Orientador: Paulo Francisco Domingues / Banca: Hélio Langoni / Banca: Alexander Welker Biondo / Resumo: A toxoplasmose é uma das mais freqüentes zoonoses parasitárias, de distribuição mundial, cujo agente etiológico é o Toxoplasma gondii. A infecção em suínos tem sido descrita em diversos países, demonstrando seu caráter cosmopolita e a susceptibilidade desta espécie. O T.gondii pode ser transmitido sob várias formas, e com relação à espécie suína, a ingestão de carne crua ou mal cozida e seus derivados são importantes vias de transmissão para o homem. Estudou-se a prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em 550 amostras de soros de suínos de criações de "fundo de quintal" na microrregião de Registro - SP, utilizando como prova sorológica o método de aglutinação direta (MAD). Este mostrou-se uma ferramenta diagnóstica de fácil realização, baixo custo, não necessitando de equipamentos especiais para a leitura e interpretação dos resultados. Das 550 amostras de soro, 111(20,18%) reagiram positivamente com os títulos 64 (15,32%), 256 (27,93%), 1024 (39,64%), 4096 (10,81%), 16384 (4,50%) e 65536 (1,80%). Concluí-se que os resultados obtidos indicam alta prevalência desta enfermidade nas condições e região de origem dos animais. À medida que foram obtidos títulos altos de anticorpos contra o agente, pode-se concluir também que há risco potencial de transmissão da toxoplasmose para o homem, sugerindo que muitos desses animais poderiam apresentar bradizoítos em sua musculatura / Abstract: Toxoplasmosis is one of the most frequent parasitic zoonosis with worldwide distribution whose etiological agent is Toxoplasma gondii. The infection in swine has been described in many countries, showing the cosmopolitan character and susceptibility of this specie. T.gondii can be transmitted by many ways. The ingestion of swine raw or badly cocked meat and derivatives are important pathways of transmission to man. The anti-T.gondii antibodies prevalence was studied in 550 serum samples of swine under rustic condition (animals with no breed, popular named as "backyard breeding") in Registro-SP, using the modified agglutination test (MAT). Such method is verified as an easy-appliance tool, with low costs and non necessity of special equipment in order to achieve interpretation of results. In 550 samples of serum, 111 (20.18%) were positive with titles of 64 (15.32%), 256 (27.93%), 1024 (39.64:%), 4096 (10.81%), 16384 (4.50%), 65536 (1.80%). These results achieved indicate a high prevalence of the disease on the region studied and under the specific conditions described. The high rate obtained as result also leads to the conclusion that there is potential risk of toxoplasmosis transmission to man due to the possibility of the animals to have bradyzoits in their musculature / Mestre

Orientador: Alvimar José da Costa / Coorientador: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: João Luis Garcia / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: O elevado índice de ovinos naturalmente infectados por Toxoplasma gondii, a grande possibilidade destes animais se reinfectarem com este protozoário e a inexistência de dados sobre a transmissão congênita em uma reinfecção, motivaram a realização deste projeto de pesquisa. O objetivo deste experimento foi estudar a transmissão congênita em ovelhas, infectadas e reinfectadas experimentalmente com oocistos de T. gondii, em três fases gestacionais. Vinte ovelhas em idade reprodutiva, sorologicamente negativas para T. gondii (RIFI-IgG), foram selecionadas e primoinfectadas experimentalmente com a cepa ME49 (Dia zero). Três carneiros, sorologicamente negativos para toxoplasmose, neosporose, leptospirose e brucelose, foram utilizados para monta natural (RIFI≤512). Posteriormente ao diagnóstico de gestação, estas ovelhas foram distribuídas em quatro grupos experimentais: GI - cinco ovelhas reinfectadas com T. gondii no 40º dia de gestação (DG), GII - cinco no 80º DG, GIII - cinco no 120º DG e GIV - cinco receberam solução salina no 120º DG (controle não reinfectado). Cinco fêmeas sorologicamente negativas (RIFI<64) para infecção toxoplásmica foram mantidas como controle negativo (não infectado) - GV. Sete dias antes da primoinfecção, imediatamente antes da inoculação, a cada três dias até