Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T15:05:36Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Steffany Ferreira 2012.pdf: 970478 bytes, checksum: 8ca9a2d6fdbc3bdbf9c13613ab646b16 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T15:05:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Steffany Ferreira 2012.pdf: 970478 bytes, checksum: 8ca9a2d6fdbc3bdbf9c13613ab646b16 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / O câncer de pele ou tumor cutâneo não-melanoma (TCNM), é a neoplasia maligna de maior incidência no Brasil. Os cânceres, em geral, apresentam padrão de glicosilação aberrante na estrutura de oligossacarídeos de superfície celular (fenótipo), determinada pela ação conjunta de glicosiltransferases (genótipo). O presente estudo objetiva avaliar o perfil glicofenotípico de glicoconjugados de superfície celular de TCNM e correlacionar com o padrão de expressão de sialiltransferases. Cortes (4μm) de biópsias de Carcinoma Basocelular (CBC), Carcinoma Espinocelular (CEC), Ceratose Actínica (CA) e Ceratoacantoma (KA) foram ensaiados com as lectinas SNA, Sambucus nigra agglutinin, (específica para ácidos siálicos ligados na posição α-2,6) e MAA, Maakia amurensis agglutinin (específica para ácidos siálicos na posição α-2,3). A inibição da ligação lectina-carboidrato foi realizada com o ácido siálico (300mM). As amostras também foram avaliadas com anticorpos monoclonais anti-ST3Gal I (específico para β-galactosideo α2,3 sialiltransferase) e anti- ST6Gal I (específico para β-galactosideo α2,6 sialiltransferase). Semelhanças no padrão de sialilação entre CEC, CA e KA foram encontradas na histoquímica com lectinas e, principalmente na imunohistoquímica. O CBC não apresentou marcação na maioria dos casos para ambas as técnicas, indicando que este tipo tumoral apresenta um padrão molecular próprio podendo estar associado ao seu comportamento biológico (baixo potencial invasivo e metastático). Os resultados indicam a importância da sialilação no desenvolvimento e manutenção de tumores cutâneos, sendo a histoquímica com lectinas e a imunohistoquímica ferramentas úteis na determinação deste tipo de glicosilação na superfície de células tumorais.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T12:47:45Z No. of bitstreams: 2 dissertação_Luiza Lima_VERSÃO_FINAL.pdf: 1561576 bytes, checksum: 9c995164c6acc839c29d5365b9fb4cc7 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T12:47:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertação_Luiza Lima_VERSÃO_FINAL.pdf: 1561576 bytes, checksum: 9c995164c6acc839c29d5365b9fb4cc7 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES / Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um método histoquimiluminescente para avaliação quantitativa da expressão de carboidratos em tumores cutâneos utilizando lectinas conjugadas a éster de acridina (EA). As lectinas Con A, PNA e UEA-I foram conjugadas a EA. A atividade hemaglutinante da lectina-EA foi avaliada e a quimiluminescência quantificada e expressa em Unidades Relativas de Luz (URL). Biópsias de pele normal e de tumores cutâneos (ceratose actínica, ceratoacantoma, carcinoma espinocelular e basocelular) foram incubadas com o conjugado lectina-EA. A emissão de fótons foi quantificada e correlacionada com a marcação de tecidos normais e transformados. Os tumores cutâneos apresentaram uma maior expressão de resíduos de Gal-β(1-3)-GalNAc e uma menor expressão de α-Dglicose/ manose e α-L-fucose, evidenciados pelas diferenças nos valores de URL. O método histoquimiluminescente, utilizando lectinas conjugadas a éster de acridina, permitiu a avaliação quantitativa direta da expressão de carboidratos em neoplasias de pele, combinando a especificidade da interação lectina-carboidrato e a sensibilidade dos ensaios quimiluminescentes, contribuindo para eliminar a subjetividade da avaliação histoquímica convencional de carboidratos.