Ureaplasma diversum pode causar infecções e ativar a resposta imune, estando relacionado com infertilidade em bovinos. Devido à importância dos macrófagos nessas infecções e a relação direta com blastocistos bovinos, o estudo teve o objetivo avaliar o perfil imune in vitro destas células após a infecção experimental por U. diversum. Demonstrou-se capaz de promover resposta inflamatória em macrófagos murinos e bovinos e blastocistos bovinos, com ativação do TLR2 e secreção de IL-1β e TNF-α. A ativação inflamatória pode estar relacionada com a presença de um componente de superfície capaz de induzir uma resposta desse tipo, como lipoproteínas associadas aos lipídeos de membrana (LAMPs), mas as de U. diversum ainda não foram totalmente caracterizadas. Estes resultados associados ao sequenciamento do genoma de U. diversum, permite avanço na compreensão da biologia molecular de infecções por micoplasma. Assim, fomenta-se a discussão da importância e relevância das micoplasmoses, especialmente por U. diversum, na reprodução e bovinocultura no cenário brasileiro. / Ureaplasma diversum can cause infection and activate the immune response, and is associated with infertility in cattle. Due to the importance of macrophages in these infections and the direct relationship with bovine blastocysts, the study aimed to evaluate the immune profile in vitro of these cells after experimental infection U. diversum. It has been shown capable of promoting inflammatory response in murine and bovine macrophages and bovine blastocysts, with activation of TLR2 and IL-1β secretion and TNF-α. The inflammatory activation may be related to the presence of a surface component capable of inducing a response of that type, such as lipoproteins associated with lipid membrane (LAMP\'s), but U. diversum lipoproteins have not been fully characterized. These results associated with the sequencing of the U. diversum genome allows improvement in understanding the molecular biology of mycoplasma infections. Thus, encourages the discussion of the importance and relevance of mycoplasmosis, especially U. diversum, reproduction and cattle in the Brazilian scene.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-19T12:55:46Z No. of bitstreams: 1 Allison Alves de Macedo.pdf: 650201 bytes, checksum: b68962f58a5ff7ccd111367548d6a064 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-19T12:55:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Allison Alves de Macedo.pdf: 650201 bytes, checksum: b68962f58a5ff7ccd111367548d6a064 (MD5) Previous issue date: 2017-02-06 / This study’s objective was to conduct a Mycoplasma bovigenitalium and Ureaplasma diversum infections epidemiological investigation in cattle in the Ipanema Valley microregion, Pernambuco state. Vaginal swabs were collected from 355 reproductive age cows and submitted to polymerase chain reaction (PCR) and microbiological isolation. An investigative questionnaire was used to risk factors analysis associated with Mollicutes infection. According to PCR, 9.29% (33/355) of the samples were positive for Mycoplasma bovigenitalium and 21.69% (77/355) for Ureaplasma diversum. Coinfection was observed in 2.81% (10/355) of the samples. According to isolation, there was growth on Hayflick medium of 81.81% (27/33) from the samples classified as Mycoplasma spp. and 24.67% (19/77) growth on UB medium, being classified as Ureaplasma diversum. Risk factors associated to Mollicutes infection were considered: semi-intensive breeding system (OR = 4.6), pasture rent (OR = 3.6), reproductive disorders nonisolated animals (OR = 3.2), and natural mating plus artificial insemination (OR = 3.5). This is the first record of Mycoplasma bovigenitalium and Ureaplasma diversum infection in semiarid region cattle herds of Pernambuco state, Brazil. From this, preventive measures directed to the identified risk factors can contribute to Mollicutes’ occurrence decrease in the cattle herds studied. / Objetivou-se, com este estudo, realizar uma investigação epidemiológica da infecção por Mycoplasma bovigenitalium e Ureaplasma diversum em bovinos na microrregião do Vale do Ipanema, estado de Pernambuco. Foram coletados suabes vaginais de 355 vacas em idade reprodutiva que foram submetidos à Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e isolamento microbiológico. Um questionário investigativo foi utilizado para a análise dos fatores de risco associados à infecção por Mollicutes. Pela PCR, 9,29% (33/355) amostras foram positivas para Mycoplasma bovigenitalium e 21,69% (77/355) para Ureaplasma diversum. Observou-se coinfecção em 2,81% (10/355) das amostras. A partir do isolamento microbiológico das amostras positivas na PCR, houve crescimento no meio Hayflick de 81,81% (27/33) das amostras, sendo classificadas como Mycoplasma spp. e 24,67% (19/77) cresceram no meio “UB”, sendo classificadas como U. diversum. Foram considerados fatores de risco associados à infecção por Mollicutes: sistema de criação semi-intensivo (OR=4,6); aluguel de pastagens (OR=3,6); não isolamento dos animais com distúrbios reprodutivos (OR=3,2) e realização de monta natural mais inseminação artificial (OR=3,5). Este é o primeiro registro da infecção por Mycoplasma bovigenitalium e Ureaplasma diversum em rebanhos bovinos na região semiárida do estado de Pernambuco, Brasil. A partir dos resultados obtidos, medidas de prevenção direcionadas aos fatores de riscos identificados podem contribuir com a diminuição da ocorrência de Mollicutes nos rebanhos bovinos estudados.