o 30º dias pós-inoculação e a cada sete dias até o término da gestação, exames clínicos e pesquisa de anticorpos (RIFI-IgG) contra T. gondi foram realizados nas 25 ovelhas. Exames ultrassonográficos foram efetuados para diagnóstico de gestação, posteriormente à reinoculação, a periodicidade deste exame foi quinzenal. Amostras de sangue (soro), de todos os cordeiros provenientes das ovelhas experimentais foram obtidas, imediatamente após o nascimento, no 3º e 14º dia de idade, para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The high occurrence of naturally infected sheep with Toxoplasma gondii, the great possibility of reinfection and the lack of data on congenital transmission in a reinfection were the motivation of this research project. The aim this study was evaluate the congenital transmission in experimentally reinfected and infected ewes, by oocysts T. gondii, in three pregnancies phases. Twenty ewes, negative serologically for T. gondii (indirect fluorescent antibody test-IgG), were selected and experimentally infected with ME49 strain (Day0). Three ram, negative serologically for toxoplasmosis, neosporosis, leptospirosis and brucellosis were used for natural mating (IFAT≤512). After the diagnosis of pregnancy, these ewes were distributed in four experimental groups: GI - five ewes reinfected with T. gondii on the 40th day of gestation (DG), GII - five in the 80th DG, GIII - DG 120th in five and GIV - five received saline solution in 120th DG (unreinfected). Five ewes, negative serologically (IFA <64) for T. gondii infection were kept as negative control (uninfected) - GV. Seven days before the first infection, immediately prior to inoculation, every three days until the 30th day after inoculation and every seven days until the end of pregnancy, clinical examinations and blood samples (IFAT-IgG against T. gondii) were performed in 25 ewes. Ultrasonographic examinations were performed in the diagnosis of pregnancy and fortnightly after reinfection. Serum samples, from all the lambs were obtained immediately after birth (pre-colostral), at 3 and 14 days of life, for T. gondii (IFAT-IgG). Parasitism by T. gondii was investigated (histopathology, mouse inoculation and PCR) in tissue fragments of female and fetuses, stillbirths and/or dead lambs after birth. Twenty ewes showed T. gondii antibodies specific on post-inoculation day (PID) 11. The most serological title... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: A toxoplasmose na maioria dos casos é assintomática, porém pode causar seqüelas graves no feto, quando transmitida durante a fase aguda da infecção pela gestante. Diante disso, é de fundamental importância o acompanhamento sorológico de gestantes, a fim de definir o momento em que houve a aquisição da infecção por T. gondii, possibilitando assim, o tratamento precoce e diminuindo, portanto, o risco de transmissão congênita. No período de Janeiro a Novembro de 2005, avaliou-se a metodologia sorológica do teste de avidez de IgG anti-Toxoplasma gondii na rotina laboratorial entre as gestantes com teste sorológico negativo para anticorpos IgM anti-Toxoplasma (n = 200) e gestantes com teste sorológico positivo (n = 33) durante o pré-natal, em Araraquara-SP, no Laboratório de Imunologia Clínica e Biologia Molecular NAC-FCF/UNESP. Os resultados foram avaliados, segundo o perfil sorológico das gestantes participantes da pesquisa e a variação do índice de avidez de IgG entre as soropositivas para IgM e sua relação com o tratamento antiparasitário. Baseando-se nos resultados ressaltou-se a importância da adoção de medidas profiláticas para a redução da transmissão congênita. Todos os resultados para anticorpos IgG e IgM devem ser notificados na ficha da paciente, outros testes complementares devem ser realizados e a interpretação utilizada para o teste de avidez de IgG, precisa ser padronizada. Concluiu-se que alguns profissionais de saúde realizaram desnecessariamente o tratamento antiparasitário nas gestantes. Embora as gestantes realizem em sua maioria, o pré-natal no primeiro trimestre de gestação, a prevalência para toxoplasmose entre as gestantes de Araraquara-SP foi elevada, necessitando, portanto, de melhor acompanhamento da gestante e do recém-nascido e conscientização da importância da