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-20T15:04:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Luiza Lima_Tese de Doutorado_2015.pdf: 5654099 bytes, checksum: da2a7cb303b6562f1bc8af5fc0c76f13 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-20T15:04:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Luiza Lima_Tese de Doutorado_2015.pdf: 5654099 bytes, checksum: da2a7cb303b6562f1bc8af5fc0c76f13 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / CAPEs / Com o objetivo de criar um modelo biológico reprodutível e eficiente que possa mimetizar a interação proteína-carboidrato, nós reportamos o uso do ensaio quimiluminescente com lectinas conjugadas a éster de acridina (EA) para investigar a complexação da lectina ao carboidrato e para avaliação quantitativa da expressão de carboidratos em tumores cutâneos. Polissacarídeos de N-acetil-D-glicosamina (quitosana), glicose (phytagel) e galactose (carragenana) foram utilizados para sintetizar membranas (0,0314 – 0,6358 cm2). Concanavalina A-EA (Con A), Wheat germ aglutinina (WGA), Peanut aglutinina (PNA), Ulex europeaus aglutinina-I (UEA-I) e Maackia amurensis aglutinina (MAA) foram conjugadas a EA. A atividade hemaglutinante das lectinas-EA foi avaliada e a quimiluminescência quantificada e expressa em Unidades Relativas de Luz (URL). Biópsias de pele normal e de tumores cutâneos, tais como ceratose actínica (AK), ceratoacantoma (KA), carcinoma espinocelular (CEC) e basocelular (CBC), e as membranas foram incubadas com o conjugado lectina-EA (100 μL 100 μg mL-1) por 2h a 4°C. A emissão de fótons foi quantificada e correlacionada com a marcação de tecidos normais, transformados e das membranas. Inibições com carboidratos específicos foram realizadas. AK, KA , CBC e CEC apresentaram menor expressão de α -D- glucose/manose e resíduos de α-L-fucose, em comparação com o tecido normal. Os tumores cutâneos apresentaram maior expressão resíduos de β Gal-(1-3)-GalNAc que o tecido normal . AK e SCC exibiram maior expressão de resíduos Neu5Ac-α(2,3)Gal que a epiderme normal. KA e BCC apresentaram valores de URL equivalentes, em comparação com o tecido normal. Os valores de URL diminuíram quando as lectinas foram incubadas com seus carboidratos específicos. Os valores das constantes e os sítios de ligação foram calculados para cada lectina utilizando a equação obtida a partir das curvas hiperbólicas, 2,4 x 10-7 M-1 ± 0,8 x 10-7 M-1and 1,3 x 10-3 mol . mg-1 ± 0,3 x 10-3 mol . mg-1 (Con A); 0,9 x 10-6 M-1  0,4 x 10-6 M-1 and 0,021 x 10-3 mol . mg-1 ± 0,003 x 10-3 mol . mg-1 (WGA) and 2,0 x 10-6 M-1  0,9 x 10-6 M-1 and 0,069 x 10-3 mol . mg-1 ± 0,010 x 10-3 mol . mg-1 (PNA). O método quimiluminescente permitiu a avaliação quantitativa direta da expressão de carboidratos em neoplasias de pele e a investigação a complexação da lectina ao carboidrato através do modelo de Langmuir, combinando a especificidade desta interação e a sensibilidade dos ensaios quimiluminescentes. / Aiming to create a reproducible and efficient biological model that mimic the protein-carbohydrate interaction, we report the use of chemiluminescent assay with lectins labeled to acridinium ester (AE) to investigate the complexation of lectin to carbohydrate and for the quantitative evaluation of carbohydrates expression in cutaneous tumors. Polysaccharides made N-acetyl-D-glucosamine (chitosan), glucose (phytagel) and galactose (carrageenan) were used to synthetize membranes (0,0314 – 0,6358 cm2). Concanavalin A-AE (Con A), Wheat germ agglutinin (WGA), Peanut agglutinin (PNA), Ulex europeaus agglutinin-I (UEA-I) e Maackia amurensis agglutinin (MAA) were labeled to AE. The hemmagglutinating activity of lectins-AE was evaluated and the chemiluminescence was quantified and expressed in Relative Light Unit (RLU). Biopsies of normal skin and cutaneous tumors such as, actinic keratosis (AK), keratoacantoma (KA), squamous cell carcinoma (SCC) and basal cell carcinoma (BCC), and membranes were incubated with lectins-AE (100 μL 100 μg mL-1) for 2h at 4°C. Photon emission was measured and correlated to the labeling of the normal, transformed tissues and