Lipoprotein lipase (LPL) is a key enzyme in lipoprotein metabolism. The enzyme catalyzes hydrolysis of triacylglycerols (TG) of chylomicrons and of very low density lipoproteins (VLDL). However, the mechanisms involved in the regulation of this protein are not fully understood yet. Therefore, the aim of the theses is to study selected aspects of LPL activity regulation. Recently discovered apolipoprotein A-V (apo A-V) substantially affects triglyceridemia and it is presumed that it may function as LPL activator. However, its concentration in the blood is extremely low and we therefore investigated whether most of apo A-V could be bound to the heparan sulfate proteoglycan (HSPG) of vascular wall similarly to LPL. Intravenous heparin application in healthy volunteers resulted in an expected increase in LPL activity but apo A-V concentration did not change. Our results do not support the hypothesis that most of apo A-V is bound to HSPG of the capillary endothelium. An alcohol consumption plays also a role in LPL regulation - the long-term moderate alcohol consumption is known to increase enzyme activity; on the contrary, it is presumed that LPL activity is inhibited immediately after alcohol consumption. However, the direct evidence for such a premise is missing. The other aim of the theses was to...

Os lipídios estruturados (LEs) constituem uma classe lipídica caracterizada pela presença de triacilgliceróis (TAGs) projetados de modo a apresentarem em sua estrutura química ácidos graxos (AGs) com características desejáveis. Na atualidade, estes compostos representam um desafio tecnológico e uma nova fronteira no desenvolvimento de produtos nutricionalmente superiores. Estes TAGs reestruturados são sintetizados através da mistura de óleos e gorduras e de posterior interesterificação química ou enzimática. O rearranjo de AGs nestas moléculas resulta em produtos com características físicas, químicas e nutricionais diferentes das dos lipídios originais. Devido à capacidade potencial para a redução do risco de doenças, também podem ser considerados alimentos funcionais por apresentarem vantagens clínicas que se encontram associadas aos seus AGs e à estrutura peculiar de sua molécula lipídica formada pela interesterificação. A incorporação de ácidos graxos de cadeia média (AGCM) aos TAGs, como o caprílico e cáprico, e de ácidos graxos monoinsaturados (AGMI) como o oléico (w-9), tem sido considerada de grande importância na elaboração de alimentos funcionais de origem lipídica, uma vez que proporcionam rápida fonte de energia e reduzem o risco de enfermidades cardiovasculares. Os objetivos do projeto foram analisar as interações produzidas em misturas binárias e ternárias de triacilgliceróis de cadeia média e longa pela análise das propriedades físicas e químicas das misturas e realizar a modificação das misturas por interesterificação química, visando a obtenção de LEs, com posterior análise química e física de suas propriedades. Foram utilizadas gordura abdominal de frango, sua estearina e triacilgliceróis de cadeia média. Foi empregado um planejamento de dez experimentos. Para as respostas analíticas foi aplicado um modelo de regressão múltipla, do tipo cúbico especial. Os resultados foram representados em diagramas triangulares. Os LEs obtidos apresentaram 14,8 a 58,4% de AGCM, 15,7 a 37,2% de ácidos graxos saturados, 19,2 a 47,5% de AGMI e 6,7 a 15,2% de ácidos graxos essenciais. A estearina de frango teve influência sobre as propriedades de pontos de amolecimento e fusão, consistência e conteúdo de gordura sólida. Após a reação houve formação de grupos de TAGs não existentes nas amostras originais. A técnica de DSC possibilitou distinguir entre misturas de gorduras e LEs, além de permitir a visualização de modificações nas misturas decorrentes da interesterificação. A composição triacilglicerídica foi fundamental para compreender o comportamento das misturas interesterificadas, mesmo diante da dificuldade na identificação dos TAGs individuais. / Structured triacylglycerols are generally any fats that are modified or restructured from natural oils and fats, or fatty acids therefrom, having special functionality or nutritional properties for edible or pharmaceutical purposes. These restructured triacylglycerols are synthesized by blending and chemical or enzymatic interesterification reaction of oils and fats. The fatty acids rearrangement in these molecules results in products with physical, chemical and nutritional characteristics that are different from the original lipids. These compounds can be considered functional foods when they are able to reduce the risk of diseases. Their clinical advantages are associated with the peculiar structure of the lipid molecule formed by interesterification. The incorporation of medium chain and monounsaturated, is considered of great importance in the lipidic functional foods formulation. These kinds of lipids are a quick energy source and could prevent cardiovascular diseases. The purposes of this study were to analyze the interactions that occur in binary and ternary fat blends between medium and long chain triacylglycerols and their structured triacylglycerols obtained by chemical interesterification through the analysis of their physico-chemical properties. The raw material utilized in this research was abdominal chicken fat, its stearin and medium chain triacylglycerols. The experimental design presented 10 samples corresponding to 10 different blend proportions. A mathematical model of multiple regression of the special cubic type was used to obtain the analytical responses. The results were represented in triangular diagrams. The synthesized structured triacylglycerols presented from 14.8 to 58.4% of medium chain fatty acids, from 15.7 to 37.2% of saturated fatty acids, from 19.2 to 47.5% of monounsaturated fatty acids, and from 6.7 to 15.2% of essential fatty acids. The addition of stearin influenced the softening and melting points, consistency, and solid fat content of chicken fat. After interesterification new types of triacylglycerols groups were formed. The DSC method allowed distinguishing natural fat mixtures from structured triacylglycerols. The triacylglycerols composition had a great importance in understanding the interesterified blends behavior, even with the difficulty in the individual’s triacylglycerols identification.