assistência à saúde pelos serviços de saúde. / Abstract: Toxoplasmosis usually is asymptomatic but can cause serious sequels in the fetus, when transmitted during the acute stage by the pregnant woman. Therefore, the serological screening of pregnant women has fundamental importance, in order to define the moment of contamination by T. gondii, and thus facilitating the precocious treatment and decreasing the risk of congenital transmission. During the period of January to November of 2005, we evaluated the serological methodology of IgG avidity test for toxoplasmosis in the routine laboratory, among pregnant women, with negative serological test for anti-Toxoplasma IgM antibodies (n = 200) and pregnant with serological test positive (n = 33), during the prenatal, in Araraquara-SP, in Immunology Clinic's Laboratory and Molecular Biology NAC-FCF/UNESP. The results in this study were evaluated, according to the serological profile of the pregnant women and the variation of anti-Toxoplasma IgG avidity index among the pregnant women with positive IgM antibodies and its relationship with the antiparasitic treatment. According to our results, we reinforce the importance of use prophylactics measures to reduce congenital transmission. All results for IgG and IgM antibodies must be notified, other complementary tests should be accomplished and the interpretation used for the IgG avidity test should be standardized. We concluded that some professionals realized unnecessary antiparasitic treatment. Although most of pregnant women at Araraquara-SP accomplish the prenatal in the first trimester of gestation, the prevalence for toxoplasmosis are elevated, needing therefore, a better accompaniment of the pregnant women and of the newly born and conscientiousness about the importance of health assistance during pregnancy by health services. / Orientador: Maria Jacira Silva Simões / Coorientador: Paulo Inácio da Costa / Banca: Semíramis Guimarães Ferraz Vianna / Banca: Herminia Yohko Kanamura / Mestre

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: João Luis Garcia / Banca: Francisco Carlos Rodrigues de Oliveira / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Cesar Roberto Esper / Resumo: Ovinos machos isentos de Toxoplasma gondii, foram distribuídos em três grupos sendo, G1: um ovino inoculado, pela via oral, com 2,0 x 105 oocistos da cepa P, G2: um ovino infectado, pela via subcutânea, com 1,0 x 106 taquizoítos da cepa RH e G3: um ovino não infectado mantido como controle. Após a inoculação dos machos com T. gondii, 12 ovelhas reprodutoras, não gestantes, sorologicamente negativas para doenças reprodutivas, sobretudo toxoplasmose, foram sincronizadas e em seguida expostas à monta natural pelos machos, anteriormente inoculados, sendo: cinco ovelhas submetidas à monta natural pelo macho do G1; cinco ovelhas expostas à monta natural pelo macho do G2 e duas ovelhas pelo macho pertencente ao grupo controle. Nos soros das ovelhas obtidos nos dias -30, -14, -7, -1, zero (antes da monta natural) e nos dias 1, 3, 5, 7, 11, 14 e semanalmente até o parto, foi pesquisada a presença de anticorpos contra T. gondii pela RIFI. Bioensaio em camundongos e PCR foram realizados em amostras de sêmen e tecidos dos machos, tecidos das fêmeas e de seus respectivos filhotes. Cinco das 12 fêmeas utilizadas apresentaram anticorpos específicos contra T. gondii após a monta natural, sendo duas pelo macho inoculado com oocistos (G1) e três pelo ovino infectado com taquizoítos (G2). Pelo bioensaio foi possível diagnosticar, no dia da monta natural, a presença do T. gondii em amostras seminais dos ovinos infectados (G1 e G2) e em amostras do "pool" de tecidos das cinco fêmeas e em cinco de seus respectivos filhotes. Foi possível, ainda, pela técnica da PCR isolar o DNA de T. gondii em amostras seminais dos machos reprodutores no dia do coito, e no "pool" de tecidos de uma e duas fêmeas expostas à monta natural por reprodutores infectados com oocistos e taquizoítos, respectivamente. É importante relatar que, por meio desta técnica foi possível diagnosticar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Male sheep in reproductive age and with no prior Toxoplasma gondii disease, were divided into three groups: G1, a sheep inoculated with 2.0 x 105 of P strain