No. of bitstreams: 1 2009_HelvecioLealSantosJunior.pdf: 1422454 bytes, checksum: d6ba3f63ea8dba7e9c2cd063c4a2d68f (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-17T18:27:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_HelvecioLealSantosJunior.pdf: 1422454 bytes, checksum: d6ba3f63ea8dba7e9c2cd063c4a2d68f (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-17T18:27:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_HelvecioLealSantosJunior.pdf: 1422454 bytes, checksum: d6ba3f63ea8dba7e9c2cd063c4a2d68f (MD5) Previous issue date: 2008-12-11 / Foram introduzidos em três piquetes (P, M e G) cultivados com Brachiaria decumbens, 21 ovinos, machos, de 4 meses de idade, durante dois meses. Nos piquetes a forrageira tinha 15, 45 e 90 dias de crescimento respectivamente. O aumento na concentração da enzima sérica aspartatoaminotransferase ocorreu na semana após o inicio do experimento nos grupos P e M e sétima semana no grupo G, enquanto que o aumento da gamaglutamiltransferase ocorreu na segunda semana no grupo P e M e no grupo G ocorreu na quarta semana. Os principais sinais clínicos incluíram apatia, fotofobia, secreção ocular bilateral, hiperemia e icterícia de mucosas além de edema de face. Quando os animais apresentavam os sinais clínicos severos da intoxicação eram retirados do experimento e realizava-se a biópsia hepática guiada por ultrasom. Os ovinos que morreram foram necropsiados. Os achados de necropsia foram a hepatomegalia e distensão da vesícula biliar. Na avaliação microscópica das biópsias e dos animais necropsiados os principais achados incluíam: tumefação e vacuolização de hepatócitos, macrófagos espumosos, colestase e cristais na luz de ductos biliares. A microscopia eletrônica do fígado dos animais intoxicados revelou hiperplasia de retículo endoplasmático liso associado a presença de cristais no citoplasma de hepatócitos. Não foram observados esporos do fungo Pithomyces chartarum nas coletas realizadas durante o experimento. Na avaliação dos níveis de protodioscina o grupo P, grupo em que a pastagem apresentava intensa brotação apresentou a maior concentração dos níveis de protodioscina. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Were introduced into three paddocks (P, M e G) cultivated with Brachiaria decumbens, 21 sheep, male, from 4 months of age, for two months. In the pickets had forage 15, 45 and 90 days of growth respectively. Increase in the concentration of seric enzyme aspartatoaminotransferase occurred in the after the start of the experimente in group P and M and at the seventh week in group G, while the increase in gamaglutamiltransferase ocorred in the second week in group P and M and in group G occurred in the fourth week. The main clinical signs included apathy, photophobia, bilateral ocular secretions, mucous hyperemia of jaundice and facial swelling. When the animals showed clinical signs of sever intoxication they were withdraw from the experiment and it was performed an ultrasound guided liver biopsy. The sheep´s that died were necropsied. The findings of the necropsy were hepatomegaly and distension of the gallbladder. In the microscopic assessment of biopsies and animals corpses the main findings included: swelling and vacuolization of hepatocytes, macrophages sparkling, crystal and cholestasis in light of bile ducts. The electron microscopy of liver of the poisoned animals reveled hyperplasia of smooth endoplasmic reticulum associated with the presence of crystals in the cytoplasm of hepatocytes. There were no Pitomyces chartarum spore in samples taken during the experiment. In assessing the levels of protodioscina the group P, group where the pasture was intense shooting had the highest concentration levels of protodioscina.