HIPÓTESIS DE TRABAJO: Igual que se ha descrito en patología trombótica en el individuo no gestante, la investigación del potencial fibrinolítico global del plasma y de la regulación de la fibrinolisis puede contribuir a arrojar luz sobre la patogenia de patología gestacional precoz y avanzada de sustrato trombótico vinculado o no a la presencia de AAF. Por otro lado, es posible que el haber presentado abortos de repetición asociados o no a los AAF, constituya un sustrato predisponente a la trombosis arterial o venosa a largo plazo. OBJETIVOS: 1. Determinar el CLT, los niveles plasmáticos de TAFI, y los polimorfismos genéticos de esta proteína en pacientes con pérdidas gestacionales precoces (aborto de repetición y fracaso implantatorio repetido tras fecundación in vitro). 2. Investigar si lo anterior, es decir, CLT y niveles plasmáticos y polimorfismos de TAFI, presentan diferencias según se trate de pacientes con abortos de repetición, asociados o no, a la presencia de anticuerpos antifosfolipídicos. 3. Valorar el CLT, los niveles plasmáticos de TAFI, y los polimorfismos de TAFI, a lo largo la gestación tanto en gestantes normales como en pacientes con SAF primario. 4. Correlacionar los resultados obtenidos en cuanto a los niveles de TAFI, sus polimorfismos genéticos y el CLT en las mujeres gestantes, con o sin SAF, con los resultados perinatales y el riesgo de trombosis. 5. Comparar los resultados del CLT, los niveles plasmáticos de TAFI, y los polimorfismos de TAFI en gestantes complicadas con preeclampsia severa, como paradigma de complicación obstétrica de origen trombótico placentario en: a) una cohorte de pacientes con SAF primario; y b) en una cohorte de pacientes sin SAF ni otras trombofilias . 6. Investigar el riesgo de trombosis arterial o venosa a largo plazo no relacionado con la gestación en pacientes con abortos de repetición, asociados o no a los anticuerpos antifosfolipídicos . CONCLUSIONES: 1. Las pacientes con fracaso implantatorio repetido tras fecundación in vitro (FIR) y con abortos de repetición (AR) de causa idiopática presentan una reducción del potencial fibrinolítico del plasma determinado mediante el tiempo de lisis del coágulo (CLT). Esta alteración de la fibrinolisis puede explicarse en parte por niveles de TAFI significativamente mayores en estos dos grupos de pacientes. La determinación de polimorfismos de TAFI no muestra diferencias en estos grupos. 2. Las pacientes con AR con o sin síndrome antifosfolipídico asociado (SAF) presentan una reducción del potencial fibrinolítico objetivada mediante una prolongación del CLT. Sólo las pacientes con AR sin SAF asociado presentan una elevación de los niveles de TAFI, por lo que, en este grupo de pacientes, la alteración global de la fibrinolisis puede atribuirse en parte a este hallazgo. No se han hallado diferencias en los polimorfismos de TAFI entre estos dos grupos. 3. Durante la gestación se produce un incremento de los niveles de TAFI y un alargamiento del CLT que regresan a niveles basales tras la gestación. Las pacientes con SAF presentan un alargamiento del CLT basal respecto a las gestantes sanas. No existen diferencias en la distribución de polimorfismos de TAFI ni en sus niveles entre gestantes sanas o con SAF. 4. Las gestantes con SAF no presentan diferencias en los niveles de TAFI, polimorfismos de TAFI o CLT en función del resultado perinatal o el antecedente de trombosis. 5. Las pacientes con SAF con o sin preeclampsia y las pacientes con preeclampsia sin SAF presentan una reducción del potencial fibrinolítico del plasma basalmente. Los niveles basales de TAFI se han encontrado significativamente más elevados en las pacientes con preeclampsia severa con o sin SAF que en las pacientes sin preeclampsia o en controles sanas. 6. Las pacientes con AR y SAF presentan un riesgo de trombosis a largo plazo 15 veces superior que las pacientes con AR sin SAF. El riesgo de eventos trombóticos arteriales es superior en aquéllas pacientes que además presentan factores de riesgo cardiovascular tradicionales. / ANALYSIS OF FIBRINOLYSIS AS A NEW PATHOGENIC MECHANISM IN EARLY AND LATE THROMBOTIC PREGNANCY COMPLICATIONS. ASSOCIATION WITH THE ANTIPHOSPHOLIPID ANTIBODIES SUMMARY: These are the main results of the five manuscripts that compose the Doctoral Thesis: Study 1: Patients with recurrent implantation failure have reduced plasma fibrinolytic potencial, as shown by a prolonged Clot Lysis Time (CLT), and this may be explained, at least in part, by increased Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor (TAFI) antigen levels. Study 2: Patients with unexplained recurrent miscarriage have an impairment in fibrinolyis demonstrated by increased CLT, that can be at least partly explained by higher TAI antigen levels. Study 3: Patients with Antiphospholipid Syndrome (APS) have impairment in fibrinolysis evidenced by prolonged CLT at baseline, TAFI and CLT do not seen to be useful as markers of obstetric outcome or risk of trombosis in patients with APS. Study 4: Increased TAFI antigen levels and impaired fibrinolysis are pathogenetic factors in preeclampsia, regardless of whether or not preeclampsia is associated with the presence of antiphospholipid antibodies. Study 5: Antiphospholipid syndrome patients with recurrent spontaneous abortions (APS-RSA) had a significantly higher 12-year cumulative thrombotic incidence rate compared with the three comparator groups. APS-RSA patients had 25.6 thrombotic events per 1000 patients-years. The Odds Ratio of thrombosis in relation to the presence or absence of antiphospholipid antibodies in patients with recurrent spontaneous abortions (RSA) was 15.06. Thus, our data indicate that a history RSA associated with antiphospholipid antibodies is a risk factor for subsequent thrombosis in the long term.

