A uva é uma fruta amplamente consumida em todo o mundo e importante fonte de compostos com atividade antioxidantes, principalmente compostos fenólicos. A operação mais tradicional de conservação de alimentos é pelo uso de calor, porém ele acarreta em alterações sensoriais e nutricionais do produto acabado. A utilização do bagaço de uva, resultante do processo de extração de suco, também tem demonstrado grande potencial para elaboração de produtos ricos em compostos com atividade antioxidante e fibras. Logo, estudos tecnológicos para o apropriado processamento industrial do suco de uva e de seus resíduos são necessários para incrementar o seu uso como componente funcional na indústria de alimentos. Os resultados sobre a concentração do suco de uva por osmose direta mostraram que o aumento da diferença de pressão osmótica, da vazão de alimentação e da temperatura acarretam em aumento do fluxo de água e sódio através da membrana. Também, foi observado que os fenômenos de polarização por concentração são fatores determinantes no desempenho do processo e podem ser minimizados pelo controle dos parâmetros de processo de osmose direta. Esse estudo mostrou que o suco concentrado por osmose direta não perde suas propriedades antioxidantes e não há redução da concentração de compostos fenólicos na bebida. Os resultados mostraram que há o aumento do teor de sódio de 0,9 mg L-1 para 1,75 mg L-1, quando o suco foi concentrado por osmose direta, porém esse aumento não acarreta em níveis altos para o consumo humano. Os resultados de secagem do bagaço de suco de uva mostram que maiores temperaturas e velocidades de ar de secagem implicaram em um processo de desidratação mais rápido. A retenção de compostos bioativos se mostrou maior em menores temperaturas. Em relação à velocidade do ar de secagem, a retenção da concentração dos compostos fenólicos totais foi maior quando foram utilizadas maiores fluxos de ar. Os flavonóis e flan-3-óis foram sensíveis ao aumento da velocidade de ar de secagem devido a degradações oxidativas. A atividade sequestrante de radicais ABTS aumentou no resíduo tratado a altas temperaturas, possivelmente devido à formação de produtos da reação de Maillard que também apresentam tal característica. A extração de compostos fenólicos do bagaço de suco de uva mostrou que grande parte de compostos fenólicos, principalmente taninos condensados, estão fortemente ligados na matriz do resíduo e não são facilmente extraíveis com solventes orgânicos. Além disso, esses compostos apresentam grande capacidade antioxidante, principalmente poder quelante de ferro. O estudo cinético de extração de compostos fenólicos e de antocianinas de bagaço de uva mostrou que o modelo de pseudo-primeira ordem foi o modelo que melhor representou a extração dos polifenóis. Em relação à estabilidade da farinha de bagaço de uva, os resultados mostraram que os compostos fenólicos e compostos com atividade sequestrante de radiais DPPH e de ferro se mostraram estáveis durante o armazenamento do produto a 25ºC por um período de 6 meses. Antocianinas e compostos com a atividade de sequestrar radiais ABTS se mostraram sensíveis à degradação durante o armazenamento. Foi observado que a farinha se mostrou livre de Salmonella sp., Bacillus cereus e coliformes fecais, havendo a necessidade de cuidados com o crescimento de bolores e leveduras durante a armazenagem. Finalmente, foram elaboradas massas tipo fettuccini, substituindo farinha de trigo por farinha de bagaço de uva, em que foi verificado que a adição do subproduto do suco de uva não interferiu na absorção de água e na perda de sólidos da massa durante o seu cozimento. Houve grande incremento de compostos fenólicos, antocianinas e de compostos com atividade antioxidante nos produtos adicionados de farinha de bagaço de uva, sendo a massa tipo fettuccini com melhor aceitação aquela em que se adicionou 2,5% do subproduto na sua preparação. Assim, farinha de bagaço de uva se mostra como um potencial componente funcional para ser utilizado tanto na indústria de alimentos quanto na agricultura familiar. / Grapes are widely consumed fruits throughout the world and important source of compounds with antioxidant activity, particularly phenolic compounds. The most traditional operation of food preservation is the use of heat, but it leads to changes on sensory and nutritional properties of the industrialized product. The use of grape pomace, resulting from the extraction of juice, has also shown great potential for development of products rich in compounds with antioxidant activity and fiber. So, technology studies to the propper industrial processing of grape juice and their waste ar essential to enhance the use of them as functional components in food and pharmaceutical industries. The results of the concentration of grape juice by forward osmosis showed that the concentration polarization phenomena are determining factors on process performance. Also, the study showed that the juice concentrated by FO does not degrade the compounds with antioxidant activity and does not change the nutritional properties of the beverage, despite of the small sodium transport for juice. The drying procedures of the grape marc show that higher temperatures and air velocity implied on a faster process of dehydration. The retention of bioactive compounds was greater