oocysts; G2, a sheep infected with 1.0 x 106 of RH strain tachyzoites and; G3 a control uninfected sheep. After inoculation of males with T. gondii, 12 breeding ewes, not pregnant, serologically negative for reproductive diseases, particularly toxoplasmosis, were synchronized and then exposed to natural mating by those males, previously inoculated, being: five ewes submitted to natural mating by male G1, five ewes exposed to natural mating by the male of G2 and two ewes submitted to natural mating by the male control from group. In sera obtained from all ewes on days -30, -14, -7, -1, zero (before natural mating) and on days 1, 3, 5, 7, 11, 14 and weekly until partum, was investigated the presence of antibodies against T. gondii by IFAT. Bioassay and PCR were performed on samples of semen and tissues of males/females tissues and their offspring. Five of the 12 females submitted to natural mating, had antibodies anti-T. gondii, being, two by male inoculated with oocysts (G1) and three for sheep infected with tachyzoites (G2). For the bioassay was possible to diagnose on the day of natural mating, the presence of T. gondii in semen samples from infected sheep (G1 and G2) and in samples of pool of tissues from five females and five of their puppies. It was also possible by PCR to isolate the DNA of T. gondii in semen samples of rams on sexual intercourse, and the pool of tissues of one and two females exposed to breeding by natural mating infected with tachyzoites and oocysts, respectively. It is important to report that through this technique it was possible to diagnose the presence of this parasite also in the pool of tissue from the offspring of a female submitted to the natural breeding sheep infected with oocysts. From the results... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Caprinos machos em idade reprodutiva, sorologicamente negativos para Toxoplasma gondii, foram selecionados e distribuídos como apresentado a seguir: A - um caprino inoculado, via oral, com 2,0 x 105 oocistos da cepa P; B - um caprino inoculado, via subcutânea, com 1,0 x 106 taquizoítos da cepa RH e C - um caprino não inoculado mantido como controle. Após a inoculação dos machos com T. gondii, 12 cabras reprodutoras, não gestantes, sorologicamente negativas para as principais doenças reprodutivas, sobretudo toxoplasmose, foram sincronizadas. Em seguida, foram expostas à monta natural pelos machos, anteriormente inoculados: cinco cabras submetidas à monta natural pelo macho A (GI); cinco cabras submetidas à monta natural pelo macho B (GII) e duas cabras pelo macho C - controle (GIII). Nos soros das cabras obtidos nos dias -14, -7, -1 (antes da monta natural), e nos dias 3, 6, 9, 11, 14 e semanalmente até o parto, foi pesquisada a presença de anticorpos contra T. gondii pelo ELISA teste. Bioensaio em camundongos e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) foram realizados em amostras de sêmen e tecidos dos machos, tecidos das fêmeas e de seus respectivos "produtos". Dez das 12 fêmeas utilizadas apresentaram anticorpos específicos contra T. gondii após a monta natural, sendo as cinco cobertas pelo macho inoculado com oocistos (GI) e cinco cobertas pelo caprino inoculado com taquizoítos (GII). Pelo bioensaio e pela PCR foi possível identificar, em várias datas experimentais em que ocorreu a monta natural, a presença do T. gondii nas amostras seminais dos caprinos inoculados. Posteriormente, após eutanásia, foi possível também isolar este parasito em algumas das amostras teciduais dos machos experimentais. Por estas mesmas técnicas de diagnóstico, identificou-se também a presença deste coccídio nas amostras teciduais das fêmeas experimentais, assim como de seus ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Male goats in reproductive age, serologically negative for Toxoplasma gondii, were selected and distributed according to the following arrangement: A - one goat inoculated orally with 2.0 x 105 oocysts of the strain P; B - one goat inoculated subcutaneously with 1.0 x 106 tachyzoites of the strain RH and C - one uninfected goat kept as control. After T. gondii inoculation, 12 nonpregnant female breeder goats serologically negative for the main reproductive diseases, especially toxoplasmosis, were synchronized and then exposed