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Infecção de gerbils (Meriones unguiculatus) com Toxocara canis : migração de larvas e estudo morfológico com pesquisa imunohistoquímica de antígenos de larvas nas lesões

Flecher, Mayra Cunha 13 April 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Mayra Cunha Flecher Parte 1.pdf: 411121 bytes, checksum: 2e2fa35dfadad427bfb1686b54ea0759 (MD5) Previous issue date: 2010-04-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introdução. Nos últimos anos, os gerbils têm sido usados como modelo de Toxocaríase experimental, especialmente, para os estudos de lesões oculares e do Sistema Nervoso Central. Objetivos. Estudar a migração das larvas e as lesões, por meio de estudo imunohistoquímico, em gerbils infectados ou reinfectados com Toxocara canis. Métodos. Gerbils foram infectados com 1.500 ovos embrionados de T. canis e eutanasiados 4, 8, 12, 24, 48, 72 e 96 horas; 7, 15, 30 e 60 dias após a infecção. Intestino delgado e grosso, fragmentos do fígado e do encéfalo foram pressionados entre duas lâminas para a contagem de larvas, e o pulmão, digerido com solução de pepsina ácida para a contagem das larvas no sedimento. De todos os órgãos foram colhidos fragmentos, e fixados em formol tamponado para estudo histológico e imunohistoquímico das lesões, com utilização de um soro policlonal obtido em coelhos infectados com T. canis. Outro grupo de gerbils, previamente infectados foram reinfectados, 30 dias após a primeira infecção, com 1.500 ou 1.000 ovos e sacrificados 4, 8, 48 e 72 horas, e 7, 15, 30 e 60 dias após a reinfecção sendo submetidos aos mesmos procedimentos dos animais com uma única infecção. Resultados. Os resultados mostraram que as larvas migraram nas primeiras 24 horas através do intestino delgado e ceco, a partir desse tempo elas começaram a ser observadas em grande número no fígado, apresentando concentração maior 48 horas após a infecção. Depois começaram a migrar para os pulmões e outros órgãos, reduzindo de número no fígado após uma semana de infecção, e voltando a aumentar após 15 dias, sendo ainda observadas até os 60 dias. Nos pulmões, as larvas foram abundantes após 72 horas, onde induziram grandes áreas de hemorragia, que reduziam em número progressivamente até 30 dias após a infecção. A partir de 96 horas, foram encontradas no encéfalo, onde predominaram até o fim do experimento. Nos animais reinfectados houve um aumento na proporção de larvas contadas no fígado, em relação à primoinfecção, e redução delas no encéfalo. Nos animais que receberam uma infecção, as alterações morfológicas nos diferentes órgãos, exceto nos sistema nervoso, caracterizaram-se por inflamação discreta ou moderada com grande quantidade de eosinófilos e agregados frouxos de macrófagos e eosinófilos. No encéfalo as larvas foram observadas intactas, com reação inflamatória muito escassa. Nos animais reinfectados, as lesões inflamatórias foram mais graves com granulomas epitelióides bem organizados, muitos com larva no centro, inclusive com lesões graves na substância branca de cerebelo. A imunohistoquímica detectou em todos os órgãos, na infecção primária e na reinfecção, antígenos da larva nas áreas de exsudato inflamatório difuso, nos granulomas e ao redor das larvas. Conclusão. Os resultados mostraram que a migração das larvas no gerbil segue o padrão observado em camundongos e ratos com uma fase neurotrópica mais tardia, com concentração de larvas no sistema nervoso central. Na reinfecção há evidencias de resposta imunitária adaptativa tipo TH2 (eosinofilia no exsudato inflamatório e granulomas eosinofílicos), com aumento da retenção de larvas no fígado retardando a sua chegada no encéfalo; embora os granulomas epitelióides nos animais reinfectados, ás vezes, tivessem larvas no seu interior, não havia evidência de agressão a essa larvas / Introduction. In last years, the gerbils have been used as experimental model of toxocariasis, especially for studies of ocular lesions and central nervous system. Objectives. To study the migration of larvae and lesions with immunohistochemical study in gerbils infected or re-infected with Toxocara canis. Methods. Gerbils were infected with 1,500 embryonated eggs of T. canis and euthanized 4, 8, 12, 24, 48, 72 and 96 hours, 7, 15, 30 and 60 days after infection. Small and large intestine, liver and brain fragments were pressed between two slides for larvae counts, and lung, digested with acid pepsin solution for larvae counts in the sediment. Formalin fixed fragments of different organs were paraffin embedded for histology and immuniohistiochenmistry, using anti-Toxocara polyclonal serum obtained from rabbits infected with T. canis. Previously infected gerbils were re-infected 30 days after the first infection, with 1,500 or 1,000 eggs and sacrificed 4, 8, 48 and 72 hours, 7, 15, 30 and 60 days after reinfection and underwent the same procedures for larvae counts and histology and immunohistochemestry studies.. Results. Toxocara larvae migrate within the first 24 hours through the small intestine and cecum; from that time they began to be observed in large numbers in the liver, reaching higher number at 48 hours after infection. Then they began to migrate to the lungs and other organs, decreasing the number in the liver after a week of infection, and increased again after 15 days, and still observed until 60 days. In the lungs, the larvae were abundant after 72 hours, which induced large areas of hemorrhage, and were reduced progressively until 30 days after infection. After 96 hours, larvae start to be found in the brain, where the larval burden increased progressively until the end of the experiment. In re-infected animals was an increase in the proportion of larvae counted in the liver in relation to the first infection, and reduction in the brain, at the same times post infection. In animals that received one infection, the morphological changes in various organs, except in the nervous system, characterized by mild or moderate inflammation with large numbers of eosinophils and loose aggregates of macrophages and eosinophils. In the brain larvae were found intact, with scarce or absent inflammatory reaction. In re-infected animals, inflammatory lesions were more severe in all organs, with well organized epithelioid granulomas, with or without larva. Central nervous system lesions were severe, mainly injury in the white matter and Purkinge cells of cerebellum. Immunohistochemistry detected in all organs from all animals larval antigens in areas of diffuse inflammatory exudates, in granulomas and around intact larvae. Conclusion. The results showed that the Toxocara canis larval migration pattern in gerbils is similar to that described in mice and rats, with a neurotropic later stage, leading to concentration of larvae in the central nervous system. Lesions observed after reinfection showed evidence of a TH2 type adaptive immune response (eosinophils in the exsudate and epitheliod eosinophilic granulomas) that would be in relationship with retention of larvae in the liver, delaying their arrival to the brain. Although larvae were sometimes found inside epithelioid granulomas, there was not evidence that larvae were injured by inflammatory cells