Cette thèse a consisté à développer une nouvelle stratégie analytique en utilisant le couplage chromatographie liquide - spectrométrie de masse (LC-MSn) afin d’identifier dans les huiles et corps gras, les triglycérides (TAGs) et leur régio-spécificité. Cette méthodologie analytique générale a été appliquée à 8 huiles de graine de résineux en particulier, à l’huile de pignon de Pinus Koraiensis car ses TAGs sont constitués d’acides gras, possédant une double liaison en position Δ5, non-méthylène alternée, susceptibles de jouer un rôle anti-cholestérol chez l’homme.La thèse se décompose en quatre chapitres: les deux premiers, bibliographiques, traitent respectivement de la taxonomie des 8 résineux étudiés, de la composition en acide gras (AG) de leur graine et des techniques analytiques déjà décrites pour caractériser les TAGs. Le troisième chapitre, expérimental, est dédié au développement de nouvelles stratégies analytiques NARP-LC-MSn mises en place pour identifier les TAGs présents dans les huiles et plus particulièrement à l’huile de pignon de Pinus Koraiensis. Grâce à l’ajout post colonne de sel d’argent, il a été possible de déterminer de manière non ambigüe la structure de tous les TAGs d’un lipide, même ceux présents en faible quantité, par Ag+-NARP-LC-MS mais aussi de déterminer la structure de chaque AG constitutif d’un TAG par fragmentation de l’adduit moléculaire par Ag+-NARP-LC-MS2. Le problème de la distinction des TAGs ayant la même masse moléculaire, les mêmes longueurs de chaine mais des positions de double liaisons différentes, a été résolu en développant une méthode d’identification des TAGs à partir des lois de rétention chromatographiques qui relient linéairement le logarithme du facteur de rétention de chaque TAG soit au nombre total de carbone soit au nombre total de double liaisons. Cette étude a permis d’identifier 22 nouveaux TAGs parmi un nombre total de 58 TAGs caractérisés. Elle a amené la preuve que le résidu AG saturé à 17 atomes de carbone est ramifié et non linéaire. Elle a mis en évidence la présence de trois AGs constitutifs qui n’ont jamais été décrit: 19:1, 19:2 et 24:0 dans l’huile de pignon de Pinus Koraiensis. Le quatrième chapitre porte sur le développement de trois méthodes de détermination de la régiospécificité des TAGs, grâce à la seule SM: (1) une méthode Ag+-NARP-LC-ESI-MS2 utilisant les rapports des ions diglycériques des TAGs. Il en ressort que cette méthode n’est pas assez fiable pour déterminer la structure des TAGs. (2) la seconde méthode fait appel à des expériences MS4/ MS5 sur les adduits argent des TAGs. Elle s’avère pertinente à condition d’avoir à disposition les couples de TAGs standards. (3) enfin une troisième méthode, utilisant la MS2, s’appuie sur le principe de la méthode de dissociation compétitive d’une paire [TAGref – Li -TAG]+. En utilisant la méthode des ajouts dosés il est montré qu’elle ne nécessite que de la disponibilité d’un seul des deux TAGs stéréoisomères comme standard.Ces méthodes originales ont permis, malgré leurs limites respectives de caractériser la régiospécificité d’un certain nombre de TAGs présents dans l’huile de graine de Pinus Koraiensis. / This thesis consisted of developing a new analytical strategy using liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC-MSn) to identify in oils and fats, triglycerides (TAGs) and their regio-specificity. The general analytical methodology was applied to 8 conifers seed oils, in particular, the seed oil of Pinus koraiensis. These conifer seed oils differ from common edible vegetable oils by having a series of unusual polyunsaturated fatty acids (UPIFA) with a polymethylene-interrupted (PMI) double bond system and a double bond at the 5 position which may have anti-cholesterol properties. This thesis is composed of four chapters: the two first chapters, literature review, are devoted respectively to TAGs of the 8 resinous seed oils studied and analytical techniques already used. The third chapter is dedicated to the development of a new analytical strategy combining HPLC with mass spectrometry method to identify TAGs in Pinus Koraiensis seed oil. Thanks to post column addition of silver salt, it was possible to determine the TAGs present by Ag+-NARP-LC-MS and also the fatty acids composition of the TAGs by Ag+-NARP-LC-MS2. Concerning the distinction between TAGs with the same mass, same chain length but differing positions of double bond on fatty acid chain, it was determined by chromatographic retention rules which link linearly the logarithm of retention factor of each TAG to the total carbon number or the total number of double bonds. This study has identified 22 new TAGs from a total of 58 TAGs characterized. It confirmed the knowledge that the saturated fatty acid with 17 carbon atoms is branched, not linear. It highlighted the presence of three constituent fatty acids that have never been described: 19:1, 19:2 and 24:0 in the seed oil of Pinus koraiensis. The last experimental part is devoted to the regiospecificity determination of TAGs. Three methodologies were developed. The first one used the ratios of diacylglycerol ions of TAGs but was not reliable enough. The second method used the LC-MS4 experiments (It is relevant if they have available couples of TAG standards). Finally, a third method, using MS2, based on the principle of the method of competitive dissociation of a pair [TAGref - Li-TAG] +. Using the method of standard additions it has been shown that it requires the availability of one of the two stereoisomers TAGs as a standard.These methods provide a significantly different approach to regioisomer characterization of TAGs and overcome most of the shortcomings of existing methodologies.