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Raquel Viana (tempestade_b@hotmail.com) on 2010-03-29T13:47:46Z No. of bitstreams: 1 2009_GlauciaManoelladeSouzaLima.pdf: 6424079 bytes, checksum: ebb433df2157258c4cb5131712e0b77e (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T14:10:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_GlauciaManoelladeSouzaLima.pdf: 6424079 bytes, checksum: ebb433df2157258c4cb5131712e0b77e (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T14:10:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_GlauciaManoelladeSouzaLima.pdf: 6424079 bytes, checksum: ebb433df2157258c4cb5131712e0b77e (MD5) Previous issue date: 2009 / Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria Gram-positiva, entomopatogênica, que se caracteriza pela presença de inclusões cristalinas denominadas de #-endotoxinas ou proteínas Cry. Essas proteínas podem ser altamente tóxicas para insetos suscetíveis, não apresentando atividade para outros organismos. Alguns sistemas de expressão vêm sendo utilizados para expressar proteínas Cry com a finalidade de aumentar a sua toxicidade para diversas ordens de insetos. Os baculovírus são vírus de insetos que têm sido muito utilizados como vetores de expressão de genes heterólogos em células de insetos, devido principalmente à presença de promotores fortes que permitem altos níveis da proteína heteróloga na fase tardia da infecção. Neste trabalho, foram clonados genes cry (cry2Aa e cry11A) isolados das estirpes de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki S447 e subsp. israelensis S1806, respectivamente, no genoma do baculovírus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), por transposição sítio-específica, gerando os vírus vAcCry2Aa e vAcCry11A. A avaliação da expressão bem como a presença do transcrito foi realizada por RT-PCR. As proteínas heterólogas Cry2Aa e Cry11A foram analisadas em gel SDS-PAGE 12%, revelando a presença de bandas de aproximadamente 65 kDa e 70 kDa, respectivamente. A toxicidade das proteínas heterólogas foi testada para larvas de inseto das ordens Lepidoptera e Diptera. A proteína heteróloga Cry2Aa apresentou uma CL50 1,036 $g/mL para larvas de segundo instar de Anticarsia gemmatalis , enquanto Cry11A mostrou ser bastante tóxica para larvas de segundo instar de Aedes aegypti com CL50 de 53,3 ng/mL. A presença de cristais derivados da proteínas heteróloga Cry2Aa só foi evidenciada nos extratos de lagartas infectadas com os vírus recombinantes. A análise ultraestrutural da proteína heteróloga Cry2Aa purificada a partir dos extratos das larvas de terceiro instar infectadas com o vírus recombinante vAcCry2Aa mostrou a presença de grandes cristais na forma cubóide Neste trabalho foi possível avaliar que o baculovírus é um bom vetor de expressão de proteínas Cry. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacillus thuringiensis (Bt) is a Gram positive, entomopathogenic bacteria that produces crystalline inclusions called -endotoxins or Cry proteins. These proteins are highly toxic to susceptible insects, not showing activity against others organisms. Some expression systems have been used to express crystal proteins with the aim to increase their toxicity for several insect orders. Baculoviruses are insect viruses that have been widely used as expression vectors of heterologous proteins in insect cells, mainly due to the presence of strong promoters that allow high levels of expression of the heterologous protein during the late phase of virus infection. In this work, cry genes (cry2Aa and cry11A) from B. thuringiensis subsp. Kursaki S447 and subsp. israelensis S1806, respectively, were introduced into the genome of the baculovirus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), by site-specific transposition, generating the recombinant viruses vAcCry2Aa and vAcCry11A. Transcription of the heterologous genes were confirmed using mRNA from recombinant viruses infectedinsect cells (72 h p.i) by RT-PCR . The heterologous Total extracts from Spodoptera frugiperda infected with the recombinant viruses (vAcCry2Aa and vAcCry11A) were analyzed by SDS-PAGE, which detected the presence of polypeptides around 65 kDa and 70 kDa, respectively. Bioassays, using the heterologous proteins showed that Cry2Aa had toxicity to second instar Anticarsia gemmatalis larvae with a LC50 of 1.03 $g/mL and that Cry11A had toxicity to second instar Aedes aegypti larvae (Cry11A) with a LC50 of 53.3 ng/mL. Cuboid-shaped protein crystals (Cry2Aa) were observed only in vAcCry2Aa S. frugiperda infected-extracts by light and scanning electron microscopy. This work confirms the utility of the baculovirus expression system for the efficient expressionof Cry proteins.