Os Mollicutes causam doenças em várias espécies animais de importância econômica, inclusive em bovinos. Neste estudo, foi avaliada por concentração inibitória mínima (CIM) e citometria de fluxo, a atividade de oito agentes antibacterianos (enrofloxacina, ciprofloxacina, gentamicina, claritromicina, cloranfenicol, oxitetraclina, tiamulina e tilosina) contra Ureaplasma diversum. Foram analisadas 24 amostras de isolados de campo oriundas da mucosa genital de fêmeas bovinas. As amostras foram confirmadas por crescimento em caldo, placa e por PCR. Os inóculos foram submetidos à analise de suscetibilidade aos antibióticos pelo método da microdiluição em microplaca e posteriormente analisados pelo citômetro de fluxo a fim de avaliar a atividade antimicrobiana nas células. A claritromicina apresentou os maiores índices de inibição in vitro, sendo a gentamicina considerada o antibiótico de menor espectro de ação nesse estudo. De acordo com as análises do citômetro, a gentamicina apresentou o menor número de células viáveis enquanto a tiamulina apresentou o maior número. Embora haja resultados destoantes entre as técnicas utilizadas, o citômetro de fluxo pode ser utilizado como uma boa ferramenta para auxiliar a avaliação da suscetibilidade desses microrganismos a antibióticos. / The Mollicutes cause disease in several economically important species, including cattle. In this study, was evaluated by minimum inhibitory concentration (MIC) and flow cytometry, the activity of eight antibacterial agents (enrofloxacin, ciprofloxacin, gentamicin, clarithromycin, chloramphenicol, oxitetraclina, tiamulin and tylosin) against Ureaplasma diversum. We analyzed 24 samples of field isolates originating from the genital mucosa of cows. The samples were confirmed by growth in broth, plate, and PCR. The inoculations were subjected to analysis of susceptibility to antibiotics by the method of micro-dilution plate and then analyzed by flow cytometry to assess the antimicrobial activity in cells. Clarithromycin showed the highest levels of inhibition in vitro, the antibiotic gentamicin considered lower spectrum of action in this study. According to the analysis of the flow cytometer, gentamicin showed the lowest number of viable cells as tiamulin showed the greatest number. Although there are divergent results between the techniques used, flow cytometry can be used as a good tool even help assess the susceptibility of microorganisms to antibiotics.

Os Mollicutes causam doenças em várias espécies animais de importância econômica, inclusive em bovinos. Neste estudo, foi avaliada por concentração inibitória mínima (CIM) e citometria de fluxo, a atividade de oito agentes antibacterianos (enrofloxacina, ciprofloxacina, gentamicina, claritromicina, cloranfenicol, oxitetraclina, tiamulina e tilosina) contra Ureaplasma diversum. Foram analisadas 24 amostras de isolados de campo oriundas da mucosa genital de fêmeas bovinas. As amostras foram confirmadas por crescimento em caldo, placa e por PCR. Os inóculos foram submetidos à analise de suscetibilidade aos antibióticos pelo método da microdiluição em microplaca e posteriormente analisados pelo citômetro de fluxo a fim de avaliar a atividade antimicrobiana nas células. A claritromicina apresentou os maiores índices de inibição in vitro, sendo a gentamicina considerada o antibiótico de menor espectro de ação nesse estudo. De acordo com as análises do citômetro, a gentamicina apresentou o menor número de células viáveis enquanto a tiamulina apresentou o maior número. Embora haja resultados destoantes entre as técnicas utilizadas, o citômetro de fluxo pode ser utilizado como uma boa ferramenta para auxiliar a avaliação da suscetibilidade desses microrganismos a antibióticos. / The Mollicutes cause disease in several economically important species, including cattle. In this study, was evaluated by minimum inhibitory concentration (MIC) and flow cytometry, the activity of eight antibacterial agents (enrofloxacin, ciprofloxacin, gentamicin, clarithromycin, chloramphenicol, oxitetraclina, tiamulin and tylosin) against Ureaplasma diversum. We analyzed 24 samples of field isolates originating from the genital mucosa of cows. The samples were confirmed by growth in broth, plate, and PCR. The inoculations were subjected to analysis of susceptibility to antibiotics by the method of micro-dilution plate and then analyzed by flow cytometry to assess the antimicrobial activity in cells. Clarithromycin showed the highest levels of inhibition in vitro, the antibiotic gentamicin considered lower spectrum of action in this study. According to the analysis of the flow cytometer, gentamicin showed the lowest number of viable cells as tiamulin showed the greatest number. Although there are divergent results between the techniques used, flow cytometry can be used as a good tool even help assess the susceptibility of microorganisms to antibiotics.