membranes. Inhibitions with specific carbohydrate were carried out. AK, KA, SCC and BCC showed lower expression of -D-glucose/mannose and -L-fucose residues compared to normal tissue. Cutaneous tumors displayed higher expression of Gal-(1-3)-GalNAc residues than normal tissue. AK and SCC exhibited higher expression ofNeu5Ac-(2,3)Gal residues than normal epidermis. KA and BCC showed equivalent RLU values compared to normal tissue. The RLU values decreased when the lectins were incubated with their specific carbohydrate. The constant values and maximum binding sites on the membranes were calculated for each lectin using the equation obtained from hyperbolic curves, 2.4 x 10-7 M-1 ± 0.8 x 10-7 M-1and 1.3 x 10-3 mol . mg-1 ± 0.3 x 10-3 mol . mg-1 (Con A); 0.9 x 10-6 M-1  0.4 x 10-6 M-1 and 0.021 x 10-3 mol . mg-1 ± 0.003 x 10-3 mol . mg-1 (WGA) and 2.0 x 10-6 M-1  0.9 x 10-6 M-1 and 0.069 x 10-3 mol . mg-1 ± 0.010 x 10-3 mol . mg-1 (PNA). The chemiluminescence method allowed quantitative assessment of the carbohydrate expression in cutaneous tissues and was an analytical technique efficient to investigate the complexation of lectin to carbohydrate through Langmuir model, combining the specifity this interaction and sensibility of chemiluminescent assays.

Visando o tratamento tópico de tumores cutâneos, desenvolvemos micro e nanoemulsões para a co-localização cutânea de paclitaxel e ceramida C6. A nanoemulsão mostrou-se mais eficaz em promover penetração de ambos os compostos nas camadas viáveis da pele, com aumentos de 11,5 (paclitaxel) e 3,5 (ceramida) vezes comparado a uma solução controle, e não reduziu significativamente a viabilidade de equivalentes epidérmicos, sugerindo sua segurança para aplicação tópica. A incorporação na nanoemulsão diminuiu as concentrações de paclitaxel e ceramida necessárias para reduzir a viabilidade de células de melanoma a 50% em 6 a 15 vezes, respectivamente, sendo que a co-encapsulação desses compostos promoveu uma nova redução (4 vezes) nessas concentrações, demonstrando aumento da eficácia decorrente da associação dos compostos. A administração tópica do nanocarreador contendo paclitaxel e ceramida co-encapsulados promoveu desorganização e morte celular em equivalentes cutâneos com melanoma, demonstrando o potencial desta formulação para o tratamento tópico de tumores cutâneos. / Nano and microemulsions were developed in this study for cutaneous co-localization of the active agents paclitaxel and C6 ceramide for topical treatment of skin cancer. The nanoemulsion was more effective in promoting the penetration of the compounds into viable skin layers, with increases of 11.5- (paclitaxel) and 3.5- fold (ceramide) being observed. The nanoemulsion did not reduce the viability of human epidermis equivalents, suggesting its safety for topical application. Incorporation in the nanoemulsion reduced the concentration of paclitaxel and ceramide required to decrease viability of human melanoma cells to 50% by 6 to 15-fold compared with their solutions; co-encapsulation of the compounds promoted a further reduction of 4-fold. Topical administration of the nanocarrier with co-encapsulated paclitaxel and ceramide to skin equivalents with melanoma promoted disorganization and intense cytotoxicity. These results demonstrate the potential of nanoemulsions for association of paclitaxel and ceramide C6 to improve their cytotoxic effect and skin localization.