The classic ketogenic diet, rich in long chain triacylglycerols (LCT), is characterised by a high concentration of lipids and a low concentation of carbohydrates and proteins, promoting ketonemia and ketonuria, a property used in the treatment of disorders that affect cerebral metabolism and function, for example epilepsy resistant to medication. Medium chain triacylglycerols (MCT) are considered alternative substrates to LCT in the production of this diet, to promote a more rapid increase in the levels of the body´s blood ketones. Trienantin, a medium chain triacyglycerol from enantic fatty acid (7:0), has been used with success with children suffering hereditary metabolic syndromes, but has had few studies about its toxicological effects. The objective of this dissertation was to evaluate the toxicity of a subchronic consumption of a ketogenic diet with a trienantin base on young rats, and is submitted in the form of two articles. The first, under the name of: Substitution of LCT with MCT in nutritional therapy: an emphasis on ketogenic therapy presents a revision of the ketogenic diet, comparing the data of LCT and MCT in animal and clinical studies. The more rapid ketonemia promoted by MCT allows a lower quantity of lipids and a greater proportion of proteins and carbohydrates, enhancing the palatability of the diet. The effect of replacing LCT with MCT on physiological parameters, such as serum lipid profile, remains controversial and requires additional studies to comprehend the repercussions of this class of lipids on human health. The second article entitled: Toxicological evaluation of a subchronic ketogenic diet based upon trienantin in young rats deals with an experimental study of male Wistar rats in which 3 groups (n=10), named according to their received diet: Control (diet pattern AIN-93) KetoTAGC7 (ketogenic based upon AIN-93G: modified to contain 4% soy oil, 25.79% trienantin and 40% margarine) and Keto TAGsoy (ketogenic based upon soya: AIN-93G modified to contain 29.79% soya oil and 40% margarine). The proportion of lipid:carbohydrate+protein in the ketogenic diets was 3.5:1 (control diet, 1:11.8) and the experimental duration was 6 weeks. Triacylglycerols, total cholesterol, HDLc, VLDLc and LDLc, in addition tests for hepatic and renal function and injury, were performed from serum obtained, and samples of liver,stomach, kidney and small intestine were collected for histological analysis. It was verified that the energy value of the portions of rations ingested did not differ amongst the three groups during the experimental period, however the animals submitted to the ketogenic diets had ingested a similar quantity of rations within the group, but less than (p=0.005) the control group. The ketogenic diet promoted similar weight gain amongst the group and only the animals in group KetoTAGC7 exhibited weight gain less than that of the control group (p=0.004) between the second and fifth weeks of the experiment. At the end of the study, all groups presented equivalent weights. There were no significant viii differences between the three groups as to the lipid profile, serum glucose and of the markers for hepatic function and injury. Histological analysis of samples from the small intestine, stomach and kidney did not show any significant morphological alteration and the presence of lipid infiltration within hepatocytes was detected in the same manner amongst the three groups. A ketogenic diet with a trienantin base did not promote toxic effects, under the conditions of this study, indicating the possibility that MCT could be administered to patients suffering neurological and metabolic defects, as part of ketogenic diet. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A dieta cetogênica clássica, rica em triacilgliceróis de cadeia longa (TCL), é caracterizada por uma alta concentração de lipídeos e, ao mesmo tempo, por uma baixa concentração de carboidratos e proteínas para promover cetonemia/cetonúria, propriedade utilizada no tratamento de várias desordens que afetam o metabolismo e a função cerebral, a exemplo da epilepsia resistente ao uso de medicamentos. Os triacilgliceróis de cadeia média (TCM) são considerados um substrato alternativo aos TCL na elaboração desta dieta, por promoverem um aumento mais rápido nos níveis dos corpos cetônicos sanguíneos. A trienantina é um triacilglicerol de cadeia média do ácido graxo enântico (7:0), utilizada com sucesso em crianças portadoras de síndromes metabólicas herdadas, havendo poucos estudos sobre seus efeitos toxicológicos. A presente dissertação teve como objetivo avaliar a toxicidade do consumo subcrônico da dieta cetogênica à base de trienantina em ratos jovens, sendo desenvolvida na forma de dois artigos. No primeiro, denominado Substituição de TCL por TCM na terapia nutricional: uma ênfase no tratamento cetogênico, apresenta-se uma revisão sobre a dieta cetogênica, confrontando-se dados sobre os efeitos dos TCL e dos TCM, em experimentos animais e ensaios clínicos. A mais rápida cetonemia promovida pelos TCM permite utilizar uma menor quantidade de lipídios e maior de proteínas e de carboidratos, aumentando a palatabilidade da dieta. O efeito da substituição de TCL por TCM sobre parâmetros fisiológicos, como o perfil lipídico sérico, é controverso, necessitando-se de pesquisas adicionais para entendimento da repercussão dessa classe de lipídios sobre a saúde humana. O segundo artigo, intitulado Avaliação toxicológica subcrônica de dieta cetogênica à base de trienantina em ratos jovens, trata do estudo experimental realizado em ratos Wistar, em que foram estabelecidos 3 grupos (n=10), denominados, segundo a dieta recebida, em Controle (dieta padrão AIN-93G), CetoTAGC7 (cetogênico à base de trienantina; AIN-93G modificada para conter 4% de óleo de soja, 25,79% de trienantina