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Alterações comportamentais em Rattus norvegicus experimentalmente infectados por Toxocara cati ou T. canis / Behavioral changes in experimentally infected Rattus norvegicus by Toxocara cati or T. canis

Sergio Vieira dos Santos 09 December 2010 (has links)
Toxocara canis e T. cati são nematódeos parasitos de cães e gatos, transmitidos pela ingestão de ovos larvados, pela via transmamária, por predação de hospedeiro paratênico e via transplacentária; essa última via ocorre na infecção por T. canis. Muitos parasitos apresentam mecanismos para alterar o comportamento de seus hospedeiros e garantir sua transmissão. Vários pesquisadores demonstraram ocorrência de alterações comportamentais, utilizando camundongos como modelo de hospedeiro paratênico para T. canis. Porém, não há na literatura, estudos sobre a ocorrência de alterações de comportamento de Rattus norvegicus experimentalmente infectados por T. cati. Os objetivos do presente trabalho foram verificar a distribuição de larvas de T.cati em exemplares de R. norvegicus e determinar as fases miotrópica e neurotrópica na infecção deste parasito; bem como comparar comportamentos de fêmeas e machos deste roedor experimentalmente infectado com inóculo de T. canis ou T. cati, nos períodos agudo e crônico da infecção. As variáveis avaliadas foram: ansiedade, atividade motora e força muscular. Inicialmente utilizaram-se 21 ratos com idade de oito semanas, infectados com 300 ovos de T. cati. Nos dias 3, 5, 8, 10, 15, 30 e 60 pósinfecção três animais foram mortos para contagem das larvas em seus órgãos. A seguir foram utilizados 50 exemplares fêmeas e 50 machos de R. norvegicus, com seis a oito semanas. Para cada sexo os animais foram divididos em três grupos: T. canis - 20 ratos infectados com 300 ovos de T. canis, T.cati -20 ratos infectados com 300 ovos de T. cati e controle - 10 ratos sem infecção. Nos dias 5, 15, 40 e 70 após a infecção, os animais dos grupos infectados e controle foram submetidos à avaliação das variáveis comportamentais e determinação da força muscular. Pôde-se verificar que a fase neurotrópica das larvas ocorreu principalmente no 15º dpi e 30º dpi. A fase miotrópica ocorreu em todo o período do experimento, porém especialmente no 15º e 60º dpi. Em relação à força muscular das fêmeas, pode-se observar diferença significante nos três grupos apenas no 40º dpi. Nos machos houve diferença significante entre os três grupos durante todo experimento. Nas variáveis comportamentais, somente as fêmeas do grupo infectado com T. canis apresentaram diferença significativa no 40º dpi em relação ao grupo controle. Os machos não apresentaram diferenças significantes na avaliação do comportamento. Pode-se concluir que T. cati teve comportamento migratório diferenciado, exemplares de R. norvegicus independente do sexo apresentaram maior decréscimo na força muscular quando infectados com T. cati e que apenas fêmeas infectadas por T. canis tiveram seu comportamento alterado permanecendo por mais tempo em condições de exposição em campo aberto. / Toxocara canis and T. cati are parasitic nematodes of dogs and cats, transmitted by the ingestion of embryonated eggs, by the transmamary and transplacentary routes or by predation of paratenic hosts harboring third-stage larvae in their bodies. The transplacentary route occurs only in T. canis infection. Many parasites have mechanisms to change the host\'s behavior in order to ensure their transmission. Several researchers have demonstrated the occurrence of behavioral changes, using mice as a model of paratenic host for T. canis. However, there are no studies on the occurrence of changes in behavior of Rattus norvegicus experimentally infected with T. cati. The aims of this study were to investigate the distribution of T.cati larvae in R. norvegicus and determine the myotropic and neurotropic phases in the infection of this parasite, and to compare behavior of male and female rodents experimentally infected with either T. canis or T. cati, in the acute and chronic periods of infection. The variables measured were: anxiety, motor activity and muscle strength. Initially we used 21 rats aged eight weeks, infected with 300 eggs of T. cati. On days 3, 5, 8, 10, 15, 30 and 60 post-infection three animals were killed to count the larvae in the organs and muscle. In the second experiment 50 females and 50 males of R. norvegicus, with six to eight weeks of age were used. For each sex the animals were divided into three groups: T. canis - 20 rats infected with 300 eggs of T. canis, T.cati -20 rats infected with 300 eggs of T. cati and control - 10 rats infection free. On days 5, 15, 40 and 70 post-infection, the infected animals and control groups were submitted to evaluation of behavioral variables and determination of forepaws\' muscle strength. It was verified that the neurotropic phase of larvae occurred mainly in the 15th dpi and 30 dpi. Myotropic phase occurred during all experimental period, but especially 15th and 60th dpi. In regard to muscle strength in females, a significant difference in the three groups was observed only after 40th post-infection. In males there was significant difference among the three groups throughout the experiment. In the behavioral variables, only the female of the group infected with T. canis showed significant differences after 40th dpi when compared to control group. Males showed no significant differences in the performance evaluation. It can be concluded that T. cati migration behavior was different, R. norvegicus regardless of sex showed greater decrease in muscle strength when infected with T. cati and only infected females by T. canis showed behavioral changes remaining more time under conditions of exposure in the open field.