Four cellular models have been developed to implement and standardise in vitro methodology to monitor the effect of food compounds or extracts on anti-inflammatory system, on endothelial function and on anti-thrombotic response: 1. Induction of inflammation: Monocytes THP-1 cells challenged with Lipopolysaccharides and tumour necrosis factor-alpha (TNF-) protein release and mRNA expression were assessed. 2. Induction of endothelial dysfunction: HAEC challenged with TNF-α and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) protein release and mRNA expression were determined. 3. Assessment of endothelial function: HAEC were incubated with TNF- and Insulin and mRNA expression of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) was determined. 4. Study of thrombotic effects: HAEC were pre-incubated with resveratrol and then, challenged with TNF-α to assess the tissue factor (TF) protein and mRNA expression. Thus, these in vitro cellular models are valid systems for the study of compounds or food extracts on mechanisms involved in the pathogenesis of atherosclerosis. / S'han desenvolupat 4 models per estandarditzar metodologia in vitro per supervisar l'efecte de compostos o extractes d'aliments en un sistema antiinflamatori, en funció endotelial i resposta antitrombòtica. 1. Inducció de la inflamació: Es van estimular monòcits THP-1 amb Lipopolisacàrids i avaluar l'expressió proteica i del mRNA del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-). Inducció de disfunció endotelial: Van estimular-se HAEC amb TNF- i determinar l'expressió proteica i del mRNA de la mol·lècula d'adhesió vascular cel·lular (VCAM-1). Avaluació de la funció endotelial: Es van incubar HAEC amb TNF- o Insulina i determinar l'expressió del mRNA de la endothelial nitric oxide synthase (eNOS). Estudi dels efectes trombòtics: Les HAEC van ser pre-incubades amb resveratrol i estimulades amb TNF-α per avaluar l'expressió proteica i del mRNA del factor tissular. Aquests models cel·lulars in vitro són vàlids per estudiar compostos o extractes d'aliments sobre mecanismes implicats en la patogènesi de l'aterosclerosi.

Con el fin de obtener conocimientos que sirvan de aporte para futuros desarrollos de alimentos funcionales que contengan a las proteínas de amaranto como uno de sus ingredientes, en este trabajo nos hemos propuesto estudiar los aspectos básicos de la actividad antitrombótica de las proteínas de amaranto. Se estudiaron diversos protocolos de hidrólisis sobre los aislados proteicos de amaranto como una herramienta que nos permitiese generar distintos polipéptidos y péptidos activos. En todos los casos se observó que el tratamiento enzimático sobre las proteínas de amaranto generó péptidos con potencial actividad antitrombótica, siendo mucho más efectivo cuando la hidrólisis fue realizada por las enzimas gastrointestinales utilizadas en la simulación. Los resultados prometedores obtenidos con el aislado sometido a la digestión gastrointestinal nos impulsaron a seleccionarlo para ahondar en la búsqueda de péptidos con actividad antitrombótica presentes en las proteínas de amaranto, realizándose determinaciones in vitro, in vivo y ex vivo sobre la muestra. En los ensayos realizados con animales se pudieron estudiar parámetros asociados a las distintas etapas de la hemostasia, sugiriendo los resultados que el aislado proteico de amaranto es un potencial agente antitrombótico. Los péptidos que se encuentran encriptados en las proteínas de amaranto, una vez liberados durante la digestión gastrointestinal serían capaces de ejercer un efecto antiplaquetario y/o anticoagulante. Con el objeto de intentar comprobar la hipótesis anteriormente mencionada, se buscó purificar aquellos péptidos responsables de la actividad antitrombótica y estudiar la potencial biodisponibilidad de los mismos. Se logró, de este modo, obtener una fracción con muy alta actividad antitrombótica in vitro y las pruebas de absorción realizadas utilizando esta fracción activa, junto con su secuenciación nos permitieron encontrar péptidos potencialmente bioactivos, algunos de los cuales lograron atravesar el epitelio intestinal representado por la monocapa celular desarrollada en el inserto. Los resultados encontrados a lo largo de este trabajo de tesis fueron consistentes y nos inducen a pensar que en las proteínas de amaranto se encuentran encriptados péptidos bioactivos capaces de ejercer una actividad antitrombótica. Queda aún pendiente esclarecer el o los mecanismos de acción involucrados.