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Josefa.pdf: 982331 bytes, checksum: 15176344f6394cac2eaf6839d2fc9d1a (MD5) Previous issue date: 2009-12-11 / The reduction of reproductive rates is measured by the reduction in the number of calves born that immediately reflected in the reduction of milk production and profitability of commercial property. The effect is the increased administrative costs of maintenance with dry cows, higher rates of rejection and a higher number of doses of semen for conception. Parameters related to the level of hygiene of the udder and the milking system and environmental criteria as the overall control on the suction pressure of the milking, the ventilation system for livestock and hygiene in the milking parlor, contribute to the satisfaction of the control of pathogens transmissible among livestock. Study on monitoring the herd showed that the time of calving interval increases significantly in the first lactation cows with vaginitis, but the injury was not associated with cases of voluntary discharge. Research on the likelihood of introduction of infectious agents into herds free of the disease found that the significant risk factors for this spread were related to the return of animals that were removed for marketing, proximity between pastures of different properties and especially the clothing of a veterinarian or visitors. When analyzing the risk factors for the occurrence of a disease the causative factors are considered. Regression analysis to identify risk factors usually consider the multifactorial effects and outcome. The identification of the risk factor is to compare the pattern of distribution of the dependent variables between the levels of occurrence of the disease. Infections with mycoplasma (Mollicutes) in farm animals, have historical importance and continuing today interfering with livestock productivity. The M. Canadense is still little known in the pathological processes of reproduction. The M. bovis is highly adapted to cattle, however has been isolated in samples of buffalo, small ruminants and humans. The M. bovigenitalium was related to diseases of the reproductive system for more than three decades and was considered as the primary agent of vaginitis. The granular vulvitis sponsored by the U. diversum was demonstrated both in animals vaccinated as in unvaccinated. The agent has to interact with cellular factors, the ability to bind to the surface membrane of the host and even biological mechanisms to escape immune response submitted by host.Young animals and adults are susceptible. Transmission is by the introduction of carrier animals, semen and contact with infected genital secretions of infected animals / A queda dos índices reprodutivos é medida pela redução no número de bezerros nascidos que reflete imediatamente na redução da produção de leite e na rentabilidade comercial da propriedade. A repercussão administrativa é o incremento das despesas de manutenção com vacas secas, maiores taxas de descarte e maior número de doses de sêmen por concepção. Parâmetros relacionados ao nível de higiene do úbere e do sistema de ordenha e os critérios ambientais globais como o controle na pressão de sucção da ordenhadeira, o sistema de ventilação para os animais assim como a higiene na sala de ordenha, contribuem de forma satisfatória para o controle de patógenos transmissíveis entre os animais de produção. Estudo sobre monitoramento de rebanho demonstrou que o tempo do intervalo de partos aumenta significativamente em vacas de primeira lactação com vulvovaginite, mas a ocorrência da lesão não apresentou associação com os casos de descarte voluntário. Pesquisas sobre a probabilidade de introdução de agentes infecciosos em rebanhos livres da doença identificaram que os fatores de risco significativos para esta disseminação estiveram relacionados com a devolução de animais que foram retirados para comercialização, proximidade entre pastos de diferentes propriedades e principalmente pela vestimenta do veterinário ou de visitantes. Ao analisar os fatores de risco para a ocorrência de determinada doença as causas multifatoriais são consideradas. As análises de regressão para identificar fatores de risco normalmente consideram os efeitos multifatoriais e o desfecho. Assim, a identificação do fator de risco consiste em comparar o padrão de distribuição das variáveis dependentes entre os níveis de ocorrência da doença. O M. canadense ainda é pouco conhecido nos processos patológicos da reprodução. O M. bovis é altamente adaptado aos bovinos, porém já foi isolado em amostras de búfalos, pequenos ruminantes e humanos. O M. bovigenitalium foi relacionado com patologias do sistema reprodutivo há mais de três décadas e foi considerado como o agente primário da vulvovaginite. A vulvite granular promovida pelo U. diversum foi demonstrada tanto em animais vacinados quanto nos não vacinados. O agente apresenta fatores de interação celular, a habilidade de se ligar à superfície de membrana do hospedeiro e ainda mecanismos biológicos de escape à resposta imunológica apresentada pelo hospedeiro.Tanto animais jovens quanto adultos são susceptíveis. A transmissão ocorre pela introdução de animais portadores, sêmen contaminado e contato com as secreções genitais de animais infectados