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Avidez de anticorpos (IgG) anti-Toxocara canis em coelhas infectadas experimentalmente / Anti-Toxocara canis (IgG) avidity in experimentally infected rabbits

Bin, Lundia Luara Cavalcante 23 August 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lundia Bin.pdf: 419626 bytes, checksum: 784b66188ef611a6dd9abf0fdddd231f (MD5) Previous issue date: 2013-08-23 / Toxocariasis is an important zoonosis mainly transmitted by ingestion of embryonated T. canis eggs, a parasite of dogs, present in soil. The nematode larvae can migrate by a variety of organs e may cause disturbances, including respiratory, hepatic, neurological, cardiac and ophthalmic problems. Diagnostic of toxocariasis is based on detection of anti-Toxocara antibodies, particularly IgG, by ELISA. Avidity of IgG has been employed in order to evaluate the phase of infection of a disease. However, experimental studies regard to toxocariasis are scarce in literature. This study aimed to evaluate the Toxocara canis-IgG avidity in experimentally infected rabbits, before and after lactation, and of their offsprings. Seventeen nullipar white New Zealand female rabbits were distributed in two groups. In experimentally infected group, 12 animals were inoculated by oral route with 1,000 T. canis embryonated eggs, whereas five animals were uninfected (control group). Blood samples collections were performed on +7, +14, +21 and +28 days post-infection (dpi) and on the first day following the weaning (60 dpi) in order to obtaining serum for ELISA analysis. ELISA indirect test was run in order to obtain the anti- T. canis antibody reactivity index (RI) as well as the avidity index (AI). Seroconversion was observed on 14 dpi, and all the evaluated animals showed a high AI, excepting one animal (on 14 dpi). After the weaning period, all the studied rabbit showed seroconversion. All the studied bunnies were considered positive for ELISA and showed a high AI. Nevertheless, both RI and AI of mothers were significantly higher than their offspring. According to the results, it was possible to demonstrate the vertical transmission of T. canis larvae. In addition, the negative correlation between the RI obtained from the rabbits and the bunnies pointed out the possibility of passive protection due to the maternal transfer of antibodies. / A toxocaríase é uma importante zoonose transmitida principalmente pela ingestão de ovos embrionados de T.canis, um parasito de cães, presente no solo. A larva do nematódeo pode migrar por vários órgãos do corpo e ocasionar distúrbios, como problemas respiratórios, hepáticos, neurológicos, cardíacos e oftálmicos. O diagnóstico é realizado principalmente com a detecção de anticorpos, em especial de Imunoglobulinas da classe G (IgG), pela técnica de ELISA. A avidez de IgG tem sido utilizada para avaliar a fase de infecção de uma doença. No caso da toxocaríase, estudos experimentais são escassos na literatura. O objetivo do estudo foi o de avaliar a avidez de anticorpos anti-Toxocara canis em coelhas infectadas experimentalmente, antes e após lactação, e de suas progênies. Foram utilizadas 17 coelhas da linhagem Nova Zelândia, brancas, nulíparas, distribuídas em dois grupos. No grupo experimental, doze coelhas foram infectadas, oralmente, com 1.000 ovos larvados de T. canis. O segundo grupo, constituído por cinco coelhas serviu como controle. Nos dias 7, 14, 21 e 28 pós-infecção (DPI) e no primeiro dia após o desmame (60 DPI), foram coletadas amostras de soro para análise. O teste de ELISA indireto foi realizado para avaliar a o índice de reatividade (IR) de anticorpos IgG anti-T. canis e para cálculo do índice de avidez (IA). A soroconversão nos animais ocorreu a partir do 140 DPI. Com exceção de um animal (aos 14 DPI), todos os IA foram classificados como de alta avidez. Após lactação, (60 DPI), todos os animais foram considerados como ELISA positivo. Em relação aos filhotes todos os animais foram sororreagentes e apresentaram alto IA. Entretanto, tanto o IR quanto o IA das fêmeas foram significativamente maiores que da sua progênie. Os resultados demonstraram a transmissão vertical de larvas. A correlação negativa entre os valores da IR das coelhas e de seus filhotes sugere a possibilidade de proteção passiva pela transferência de anticorpos maternais.