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-04-13T13:54:38Z No. of bitstreams: 1 2009_RICARDOROCHAPAVANDASILVA_dissertaçao.pdf: 2120078 bytes, checksum: 0eb01ef36a8d23ea73bca49643bf19b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-04-15T00:09:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RICARDOROCHAPAVANDASILVA_dissertaçao.pdf: 2120078 bytes, checksum: 0eb01ef36a8d23ea73bca49643bf19b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-15T00:09:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RICARDOROCHAPAVANDASILVA_dissertaçao.pdf: 2120078 bytes, checksum: 0eb01ef36a8d23ea73bca49643bf19b7 (MD5) Previous issue date: 2009 / A preocupação dos efeitos de cianobactérias na saúde humana cresce em muitos países. Casos de florações de cianobactérias em reservatórios e lagos criam problemas para o abastecimento de água, além de envenenamento, tanto animal como humano, se tornando uma preocupação para a saúde pública. As toxinas das cianobactérias são um grupo de toxinas naturais do ponto de vista químico e toxicológico. Podem ser neurotoxinas, hepatotoxinas, citotoxinas, toxinas irritantes e gastrintestinais. Microcystis aeruginosa é a espécie mais comum em florações de água doce de cianobactérias nocivas. Este trabalho teve como objetivo a avaliação da toxicidade e da genotoxicidade do extrato de uma floração de Microcystis spp contendo microcistina em peixes. Utilizaram-se duas espécies de peixes, sendo uma exótica (Oreochromis niloticus) e outra nativa do Brasil (Astyanax bimaculatus). Para a determinação da toxicidade aguda, utilizouse o método Trimed Spearman-Karber, e para a genotoxicidade aplicaram-se os testes de micronúcleo, do cometa e necrose versus apoptose com eritrócitos de sangue periférico coletados dos peixes. Estes foram expostos por duas vias (exposição corpórea e intraperitoneal) em diferentes concentrações. Verificou-se que em O. niloticus a CL50 (72 h) foi maior que 103,725 μg/L e a DL50 (72h) maior que 138 μg/100g de peso corpóreo. E para A. bimaculatus a CL50 (72h) calculada foi de 242,81 com intervalo de confiança de 152,74 a 386,00 μg/L e a DL50 (72h) igual a 491,9 com intervalo de confiança de 385,8 a 627,3 μg/100g de peso corpóreo. A maior média de micronúcleos observada em O. niloticus foi através de exposição corpórea à concentração de 103,725μg/L. Em A. bimaculatus a maior média foi na concentração 368,8μg/100g de peso expostos via i.p., seguida pela média da concentração 103,725μg/L e pela média da concentração 245,86μg/100g de peso via i.p. No teste do cometa os resultados demonstraram, tanto para O. niloticus como para A. bimaculatus, que em ambas as vias de exposição e concentrações mais elevadas, observaram-se valores significativos. No teste de necrose versus apoptose, observou-se, em O. niloticus, um maior índice de células em necrose com a maior dose e um maior índice de apoptoses na dose mais baixa. Em A. bimaculatus observaram-se células em necrose e em apoptose na dose mais alta e células em apoptoses com a dose mais baixa. O extrato da floração apresentou ação tóxica apenas para A. bimaculatus e ação genotóxica nas duas espécies de peixes. Em concentrações maiores, o extrato provocou necrose e em doses baixas provocou apoptose. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The concern with the effects of cyanobateria in the humans health raise in many countries. Cases of cyanobacteria bloom in reservoir and lakes turn out to be a problem for the water supply besides poisoning animals as human being becoming a source of issue for the public health. The cyanotoxins are a group of natural toxins form the toxicological and chemist point of view. They can be neurotoxin, hepatotoxin, citotoxin, irritating and gastrointestinal toxin. Microcystis aeruginosa is the most ordinary specie in fresh water bloom of harmful cyanobacteria. The objective of this project was the valuation of toxicity and the genotoxicity in fishes of the extract of a bloom of Microcystis spp containing microcystin. Two species were used, one of them is exotic (Oreochromis niloticus) and the other is native from Brazil (Astyanax