e 40% de margarina) e CetoTAGsoja (cetogênico à base de soja; AIN-93G modificada para conter 29,79% de óleo de soja e 40% de margarina). A proporção lipídeos:carboidratos+proteína das dietas cetogênicas foi de 3,5:1 (dieta controle, 1:11,8) e o período experimental totalizou 6 semanas. Triacilgliceróis, colesterol total, HDLc, VLDLc e LDLc, além de provas de função e lesão hepática e renal, foram medidos nas amostras de soro obtidas e fragmentos de fígado, estômago, rim e intestino delgado foram coletados para a análise histológica. Verificou-se que o valor energético da cota de ração ingerida pelos três grupos, no período experimental, não foi diferente, embora os animais submetidos às dietas cetogênicas tenham ingerido uma quantidade de ração semelhante entre si, mas inferior (P<0,005) aos do grupo controle. As dietas cetogênicas promoveram ganho de peso vi semelhante entre si e apenas os animais do grupo CetoTAGC7 exibiram ganho de peso inferior (P=0,004) em relação aos do grupo controle, entre a 2ª e a 5ª semana de experimento. Ao final do estudo, todos os grupos apresentaram pesos equivalentes. Não houve diferenças significativas entre os três grupos quanto ao perfil lipídico e glicose séricos e aos marcadores de função e lesão hepática e renal. A análise histológica dos fragmentos de intestino delgado, estômago e rim não evidenciou qualquer alteração morfológica importante e a presença de infiltração lipídica nos hepatócitos foi detectada de maneira semelhante para os três grupos. A dieta cetogênica à base de trienantina não promoveu efeitos tóxicos, nas condições do presente estudo, indicando a possibilidade deste TCM ser administrado em pacientes portadores de desordens neurológicas e defeitos metabólicos, inclusive, em concentrações cetogênicas.

Epilepsy is a chronic disturbance of brain function characterized by the presence of recurrent and spontaneous seizures, making one of the most frequent and severe neurological diseases, affecting approximately 50 million people worldwide, mainly children. Among these, 40% had antiepileptic drug refractory seizures. Non-drug options as surgery, vagus nerve stimulation and the ketogenic diet are timely. This diet, used since 1921 in treatment of drug-resistant epilepsy is characterized by a high concentration of lipids and often by low concentration of carbohydrates and proteins. Traditionally, the ketogenic diet use long chain triacylglycerols (LCT), however, the medium chain triacylglycerols (MCT) are considered an alternative substrate for promoting faster ketonemia-ketonuria. The oil from coconut (Cocos nucifera L.) is a natural source of MCT, and is used for several purposes, including therapeutic. This dissertation aims to investigate the effects of the ketogenic diet based on coconut oil and soybean oil on epileptic seizures in rats, consists of a review chapter, entitled Drug-resistant epilepsies: an emphasis on treatment ketogenic, and an article from the results, entitled Effects of ketogenic diet based on coconut oil on the seizures of rats with epilepsy induced by pilocarpine. The article deals an experimental study conducted in Wistar rats, divided into three groups (n=10), named according to the diet received, in Control (standard diet AIN-93G), CetoTAGcoco (ketogenic diet based in coconut oil; AIN-93G diet modified to contain 7% soybean oil, 22.79% of extra virgin coconut oil and 40% margarine) and CetoTAGsoja (ketogenic diet based in soybean oil; AIN-93G diet modified to contain 29.79% of soybean oil and 40% margarine). The ratio lipid:carbohydrate+protein of ketogenic diets was 3.5:1 (control diet, 1:11.8). The experimental period lasted 19 days. The animals fed ketogenic diets showed food intake (g) below, however, dispend energetic and weight gain similar to Control group. The behavioral analysis showed that the experimental groups did not differ in frequency and duration of seizures, however, the animals in group CetoTAGcoco had shorter duration of seizures in the 19th day, that the Control group (0.00±0.00 against 22.78±2.95, respectively, P<0.05). Additionally, the CetoTAGcoco group presented lower variation of frequency and duration of seizures between the 19th and 1st day of treatment than the Control group (9.00±1.73 against 11.00±1.00, for frequency, and 20.80±12.61 against 49.14±21.15, for duration, respectively, P<0.05). The results of this study suggest a possible protective effect of ketogenic diet based on extra virgin coconut oil on seizures. That result, coupled with studies attesting to confidence and tolerance of the coconut oil, particularly in ketogenic ratios, indicating a potential benefit of this oil for control the seizures, especially for individuals with medically refractory epilepsy. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A epilepsia é um disturbio crônico da função cerebral, caracterizado pela presença de crises convulsivas recorrentes e espontâneas. Trata-se de uma das mais frequentes e graves doenças neurológicas, que afeta cerca de 50 milhões de pessoas no mundo, principalmente crianças. Dentre estas, 40% apresentam crises refratárias às drogas antiepilépticas existentes. Opções não farmacológicas, como cirurgia, estimulação do nervo vago e dieta cetogênica, são oportunas. Esta dieta, utilizada desde 1921 no tratamento da epilepsia fármaco-resistente, caracteriza-se por alta concentração de lipídeos e, frequentemente, por baixa concentração de carboidratos e proteínas. Tradicionalmente, a dieta cetogênica utiliza como fonte lipídica os triacilgliceróis de cadeia longa (TCL); porém, os triacilgliceróis de cadeia média (TCM) são considerados um substrato alternativo, por promoverem cetonemia/cetonúria de forma mais rápida. O óleo proveniente do coco (Cocos nucifera L.) representa uma fonte natural de TCM, sendo utilizado para diversos