Els mecanismes patogènics dels fenòmens trombòtics apareguts a la síndrome antifosfolipídica (SAF), la malaltia de Behçet i l'arteritis de Horton no són completament coneguts. En aquestes entitats, la clínica trombòtica i isquèmica té un grau important d'heterogeneïtat en la seva presentació. La possible implicació de la fibrinolisi plasmàtica en aquesta heterogeneïtat clínica, resulta molt atractiva per la important relació existent entre les seves vies d'activació i inhibició i els fenòmens inflamatoris que tenen lloc en les malalties autoimmunes. Per altra part, els nivells de PAI-1 s'han relacionat amb un nou polimorfisme de deleció/inserció d'una base (4G/5G). Aquests antecedents ens han portat a plantejar la possible relació entre aquest polimorfisme 4G/5G del gen del PAI-1 i les manifestacions trombòtiques i isquèmiques a les tres entitats analitzades. Aquesta relació seria secundària a la major resposta d'alliberació de PAI-1 que es produiria en els pacients amb genotip 4G/4G, quan la cèl·lula endotelial s'estimula per les citocines alliberades al procés inflamatori. Així doncs, en aquestes tres entitats hem relacionat aquest polimorfisme i els principals factors de trombofilia amb les manifestacions trombòtiques i isquèmiques. A més, en l'àmbit de la SAF, hem avaluat el paper que la 2glucoproteïna I (2GPI) juga en la interacció plaquetar amb el subendoteli que els anticossos antifosfolipídics (AAF) promouen.El primer estudi l'hem portat a terme en pacients amb SAF, comparant-los amb pacients amb lupus eritematós amb i sense anticossos antifosfolipídics i pacients amb trombosi sense factor de risc identificat. Hem pogut demostrar que no hi havia diferències en la prevalença dels factors causants de trombofília entre els diferents grups de pacients i que la presència de l'al·lel 4G s'associa significativament al desenvolupament de trombosis arterials en pacients amb SAF.En el segon treball i mitjançant els estudis de perfussió i avaluació morfomètrica hem avaluat el paper que la 2GPI juga en la interacció plaquetar amb el subendoteli promoguda pels AAF. Concretament hem comparat 3 anticossos anticardiolipina (aCL) monoclonals amb activitat anti-beta2GPI procedents de pacients amb SAF amb un aCL monoclonal sense activitat anti-beta2GPI, obtingut d'un pacient amb un linfoma sense clínica de SAF. D'aquest estudi es desprèn que la presència de la beta2GPI és necessària per que els anticossos anticardiolipina monoclonals augmentin la interacció plaquetar amb el subendoteli.En el tercer estudi hem comparat els factors de trombofília i els marcadors de l'activació de la coagulació i fibrinolisi plasmàtiques en els pacients amb malaltia de Behçet, trombosis sense trombofília identificada i individus sans. Dels nostres resultats es desprèn que la majoria de les trombosis a la malaltia de Behçet no són degudes a la coexistència dels factors de trombofília i que en aquesta entitat existeix un augment de la generació de trombina amb una fibrinolisi compensadora i una lesió endotelial. A més, l'augment de la generació de trombina és independent de l'activació de les vies intrínseca i extrínseca de la coagulació plasmàtica.Finalment, en el darrer treball, hem avaluat els mateixos paràmetres en pacients amb arteritis de cèl·lules gegants i individus sans. La troballa més important fou que la prevalença dels AAF és més elevada en els pacients que en la població sana però que no es relacionen ni amb els fenòmens isquèmics ni trombòtics de la malaltia.Com a conclusió final, poden dir que a la SAF, a diferència del què succeeix en els malalts afectes de malaltia de Behçet i arteritis de cèl·lules gegants, les alteracions de la fibrinolisi plasmàtica, determinades genèticament, podrien jugar un paper rellevant en el desenvolupament dels fenòmens trombòtics.