Linfomas pertencem a um grupo de neoplasias em que há proliferação monoclonal de linfócitos malignos, sendo uma das neoplasias mais frequentemente diagnosticadas em cães. Podem ser classificados quanto à forma anatômica em multicêntrico, mediastinal, digestório e extranodal. Dentre os extranodais, os linfomas cutâneos são classificados histologicamente como epiteliotrópicos e não epiteliotrópicos e são predominantemente de imunfenótipo T, com raros casos do tipo B. A principal característica histopatológica do linfoma epiteliotrópico em cães é o tropismo das células neoplásicas pela epiderme, mucosa ou estruturas anexas, enquanto o linfoma não epiteliotrópico é caracterizado pela infiltração dérmica e subcutânea sem invasão das estruturas anexas. Os linfomas cutâneos caninos têm progressão rápida, são considerados bastante agressivos e com mau prognóstico, com baixa taxa de resposta à quimioterapia. Um dos fatores que podem contribuir para isso é a resistência das células a múltiplas drogas e entre esses mecanismos de resistência estão o efluxo de drogas do meio intracelular para o extracelular por meio dos transportadores da família ABC, como a glicoproteína-P, MRP (multiple resistance protein) e BCRP (breast câncer resistance protein) e da LRP (lung resistance protein), uma proteína vault responsável pelo transporte nucleocitoplasmático. O objetivo deste estudo foi caracterizar imunofenotipicamente os linfomas cutâneos, a proliferação celular por meio do marcador Ki67, a expressão das proteínas de resistência glicoproteína-P, MRP, BCRP e LRP e avaliar a relação dessas proteínas com a sobrevida dos animais. Foi realizado um estudo retrospectivo com 21 casos de cães linfomas cutâneos com diagnóstico histopatológico. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para determinar a imunofenotipagem dos linfomas pelos marcadores CD3 e CD20, a proliferação celular por Ki67 e a expressão de glicoproteína-P, MRP, BCRP e LRP. Dos 21 animais, 38% tiveram diagnóstico histopatológico de linfoma epiteliotrópico, 52% eram linfomas não epiteliotrópicos, 5% dos casos de linfoma não tiveram epiteliotropismo definido e 5% foram classificados como neoplasia de células redondas. O imunofenótipo predominante foi CD3+CD20- (76%), 15% dos casos eram CD3-CD20+ e 9% eram CD3+CD20+. A mediana de células marcadas para Ki67 foi de 31%. Com relação aos marcadores de resistência a múltiplas drogas, a mediana da marcação de glicoproteína-P foi de 40%, a de LRP foi de 65% enquanto para MRP e BCRP, 19% e 23%, respectivamente. Os linfomas cutâneos não epiteliotrópicos foram mais frequentes que os epiteliotrópicos e o imunfenótipo predominante foi o T. A ocorrência de linfócitos CD3-CD20+ e CD3+CD20+ indica a necessidade de mais estudos e um painel mais amplo de anticorpos para subtipagem desses linfomas. A glicoproteína-P teve maior expressão nos linfomas não epiteliotrópicos do que nos epiteliotrópicos e não houve correlação entre as proteínas de resistência e o tempo de sobrevida dos animais, sugerindo que, além da biologia da neoplasia, outros mecanismos de resistência a múltiplas drogas diferente dos estudados possam ter um papel relevante na baixa resposta do linfoma cutâneo à quimioterapia. / Lymphoma is a group of blood cell tumors that develop from monoclonal proliferation of malignant lymphocytes. Lymphoma is the most frequent neoplasia in dogs and can be anatomically classified in multicentric, mediastinal, digestive and extranodal. Cutaneous lymphomas an extranodal type of lymphoma are classified histologically in epitheliotropic and non-epitheliotropic and are predominantly of T-cell immunophenotype, and rare cases of B cell phenotype. The main histopathological characteristic of epitheliotropic lymphoma in dogs is the tropism of neoplastic cells by the epidermis, mucosa or adjacent structures, while non-epitheliotropic lymphoma is characterized by dermal and subcutaneous infiltration without invasion of adjacent structures. Canine cutaneous lymphomas have rapid progression, are considered very aggressive and have poor prognosis. These dogs, usually have a low rate of response to chemotherapy which can be associated to an antineoplastic resistance. Among mechanisms of resistance are efflux of drugs from intracellular to extracellular through ABC family transporters such as P-glycoprotein, MRP (multple resistance protein) and BCRP (breast cancer resistance protein) and LRP (lung resistance protein), a vault protein responsible for nucleocytoplasmic transport. The aim of this study was to characterize immunophenotypically cutaneous lymphomas, measure cell proliferation