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Contaminação de solo de áreas de lazer por ovos de Toxocara spp em regiões central e periurbana de Mirante do Paranapanema, São Paulo, Brasil / Soil contamination by Toxocara spp eggs in public areas of parks in central and periurban area of Mirante do Paranapanema, São Paulo, Brasil

Dias, Aparecida Pereira 12 December 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Mestrado Aparecida Pereira Dias.pdf: 334818 bytes, checksum: 8756f98a5299978163e1bfa1237c20bc (MD5) Previous issue date: 2007-12-12 / In order to evaluate the enviromental contamination by Toxocara spp eggs in public areas in Mirante do Paranapanema, São Paulo, Brazil, and to compare the frequencies in central areas (area 1: six parks) and periurban (area 2: seven parks), 250g of soil were collected from five different sites from 13 public parks. Two aliquots of 10 g were analyzed using the centrifuge-fluctuation technique with sodium nitrate (d= 1,200 g/cm3). The contamination was observed in 76.9% of parks, being all the periurban parks contaminated (7/7). On other hand, it wqas registered the presence of Toxocara spp eggs in 50% (3/6) of the central places (p<0.05). From recovered eggs 33.3% were available, and 15.15% had moving larvae. The results pointing the parks of Mirante do Paranapanema as a source of infection for the human population to toxocariasis. / Com o objetivo de avaliar a contaminação ambiental por ovos de Toxocara spp em áreas de lazer de Mirante do Paranapanema, São Paulo, e comparar as freqüências entre as regiões central (área 1: seis praças) e periurbana (área 2: sete praças) do município, foram coletadas amostras de 13 parques/praças públicas. Amostras de 250 gramas de solo foram colhidas de cinco pontos diferentes de cada local, escolhidos aleatoriamente. Foram retiradas de cada amostras, duas alíquotas de 10 gramas. O material foi submetido a lavagens com Tween 80(0,2% v/v) e hidróxido de sódio 0,1N. Para recuperação dos ovos, foi utilizada a solução de nitrato de sódio (d= 1.200 g/cm3), pela técnica de centrífugo-flutuação. Verificou-se que a contaminação ocorreu em 76,9% das praças (10/13), com a ocorrência de ovos em todas as praças da área periurbana (7/7) e em 50% das praças centrais (3/6), com diferença significativa (p<0,05). Dos ovos recuperados, 33,3% apresentaram características de viabilidade, sendo que destes 15,15% estavam larvados. Os resultados mostram que a contaminação destas praças pode oferecer riscos da população humana local para aquisição de toxocaríase.
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Avidez de anticorpos (IgG) anti-Toxocara canis em coelhas infectadas experimentalmente / Anti-Toxocara canis (IgG) avidity in experimentally infected rabbits

Bin, Lundia Luara Cavalcante 23 August 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lundia Bin.pdf: 419626 bytes, checksum: 784b66188ef611a6dd9abf0fdddd231f (MD5) Previous issue date: 2013-08-23 / Toxocariasis is an important zoonosis mainly transmitted by ingestion of embryonated T. canis eggs, a parasite of dogs, present in soil. The nematode larvae can migrate by a variety of organs e may cause disturbances, including respiratory, hepatic, neurological, cardiac and ophthalmic problems. Diagnostic of toxocariasis is based on detection of anti-Toxocara antibodies, particularly IgG, by ELISA. Avidity of IgG has been employed in order to evaluate the phase of infection of a disease. However, experimental studies regard to toxocariasis are scarce in literature. This study aimed to evaluate the Toxocara canis-IgG avidity in experimentally infected rabbits, before and after lactation, and of their offsprings. Seventeen nullipar white New Zealand female rabbits were distributed in two groups. In experimentally infected group, 12 animals were inoculated by oral route with 1,000 T. canis embryonated eggs, whereas five animals were uninfected (control group). Blood samples collections were performed on +7, +14, +21 and +28 days post-infection (dpi) and on the first day following the weaning (60 dpi) in order to obtaining serum for ELISA analysis. ELISA indirect test was run in order to obtain the anti- T. canis antibody reactivity index (RI) as well as the avidity index (AI). Seroconversion was observed on 14 dpi, and all the evaluated animals showed a high AI, excepting one animal (on 14 dpi). After the weaning period, all the studied rabbit showed seroconversion. All the studied bunnies were considered positive for ELISA and showed a high AI. Nevertheless, both RI and AI of mothers were significantly higher than their offspring. According to the results, it was possible to demonstrate the vertical transmission of T. canis larvae. In addition, the negative correlation between the RI obtained from the rabbits and the bunnies pointed out the possibility of passive protection due to the maternal transfer of antibodies. / A toxocaríase é uma importante zoonose transmitida principalmente pela ingestão de ovos embrionados de T.canis, um parasito de cães, presente no solo. A larva do nematódeo pode migrar por vários órgãos do corpo e ocasionar distúrbios, como problemas respiratórios, hepáticos, neurológicos, cardíacos e oftálmicos. O diagnóstico é realizado principalmente com a detecção de anticorpos, em especial de Imunoglobulinas da classe G (IgG), pela técnica de ELISA. A avidez de IgG tem sido utilizada para avaliar a fase de infecção de uma doença. No caso da toxocaríase, estudos experimentais são escassos na literatura. O objetivo do estudo foi o de avaliar a avidez de anticorpos anti-Toxocara canis em coelhas infectadas experimentalmente, antes e após lactação, e de suas progênies. Foram utilizadas 17 coelhas da linhagem Nova Zelândia, brancas, nulíparas, distribuídas em dois grupos. No grupo experimental, doze coelhas foram infectadas, oralmente, com 1.000 ovos larvados de T. canis. O segundo grupo, constituído por cinco coelhas serviu como controle. Nos dias 7, 14, 21 e 28 pós-infecção (DPI) e no primeiro dia após o desmame (60 DPI), foram coletadas amostras de soro para análise. O teste de ELISA indireto foi realizado para avaliar a o índice de reatividade (IR) de anticorpos IgG anti-T. canis e para cálculo do índice de avidez (IA). A soroconversão nos animais ocorreu a partir do 140 DPI. Com exceção de um animal (aos 14 DPI), todos os IA foram classificados como de alta avidez. Após lactação, (60 DPI), todos os animais foram considerados como ELISA positivo. Em relação aos filhotes todos os animais foram sororreagentes e apresentaram alto IA. Entretanto, tanto o IR quanto o IA das fêmeas foram significativamente maiores que da sua progênie. Os resultados demonstraram a transmissão vertical de larvas. A correlação negativa entre os valores da IR das coelhas e de seus filhotes sugere a possibilidade de proteção passiva pela transferência de anticorpos maternais.