Thesis (PhD)--Stellenbosch University, 2015. / ENGLISH ABSTRACT: Introduction In the era of antiretroviral therapy (ART), people living with Human Immunodeficiency Virus (HIV) now have prolonged life spans. An emerging trend of non- acquired immune deficiency syndrome (AIDS) related complications now prevails in the aging HIV infected population. Increased levels of inflammation and chronic immune activation are associated with HIV infection. In the era of ART people living with HIV are at an increased risk of cardiovascular disease (CVD). Platelets play a pivotal role in both inflammation and immune activation and upon activation platelets degranulate and secrete various inflammatory, coagulatory and adhesion molecules. Activated platelets express surface P-selectin (CD62P) and are a key component of the coagulation pathway and serve as a link between inflammation and thrombosis. Activated platelets have been implicated in inflammatory and cardiovascular disease and have been identified as immune cells that play a crucial role in pathogen recognition and modulation of immune cells during infections. Several antiviral and antibacterial properties of platelet alpha granule contents have been established. Platelet aggregometry remains the most widely used technique to evaluate platelet function even though this technique is limited by many pre-analytical variables. Platelet flow cytometry on the other hand offers a rapid measurement of platelet function in their physiological environment with minimal artefactual activation. Few studies have however reported on standardized methods to evaluate platelet function in the context of HIV. Platelet function remains unclear and data on HIV infected treatment naïve individuals remains scarce. The aim of this project was to examine the relationship between platelet function and immune activation in patients with HIV Materials and methods This study consisted of five sub-studies, firstly platelet indices and levels of platelet activation were determined in a cohort of 330 participants (185 HIV infected ARV naïve and 145 uninfected healthy controls) using; flow cytometry and haemotology analyzers. The relationship between these indices and markers of platelet activation, disease progression and immune activation were assessed. Furthermore, levels of platelet activation and aggregation were evaluated in a cohort of 82 participants (41 HIV infected (ARV naïve) individuals and 41 uninfected healthy controls), using a novel whole blood flow cytometry based functional assay. These baseline levels were then correlated with markers of immune activation and disease progression in HIV. In a subsequent study, platelet function in a cohort consisting of 58 HIV infected (ARV naïve) and 38 uninfected controls was evaluated using flow cytometry. Platelet response was measured post stimulation with adenosine diphosphate (ADP) at concentrations known to induce reversible (0.04mM) and irreversible (0.2mM) platelet aggregation. In order to assess platelet function in HIV, platelet response was evaluated in a cohort consisting of 58 HIV infected (ARV naïve) and 38 uninfected controls. Platelets were activated using varying concentrations of ADP, arachidonic acid (AA) and collagen and platelet function was measured using flow cytometry. Levels of circulating platelet leukocyte aggregates (PLAs) were also measured using flow cytometry in a cohort consisting of 35 HIV-infected (ARV naïve) individuals and 32 uninfected healthy controls. Associations between PLAs, immune activation and disease progression in HIV infected individuals were determined. The final study evaluated platelet aggregates, platelet derived microparticles (PMPs) and microparticles (MPs) in a cohort consisting of 46 HIV infected (ARV-naïve) and 40 uninfected healthy controls. Associations between MPs, PMPs, platelet aggregates and markers of immune activation and disease progression were evaluated. Results HIV infected individuals showed decreased mean platelet volume levels (HIV mean 7.91 ± 0.85 vs. 8.52 ± 1.12, p<0.0001) that directly correlated with CD4 counts (r=-0.2898, p=0.0075) and viral load (r=0.2680, p=0.0177). Platelet distribution width (PDW) levels directly correlated (r=0.3455, p=0.0362) with active coagulation and inversely correlated (r=-0.3666, p=0.0463) with platelet aggregation. HIV infected individuals showed increased levels of platelet activation (%CD62P median 11.33[5.96-29.36] vs. control group 2.48[1.56-6.04], p=0.0001). In HIV, platelet function is retained and platelets showed increased response to