using the Ki67 marker, the expression of resistance proteins P-glycoprotein, MRP, BCRP and LRP and to evaluate the relationship of these proteins with the survival of the animals. A retrospective study was performed with 21 cases of dogs with cutaneous lymphoma with histopathological diagnosis. Immunohistochemical was used to immunophenotyping of lymphomas by CD3 and CD20 markers, Ki67 cell proliferation, and P-glycoprotein, MRP, BCRP and LRP expression. Of the 21 animals, 38% had histopathological diagnosis of epitheliotropic lymphoma, 52% were non-epitheliotropic lymphomas, 5% of lymphoma cases had no definition and 5% were classified as round cell neoplasia. The predominant immunophenotype was CD3+CD20- (76%), 15% of the cases were CD3-CD20 + and 9% were CD3 + CD20 +. The median of cells labeled for Ki67 was 31%. Regarding the markers of resistance to multiple drugs, the median of the P-glycoprotein label was 40%, which 65% of LRP while for MRP and BCRP, 19% and 23%, respectively. Non-epitheliotropic cutaneous lymphomas were more frequent than epitheliotropic lymphomas and the predominant immunophenotype was T. The occurrence of CD3-CD20+ and CD3+CD20+ lymphocytes indicates the need for further studies and a wider panel of antibodies for subtyping these lymphomas. P-glycoprotein had higher expression in non-epitheliotropic lymphomas than in epitheliotropic lymphomas and there was no correlation between resistance proteins and survival time of the animals, suggesting that in addition to the biology of neoplasia other mechanisms of resistance to multiple drugs different from those studied may play a relevant role in the low response of cutaneous lymphoma to chemotherapy.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The files of biopsies performed in dogs in the Veterinary Pathology Laboratory of the Universidade Federal de Santa Maria, from 1964 to 2003 were reviewed for skin tumors. The 703 files with skin tumors found were distributed as follows: 25 (1964-1973), 48 (1974-1983), 161 (1984-1993) e 469 (1994-2003). In 36 (5,1%) dogs the sex was not specified. Out of the 667 dogs in which the sex was specified in the file, 377 (56,5%) were males and 290 (43,5%) were females, i.e., a ratio male:female of 1,3. In 44 of the 703 files (6,2%), the ages of the dogs were not informed. Of those (659 dogs) with an age informed in the file, 30 (4,5%) were classified as puppies, 260 (39,5%) as adults and 369 (56,0%) as aged. In the 703 files, 570 (81,0%) it was described that the dog had only one skin tumor and in 133 (19,0%), more than one tumor was described the skin. Six hundred and fifty four (93,1%) dogs had only one histologic type of tumor and 41 (5,8%) had two tumors of different histologic types. In seven (1,0%) dogs there were three tumors of different histologic type and in one (0,1%) four histologically unrelated tumors were diagnosed, totaling, 761 tumors. Out of the total of 761 skin tumors found, 673 (88,4%) were neoplastic and 88 (11,6%) were non-neoplastic. Out of the 673 neoplastic tumors, 294 (43,7%) were epithelial, 344 (51,1%) were mesenchymal and 35 (5,2%) were melanocytic. Out of the 294 epithelial tumors, 171 (58,2%) were benign and 123 (41,8%) were malign; of the 344 mesenchymal tumors, 133 (38,7%) were benign and 211 (61,3%) were malign; and of the 35 melanocytic tumors, 10 (28,6%) were benign and 25 (71,4%) were malign. Thus, out of the total of 761 skin tumors found in this survey, 402 (52,8%) were benign growths and 359 (47,2%) were malign. The 15 more frequently found tumors, in decreasing order of frequency, were mast cell tumor, squamous cell carcinoma, perianal adenoma, lipoma, trichoblastoma, perianal carcinoma, papilloma, follicular cysts, hemangioma, hemangiosarcoma, melanoma, sebaceous adenoma, histiocytoma, nodular sebaceous hyperplasia and fibroma / Os protocolos de biópsia de cães realizadas no Laboratório de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Santa Maria entre 1964 e 2003 foram revisados a procura de