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Contaminação de solo de áreas de lazer por ovos de Toxocara spp em regiões central e periurbana de Mirante do Paranapanema, São Paulo, Brasil / Soil contamination by Toxocara spp eggs in public areas of parks in central and periurban area of Mirante do Paranapanema, São Paulo, Brasil

Dias, Aparecida Pereira 12 December 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Mestrado Aparecida Pereira Dias.pdf: 334818 bytes, checksum: 8756f98a5299978163e1bfa1237c20bc (MD5) Previous issue date: 2007-12-12 / In order to evaluate the enviromental contamination by Toxocara spp eggs in public areas in Mirante do Paranapanema, São Paulo, Brazil, and to compare the frequencies in central areas (area 1: six parks) and periurban (area 2: seven parks), 250g of soil were collected from five different sites from 13 public parks. Two aliquots of 10 g were analyzed using the centrifuge-fluctuation technique with sodium nitrate (d= 1,200 g/cm3). The contamination was observed in 76.9% of parks, being all the periurban parks contaminated (7/7). On other hand, it wqas registered the presence of Toxocara spp eggs in 50% (3/6) of the central places (p<0.05). From recovered eggs 33.3% were available, and 15.15% had moving larvae. The results pointing the parks of Mirante do Paranapanema as a source of infection for the human population to toxocariasis. / Com o objetivo de avaliar a contaminação ambiental por ovos de Toxocara spp em áreas de lazer de Mirante do Paranapanema, São Paulo, e comparar as freqüências entre as regiões central (área 1: seis praças) e periurbana (área 2: sete praças) do município, foram coletadas amostras de 13 parques/praças públicas. Amostras de 250 gramas de solo foram colhidas de cinco pontos diferentes de cada local, escolhidos aleatoriamente. Foram retiradas de cada amostras, duas alíquotas de 10 gramas. O material foi submetido a lavagens com Tween 80(0,2% v/v) e hidróxido de sódio 0,1N. Para recuperação dos ovos, foi utilizada a solução de nitrato de sódio (d= 1.200 g/cm3), pela técnica de centrífugo-flutuação. Verificou-se que a contaminação ocorreu em 76,9% das praças (10/13), com a ocorrência de ovos em todas as praças da área periurbana (7/7) e em 50% das praças centrais (3/6), com diferença significativa (p<0,05). Dos ovos recuperados, 33,3% apresentaram características de viabilidade, sendo que destes 15,15% estavam larvados. Os resultados mostram que a contaminação destas praças pode oferecer riscos da população humana local para aquisição de toxocaríase.