submaximal concentrations of endogenous agonists. HIV infected individuals showed increased levels of circulating platelet monocyte aggregates (25.26[16.16-32.28] vs. control group 14.12[8.36- 18.83], p=0.0001) that directly correlated with markers of immune activation; %CD38/8 (r=0.54624, p=0.0155), viral load (r=0.633, p<0.009). Furthermore we report on increased levels of circulating MPs (median %MPs 1.7[0.95-2.83] vs. Control group 1.12[0.63-1.57], p=0.0160); PMPs (median %PMPs 26.64[11.33-36.62] vs. Control group 20.02[18.08-26.08], p=0.0133); activated PMPs (median CD62P MFI 3.81[3.46-4.54] vs. Control group 3.41[3.16-3.6], p=0.0037) and platelet aggregates (Median %CD62P 14.10[5.49-39.94] vs. Control group 0.17[0.10-10.99], p= 0.0097) in HIV infected asymptomatic individuals. Conclusion This study supports the potential use of the MPV and PDW as readily available markers of platelet activation and immune activation in HIV. We also showed elevated levels of activated platelets in HIV infected individuals that were hyper responsive to endogenous agonists in a concentration dependent manner. Platelet flow cytometry is a rapid and valuable technique in the evaluation of platelet function in HIV. The measurement of platelet function using flow cytometry allows the evaluation of platelet signalling pathways that may be modified in HIV infected individuals. Lastly we describe an optimized whole blood flow cytometry based assay for the evaluation of circulating microparticles (MPs), platelet derived microparticles (PMPs) and levels of activated platelets and aggregates which mimics the in vivo physiological environment of MPs. To the best of our knowledge, this study is the first to report on a novel approach in evaluating platelet function in HIV using a series of optimised whole blood flow cytometry based platelet assays. In addition, minimal work has been performed previously on platelet function in the context of HIV-infection; and particularly in a cohort of asymptomatic, untreated patients as defined for this study. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Inleiding In die era van antiretrovirale terapie (ART), het mense wat met die menslike immuniteitsgebreksvirus (MIV) leef, het nou 'n verlengde lewensduur. 'N opkomende neiging van nie-verworwe immuniteitsgebreksindroom (vigs) heers nou in die verouderende MIV-besmette bevolking. Verhoogde vlakke van inflammasie en chroniese immuun aktivering word geassosieer met MIV-infeksie en in die era van ART loop mense wat met MIV leef, 'n verhoogde risiko van kardiovaskulêre siekte (KVS). Plaatjies speel 'n belangrike rol in beide inflammasie en immuun aktivering en met aktivering degranulate en skei plaatjies verskeie inflammatoriese, coagulatory en adhesie molecule af. Geaktiveerde plaatjies druk oppervlak P-selectin (CD62P) is 'n belangrike komponent van die stollings weg en dien as 'n skakel tussen inflammasie en trombose. Geaktiveerde plaatjies is in beide inflammasie en kardiovaskulêre siekte betrokke en is geïdentifiseer as immuun selle wat 'n deurslaggewende rol speel in die patogeen erkenning en modulasie van immuun selle tydens infeksies. Verskeie antivirale en antibakteriese eienskappe van plaatjie alpha korrel inhoud is vasgestel. Plaatjie aggregometry bly die mees gebruikte tegniek om plaatjie funksie te evalueer, alhoewel hierdie tegniek is beperk deur baie pre-analitiese veranderlikes. Plaatjie vloeisitometrie aan die ander kant bied 'n vinnige meting van plaatjie funksie in hul fisiologiese omgewing met 'n minimale artefactual aktivering. Min studies het egter berig op gestandaardiseerde metodes om plaatjie funksie in die konteks van MIV te evalueer. Plaatjie funksie is steeds onduidelik en data oor MIV besmet behandeling naïef individue bly skaars. Die doel van hierdie projek was om die verhouding tussen die plaatjie funksie en immuun aktivering in pasiënte met MIV te ondersoek. Materiaal en metodes Hierdie studie het bestaan uit vyf sub-studies. In die eerste plekis plaatjie indekse en vlakke van plaatjie aktivering bepaal in 'n groep van 330 deelnemers (185 MIV-besmette ARV naïef en 145 onbesmette gesonde kontrole) met behulp van vloeisitometrie en hematologie ontleders. Die verhouding tussen hierdie indekse en merkers van plaatjie aktivering, die siekte se progressive en immuun aktivering is beoordeel. Verder is die vlakke van plaatjie aktivering en samevoeging in 'n groep van 82 deelnemers (41 MIV-besmette (ARV naïef) individue en 41 onbesmette gesonde kontrole) geëvalueer, met behulp van 'n nuwe vol bloed vloeisitometrie gebaseerde