at lower temperatures. In relation to the air velocity, the retention of the phenolic compounds was higher when higher values of air flows were used. Flavonols and flan-3-ols were sensitive to the increasing of the air velocity due to oxidative degradation. The ABTS-radical scavenging activity was increased when high temperatures were applied, possibly due to the formation of Maillard reaction products which also have this characteristic. The extraction of phenolic compounds from grape juice marc showed that most of the phenolic compounds, mainly tannins, are strongly linked in the matrix of residue and are not easily extractable with organic solvents. Furthermore, these compounds still have great antioxidant capacity, mainly iron chelating power, which shows the great potential of grape pomace be used in food applications, both in the form of phenolic extracts, as in the form of flour. The kinetics of extraction of phenolic compounds and anthocyanins in grape pomace showed that the model of pseudo-first order was the equation that best represented the extraction of polyphenols. Much of polyphenols is strongly linked to bagasse and not extracting solvent, as well as much of bioactive with antioxidant activity, reducing power and chelating activity is linked. In relation to the stability of the marc powder, the results showed that the phenolic compounds and compounds with DPPH radial and iron scavenging activity were stable during storage of the product at 25 ° C for a period of 6 months. Anthocyanins compounds with the capability of scavenging ABTS radicals were sensitive to degradation during storage. It was observed that the dried residue was free of Salmonella sp., Bacillus cereus and faecal coliforms, although it may be of great concern the growth of yeasts and molds during storage. The sorption isotherm curve of grape marc at 25 ° C had sigmoidal behavior, and the GAB model was the best equation to describe the experimental data. Finally, fettuccini type pastas were prepared, substituting wheat flour by grape marc powder. It was observed that the addition of the dried by-product did not interfere in water absorption capability and the solid loss of the past during cooking procedures. High enhance of the concentration of phenolic compounds, anthocyanins and compounds with antioxidant activity was observed in the blend added of grape marc powder, being the fettuccini pasta with better acceptance that in which it was added 2.5% of the residue to the preparation. These results so far show that grape pomace and the its phenolic extracts have great potential to be use as functional components in the food industry.

O suco de uva possui um importante papel econômico no Brasil, principalmente no estado do Rio Grande do Sul, grande produtor de uvas e derivados. Atualmente, podem ser encontrados sucos de uva orgânicos, em que o uso de agrotóxicos e engenharia genética no cultivo da uva são proibidos, e sucos convencionais, elaborados com uvas que recebem uma série de agroquímicos. Uma diferença significativa observada entre os dois tipos de suco é o conteúdo de compostos fenólicos, que é maior no suco orgânico. Esses compostos podem apresentar importante atividade antioxidante, minimizando a incidência de diversas doenças relacionadas ao estresse oxidativo, como as neurodegenerativas, o câncer e a aterosclerose. A epilepsia é uma das doenças neurológicas mais comuns em todo o mundo e é caracterizada por crises convulsivas espontâneas e recorrentes. Essas crises podem aumentar o conteúdo de espécies reativas de oxigênio e de nitrogênio, desequilibrando o metabolismo redox de pacientes epilépticos. Em vista disso, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antioxidante e anticonvulsivante de sucos de uva Bordô, orgânico e convencional, e seus efeitos no comportamento de ratos Wistar. Em adição, foi determinado o conteúdo de compostos fenólicos totais e compostos majoritários de cada suco. Para a realização do estudo, ratos Wistar machos (n=48) com 3 meses de idade pesando em torno de 250-300g foram divididos em 3 grupos e tratados, por gavagem, com solução salina, suco de uva orgânico ou convencional, durante 17 dias (tempo determinado de acordo com teste piloto). No 18° dia, as possíveis mudanças no comportamento (ansiedade, capacidade locomotora e exploratória) dos animais foram avaliadas pelo teste de Campo Aberto. A seguir, metade dos ratos de cada grupo recebeu uma dose única da droga convulsivante pentilenotetrazol (PTZ) e foram observados durante 30 minutos para avaliação das características convulsivas (tempo de latência para início da convulsão, tempo de convulsão tônico-clônica, tempo de convulsão total, número de convulsões e número de animais que chegaram ao nível cinco da escala de Racine, o tipo mais severo de crise convulsiva). Avaliou-se, ainda, a taxa de mortalidade em cada grupo. A seguir, os animais foram eutanasiados por decapitação e as estruturas cerebrais (córtex cerebral, cerebelo e hipocampo), fígado e sangue foram coletados para avaliação do metabolismo redox (danos oxidativos a lipídios e proteínas, conteúdo de óxido nítrico, atividade das enzimas superóxido dismutase e catalase e conteúdo de proteínas sulfidril). Os resultados mostraram que o tratamento com os sucos não alterou o comportamento dos ratos e não foi capaz de