fins, inclusive terapêuticos. A presente dissertação visa investigar os efeitos de dieta cetogênica à base de óleo de coco e óleo de soja sobre as crises convulsivas de ratos epilépticos. É constituída por um capítulo de revisão, intitulado Epilepsias fármaco-resistentes: uma ênfase no tratamento cetogênico, e um artigo de resultados, intitulado Efeito de dieta cetogênica à base de óleo de coco sobre as crises convulsivas de ratos portadores de epilepsia induzida por pilocarpina. O artigo trata de um estudo experimental realizado com ratos Wistar, alocados em três grupos (n=10), denominados, segundo a dieta recebida, em Controle (dieta padrão AIN-93G), CetoTAGcoco (dieta cetogênica à base de óleo de coco; AIN-93G modificada, com 7% de óleo de soja, 22,79% de óleo de coco extra-virgem e 40% de margarina) e CetoTAGsoja (dieta cetogênica à base de óleo de soja; AIN-93G modificada, com 29,79% de óleo de soja e 40% de margarina). A proporção lipídeos: carboidratos+proteína das dietas cetogênicas foi de 3,5:1 (dieta controle, 1:11,8). O período experimental totalizou 19 dias. Os animais submetidos aos tratamentos cetogênicos apresentaram consumo alimentar (g) inferior, porém, consumo energético (Kcal) e ganho de peso corporal (g) semelhantes ao grupo Controle. As análises comportamentais demonstraram que os animais dos grupos experimentais não diferiram entre si quanto à freqüência e à duração total das crises; entretanto, os animais do grupo CetoTAGCcoco tiveram menor duração média de crises no 19º dia, que o grupo Controle (0,00±0,00 contra 22,78±12,95, respectivamente; p<0,05). Adicionalmente, o grupo CetoTAGcoco apresentou valores inferiores de variação de frequência e de duração das crises entre o 19° e o 1° dia de tratamento, que o grupo Controle (9,00±1,73 contra 11,00±1,00, para freqüência, e 20,80±12,61 contra 49,14±21,15, para duração, respectivamente; p<0,05). Os resultados do presente estudo apontam para um possível efeito protetor da dieta cetogênica à base de óleo de coco extra-virgem sobre as crises convulsivas. Tais resultados, associados a estudos que atestem a confiabilidade e a tolerância do consumo de óleo de coco, particularmente em proporções cetogênicas, poderiam indicar um benefício potencial deste óleo no controle das crises convulsivas, especialmente para indivíduos portadores de epilepsia refratária a medicamentos.

Orientador: Prof. Dr. Hugo B. Suffredini / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2017. / Neste trabalho, foi abordado o desenvolvimento de um biossensor para estimar a concentração de triacilgliceróis derivados da síntese in loco de glicerol, produzido pela hidrólise de azeite de oliva catalisada por lipases, em um sistema do tipo interface líquido-líquido constituído por duas fases líquidas imiscíveis entre si.A técnica proposta neste trabalho consiste em uma inovação na área de eletroanalítica pois permite a detecção direta de compostos eletroativos em matrizes hidrofóbicas sem a necessidade de pré-tratamentos complexos. Eletrodos de Au, preparados a partir de CD-ROM¿s graváveis, apresentaram maiores valores de sensibilidade, na faixa de trabalho de 0,1 a 1,0 mmol L-1. A enzima foi imobilizada quimicamente sob o CDtrodo de ouro por meio de ligações cruzadas com glutaraldeído. Porcentagens de 5 a 75% de óleo de azeite foram adicionadas a 2,0 mL de Nujol® e, a temperatura de 30ºC foi observado o aumento da densidade de corrente. Um patamar se estabilizou após 10minutos de experimento cronoamperométrico no potencial de oxidação do glicerol em 0,3 V vs.SCE, tempo inferior com relação aos resultados obtidos por métodos colorimétricos. Também foi observada boa repetibilidade para um mesmo eletrodo com desvio de 4,44%pelo prazo de 5 dias consecutivos,armazenando o biossensor em solução tampão fosfato pH 7,5 e após prévia limpeza eletroquímica.Desta forma, conclui-se que o biossensor desenvolvido neste trabalho simples de ser fabricado, possuindo funcionamento adequado e boa resposta quanto à sensibilidade e especificidade para a molécula de glicerol, de modo que sua aplicação torna-se viável tanto para espécies em concentrações mínimas quanto em altas concentrações. / In this work, we discussed the development of a biosensor to estimate the concentration of triacylglicerol¿s in oil from the synthesis in loco of glycerol by hydrolysis of olive oil catalyzed by lipases in a liquid-liquid interface system consisting of two immiscible liquid. The use of interfaces in electrochemistry is not necessarily new study but represent an innovation in the field of electroanalytical, since it allows the direct detection of electroactive compounds in hydrophobic matrices without the need for complex pretreatment steps. Gold electrode presented a higher sensitivity value when compared to other electrodes in the concentration range of 0.1 to 1.0 mmol L-1. The enzyme was chemically immobilized in the gold electrode by crosslinking by glutaraldehyde 0.2%. Percentages of 5 to 75% of olive oil were added on 2.0 mL of Nujol ® and a temperature of 30 °C, increase of current densities was observed, with stabilization after 10 minutes of chronoamperometric experiment at an oxidation potential of glycerol in 0.3 V vs. Ag/AgCl, lower time in relation to the results obtained by colorimetric methods. Good repeatability of the experiments was also observed during 5 consecutive days, with a relative error of 4,44%, by storing the biosensor in phosphate buffer pH 7.5 and after previous electrochemical cleaning. Thus, it is possible to concluded that the biosensor developed in this work is easy to manufacture and simple to operate, presenting good sensitivity and specificity for the glycerol molecule. Its application in biological and organic matrices becomes viable as an alternative to the conventional methods of detection of TAG¿s.