funksionele toets. Hierdie basislyn vlakke is dan gekorreleer met merkers van immuun aktivering en die progreessie van die siekte in MIV. In 'n daaropvolgende studie, is plaatjie funksie in 'n groep wat bestaan uit 58 MIV besmet te (ARV naïef) en 38 onbesmette beheer geëvalueer met behulp van vloeisitometrie. Plaatjie reaksie is na stimulasie gemeet met adenosine diphophate (ADP) by konsentrasies bekend omkeer (0.04mM) te oorreed en onomkeerbaar (0.2mm) plaatjie aggregasie. Ten einde plaatjie funksie in MIV te evalueer, is plaatjie reaksie in 'n groep wat bestaan uit 58 MIV-besmette (ARV naïef) en 38 onbesmette kontrole geëvalueer. Die plaatjies is geaktiveer deur gebruik te maak van wisselende konsentrasies van ADP, is aragidoonsuur (AA) en kollageen en plaatjie funksie gemeet met behulp van vloeisitometrie. Vlakke van sirkulerende plaatjie leukosiet gemiddeldes is ook gemeet met behulp van vloeisitometrie in 'n groep wat bestaan uit 35 MIV-positiewe (ARV naïef) individue en 32 onbesmette gesonde kontrole. Assosiasies tussen leukosiet gemiddeldes, immuun aktivering en die progressive van ie siekte in MIV-besmette individue is ook bepaal. Die finale studie het plaatjie-gemiddeldes, plaatjie afgelei mikrodeeltjies en mikrodeeltjies geëvalueer in 'n groep wat bestaan uit 46 MIV besmet (ARV-naïewe) en 40 onbesmette gesonde kontrole. Assosiasies tussen mikrodeeltjies, plaatjie afgelei, plaatjie gemiddeldes en merkers van immuun aktivering en die siekte se progressie is geëvalueer. Resultate MIV-besmette individue het gedaalde gemiddelde plaatjie volume vlakke getoon (HIV gemiddelde 7,91 ± 0,85 8,52 ± 1,12 teen, p <0,0001) wat direk gekorreleer het met CD4-tellings (r = -0,2898, p = 0,0075) en virale (r = 0,2680, p = 0,0177). Plaatjie verspreiding breedte vlakke het direk gekorreleer met (r = 0,3455, p = 0,0362) met 'n aktiewe koagulasie en omgekeerd gekorreleer (r = -0,3666, p = 0,0463) met plaatjie aggregasie. MIV-besmette individue het verhoogde vlakke van plaatjie aktivering getoon (% CD62P mediaan 11,33 [5,96-29,36] teen kontrole groep 2,48 [1,56-6,04], p = 0,0001). In MIV, was plaatjie funksie behou en plaatjies het 'n verhoogde reaksie op submaksimale konsentrasies van endogene agoniste getoon. MIVbesmette individue het verhoogde vlakke van sirkuleer plaatjie monosiet-gemiddeldes gedemonstreer (25.26 [16,16-32,28] teen kontrole groep 14,12 [8,36-18,83], p = 0,0001) wat direk gekorreleer het met merkers van immuun aktivering; % CD38 / 8 (r = 0,54624, p = 0,0155), virale lading (r = 0,633, p <0,009). Verder rapporteer ons op verhoogde vlakke van sirkulerende mikrodeeltjies (mediaan% LP 1.7 [0,95-2,83] teen kontrole groep 1,12 [0,63-1,57], p = 0,0160); PMPs (mediaan% PMPs 26,64 [11,33-36,62] teen kontrole groep 20,02 [18,08-26,08], p = 0,0133); geaktiveer PMPs (mediaan CD62P MFI 3,81 [3,46-4,54] teen kontrole groep 3,41 [3,16- 3,6], p = 0,0037) en plaatjie gemiddeldes (Mediaan% CD62P 14,10 [5,49-39,94] teen 0.17 [0,10- 10,99], p= 0.0097) in MIV besmet asimptomatiese individue. Gevolgtrekking Hierdie studie ondersteun die potensiële gebruik van die MPV en PDW as waardevolle geredelik waardevolle merkers van plaatjie aktivering en immuun aktivering in MIV. Ons het ook getoon verhoogde vlakke van geaktiveer de plaatjies in MIV-besmette individue getoon wat hyper reageer op endogene agoniste was in 'n konsentrasie-afhanklike wyse. Plaatjie vloeisitometrie is 'n vinnige en waardevolle tegniek in die evaluering van plaatjie funksie in MIV. Die meting van plaatjie funksie gebruik vloei cytometry maak die evaluering van plaatjie sein paaie wat in MIVgeïnfekteerde individue verander moontlik. Laastens het ons beskryf 'n hele bloed vloeisitometrie gebaseer de toets vir die evaluering van sirkulerende mikrodeeltjies, plaatjie afgelei mikrodeeltjies en vlakke van geaktiveer plaatjies en gemiddeldes wat lyk soos die in vivo fisiologiese omgewing van MP's. Na die beste van ons kennis, is hierdie studie die eerste om te rapporteer oor 'n nuwe benadering in die evaluering van plaatjie funksie in MIV met behulp van 'n reeks van new hele bloed vloeisitometrie gebaseer de plaatjie toetse. Daarbenewens is minimale werk voorheen uitgevoer op die plaatjie funksie in die konteks van MIV-infeksie; en veral in 'n groep van asimptomatiese, onbehandelde pasiënte soos vir hierdie studie. Hierdie projek het bewyse bygevoeg tot die teorie dat plaatjies, in MIV, kan 'n skakel wees tussen die aktiewe inflammatoriese reaksie en die toename in die aantal trombotische en kardiovaskulêre siekte waargeneem in pasiënte wat met hierdie siekte saamleef.