bimaculatus). To determine the toxicity the method Trimed Spearman- Karber was used, and for the genotoxicity the micronucleus test, the comet assay and necrosis versus apoptosis test were applied using erythrocytes of peripheral blood from fishes. These were exposed by two ways (body exposure and via intraperitoneal (i.p.)) in different concentrations. One has checked that in O. niloticus. the LC50 (72 h) surpassed 103,725 μg/L and the LD50 (72h) surpassed 138 μg/100g of body weight. For A. bimaculatus the LC50 (72h) calculated was the 242,81 with confidence interval of 152,74 at 386,00 μg/L and the LD50 (72h) equal to 491,9 with confidence interval of 385,8 at 627,3 μg/100g of body weight. The largest average of the micronucleus observed in O. niloticus was given by the body exposition to the concentration of 103,725μg/L. In A. bimaculatus the largest average was in the concentration 368,8μg/100g of exposed weights via i.p., followed by the concentrated average 103,725μg/L and by the concentrated average 245,86μg/100g of weight via i.p. In the comet assay, for both O. niloticus and A. bimaculatus, the results show that in both ways of exposition and the highest concentrations, significant values were observed. In the necrosis versus apoptosis test one has observed a larger incidence of cells in necrosis with the highest dose and a higher incidence of apoptosis in the lowest dose in O. niloticus. And one has observed cells in necrosis and in apoptosis in the highest dose and cells in apoptosis with the lowest dose in A. bimaculatus. The extract of bloom has shown toxic action only for the A. bimaculatus. In higher concentrations the extract causing necrosis and in low doses the extract caused apoptosis.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-17T22:49:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-24T22:38:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-24T22:38:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CAPES / A WSMoL (do inglês water-soluble Moringa oleifera lectin) é uma lectina (proteína que reconhece carboidratos) proveniente das sementes da Moringa oleifera, as quais são utilizadas no tratamento de água. Algumas espécies de insetos podem atuar como vetores de doenças ou pragas agrícolas. O mosquito Aedes aegypti é o vetor da dengue e sabe-se que o extrato de sementes de M. oleifera e WSMoL são tóxicos para as larvas deste inseto. O extrato de sementes e WSMoL apresentaram uma concentração letal a 50% das larvas após 24 horas de exposição (CL₅₀) igual a 0,27 mg/mL e 0,197 mg/mL, respectivamente. Entretanto, para uma adequada utilização desse inseticida natural se faz necessário a realização de testes ecotoxicológicos a fim de avaliar os possíveis efeitos causados em organismos aquáticos não-alvo. Neste trabalho, foi avaliada a toxicidade de extrato de semente e WSMoL para larvas de Danio rerio, espécie de peixe muito utilizada na Ecotoxicologia devido à facilidade de observação de seu comportamento e desenvolvimento e serem sensíveis na fase larval. As larvas de D. rerio foram expostas a diferentes concentrações do extrato de sementes ou WSMoL por 168 horas (7 dias),tendo sido avaliados efeitos letais por meio da determinação da taxa de mortalidade. Além disso, efeitos sub-letais comportamentais e bioquímicos sobre a velocidade natatória das larvas e atividade da acetilcolinesterase, respectivamente,também foram avaliados. Foi observado um efeito dose dependente na taxa de mortalidade de D. rerio tanto para o extrato quanto para a lectina purificada. Após 24 horas, os valores de CL₅₀/₂₄h foram 0,365 e 0,21 mg/mL para extrato e WSMoL, respectivamente. Esses resultados mostram que a susceptibilidade das larvas de D. rerio a WSMoL foi similar a das larvas de A. aegypti (6% de diferença nos valores de LC₅₀/₂₄h) enquanto extrato é aproximadamente 34% mais potente para as larvas do mosquito. Após 96 horas, os valores de CL₅₀/₂₄h para extrato e WSMoL foram 0,031 e 0,135 mg/mL, respectivamente. Com relação à velocidade natatória dos indivíduos expostos ao extrato, houve um aumento significativo (p < 0,05) após incubação nas concentrações 0,03 e 0,27 mg/mL e uma diminuição para larvas incubadas