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Frequência de anticorpos anti-Toxocara em frangos criados em sistema semi-intensivo, no Norte do Paraná, Sul do Brasil / Frequency of anti-Toxocara antibodies in broiler chickens reared under semi-intensive system, in the State of Paraná, southern Brazil

OLIVEIRA, Adilson Cardoso de 28 June 2017 (has links)
Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2018-02-07T17:46:54Z No. of bitstreams: 2 ADILSON OLIVEIRA.pdf: 313073 bytes, checksum: 760378e31125b9946d2bbf47c1aeafdb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-07T17:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ADILSON OLIVEIRA.pdf: 313073 bytes, checksum: 760378e31125b9946d2bbf47c1aeafdb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-06-28 / Toxocariasis is an important zoonosis of worldwide distribution. The main way of transmission of the disease to human is the ingestion of soil containing embryonated eggs of Toxocara spp., the etiological agent. Studies have indicated the ingestion of raw or undercooked meat of chickens as another way of transmission. Besides, free-range chickens have been considered a good sentinel for the contamination of soil by Toxocara spp. eggs. The aim of this study was to evaluate the presence of anti-Toxocara antibodies in naturally infected broiler chickens (n=189) slaughtered in an abattoir located in Paraná, southern Brazil. The chickens were reared in a semi-intensive system by small familial farmers (n=7). An ELISA test was performed to detect the presence of anti-Toxocara IgY after serum adsorption with Ascaridia galli extract. An overall seroprevalence of 67.7% (128/189; 95% confidence interval [CI] = 61.1-74.4) was observed. The frequency of positive animals by farm ranged from 29.6% to 100%. The optical density and reactivity index indicated the possible chronicity of infection of the evaluated chickens. Associations between the presence of antibodies and the area where chickens were reared (p = 0.382) or the population density of dogs on the farm (p = 0.785) were not observed. This study shows a high frequency of Toxocara spp. infection in broiler chickens reared in semi-intensive systems and provides significant evidence that chickens are good indicator of environmental contamination by larva migrans agents. Further studies are necessary to assess the risk factors associated with poultry infection and the likelihood of toxocariasis transmission to humans via the ingestion of free-range chicken meat. / Toxocaríase é uma importante zoonose, com ampla distribuição mundial. A principal via de transmissão da doença para humanos se deve à ingestão acidental de ovos de Toxocara spp. presentes NO solo. Estudos têm descrito a infecção de seres humanos pelo consumo de carne crua ou mal cozida de frango. Os frangos criados em sistema semi-intensivo têm sido também considerados como sentinelas para a contaminação de solo por ovos de Toxocara spp. Com a finalidade de avaliar a presença de anticorpos anti-Toxocara em frangos de corte, foram colhidas 189 amostras de sangue de frangos em um abatedouro no Norte do Paraná. Os frangos foram criados em sistema colonial/caipira (sistema semi-intensivo), em pequenas propriedades rurais (n=7) pertencentes a produtores vinculados a uma associação de pequenos produtores. Os testes sorológicos foram realizados pela técnica de ELISA indireto, utilizando-se antígenos excretórios-secretórios (TES) de Toxocara canis para detecção de anticorpos IgY (IgG), com preadsorção do soro com antígenos de Ascaridia galli, para redução de reações cruzadas. Como resultado, foi obtida uma prevalência de 67,7% (128/189; IC 95%= 61,1-74,4), com uma variação de 29.6% a 100% entre as propriedades. Não foi observada correlação entre a positividade dos animais quando comparada a área (p= 0,382) e a densidade populacional de cães por propriedade (p= 0,785). Os resultados demonstraram alta frequência de anticorpos anti-Toxocara em frangos de corte criados em sistema semi-intensivo, indicando que essas aves podem ser indicadores de contaminação ambiental por agentes de larva migrans. Outros estudos são necessários para avaliar os riscos associados à transmissão de toxocaríase aos humanos pelo consumo da carne de frangos criados no sistema colonial/caipira.
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Comparação de métodos para recuperação de ovos de Toxocara spp. em amostras de solo / Comparison of different techniques to recover Toxocara spp. Eggs from soil samples

Batista, Aline da Silveira 16 August 2018 (has links)
Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-11-23T17:01:02Z No. of bitstreams: 1 Aline da Silveira Batista.pdf: 165848 bytes, checksum: c187bcd430f8b370d46748116a9de117 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-23T17:01:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aline da Silveira Batista.pdf: 165848 bytes, checksum: c187bcd430f8b370d46748116a9de117 (MD5) Previous issue date: 2018-08-16 / The objective of this study was to compare the efficiency of different techniques to recover Toxocara spp. eggs from artificially and naturally contaminated soil samples. In the first stage, soil samples (n= 12 samples of 1g) were artificially contaminated with 100 eggs of T. canis. Three techniques were used: 1) centrifugal-sedimentation after soil filtration in a series of four sieves, using distilled water (300, 212, 90, and 63 μm); 2) centrifugal-flotation with zinc sulfate (d= 1.35 g/cm3) after sieving; and, 3) centrifugal-flotation with zinc sulfate without sieving. The recovery of eggs using technique 1 was significantly superior to the other techniques, with 78.25%, 16.33%, and 10.92% positivity, respectively. In the second stage, soil samples from 15 public squares/parks were evaluated over a period of 6 months, comparing the more efficient techniques in stage 1 (techniques 1 and 2). The recovery of eggs by technique 1 was more efficient. In the three out of the 6 months evaluated, there was a significant difference in the mean number of eggs recovered, using the technique of centrifugal-sedimentation with sieving. The technique is low cost, easy to implement, and does not require solutions which present environmental risks for its execution. / O objetivo do estudo foi comparar a eficiência de três técnicas de recuperação de ovos de Toxocara spp., a partir de amostras de solo artificialmente e naturalmente contaminadas. Na primeira etapa, amostras de solo (n= 12 amostras de 1g) foram contaminadas com 100 ovos de T. canis. Foram utilizadas três técnicas: 1) centrifugo-sedimentação após filtragem do solo em série de quatro tamises (300, 212, 90 e 63 μm); 2) centrifugo-flutuação com sulfato de zinco (d = 1.35 g/cm3) após tamisação; e, 3) centrifugo-flutuação com sulfato de zinco sem tamisação. A recuperação de ovos pela técnica 1 foi significativamente superior às demais, com 78,25%; 16,33% e 10,92% de positividade, respectivamente. Em uma segunda etapa, foram avaliadas amostras de solo de 15 praças e parques públicos de Presidente Prudente, São Paulo, durante um período de 6 meses, com comparação das técnicas 1 e 2. A recuperação de ovos pela técnica 1 mostrou ser mais eficiente. Em três meses avaliados, houve diferença significativa na média dos ovos recuperados. A técnica de tamisação centrifugo-sedimentação mostrou maior eficiência na recuperação de ovos de Toxocara spp. em relação as outras técnicas. A técnica é de baixo custo, fácil execução e não requer soluções com riscos ambientais para sua execução.