El propósito de este trabajo es conocer la incidencia de la trombosis venosa profunda (TVP) de miembros inferiores y factores de riesgo predisponentes para su ocurrencia en una población adulta de la ciudad de Neuquén en un período de 18 meses. Esta enfermedad es frecuente en nuestro medio y no existen datos locales a cerca de su incidencia ni de los factores de riesgo asociados.

PROPÓSITO: Determinar y comparar la concentración de somatostatina (SST) intravítrea en pacientes con edema macular diabético (EMD), retinopatía diabética proliferativa (RDP), enfermedad oclusiva venosa retiniana (OVR) y pacientes controles. Determinar y comparar la concentración de eritropoyetina (EPO) intravítrea en pacientes con EMD, RDP, OVR y pacientes controles.MATERIAL Y MÉTODOS: Se obtuvieron muestras vítreas, séricas y plasmáticas de pacientes con edema macular secundario a OVR, EMD, RDP, membrana epiretiniana, agujero macular y desprendimiento regmatógeno retiniana (controles). La EPO y la SST se midieron por radioinmnoensayo. RESULTADOS: No se encontraron diferencias entre los grupos en la concentración de EPO sérica (Concentración sérica: OVR: 8.9 mU/mL [7-20.8]; EMD: 12.4 mU/mL[7.8-46.7]; RDP: 9,33 mU/mL [3-16]; controls: 8.6 mU/mL [4.1-19], P=ns). No se encontraron diferencias en la concentración de EPO intravítrea ajustada entre pacientes con OVR y controles (OVR: 69 mU/mL [27-800] vs. controles: 50 mU/mL [13-107], P=0,095). No se hallaron diferencias entre la concentración intravítrea de EPO entre los pacientes con RDP y EMD (RDP: 528,74 mU/mL [156-1859] vs. EMD: 578,63 mU/mL [41-2780], P=0,833). La concentración intravítrea de EPO ajustada fue superior en los pacientes con EMD y RDP que en los pacientes con OVR y controles y las diferencias fueron estadisticamente significativas (P<0,05). No se encontraron diferencias en la concentración de SST intravítrea ajustada entre pacientes con OVR y controles (OVR: 715,8 pg/mL [49-1367] vs. controles: 735,26 pg/mL [102-2024] P=0,973). No se encontraron diferencias en la concentración intravítrea de SST ajustada entre pacientes con RDP y EMD ( RDP: 119,59 pg/mL [14-377] vs. EMD: 88,97 pg/mL [21-232]P=0,601). La concentración intravítrea de SST fue significativamente superior en los pacientes con OVR y controles con respecto a los pacientes con EMD y RDP (p<0,05).CONCLUSIONES: En los pacientes con EMD y RDP encontramos una disminución en la concentración de SST intravítrea que no encontramos en los pacientes con OVR. La EPO intravítrea se encontró aumentada en los pacientes con EMD y RDP pero no en los pacientes con OVR. La SST y la EPO demostraron tener una implicación patogénica en el EMD y en la RDP cosa que no ocurrió en el EM secundario a OVR. / PURPOSE: To determine the levels of somatostatin (SST) and Erythropoietin (EPO) in the vitreous fluid of patients with diabetic macular edema (DME), proliferative diabetic retinopathy (PDR), macular edema secondary to retinal vein occlusion (RVO) and controls subjects.METHODS: Vitreous, serum and plasma samples were obtained from patients with macular edema secondary to RVO, DME, PDR, idiopathic epiretinal membrane, macular hole and rhegmatogenous retinal detachment (controls). EPO and SST were measured by radioimmunoassay (RIA).RESULTS: No differences were found between the groups in serum EPO levels. (Serum concentrations: RVO: 8.9 mU/mL [7-20.8]; DME: 12.4 mU/mL[7.8-46.7]; PDR: 9,33 mU/mL [3-16]; controls: 8.6 mU/mL [4.1-19], P=ns). No differences were found in intravitreal EPO levels between patients with RVO and controls. (Intravitreal concentrations: RVO: 69 mU/mL [27-800] vs. controls: 50 mU/mL [13-107], P=0,095). No differences were found in intravitreal EPO levels between patients with RDP and DME (Intravitreal concentrations: DPR: 528,74 mU/mL [156-1859] vs. DME: 578,63 mU/mL [41-2780], P=0,833). Intravitreal EPO concentration was significantly higher in patients with DME and RDP than in patients with RVO or controls (P<0,05). No differences were found in intravitreal SST levels between patients with RVO and controls (Intravitreal concentrations: RVO: 715,8 pg/mL [49-1367] vs. controls: 735,26 pg/mL [102-2024] P=0,973). No differences were found in intravitreal SST levels between patients with PDR and DME (Intravitreal concentrations: PDR: 119,59 pg/mL [14-377] vs. EMD: 88,97 pg/mL [21-232]P=0,601).Intravitreal SST concentration was significantly higher in patients with RVO and controls than in patients with DME and PDR (p<0,05).CONCLUSIONS: Intravitreal SST levels are elevated in patients with macular edema secondary to RVO and control subjects compared to patients with DME and PDR. Intravitreal EPO levels are not elevated in patients with macular edema secondary to RVO compared to control subjects whereas patients with DME and PDR have high levels of this factor in the vitreous. These results suggest that EPO and SST could be involved in the pathogenesis of diabetic retinopathy but not in macular edema secondary to RVO.