minimizar as convulsões induzidas por PTZ. Observou-se, no entanto, que o tratamento com suco convencional evitou a morte dos animais induzida por PTZ, enquanto que com o suco orgânico a mortalidade foi reduzida para 33%. Por outro lado, ambos os sucos evitaram os danos oxidativos a lipídios e proteínas, bem como o aumento no conteúdo de óxido nítrico no sistema nervoso central (SNC), fígado e soro dos ratos. Observou-se, ainda, que o tratamento com os sucos evitou a depleção de proteínas sulfidril em todos os tecidos estudados. O suco orgânico foi capaz de evitar, também, a depleção da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase e catalase em todos os tecidos. Já o suco convencional evitou a diminuição da atividade das enzimas antioxidantes induzida por PTZ apenas no fígado e soro dos ratos tratados. Observou-se, ainda, que o suco orgânico apresentou maior concentração de compostos fenólicos totais, catequina, epicatequina, antocianinas, procianidina B1 e resveratrol do que o suco convencional, fator que pode ter influenciado nos resultados obtidos neste trabalho. Portanto, os resultados obtidos neste estudo abrem portas para o desenvolvimento de novas estratégias terapêutica para o tratamento da epilepsia afim de aumentar a qualidade e a expectativa de vida de indivíduos portadores da doença, além de contribuir para o aumento do valor agregado do suco de uva, favorecendo a vitivinicultura nacional. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Grape juice has an important economic role in Brazil, mainly in the state of Rio Grande do Sul, a great important producer of grapes and its derivatives. Currently, it can be found organic grape juice, in which the use of pesticides and genetic engineering in grape cultivation are forbidden, and conventional juices obtained from grapes that receive a series of agrochemicals. A remarkable difference observed between the two types of juices is the content of phenolic compounds, which is higher in organic juice. These compounds have significant antioxidant activity, reducing the incidence of several diseases related to oxidative stress, such as neurodegenerative disorders, cancer and atherosclerosis. Epilepsy is a most common neurological disease worldwide and is characterized by spontaneous and recurrent seizures. These crises may increase the concentration of oxigen reactive species, unbalancing the redox metabolism of epileptic patients. Accordingly, the aim of this study was to evaluate the antioxidant, anticonvulsant and behavior activities of organic and conventional purple grape juices treatments in Wistar rats. In addition, it was determined the content of total and major phenolic compounds of each juice. For the study, male Wistar rats (n = 48), 3 months old, were divided into three groups and treated, by gavage, with saline, organic or conventional grape juice for 17 days (time determined by pilot testing). On the 18th day, the animals were evalueted by the open field test and the possible behavior changes (anxiety, locomotor and exploratory activities) are appointed. After that, half the animals in each group received a single dose of the convulsant drug pentylenetetrazole (PTZ) and they were observed for 30 minutes for evaluation of seizure characteristics (the latency to seizure, the tonic-clonic seizure time, the total seizure time, the number of seizure and how many animals reached the fifth stage on Racine’s scale, the most severe type of seizure). It was also evaluated the mortality rate in each group. Then, the animals were euthanized by decapitation according the animal ethics protocols and the brain structures (hippocampus, cerebellum and cerebral cortex), liver and blood were collected to evaluate the redox metabolism (oxidative damage to lipids and proteins, the nitric oxide content, activity of the superoxide dismutase and catalase enzymes and proteins sulfhydryl content). The results showed that treatment with the juices did not change the behavior of rats and it was not able to minimize the PTZ-induced seizures. However, the treatment with conventional juice prevented the death of animals induced by PTZ, whereas with organic juice mortality was reduced to 33%. By the other hand, both juices prevented the oxidative damage to lipids and proteins, as well as increased the of nitric oxide content in the central nervous system (CNS), liver and serum of rats. It was also observed that treatment with the juices prevented depletion of sulfhydryl proteins in all studied tissues. Organic juice was also able to prevent the reduction of the activity of antioxidant superoxide dismutase and catalase enzymes in all tissues. However, the conventional juice do not prevented the decrease in antioxidant enzyme activity induced by PTZ in the CNS of treated rats. Also, organic juice had a higher organic concentration of total phenolic compounds, catechin, epicatechin, anthocyanins, procyanidin B1 and resveratrol than conventional juice, a factor that may have influenced the results obtained in this work. Therefore, the results obtained in this study open possibility to the delopment of new therapeutic strategies for the treatment of epilepsy in order to increase the quality and expectancy life of epileptic individuals, and contribute to increasing the value of grape juice, favoring the wine country.