La picoalgue verte marine Ostreococcus tauri est un eucaryote minimal développé en système modèle et qui a servi de ressource de gènes en biologie des lipides. Des informations détaillées sur ces caractéristiques lipidiques étaient cependant manquantes. Lors de ma thèse j’ai caractérisé le glycérolipidome d’O. tauri et ai cherché à déterminer quelles sont les cibles enzymatiques responsables de la dynamique des acides gras (FA) et de la régulation du métabolisme lipidique en réponse à des modifications de l’environnement (carences nutritives et refroidissement). O. tauri présente des caractéristiques uniques de composition en lipides et en FA mixtes entre les algues vertes et les Chromalveolates, et a été validé comme espèce modèle pour la classe des Mamiellophyceae. L’acide docosahexaénoïque (DHA) est confiné dans les lipides présumés extraplastidiaux : le phosphatidyldimethylpropanethiol (PDPT) et le bétaïne-lipide diacylglyceryl-hydroxymethyl-trimethyl-β-alanine (DGTA), tous deux marqueurs lipidiques des Chromalveolates. Les lipides plastidiaux de type procaryotique sont caractérisés par une prépondérance de FA polyinsaturés (PUFA) en C18 n-3, le 18:5 n-3 étant restreint aux galactolipides. Le 16:4 n-3, PUFA typique des galactolipides des microalgues vertes, est également un composant majoritaire des lipides extraplastidiaux chez O. tauri. Les triacylglycérols (TAG) présentent tout le panel d’acides gras d’O. tauri et leurs combinaisons moléculaires indiquent une origine plastidiale majoritaire. La carence azote provoque une forte accumulation de TAG, notamment des espèces présentant des combinaisons sn-1/sn-2 en 18:X/16:X et s'accompagne d'un transfert de carbone du phosphatidylglycérol (PG) et du monogalactosyldiacylglycérol (MGDG) aux TAG ce qui indique une contribution croissante de la voie plastidiale à la synthèse des TAG. Des expériences préliminaires de RT-qPCR sur des gènes du métabolisme des TAG révèlent une forte activation transcriptionnelle de certaines diacylglycérol acyltransférases (DAGT). Les carences nutritives répriment sévèrement l’activité Δ6 désaturase, générant une inversion du ratio 18:3/18:4 dans les lipides plastidiaux qui se répercute dans les TAG. La régulation fine et dynamique de ce ratio suggère un rôle important du 18:3 et du 18:4 dans les membranes plastidiales. Le refroidissement engendre une augmentation spécifique du 18:5 des galactolipides. La recherche active de la désaturase responsable de ce phénotype par une approche d'expression de gènes candidats en systèmes homologue et hétérologues (S. cerevisiae, N. Benthamiana) a conduit à l’indentification de deux Δ6 désaturases plastidiales jamais caractérisées dans d'autres systèmes. Celles-ci possèdent des spécificités non redondantes et originales entre elles et par rapport à l'acyl-CoA-Δ6 d'O. tauri. / The marine green picoalga Ostreococcus tauri is a minimal eukaryote implemented as model system that has been used as gene resource for lipid biology. Detailed information about its lipidic features was however missing. During my PhD, I characterized O. tauri glycerolipidome and associated dynamics under environmental stresses such as nutrient starvations and chilling and investigated transcriptional variations of putative target enzymes responsible for these changes. O. tauri which could be validated as model for related species of the class Mamiellophyceae, was found to display unique lipidic features related to both green and Chromalveolates microalgae. Docosahexaenoic acid (DHA) is confined to presumed extraplastidial lipids i.e. phosphatidyldimethylpropanethiol (PDPT) and the betaine lipid diacylglyceryl-hydroxymethyl-trimethyl-β-alanine (DGTA); all of these compounds are hallmarks of Chromalveolates. Plastidial lipids found to be of prokaryotic type are characterized by the overwhelming presence of C18 n-3 polyunsaturated FA (PUFA), 18:5 n-3 being restricted to galactolipids. C16:4 n-3, an FA typical of green microalgae galactolipids, also was a major component of O. tauri extraplastidial lipids. Triacylglycerols (TAGs) display the complete panel of FAs, and their molecular combinations designate a major plastidial origin of DAG precursors. Nitrate starvation greatly increases TAG content, in particular 18:X/16:X (sn-1/sn-2) combinations, and was associated with the transfer of carbon from phosphatidylglycerol (PG) and monogalactosyldiacylglycerol (MGDG) to TAG indicating an increased contribution of the plastidial pathway to the TAG synthesis. Preliminary RT-qPCR experiments on TAG metabolism genes revealed an important transcriptional activation of some diacylglycerol acyltransferases (DGAT). Nutrient starvations severely repress Δ6 desaturase activity and result in the inversion of the 18:3/18:4 ratio in plastidial lipids that was feedback into TAG. The fine-tuning and dynamic regulation of the 18:3/18:4 ratio suggests an important physiological role of these FAs in photosynthetic membranes. Chilling generates an increase of 18:5 in galactolipids. The active quest for the desaturases responsible for this phenotype was achieved by expressing candidate genes in homologuous and heterologous (S. cerevisiae, N. Benthamiana) systems and led to the identification of two yet uncharacterized plastidial Δ6 desaturases. These desaturases display original and non-redundant specificity between each other and with the previously characterized in O. tauri Δ6 acyl-CoA desaturase.