El presente estudio es una investigación secundaria la cual tiene como objetivo: describir y analizar los beneficios de las medias de compresión graduada en la prevención de trombosis venosa profunda y la comodidad del paciente sometido a cirugía. La investigación tiene una legítima relevancia científica porque mediante la aplicabilidad de medias de compresión utilizada hasta la rodilla o hasta el muslo se buscando la comodidad del paciente ayudará a disminuir el riesgo de trombosis venosa profunda en pacientes post operados, lo cual disminuirá estancias hospitalarias prolongadas, además de evitar morbilidad y mortalidad en pacientes sometidos a cirugías. Formulándose la pregunta clínica ¿cuáles son los beneficios de las medias de compresión graduada en la prevención de trombosis venosa profunda y la comodidad del paciente sometido a cirugía?. Las estrategias de búsqueda se desarrollaron mediante la elección de las palabras clave, registro escrito de búsqueda de datos PubMed, BvS. La lectura crítica se realizó mediante la lista de chequeo de validez aparente de Gálvez Toro, el comentario crítico se estructuro según la metodología propuesta por PRISMA, su nivel de evidencia 1+ y el grado de recomendación moderado. Finalmente, la respuesta a la pregunta de investigación: los pacientes prefieren medias de compresión hasta la rodilla debido a la comodidad y mayor facilidad de aplicación, sin embargo, la base de evidencia es limitada sobre la adhesión en la comunidad. / Trabajo académico

Deficiency of antithrombin caused by mutations affecting the gene encoding this key anticoagulant (SERPINC1) significantly increases the risk of thrombosis. We aim to identify new mechanisms involved in antithrombin deficiency. Using molecular, cellular and biochemical methods, we studied 29 patients with antithrombin deficiency without SERPINC1 mutation, a family study, three case-control studies including 2,980 patients and 3,996 controls, and two patients with congenital disorder of glycosylation (CDG). We identified the first mutation affecting the SERPINC1 promoter causing antithrombin deficiency. We confirmed the low genetic variability of SERPINC1 and its minor role on the heritability of antithrombin. Genome wide association studies and silencing experiments identified the first modulating gene of antithrombin, LARGE. We diagnosed a patient with CDG based on his antithrombin deficiency. Finally, we described a new disorder with identical biochemical features than CDGs, but only thrombosis, which is caused by a single mutation in PMM2 and concomitant alcohol consumption. / La deficiencia de antitrombina causada por mutaciones en el gen SERPINC1 incrementa el riesgo trombótico. Nuestro objetivo fue identificar nuevos mecanismos implicados en la deficiencia de este anticoagulante. Empleando metodología molecular, celular y bioquímica estudiamos 29 pacientes con deficiencia de antitrombina sin mutaciones en SERPINC1, un estudio familiar, tres estudios caso-control (2,980 pacientes/3,996 controles) y dos pacientes con trastornos congénitos de glicosilación (CDG). Identificamos la primera mutación en el promotor de SERPINC1 que causa deficiencia de antitrombina. Confirmamos la baja variabilidad genética en SERPINC1 y su escasa influencia en la heredabilidad de antitrombina. Un GWAS y experimentos de silenciamiento mostraron que LARGE es el primer gen modulador de antitrombina. Diagnosticamos un CDG por la deficiencia de antitrombina de un paciente con trombosis recurrente y descubrimos nuevo desorden con patrón bioquímico similar al CDG pero solo con trombosis que es causado por una sola mutación en PMM2 y consumo de alcohol.

Presentamos el caso de una mujer de 53 años con antecedentes de artritis reumatoide que, tras recuperarse de un cuadro de COVID-19grave, desarrolló hemorragia digestiva como manifestación de hipertensión portal e insuficiencia hepática progresiva. Basados en la serología y ecografía, se diagnosticó un síndrome overlap de hepatitis autoinmune y colangitis biliar primaria asociado a trombosis de vena porta. La respuesta a la corticoterapia y anticoagulación fue favorable. El compromiso hepático, inducido por el virus, está descrito en la COVID-19. Sin embargo, pueden desarrollarse enfermedades autoinmunes y fenómenos tromboembólicos, teniendo el hígado como órgano diana.