to natural mating by those males previously inoculated, being: five females submitted to natural mating by the male A (GI), five females exposed to natural mating by the male B (GII) and two females submitted to natural mating by the uninfected male (GIII). In sera obtained from all female goats on days -14, -7, -1, (before natural mating) and on days 3, 6, 9, 11, 14 and weekly until partum, the presence of antibodies against T. gondii was investigated by ELISA test. Bioassay in mice and PCR were performed on samples of semen and tissues of males and females and on their products which were stillbirths, fetus and offspring. Ten out of 12 females used showed specific antibodies against T. gondii after natural mating, being five from group GI and five from group GII. On several dates in which natural mating occurred, T. gondii was identified in semen samples of infected males by bioassay and PCR. Subsequently, after euthanasia, it was possible to isolate T. gondii in some of tissue samples from experimentally infected males. Moreover, by PCR and bioassay techniques it was also possible to identify T. gondii in tissue samples from experimentally infected females as well as their products (stillbirths, fetus and offspring). It was not possible to notice any clinical signs of toxoplasmosis Therefore, these results proved, for the first time, the sexual transmission of toxoplasmosis in goat species / Orientador: Alvimar José da Costa / Coorientador: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Odilon Vidotto / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Flávio Ruas de Moraes / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Doutor

Orientador: Luiz Carlos de Mattos / Banca: Wilson Baleotti Junior / Banca: Marilanda Ferreira Bellini / Resumo: Introdução: A infecção por Toxoplasma gondii em gestantes associa-se aos riscos de transmissão congênita. Este protozoário infecta os humanos utilizando como rota de infecção o trato gastrintestinal, onde se dá a síntese dos antígenos fucosilados Lea e Leb que determinam os fenótipos do sistema histo-sanguíneo Lewis [Le(a+b-), Le(a+b+) e Le(a-b-)]. A expressão destes fenótipos resulta de interações epistáticas entre os genes FUT2 (Secretor) e FUT3 (Lewis) que codificam as fucosiltransferases FUTII e FUTIII, respectivamente. Mutações no gene FUT3 determinam a ausência de fucosilação dos oligossacarídeos precursores do tipo 1 resultando na expressão do fenótipo Le(a-b-). A infecção por T. gondii e a expressão dos antígenos Lewis ocorrem no mesmo órgão e, embora aparentemente independentes, podem estar relacionadas entre si. Objetivo: Investigar a associação o sistema histo-sanguíneo Lewis e a infecção por T. gondii da cepa RH. Material e Métodos: Foram selecionadas 209 amostras de soro e de DNA genômico estocadas no Laboratório de Imunogenética do Departamento de Biologia Molecular da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto - FAMERP, coletadas de gestantes atendidas no Ambulatório de Gestação de Alto Risco do Hospital de Base da Fundação Faculdade Regional de Medicina de São José do Rio Preto - FUNFARME. Uma triagem para detecção dos anticorpos anti-T. gondii foi realizada nas amostras de soro pelo método hemaglutinação indireta (HAI). O ensaio imunoenzimático (ELISA) foi empregado para identificar os anticorpos específicos da classe IgG contra a cepa RH. Cento e noventa e cinco amostras de soro que apresentaram resultados concordantes entre os dois testes foram selecionadas para compor os grupos "reagente" e "não reagente". Para inferir os fenótipos do sistema histo-sanguíneo Lewis, as amostras de DNA... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Toxoplasma gondii Infection in pregnant women is associated with risks of congenital transmission. This protozoa infects humans using as infection rout the gastro intestinal tract, where occur the synthesis of fucosylated Lea and Leb antigens which determine Lewis histo-blood group phenotypes [Le(a+b-), Le(a+b+), Le(a-b-)]. The expression of these phenotypes results from epistatic interactions between FUT2 (Secretor) and FUT3 (Lewis) genes which codes both the FUTII and FUTIII fucosyltransferases, respectively. Single nucleotide polymorphisms affecting FUT3 gene determine the absence of type 1 oligosaccharide