tumores cutâneos. Foram encontrados 703 protocolos distribuídos da seguinte maneira: 25 (1964-1973), 48 (1974-1983), 161 (1984- 1993) e 469 (1994-2003). Desses, em 36 (5,1%) o sexo não foi informado. Dos 667 cães que tinham o sexo descrito nos protocolos, 377 (56,5%) eram machos e 290 (43,5%) eram fêmeas, ou seja, uma relação macho:fêmea de 1,3. Do total de 703 cães, 44 (6,2%) não tiveram suas idades anotadas nos protocolos. Dos 659 cães em que a idade foi informada, 30 (4,5%) foram incluídos como filhotes, 260 (39,5%) como adultos e 369 (56,0%) como idosos. Nos 703 protocolos encontrados, em 570 (81,0%) estava descrito que o cão apresentava apenas um tumor na pele e, em 133 (19,0%), que o cão tinha mais de um tumor. Seiscentos e cinqüenta e quatro (93,1%) cães tinham apenas um tipo histológico de tumor e 41 (5,8%) apresentavam dois tumores histologicamente distintos. Em sete (1,0%) cães havia três tumores diferentes e em um (0,1%) cão foi diagnosticado quatro tumores não relacionados, finalizando um total de 761 tumores. Do total de 761 tumores cutâneos encontrados, 673 (88,4%) eram neoplásicos e 88 (11,6%) eram não-neoplásicos. Dentre os 673 tumores neoplásicos descritos, 294 (43,7%) eram epiteliais, 344 (51,1%) eram mesenquimais e 35 (5,2%) eram melanocíticos. Dos 294 tumores epiteliais, 171 (58,2%) eram benignos e 123 (41,8%) eram malignos. Dos 344 tumores mesenquimais, 133 (38,7%) eram benignos e 211 (61,3%) eram malignos. Dos 35 tumores melanocíticos, 10 (28,6%) eram benignos e 25 (71,4%) eram malignos. Dessa forma, do total de 761 tumores cutâneos descritos neste levantamento, 402 (52,8%) eram proliferações benignas e 359 (47,2%) eram malignas. Os 15 principais tumores encontrados em ordem decrescente de freqüência foram: mastocitoma, carcinoma de células escamosas, adenoma perianal, lipoma, tricoblastoma, carcinoma perianal, papiloma, cistos foliculares, hemangioma, hemangiossarcoma, melanoma, adenoma sebáceo, histiocitoma, hiperplasia sebácea nodular e fibroma

Linfomas pertencem a um grupo de neoplasias em que há proliferação monoclonal de linfócitos malignos, sendo uma das neoplasias mais frequentemente diagnosticadas em cães. Podem ser classificados quanto à forma anatômica em multicêntrico, mediastinal, digestório e extranodal. Dentre os extranodais, os linfomas cutâneos são classificados histologicamente como epiteliotrópicos e não epiteliotrópicos e são predominantemente de imunfenótipo T, com raros casos do tipo B. A principal característica histopatológica do linfoma epiteliotrópico em cães é o tropismo das células neoplásicas pela epiderme, mucosa ou estruturas anexas, enquanto o linfoma não epiteliotrópico é caracterizado pela infiltração dérmica e subcutânea sem invasão das estruturas anexas. Os linfomas cutâneos caninos têm progressão rápida, são considerados bastante agressivos e com mau prognóstico, com baixa taxa de resposta à quimioterapia. Um dos fatores que podem contribuir para isso é a resistência das células a múltiplas drogas e entre esses mecanismos de resistência estão o efluxo de drogas do meio intracelular para o extracelular por meio dos transportadores da família ABC, como a glicoproteína-P, MRP (multiple resistance protein) e BCRP (breast câncer resistance protein) e da LRP (lung resistance protein), uma proteína vault responsável pelo transporte nucleocitoplasmático. O objetivo deste estudo foi caracterizar imunofenotipicamente os linfomas cutâneos, a proliferação celular por meio do marcador Ki67, a expressão das proteínas de resistência glicoproteína-P, MRP, BCRP e LRP e avaliar a relação dessas proteínas com a sobrevida dos animais. Foi realizado um estudo retrospectivo com 21 casos de cães linfomas cutâneos com diagnóstico histopatológico. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para determinar a imunofenotipagem dos linfomas pelos marcadores CD3 e CD20, a proliferação celular por Ki67 e a expressão de glicoproteína-P, MRP, BCRP e LRP. Dos 21 animais, 38% tiveram diagnóstico histopatológico de linfoma epiteliotrópico, 52% eram linfomas não epiteliotrópicos, 5% dos casos de linfoma não tiveram epiteliotropismo definido e 5% foram classificados como neoplasia de células redondas. O imunofenótipo predominante foi CD3+CD20- (76%), 15% dos casos eram CD3-CD20+ e 9% eram CD3+CD20+. A mediana de células marcadas para Ki67 foi de 31%. Com relação aos marcadores de resistência a múltiplas drogas, a mediana da marcação de glicoproteína-P foi de 40%, a de LRP foi de 65% enquanto para MRP e BCRP, 19% e 23%, respectivamente. Os linfomas cutâneos não epiteliotrópicos foram mais frequentes que os epiteliotrópicos e o imunfenótipo predominante foi o T. A ocorrência de linfócitos CD3-CD20+ e CD3+CD20+ indica a necessidade de mais estudos e um painel mais amplo de anticorpos para subtipagem desses linfomas. A glicoproteína-P teve maior expressão nos linfomas não epiteliotrópicos do que nos epiteliotrópicos e não houve correlação entre as proteínas de resistência e o tempo de sobrevida dos animais, sugerindo que, além da biologia da neoplasia, outros mecanismos de resistência a múltiplas drogas diferente dos estudados possam ter um papel relevante na baixa resposta do linfoma cutâneo à quimioterapia. / Lymphoma is a group of blood cell tumors that develop from monoclonal proliferation of malignant lymphocytes. Lymphoma is the most frequent neoplasia in dogs and can be anatomically classified in multicentric, mediastinal, digestive and extranodal. Cutaneous lymphomas an extranodal type of lymphoma are classified histologically in epitheliotropic and non-epitheliotropic and are predominantly of T-cell immunophenotype, and rare cases of B cell phenotype. The main histopathological characteristic of epitheliotropic lymphoma in dogs is the tropism of neoplastic cells by the epidermis, mucosa or adjacent structures, while non-epitheliotropic lymphoma is characterized by dermal and subcutaneous infiltration without invasion of adjacent structures. Canine cutaneous lymphomas have rapid progression, are considered very aggressive and have poor prognosis. These dogs, usually have a low rate of response to chemotherapy which can be associated to an antineoplastic resistance. Among mechanisms of resistance are efflux of drugs from intracellular to extracellular through ABC family transporters such as P-glycoprotein, MRP (multple resistance protein) and BCRP (breast cancer resistance protein) and LRP (lung resistance protein), a vault protein responsible for nucleocytoplasmic transport. The aim of this study was to characterize immunophenotypically cutaneous lymphomas, measure cell proliferation using the Ki67 marker, the expression of resistance proteins P-glycoprotein, MRP, BCRP and LRP and to evaluate the relationship of these proteins with the survival of the animals. A retrospective study was performed with 21 cases of dogs with cutaneous lymphoma with histopathological diagnosis. Immunohistochemical was used to immunophenotyping of lymphomas by CD3 and CD20 markers, Ki67 cell proliferation, and P-glycoprotein, MRP, BCRP and LRP expression. Of the 21 animals, 38% had histopathological diagnosis of epitheliotropic lymphoma, 52% were non-epitheliotropic lymphomas, 5% of lymphoma cases had no definition and 5% were classified as round cell neoplasia. The predominant immunophenotype was CD3+CD20- (76%), 15% of the cases were CD3-CD20 + and 9% were CD3 + CD20 +. The median of cells labeled for Ki67 was 31%. Regarding the markers of resistance to multiple drugs, the median of the P-glycoprotein label was 40%, which 65% of LRP while for MRP and BCRP, 19% and 23%, respectively. Non-epitheliotropic cutaneous lymphomas were more frequent than epitheliotropic lymphomas and the predominant immunophenotype was T. The occurrence of CD3-CD20+ and CD3+CD20+ lymphocytes indicates the need for further studies and a wider panel of antibodies for subtyping these lymphomas. P-glycoprotein had higher expression in non-epitheliotropic lymphomas than in epitheliotropic lymphomas and there was no correlation between resistance proteins and survival time of the animals, suggesting that in addition to the biology of neoplasia other mechanisms of resistance to multiple drugs different from those studied may play a relevant role in the low response of cutaneous lymphoma to chemotherapy.