Orientador: Edson Luiz Furtado / Coorientador: César Júnior Bueno / Banca: Marco Antinio Tecchio / Banca: Adriana Zanin Kronka / Banca: Margarida Fumiko Ito / Banca: Ivan Herman Fischer / Resumo: Phaeomoniella chlamydospora é considerado o fungo mais agressivo do complexo de patógenos, responsáveis por causar a doença de Petri em videira. Esse trabalho teve como objetivo caracterizar patologicamente, morfoculturalmente e molecularmente, uma população com 57 isolados de P. chlamydospora, oriundos de videiras de sete estados brasileiros. Todos os isolados foram molecularmente identificados como pertencentes à espécie P. chlamydospora, através da amplificação da região ITS e de partes do gene da beta tubulina (β Tubulin). Essa espécie já foi descrita ocorrendo nos estados de São Paulo, Pernambuco e Rio Grande do Sul. O presente estudo relata pela primeira vez a ocorrência deste fungo em videiras nos estados do Paraná, Santa Catarina, Minas Gerais e Mato Grosso. Posterior aos estudos moleculares, realizaram-se os seguintes ensaios: caracterização cultural dos isolados em meio de cultura BDA (batata dextrose ágar) e MEA (extrato de malte); caracterização morfológica de conídios, conidióforos e clamidósporos em meio de cultura MEA e SNA (sintético nutriente ágar); crescimento dos isolados em temperaturas de 5, 10, 15, 20, 25, 30 e 35ºC por 42 dias em meio BDA; e teste de patogenicidade em videiras 'Niágara Rosada' (incidência e agressividade). A análise de cultura identificou quatro características de colônia. Dessas, a mais comumente observada dentre os estados foi com o centro verde oliváceo com reentranças, e as bordas brancas de aspecto cremoso. A caracterização morfoló... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Phaeomoniella chlamydospora is considered the most aggressive of the pathogen complex responsible for causing a Petri disease in vines. The goal of this work was to illustrate, morphologically and molecularly, a population with 57 isolates of Phaeomoniella from vines of seven Brazilian states. All the isolates were identified as belonging to the P. chlamydosphora species through the amplification of its area and parts of beta tubulina gene (β Tubulin). This series has already been carried out in the states of São Paulo, Pernambuco and Rio Grande do Sul. This was first reported in Paraná, Santa Catarina, Minas Gerais and Mato Grosso. Later studies in the behavior of PDA (potato dextrose agar) and MEA (malt extract); morphological characterization of conidia, conidiophores and chlamydospores in the MEA and SNA culture medium (synthetic nutrient agar); growth of the substrates at temperatures of 5, 10, 15, 20, 25, 30 and 35 ° C for 42 days in PDA medium; and pathogenicity test on Niagara Rosada vines (incidence and aggressiveness). A culture analysis identified 4 colony characteristics. Among these, the most commonly included in the states was with the green olive center with reentrances, and as white edges of creamy aspect. The morphological featuring was different in growth of structures when grown in medium culture, while the greater development in MEA medium culture when the conidia and chlamydospores were evaluated; and with higher growth in medium SNA when compared to the conidiophores. The ideal temperature range for the development of the pathogen is between 20 to 25ºC, while the temperature of 5ºC. By exposing the isolates kept from 5 ° C to 25 ° C for 42 days, they presented a more significant growth compared to those grown directly at 25 ° C (fungistatic effect). All the isolates were pathogenic to the 'Niagara Rosada' vine. The isolates showed different reisolation and aggressiveness ... / Doutor

La estrecha asociación entre el consumo de frutas y la salud deriva de la presencia en éstas de una serie de sustancias nutritivas y otras no nutritivas pero con un papel clave en la prevención de determinadas enfermedades. Sin embargo, su procesado y almacenamiento afecta a estos compuestos, por lo que resulta interesante considerar este efecto a la hora de seleccionar tratamientos. El objetivo planteado en esta Tesis ha sido el estudio de la influencia de las condiciones de procesado y almacenamiento en la estabilidad de los macro y micronutrientes de interés presentes de forma mayoritaria en la uva, con el fin de recomendar aquellas que proporcionen los productos con la máxima