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Toxocaríase murina experimental: diagnóstico por PCR e comparação com técnicas imunológicas / Experimental murine toxocariasis: PCR diagnosis and its comparison with immunological techniques

Fonseca, Gabriela Rodrigues e 03 July 2018 (has links)
A toxocaríase é considerada uma das cinco parasitoses negligenciadas pelo Centers for Disease Control and Prevention e recebe ainda pouca atenção. As metodologias diagnósticas conhecidas são bem estabelecidas, apresentando, porém, limitações caracterizadas, sobretudo, pela ocorrência de reações-cruzadas. A biologia molecular mostra grandes avanços para o diagnóstico eficaz de diversas parasitoses, mas ainda carece de estudos em amostras de fácil obtenção para o diagnóstico da toxocaríase. Para aprimorar o conhecimento sobre a importância da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase Convencional (PCR) e sua relação com técnicas diagnósticas já conhecidas, foram utilizados 42 camundongos BALB/c, machos, entre 6 a 8 semanas de vida, divididos em três grupos, inoculados com 5, 50 ou 500 ovos larvados e sangrados pelo plexo orbital aos 15, 30, 60 e 90 dias pós infecção. Ainda, do total, 24 camundongos foram sangrados aos 120 dias pós infecção. Ao final do experimento, foi realizada a recuperação de larvas e a PCR de tecido hepático, cérebro e carcaça de camundongos dos grupos infectados. As amostras de soro foram processadas pelas técnicas de ELISA, Western-blotting e PCR. O ELISA e o Western-blotting mostraram resultados reagentes em todas as datas para a maioria dos inóculos de ovos, com relação diretamente proporcional entre a detecção de anticorpos e a carga parasitária. Durante o período da infecção, a detecção de IgG foi mais intensa próxima aos 60 dias pós-infecção para a maioria dos inóculos de ovos, por ambos os métodos imunológicos. Apesar de identificar DNA de larvas e vermes adultos, a PCR não foi capaz de detectar DNA do parasito em amostras de soro em todos os grupos e datas pós-infecção. Em contrapartida, foi detectado DNA do parasito em todos os órgãos com ao menos um dos primers utilizados. Foram recuperadas larvas na maioria dos órgãos com maior porcentagem de recuperação relatada nos animais inoculados com 50 ovos larvados. O diagnóstico molecular, utilizando sangue do paciente, ainda não pode ser considerado uma ferramenta para o diagnóstico dessa infecção / Toxocariasis is considered by the Centers for Disease Control and Prevention one of the five neglected diseases and still receives little attention. The diagnostic methods are well established, presenting, however, limitations characterized mainly by the occurrence of cross-reactions. Molecular biology shows great advance for the effective diagnosis of several parasitic infections, but still lacks studies using samples that are easily obtained for the diagnosis of toxocariasis. In order to refine the knowledge about the importance of Conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) and its relation with known techniques, 42 BALB/c male mice, between 6-8 weeks of age were inoculated with 5, 50 and 500 embryonated eggs respectively and bled by the orbital plexus at 15, 30, 60 and 90 days post infection. Also, 24 of 42 animals were bled the same way at 120 days post-infection. At the end of the experiment, larval recovery and conventional PCR were performed in liver, brain and carcass of mice of the infected groups. Serum samples were processed by ELISA, Western-blotting and PCR. The ELISA and Western-blotting techniques showed positive results in all days post infection for most eggs inocula and showed a directly proportional dependence between the infective dose and the level of antibodies. During the course of the infection, IgG detection was most intense near 60 days post infection for most eggs inocula, for both diagnostic methods. Despite positive DNA identification in larvae and adult worms, PCR wasn\'t able to detect parasite DNA in serum samples in all infected groups and days post infection. In contrast, parasite DNA was detected in all organs with at least one of the primers. Larvae were recovered from most organs, and animals inoculated with 50 embryonated eggs showed the highest percentage of larval recovery. Molecular diagnosis using patient\'s blood is not the best tool for toxocariasis diagnosis so far
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Toxocaríase experimental em hamster / Experimental toxocariasis in hamsters

Silva, Ana Maria Gonçalves da 08 April 2015 (has links)
INTRODUÇÃO: Toxocaríase é uma infecção parasitária de distribuição global, causada pela fase larval de Toxocara spp. Os hospedeiros naturais são cães e gatos, nos quais o parasita completa o ciclo chegando a fase adulta. Outros hospedeiros podem ser infectados pela fase larval do parasita, após ingestão de ovos embrionados do solo, mãos contaminadas, fomites, ou ingestão de carne ou vísceras de animais infectados. Em hospedeiros paratênicos o parasita não completa o ciclo, invadindo em estágio larval vísceras ou outros tecidos, onde podem sobreviver e induzir a patologia. O presente estudo teve como objetivo caracterizar o hamster (Mesocricetus auratus), como modelo experimental de toxocaríase, inicialmente através do estudo das lesões histopatológicas em fígado, pulmão e rim. A caracterização da resposta imunológica do modelo, foi feita através do estudo de citocinas envolvidas nas respostas Th1 e Th2, e foi sugerida uma correlação entre alterações glomerulares e depósitos de complexos antígenos-anticorpo pré-formados na circulação. MÉTODOS: Hamsters foram inoculados com ovos embrionados de Toxocara canis, e mantidos no biotério do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo. O estudo histopatológico foi desenvolvido utilizando-se cortes