precursor fucosylation and the expression of Le(a-b-) phenotype. The entrance of T. gondii and the expression of Lewis histo-blood group system occur in the same organ, probably there is some link between them. Objective: The aim of this study was to test the hypothesis that the Lewis histo-blood group system is associated with infection by T. gondii. Material e Method: A total of 209 serum sample and genomic DNA sample stored at the Immunogenetics Laboratory from the Molecular Biology Department of Medicine School in São José do Rio Preto - FAMERP, obtained from pregnant women who attended in the High-Risk Pregnancy Clinic of Hospital de Base were enrolled in this study. Anti-T. gondii antibodies were screened by indirect hemagglutination test. ELISA assays were used to identify specific IgG antibodies to RH strain. One hundred and ninety-five serum samples, with identical results between both tests were selected to compose the groups "reagent' and "non reagent". To infer the Lewis histo-blood group system phenotypes, genomic DNA samples corresponding to the serum sample were genotyped for the G428A mutation of the FUT2 gene and T202C and C314T of FUT3 gene by PCR-RFLP and PCR-SSP assays, respectively. The data were analyzed by Fisher's exact test... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Gisele Fabrino Machado / Banca: Mary Marcondes / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: A Leishmaniose visceral é uma enfermidade que possui uma grande variabilidade de manifestações clínicas, em humanos como em cães. Cães cronicamente infectados podem desenvolver desordens neurológicas, contudo, há poucos relatos que caracterizam as lesões e elucidam a patogenia da leishmaniose cerebral canina. Considerando a imunossupressão associada à leishmaniose visceral e que os patógenos oportunistas Toxoplasma gondii e Neospora caninum podem colaborar para a ocorrência de lesões no sistema nervoso central de cães naturalmente infectados por Leishmania chagasi, as populações de linfócitos B (CD79+) e T (CD3+) foram avaliadas no tecido nervoso de cães portadores de leishmaniose visceral e que possuem soropositividade para T. gondii e N. caninum. Lesões inflamatórias, caracterizadas por acúmulos de células mononucleares compostos principalmente por linfócitos T CD3+ predominaram em diversas regiões encefálicas dos cães infectados (P = 0,0012). Linfócitos B CD79+ foram detectados em pequena intensidade, não havendo diferença entre os grupos (P = 0,3604). Os resultados obtidos sugerem que a co-presença de leishmaniose visceral, toxoplasmose e neosporose é importante para o agravamento das lesões encefálicas, e que a imunossupressão gerada pela infecção por Leishmania não somente favorece a infecção por outros patógenos, mas colabora com esses, ocasionando lesões mais severas no tecido nervoso / Abstract: Visceral leishmaniasis is a disease with great variability regarding the clinical manifestations, in humans as in dogs. Chronically infected dogs may develop neurological disorders, however, there are few reports that characterise the lesions and make clear the pathogenesis of the canine cerebral leishmaniasis. Considering the immunossupression associated to visceral leishmaniasis and that the opportunist pathogens Toxoplasma gondii and Neospora caninum may collaborate to the occurrence of lesions in the central nervous system of dogs naturally infected by Leishmania chagasi, we evaluated the population of B (CD79+) and T (CD3+ ) lymphocytes in the nervous tissue of dogs with visceral leishmaniasis and with seropositivity to T. gondii and to N. caninum. Inflammatory lesions, characterised by mononuclear cellsaccumulation, composed mainly by CD3+ T lymphocytes predominated in several encephalic regions of the dogs from the infected groups (P=0.0012). CD79+ B lymphocytes were detected in very small intensity and presented no difference among groups (P=0.3604). The results presented herein suggest that the co-presence of visceral leishmaniasis, toxoplasmosis and neosporosis is important for the worsening of the encephalic lesions, and that the immunossupression caused by Leishmania infection not only propitiates the infection by other pathogens, but collaborate with them, causing more severe lesions in the brain / Mestre