calidad sensorial, nutricional y, a su vez, más saludables. Este estudio se ha centrado en diferentes procesos aplicables para la elaboración de fruta parcialmente deshidratada, fruta en almíbar y fruta deshidratada. Se aplicaron tratamientos convencionales de secado por aire y procesos alternativos como la deshidratación osmótica y el secado asistido con microondas o sólo el secado asistido con microondas para la obtención de uva parcialmente deshidratada y de uva pasa, respectivamente. Así mismo se estudio el efecto del escaldado (convencional y con microondas) como pretratamiento para la elaboración de uva en almíbar. Los tratamientos más suaves (aplicados para la deshidratación parcial y obtención de fruta en almíbar) no implican cambios significativos en los compuestos de la uva, excepto en el ácido tartárico que disminuye en todos los casos. Sin embargo, la deshidratación para la obtención de uva pasa provoca, en general, una diminución de todos los compuestos estudiados excepto de los fenoles totales. Así mismo, la aplicación de microondas en procesos cortos no conlleva diferencias con respecto al procesado convencional en los productos obtenidos. / Carranza Concha, J. (2009). INFLUENCIA DEL PROCESADO EN EL VALOR NUTRITIVO Y FUNCIONAL DE LA UVA BLANCA [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/6960

Les ultraviolets A (UVA) sont carcinogènes et produisent des espèces réactives de l'oxygène (ERO). Le récepteur à la mélanocortine de type 1 (MC1R) est un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) qui est impliqué dans la mélanogénèse et dans l'inflammation cutanée. Certains variants du gène sont associés à un risque accru de mélanomes et de carcinomes cutanés. Le MC1R est exprimé surtout dans les mélanocytes mais son expression peut être induite par les UV in vitro dans les kératinocytes et in vivo dans la peau. Le récepteur MC1R est activé par l'α-MSH. L'objectif de ce travail de thèse a été d'étudier les effets du récepteur MC1R sur le stress oxydatif induit par les UVA dans des lignées kératinocytaires humaines HaCaT exprimant le récepteur MC1R ou son variant non fonctionnel Arg151Cys. Nous avons montré que la production d'ERO intracellulaire induite par les UVA est fortement inhibée dans les cellules HaCaT-MC1R et que cette inhibition est renforcée en présence d'α-MSH. L'inhibition du stress oxydatif induit par les UVA dans les cellules transfectées par le MC1R est en partie dépendante de la phosphorylation de la sous-unité activatrice, NoxA1 de la NADPH oxydase. Le traitement des cellules HaCaT-MC1R par un inhibiteur du récepteur au facteur de croissance épidermique (EGFR) restaure l'habilité de ces cellules à induire un stress oxydatif après irradiation UVA. Ces résultats montrent que l'activité constitutive du récepteur MC1R dans des kératinocytes pourrait inhiber le stress oxydatif induit par les UVA via des mécanismes dépendants de l'AMPc et de l'EGFR. / Ultraviolet A (UVA) radiations are responsible for deleterious effects, mainly due to reactive oxygen species (ROS) production. Alpha-melanocyte stimulating hormone (α-MSH) binds to Melanocortin-1 Receptor (MC1R) in melanocytes to stimulate pigmentation and modulate cutaneous inflammatory responses. MC1R may be induced in keratinocytes after UV exposure. To investigate the effect of MC1R signaling on UVA-induced ROS (UVA-ROS) production, we generated HaCaT cells that stably express human MC1R (HaCaT-MC1R) or the Arg151Cys (R151C) non- functional variant (HaCaT-R151C). We then assessed ROS production immediately after UVA exposure and found that: (1) UVA-ROS production was strongly reduced in HaCaT-MC1R but not in HaCaT-R151C cells compared to parental HaCaT cells; (2) this inhibitory effect was further amplified by α-MSH treatment of HaCaT-MC1R cells before UVA exposure; (3) after UVA irradiation, NoxA1 phosphorylation was increased i n HaCaT-MC1R compared to HaCaT and HaCaT-R151C cells. Inhibition of PKA in HaCaT-MC1R cells resulted in a marked increase of UVA-ROS production; (4) the ability of HaCaT-MC1R cells to produce UVA-ROS was restored by inhibiting epidermal growth factor receptor (EGFR) or extracellular signal-regulated kinases (ERK) activity before UVA exposure. Our findings suggest that constitutive activity of MC1R in keratinocytes may reduce UVA-induced oxidative stress via EGFR and cAMP-dependent mechanisms.