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-16T14:17:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Andréa Leão_Ver_Final.pdf: 2849890 bytes, checksum: cd4d0770cfce99861e2cf216c67ed0fb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T14:17:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Andréa Leão_Ver_Final.pdf: 2849890 bytes, checksum: cd4d0770cfce99861e2cf216c67ed0fb (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / ANP / O presente estudo propõe a separação entre os triacilgliceróis (TAGs), principais constituintes dos óleos vegetais, e ácidos graxos livres (AGLs) através do processo de destilação a vácuo. A possibilidade dessa separação consiste na considerável diferença de volatilidade entre os AGLs e os TAGs. Foram preparadas misturas modelo aos óleos residuais, ou seja, combinações em diferentes proporções em massa de óleo de soja refinado (OS) e o reagente ácido oleico p.a (AO). As misturas foram destiladas nas pressões reduzidas de 0,13; 0,40; 0,67 e 1,33 kPa, sendo o processo realizado em batelada em um único estágio, sem refluxo. As amostras foram caracterizadas antes e após o processo de destilação a vácuo quanto: à massa específica, ao teor de água, ao teor de AGL (%) e à composição de ácidos graxos por cromatografia gasosa. Posteriormente, foram definidos os componentes modelo de TAG e AO e a estimativa dos parâmetros termofísicos das misturas para a simulação do processo de destilação a vácuo no software Aspen Plus V8.8, utilizando tanques flash não adiabáticos em série. O modelo termodinâmico usado foi o Non-Random Two-Liquid (NRTL). As curvas de destilação experimentais da mistura de 89,45% de OS e 10,55% de AO em massa foram melhor representadas pelas curvas de destilação simuladas, apresentando o percentual de desvios médios quadráticos de 2,5; 2,2; 2,4 e 2,5% para operações realizadas em pressões reduzidas de 0,13; 0,40; 0,67 e 1,33 kPa, respectivamente. Os dados de massa específica a 20°C dos produtos das destilações, resíduos e destilados, foram semelhantes aos do OS e AO, respectivamente. Os teores de água dos destilados (0,024% a 0,059%) e dos resíduos (0,001% a 0,014%) estão em níveis adequados para o emprego das reações de esterificação e transesterificação para a produção de biodiesel. Os teores de ácidos graxos livres dos resíduos obtidos após as destilações ficaram dentro da faixa de 0,4% a 1,2%, indicando processo de separação por destilação a vácuo efetivo. / This study proposes the separation of triacylglycerols (TAG), main constituent of vegetable oils, and free fatty acids (FFA) through the vacuum distillation process. The possibility of this separation is the considerable difference in volatility between the FFA and the TAG. Mixtures were prepared with model waste oil, or combinations of different mass ratios of refined soybean oil (SO) and the reagent oleic acid (OA). The mixtures were distilled at reduced pressures of 0.13; 0.40; 0.67 and 1.33 kPa, the process being carried out in batches in a single stage, without reflux. The samples were characterized before and after the vacuum distillation process as: the specific gravity, the water content, the FFA content (%) and the fatty acid composition by gas chromatography. Subsequently, the components were defined template TAG and OA and the estimation of parameters of mixtures thermophysical to simulate the vacuum distillation process in Aspen Plus v8.8 software using non-adiabatic flash tanks in series. The thermodynamic model used was the Non-Random Two-Liquid (NRTL). Experimental distillation curves of mixing 89.45% of SO and 10.55% of mass OA were best represented by simulated distillation curves, showing the percentage of mean deviation squared of 2.5; 2.2; 2.4 and 2.5% for operations in reduced pressures of 0.13; 0.40; 0.67 and 1.33 kPa, respectively. The specific mass of data at 20°C the distillation of the products, residues and distillates were similar to SO and OA, respectively. The content of distilled water (0.024% to 0.059%) and waste (0.001% to 0.014%) were at adequate levels for the use of esterification and transesterification reactions for biodiesel production. The contents of free fatty acids from residues obtained after distillations were within the range of 0.4% to 1.2%, indicating a separation process by distillation under vacuum effective.