com 0,81 mg/mL por esse mesmo período. Para incubação por 168 h, a velocidade foi maior que no grupo controle para os tratamentos a 0,27 e 0,81 mg/mL. Nos ensaios com WSMoL, a média da velocidade de natação de larvas expostas à lectina por 72 h foi significativamente (p < 0,05) menor que no controle nos tratamentos com 0,1 e 0,2 mg/mL. Para 168 h, a velocidade foi também menor que no controle no tratamento a 0,1 mg/mL enquanto para as concentrações de 0,02 e 0,05 mg/mL foi similar (p > 0,05) ao controle.Larvas expostas por 168 h ao extrato aquoso na concentração 0,81 mg/mL e a WSMoL na concentração de 0,1 mg/mL apresentaram uma redução significativa na atividade da acetilcolinesterase. Levando em consideração os resultados obtidos, esses inseticidas naturais devem ser usados cuidadosamente, uma vez que as concentrações necessárias para o controle de A. aegyptiforam podem também causar efeitos tóxicos letais e sub-letais para organismos não-alvo como o peixe D. rerio. Recomenda-se o uso em recipientes de armazenamento de água, e não em ecossistemas aquáticos como lagoas e lagos. / Some insect species can act as vectors of diseases or as agricultural pests. The WSMoL (water soluble Moringa oleifera lectin) is a lectin (protein that recognizes carbohydrate) derived from the seeds of Moringa oleifera, which are used in water treatment. The mosquito Aedes aegypti is the vector of dengue and it is known that M. oleifera seed extract and WSMoL are toxic to larvae of this insect. The seed extract and WSMoL showed a lethal concentration to 50% of the larvae after 24 hours of exposure (LC₅₀) equal to 0.27 mg/mL and 0.197 mg/mL, respectively. However, for proper use of these natural insecticides, it is necessary to carry out ecotoxicological tests in order to assess the possible effects on non-target aquatic organisms. In this work, the toxicity of seed extract and WSMoL to zebrafish (Danio rerio) larvae was evaluated. Danio rerio is a fish species very used in Ecotoxicology due to the ease of observation of its behavior and development and for being sensitive in the larval stage. D. rerio larvae were exposed to different concentrations of the seed extract or WSMoL for 168 h (7 days) and the lethal effects were assessed by determining the mortality rate. Additionally, behavioral and biochemical sublethal effects on larval swimming velocity and acetylcholinesterase activity, respectively, were also evaluated. It was observed a dose dependence effect on D. rerio mortality rate for both the extract and the purified lectin. After 24 h, the values of LC₅₀/₂₄h were 0.365 and 0.21 mg/mL to extract and WSMoL, respectively. These results show that the D. rerio larvae susceptibility to the WSMoL was similar to A. aegypti larvae (6% difference in LC₅₀/₂₄h values) while extract was about 34% more potent against mosquito larvae. After 96 h, the values of LC₅₀/₂₄h for extract and WSMoL were 0.031 and 0.135 mg/mL, respectively. Concerning the swimming velocity of individuals exposed to the extract there was a significant increase (p <0.05) after incubation for 72 h at 0.03 and 0.27 mg/mL and a decrease for larvae incubated at 0.81 mg/mL for this same period. For 168 h incubation, the velocity was higher than control group for treatments at 0.27 and 0.81 mg/mL. In tests with WSMoL, the average swimming velocity of larvae exposed to the lectin for 72 h was significantly (p <0.05) lower than the control on treatments with 0.1 and 0.2 mg/mL. For 168 h, the velocity was also lower than the control on treatment with 0.1 mg/mL, and with concentrations of 0.02 and 0.05 mg/mL the values were similar (p>0.05) to the control. Larvae exposed for 168 h to the aqueous extract at a concentration of 0.81 mg/mL and WSMoL at 0.1 mg/mL showed a significant reduction in the activity of acetylcholinesterase. Considering the results, these natural insecticides must be used carefully used since the concentrations necessary for the control of A. aegypti also can cause lethal toxic effects and sub-lethal to non-target organisms such as D. rerio fish. It is not recommended to use these natural insecticides in aquatic ecosystems such as ponds and lakes, but in water storage containers.