A radiação ultravioleta (UV) pode ser absorvida por diferentes moléculas celulares, incluindo o DNA no qual provoca distorções estruturais. As lesões mais comuns induzidas pela radiação UV são o ciclobutano de pirimidina (CPD) e o fotoproduto (6-4)-pirimidina-pirimidona [(6-4)PPs]. Estas lesões podem ser reparadas pela fotorreativação, caracterizada por ter uma única proteína (fotoliase) que remove lesões empregando luz visível (320-500 nm) como fonte de energia. Foram identificados dois tipos de fotoliases que diferem por sua especificidade ao substrato: CPD-fotoliase e (6-4)-fotoliase. Um outro mecanismo de reparo é o reparo por excisão de nucleotídeos (NER), um mecanismo que envolve múltiplos passos e proteínas. Enquanto os efeitos genotóxicos da UVC e UVB já estão relativamente esclarecidos e bem aceitos, ainda existem controvérsias sobre a genotoxicidade da radiação UVA, devido ao fato de ser fracamente absorvida pelo DNA. Alguns autores acreditam que os seus principais efeitos são gerados de forma indireta pela produção de espécies reativas de oxigênio enquanto outros acreditam que a UVA pode gerar danos ao DNA de forma direta, provocando a formação de dímeros de pirimidina. O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos genotóxicos da radiação UVA em fibroblastos humanos deficientes e proficientes em NER utilizando adenovírus recombinantes contendo uma ou outra fotoliase para verificar se as lesões CPD e (6-4)PP são geradas pela UVA e se elas teriam alguma importância nas respostas verificadas após irradiação. Foi verificado que as células deficientes no gene XPA são mais sensíveis à radiação UVA quando comparadas às células selvagens. Por meio da detecção imunológica, confirmamos a geração das lesões CPD, (6-4)PP e Dewar, fotoisômero da lesão (6-4)PP, após irradiação com UVA no genoma de células humanas. Empregando vetores adenovirais para transdução de fotoliase específica para lesões tipo CPD ou (6-4)PP, confirmamos que de fato essas lesões são formadas em células humanas deficientes em reparo de DNA após irradiação com UVA. Além disso, esses vírus permitiram verificar a relevância biológica dessas lesões na indução de morte celular em células XP-A irradiadas. De fato, os dados indicam que para doses baixas de radiação UVA essas lesões desempenham um importante papel na indução de morte. Não podemos descartar, porém, que lesões indiretas (provavelmente geradas por estresse oxidativo) também tenham papel na indução de morte pela radiação UVA, o que parece ser mais importante a doses médias e altas dessa radiação. / Ultraviolet radiation (UV) is absorbed by different cellular molecules, including DNA in which induces structural distortions. The most common lesions induced by UV radiation are the cyclobutane pyrimidine (CPD) and the photoproduct (6-4)-pyrimidine-pyrimidone [(6-4)PP]. These lesions can be repaired by the photoreactivation, characterized by a single protein (photolyase) that removes lesions using visible light (320-500 nm) as energy source. Two types of photolyases had been identified that differ by their substrate specificity: CPD-photolyase and (6-4)-photolyase. Another repair mechanism is the nucleotide excision repair (NER), a mechanism that involves multiple steps and proteins. While the genotoxic effects of UVB and UVC are already relatively well-understood and accepted, there is still controversy about the genotoxicity of UVA radiation, due to its low absorption by DNA. Some authors believe that the major effects are generated indirectly by the production of reactive oxygen species, while others believe that UVA can cause damage to DNA directly, inducing the formation of pyrimidine dimers. The aim of this study was to assess the genotoxic effects of UVA radiation in human fibroblasts deficient and proficient in NER, using recombinant adenovirus expressing the photolyases to verify if CPDs and (6-4)PPs are generated by UVA and whether they had any importance in the responses observed after irradiation. It was found that cells deficient in the XPA gene are more sensitive to UV radiation compared to wild type cells. By immunological detection, we confirm the generation of CPD, (6-4)PP and Dewar, photoisomer of the (6-4)PP lesion, in the genome of human cells after irradiation with UVA. Using adenoviral vectors for the transduction of photolyases specific for CPD or (6-4)PP lesions, we confirm that in fact these lesions are generated in human cells deficient in DNA repair after irradiation with UVA. Moreover, these viruses allowed us to verify the biological relevance of these lesions in the induction of cell death in irradiated XP-A cells. In fact, our data indicates that for low doses of UVA radiation, these lesions play important roles in the induction of death. We cannot rule out, however, that indirect lesions (probably caused by oxidative stress) could also have a role in the induction of death by UVA radiation, which seems to be more important in intermediate and high doses of this radiation.