Os lipídios estruturados (LEs) constituem uma classe lipídica caracterizada pela presença de triacilgliceróis (TAGs) projetados de modo a apresentarem em sua estrutura química ácidos graxos (AGs) com características desejáveis. Na atualidade, estes compostos representam um desafio tecnológico e uma nova fronteira no desenvolvimento de produtos nutricionalmente superiores. Estes TAGs reestruturados são sintetizados através da mistura de óleos e gorduras e de posterior interesterificação química ou enzimática. O rearranjo de AGs nestas moléculas resulta em produtos com características físicas, químicas e nutricionais diferentes das dos lipídios originais. Devido à capacidade potencial para a redução do risco de doenças, também podem ser considerados alimentos funcionais por apresentarem vantagens clínicas que se encontram associadas aos seus AGs e à estrutura peculiar de sua molécula lipídica formada pela interesterificação. A incorporação de ácidos graxos de cadeia média (AGCM) aos TAGs, como o caprílico e cáprico, e de ácidos graxos monoinsaturados (AGMI) como o oléico (w-9), tem sido considerada de grande importância na elaboração de alimentos funcionais de origem lipídica, uma vez que proporcionam rápida fonte de energia e reduzem o risco de enfermidades cardiovasculares. Os objetivos do projeto foram analisar as interações produzidas em misturas binárias e ternárias de triacilgliceróis de cadeia média e longa pela análise das propriedades físicas e químicas das misturas e realizar a modificação das misturas por interesterificação química, visando a obtenção de LEs, com posterior análise química e física de suas propriedades. Foram utilizadas gordura abdominal de frango, sua estearina e triacilgliceróis de cadeia média. Foi empregado um planejamento de dez experimentos. Para as respostas analíticas foi aplicado um modelo de regressão múltipla, do tipo cúbico especial. Os resultados foram representados em diagramas triangulares. Os LEs obtidos apresentaram 14,8 a 58,4% de AGCM, 15,7 a 37,2% de ácidos graxos saturados, 19,2 a 47,5% de AGMI e 6,7 a 15,2% de ácidos graxos essenciais. A estearina de frango teve influência sobre as propriedades de pontos de amolecimento e fusão, consistência e conteúdo de gordura sólida. Após a reação houve formação de grupos de TAGs não existentes nas amostras originais. A técnica de DSC possibilitou distinguir entre misturas de gorduras e LEs, além de permitir a visualização de modificações nas misturas decorrentes da interesterificação. A composição triacilglicerídica foi fundamental para compreender o comportamento das misturas interesterificadas, mesmo diante da dificuldade na identificação dos TAGs individuais. / Structured triacylglycerols are generally any fats that are modified or restructured from natural oils and fats, or fatty acids therefrom, having special functionality or nutritional properties for edible or pharmaceutical purposes. These restructured triacylglycerols are synthesized by blending and chemical or enzymatic interesterification reaction of oils and fats. The fatty acids rearrangement in these molecules results in products with physical, chemical and nutritional characteristics that are different from the original lipids. These compounds can be considered functional foods when they are able to reduce the risk of diseases. Their clinical advantages are associated with the peculiar structure of the lipid molecule formed by interesterification. The incorporation of medium chain and monounsaturated, is considered of great importance in the lipidic functional foods formulation. These kinds of lipids are a quick energy source and could prevent cardiovascular diseases. The purposes of this study were to analyze the interactions that occur in binary and ternary fat blends between medium and long chain triacylglycerols and their structured triacylglycerols obtained by chemical interesterification through the analysis of their physico-chemical properties. The raw material utilized in this research was abdominal chicken fat, its stearin and medium chain triacylglycerols. The experimental design presented 10 samples corresponding to 10 different blend proportions. A mathematical model of multiple regression of the special cubic type was used to obtain the analytical responses. The results were represented in triangular diagrams. The synthesized structured triacylglycerols presented from 14.8 to 58.4% of medium chain fatty acids, from 15.7 to 37.2% of saturated fatty acids, from 19.2 to 47.5% of monounsaturated fatty acids, and from 6.7 to 15.2% of essential fatty acids. The addition of stearin influenced the softening and melting points, consistency, and solid fat content of chicken fat. After interesterification new types of triacylglycerols groups were formed. The DSC method allowed distinguishing natural fat mixtures from structured triacylglycerols. The triacylglycerols composition had a great importance in understanding the interesterified blends behavior, even with the difficulty in the individual’s triacylglycerols identification.

This diploma thesis deals with home parenteral nutrition in the day and night regime and its effect on patients. Parenteral nutrition is usually administered at night so that patients can do normal daily activities and so that nutrition administered in this way has the least impact on their lives. Parenteral nutrition is not a physiological route of nutrient administration and it is not natural for the human body to process nutrients at night. The first part of the theoretical work presents parenteral nutrition and its composition, indications, contraindications and complications. The next part of the thesis describes home parenteral nutrition and its organisation which is necessary for this form of nutritional support to be implemented. It is necessary to monitor many laboratory values on parenteral nutrition, the theoretical part specifically mentions cholesterol, triacylglycerols, glycemia or liver function tests. One of the important parts is the chapter about circadian rhythms, hormones and metabolic changes in energy intake at night. Qualitative research was chosen for this work, which involved 17 patients on home parenteral nutrition. These patients were getting their nutrition during the night. Their laboratory values such as liver function tests, glycaemia and blood fats was evaluated and...