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-04T19:50:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-SteffanyFerreira.pdf: 961397 bytes, checksum: 6fda526203d2fb7ff12a32289be35454 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T19:50:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-SteffanyFerreira.pdf: 961397 bytes, checksum: 6fda526203d2fb7ff12a32289be35454 (MD5) Previous issue date: 2012 / O câncer de pele ou tumor cutâneo não-melanoma (TCNM), é a neoplasia maligna de maior incidência no Brasil. Os cânceres, em geral, apresentam padrão de glicosilação aberrante na estrutura de oligossacarídeos de superfície celular (fenótipo), determinada pela ação conjunta de glicosiltransferases (genótipo). O presente estudo objetiva avaliar o perfil glicofenotípico de glicoconjugados de superfície celular de TCNM e correlacionar com o padrão de expressão de sialiltransferases. Cortes (4µm) de biópsias de Carcinoma Basocelular (CBC), Carcinoma Espinocelular (CEC), Ceratose Actínica (CA) e Ceratoacantoma (KA) foram ensaiados com as lectinas SNA, Sambucus nigra agglutinin, (específica para ácidos siálicos ligados na posição α-2,6) e MAA, Maakia amurensis agglutinin (específica para ácidos siálicos na posição α-2,3). A inibição da ligação lectina-carboidrato foi realizada com o ácido siálico (300mM). As amostras também foram avaliadas com anticorpos monoclonais anti-ST3Gal I (específico para β-galactosideo α2,3 sialiltransferase) e antiST6Gal I (específico para β-galactosideo α2,6 sialiltransferase). Semelhanças no padrão de sialilação entre CEC, CA e KA foram encontradas na histoquímica com lectinas e, principalmente na imunohistoquímica. O CBC não apresentou marcação na maioria dos casos para ambas as técnicas, indicando que este tipo tumoral apresenta um padrão molecular próprio podendo estar associado ao seu comportamento biológico (baixo potencial invasivo e metastático). Os resultados indicam a importância da sialilação no desenvolvimento e manutenção de tumores cutâneos, sendo a histoquímica com lectinas e a imunohistoquímica ferramentas úteis na determinação deste tipo de glicosilação na superfície de células tumorais. / Skin cancer or Non-melanoma Cutaneous Tumors (NMCT) is the most incidente malign neoplasia in Brazil. Cancers, in general, present a aberrant glycosilation pattern in oligossacharides of cell surfasse glycoconjugates (phenotype) which it is determined by tha action of glycosiltransferases (genotype). The present study aims to evaluate the glycophenotype of glycoconjugates in the cell surface of NMCT and to correlates to the expression of sialyltransferases. Biopsies slices (4µm) of basal cell carcinoma (BCC), squamous cell carcinoma (SCC), actinic keratosis (AK) and Keratoacanthoma (KA) were assayed with SNA, Sambucus nigra agglutinin, (specific to α2,6- linked sialyc acid) and MAA, Maakia amurensis agglutinin (specific to α2,3- linked sialic acid). Samples were also evaluated with monoclonal antibodies anti-ST3Gal I (specific to Sialyltransferase β-galactoside α2,3-linked) and antiST6Gal I (specific to Sialyltransferase β-galactoside α2,6-linked). Sialylation patterns were similar to SCC, AK and KA in both lectin histochemistry and immunohistochemistry but mainly in the later one. BCC was not positive in most of the cases for both methods which indicates that this tumour has a particular molecular pattern that can be associated to its biological behavior (low invasive and metastatic potential). Results indicate the importance of silaylation in the development and maintenance of cutaneous tumors being the lectin histochemistry associated to the immunohistochemistry a useful auxiliary tool for the determination of this type of glycosilation in skin tumors.