parafinados corados por hematoxilina e eosina. Para detecção de antígenos nos tecidos foram realizadas reações imunohistoquímicas, utilizando-se anticorpo monoclonal e policlonal anti- Toxocara canis. Utilizando-se o soro dos animais infectados e animais controle, foi realizada pesquisa de antígeno e anticorpo por ELISA. Para pesquisa de imunoglobulinas IgG e IgM e complemento, foram utilizados cortes congelados de rins para realização de reação de Imunofluorescência. Fragmentos de rins foram incluídos para utilização em microscopia eletrônica, para detecção de antígenos de toxocara e de imune complexos. Para caracterização de resposta imunológica foram estudadas citocinas envolvidas na resposta Th1 e Th2 por técnica de RT-PCR. RESULTADOS: Os achados histopatológicos demonstraram desde o início da infecção, presença de larvas em maior número no fígado, seguido de pulmão e raramente rins. Em fígado remanescentes larvares foram visualizados cercados por reação inflamatória granulomatosa. Logo no início da infecção foi encontrado pneumonite intersticial e intraalveolar focal, e lesão renal com glomérulo apresentando hiperplasia focal de células mesangiais (glomerulite mesangio-proliferativa). Houve marcação de antígenos em todos os grupos de animais infectados, tanto pelo anticorpo monoclonal, como pelo policlonal. Depósitos de imunoglobulinas e complemento foram marcados em glomérulo por imunofluorescência A análise dos soros por ELISA, demonstrou na pesquisa de anticorpos aumento gradativo no decorrer da infecção, acompanhado de diminuição de antígenos. Depósitos de antígenos em glomérulos foram detectados por microscopia imonoeletrônica. No RT-PCR foi detectado aumento significativo do nível de IL-4, com tendência de elevação de IL-10 e IFN-?. CONCLUSÃO: O hamster demonstrou ser um modelo experimental eficiente para toxocaríase. Entretanto este modelo é mais adequado para infecções de curto prazo. A resposta imunológica avaliada por RT-PCR, com elevado nível da expressão de IL-4, sugere uma resposta Th2, mas a tendência de aumento de IL-10 e IFN-? poderia sinalizar uma resposta mista Th1 e Th2. Achados de depósitos de imunoglobulinas no glomérulo sugerem a possibilidade de que as manifestações renais com síndrome nefrótica em humanos possa vir a ter como base a toxocaríase / INTRODUCTION: Toxocariasis is a parasitic infection of global distribution, caused by the larval stage of Toxocara spp. The natural hosts are dogs and cats, in which the parasite completes the cycle reaching adulthood. Other hosts can be infected with the larval stage of the parasite, after ingestion of embryonated eggs from the soil, contaminated hands, fomites, or ingestion of meat or viscera of infected animals. In paratenics hosts the parasite not complete the cycle, encroaching on larval stage in viscera or other tissues where they can survive and induce pathology. The present study aimed to characterize the hamster, Mesocricetus auratus, as experimental model of toxocariasis, initially through the study of histopathological lesions in the liver, lung and kidney. The characterization of immune response model, was made through the study of cytokines Th1 and Th2 responses involved, and a correlation was suggested between glomerular changes and antibody-antigen complexes deposits preformed in the circulation. METHODS: Hamsters were inoculated with embryonated eggs of Toxocara canis, and kept in the bioterium of the Institute of Tropical Medicine of the São Paulo. The histopathologic study was developed using paraffin slides stained by hematoxylin and eosin. For detection of antigens in tissues immunohistochemistry reactions were performed using monoclonal and polyclonal anti-Toxocara canis sera. Using the serum of infected and control animals, search has been carried out of antigen and antibody by ELISA. For the search of immunoglobulins IgG, IgM and complement, were used slides prepared from frozen fragments of kidneys and a immunofluorescence reaction. Fragments of kidneys were included for electron microscopy to detect antigens of Toxocara and immune complexes. For characterization of Th1 and Th2 response cytokines involved were detected by RT-PCR technique. RESULTS: Histopathological findings demonstrated since the beginning of the infection the presence of larvae in greater numbers in the liver, followed by lung and rarely kidneys. In the liver larval remnants were surrounded by a granulomatous inflammatory reaction. Early in the infection was found interstitial pneumonitis with intraalveolar focal inflammatory infiltrate and renal injury with glomerulus showing mesangial cell focal hyperplasia (mesangioproliferative glomerulonephritis). There were the presence of antigens in all groups of animals infected detected by both the monoclonal and polyclonal antibodies. Deposits of immunoglobulin and complement were present in glomerulus by immunofluorescence analysis. ELISA, showed that the presence of antibodies increased gradually in the course of infection, accompanied by progressive diminution of antigens. Clusters of antigen/s were detected by immunoelectron microscopy. RT-PCR showed a significant increase of IL-4, with a tendency of increase of IL- 10 and IFN-?. CONCLUSION: The hamster has proved to be an efficient experimental model for toxocariasis. However this model is best suited for short-term infections. The immune response evaluated by RT-PCR, with high level of expression of IL-4, suggests a Th2 response, but the trend of increase of IL-10 and IFN-? might suggest a Th1 and Th2 mixed response. Findings of immunoglobulin deposits in glomeruli suggests the possibility that the renal manifestations with nephrotic syndrome in humans might have, in certain circunstances, as a basis the toxocariasis

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