O presente trabalho teve como objetivo o estudo da variabilidade genética e dos fatores de virulência de isolados de U. diversum. As cepas foram submetidas a sequenciamento dos genes da urease e 16S rRNA e a testes para verificar os fatores de virulência: cápsula, fosfolipase C, IgAse e adesão e invasão. A análise do sequênciamento parcial do gene 16S rRNA resultou na presença de polimorfismos em 44 posições da seqüência, que diferenciou as amostras em sete grupos. Em relação aos fatores de virulência, os dados mostraram que as cepas estudadas apresentaram uma camada densa ao redor da membrana celular dos microrganismos e atividade de fosfolipase C. No entanto, não foi observado a atividade de IgAse nas cepas. Em relação a atividade de invasão, observou-se que os ureaplasma estudados puderam ser visualizados no interior de células Hep-2 com apenas um minutos de infecção, sendo observados em uma região perinuclear, mas não no interior do núcleo. Além disto, pode verificar que entre 1% a 10% dos ureaplasmas estudos penetraram na célula pelo teste da gentamicina. / The aim of the present study was the study of genetic variability and virulence factors of U. diversum clinical isolates. The strains were submitted to sequencing for 16S rRNA and urease genes. Moreover, the strains were analyzed to the virulence factors: capsule, phospholipase C, IgA protease and adhesion and invasion into Hep-2 cells. The sequencing of parcial 16S rRNA gene showed polymorphic patterns into 44 positions. These polymorphisms clustered the strains in seven groups. For the virulence factors, ureaplasma cells showed a dense-stained external capsule-like structure surrounding the cell membrane. A high level of phospholipase C activity was also detected in 31 studied ureaplasma. However, no strains showed IgA protease activity. For the invasion assay, the isolates and strains used were detected inside the cells after infection of one minute. The invasions of the ureaplasmas surrounded the nuclear region but were not observed inside the nuclei. The gentamicin invasion assay detected that 1% to 10% of studied ureaplasmas were inside the infected cells.

O presente trabalho teve como objetivo o estudo da variabilidade genética e dos fatores de virulência de isolados de U. diversum. As cepas foram submetidas a sequenciamento dos genes da urease e 16S rRNA e a testes para verificar os fatores de virulência: cápsula, fosfolipase C, IgAse e adesão e invasão. A análise do sequênciamento parcial do gene 16S rRNA resultou na presença de polimorfismos em 44 posições da seqüência, que diferenciou as amostras em sete grupos. Em relação aos fatores de virulência, os dados mostraram que as cepas estudadas apresentaram uma camada densa ao redor da membrana celular dos microrganismos e atividade de fosfolipase C. No entanto, não foi observado a atividade de IgAse nas cepas. Em relação a atividade de invasão, observou-se que os ureaplasma estudados puderam ser visualizados no interior de células Hep-2 com apenas um minutos de infecção, sendo observados em uma região perinuclear, mas não no interior do núcleo. Além disto, pode verificar que entre 1% a 10% dos ureaplasmas estudos penetraram na célula pelo teste da gentamicina. / The aim of the present study was the study of genetic variability and virulence factors of U. diversum clinical isolates. The strains were submitted to sequencing for 16S rRNA and urease genes. Moreover, the strains were analyzed to the virulence factors: capsule, phospholipase C, IgA protease and adhesion and invasion into Hep-2 cells. The sequencing of parcial 16S rRNA gene showed polymorphic patterns into 44 positions. These polymorphisms clustered the strains in seven groups. For the virulence factors, ureaplasma cells showed a dense-stained external capsule-like structure surrounding the cell membrane. A high level of phospholipase C activity was also detected in 31 studied ureaplasma. However, no strains showed IgA protease activity. For the invasion assay, the isolates and strains used were detected inside the cells after infection of one minute. The invasions of the ureaplasmas surrounded the nuclear region but were not observed inside the nuclei. The gentamicin invasion assay detected that 1% to 10% of studied ureaplasmas were inside the infected cells.