Tendo em vista que a radiação ultravioleta A (UVA) e a luz visível (VIS) apresentam alto potencial para gerar oxigênio singleto (1O2) e provocar estresse oxidativo, é importante buscar substâncias capazes de prevenir ou minimizar o impacto desse evento sobre a pele, já que atualmente, há poucos filtros solares orgânicos no mercado que oferecem ampla proteção contra a UVA I e não há filtros orgânicos que ofereçam proteção contra a luz VIS. Estudos da literatura indicam que alguns antioxidantes, tais como a apigenina (API), a crisina (CRI) e o beta-caroteno (BTC), podem neutralizar o 1O2 e apresentam potencial de uso na fotoproteção. Deste modo, o objetivo do presente projeto foi avaliar a segurança da API, da CRI e do BTC, por meio dos ensaios de fotoestabilidade, fotorreatividade e fototoxicidade, e também sua eficácia, através de ensaios para determinar a proteção contra a morte celular induzida pela fotossensibilização da melanina, que gera 1O2, e a proteção de membrana contra danos fotooxidativos. Inicialmente, foi avaliada a fotoestabilidade da API, da CRI e do BTC quando submetidos à radiação UVA e luz VIS, por meio de CLAE. A fototoxicidade das substâncias em estudo frente à radiação UVA e luz VIS, empregando-se cultura de fibroblastos (Balb 3T3 clone A31), de melanócitos (Melan-a) e de melanoma (B16F10) também foi realizada. Para avaliar a eficácia, o efeito da API, da CRI e do BTC sobre a viabilidade das células B16F10 com níveis basais de melanina e após indução da melanogênese, bem como seu efeito sobre a proteção de membrana em modelo mimético de lipossomas, foram avaliados frente à luz VIS. Os resultados do estudo de fotoestabilidade mostraram que os antioxidantes, isolados ou em associação, foram considerados fotoestáveis em ambas as faixas de radiação avaliadas (UVA/VIS e VIS). No estudo de fotorreatividade, a API, a CRI e a associação (API+CRI+BTC) se mostraram fracamente fotorreativas após exposição ao UVA/VIS. No entanto, na presença de VIS, nenhum dos compostos apresentou fotorreatividade. No estudo de fototoxicidade, foi observado potencial fototóxico após irradiação por UVA/VIS para a CRI, BTC e a associação (API+CRI+BTC) nas três linhagens celulares avaliadas. Já a API, não apresentou potencial fototóxico apenas no ensaio realizado com fibroblastos. Na faixa da luz VIS, o BTC apresentou potencial fototóxico nas três linhagens celulares avaliadas; entretanto, para os demais antioxidantes (API e CRI) e sua associação (API+CRI+BTC) houve variação na resposta entre as diferentes linhagens. Os resultados dos estudos para avaliação da eficácia mostraram que os antioxidantes foram capazes de proteger as células contra morte induzida pela fotossensibilização da melanina, sendo que o efeito da API foi superior ao da CRI e do BTC. No estudo de proteção de membrana apenas a API foi capaz de conferir proteção contra os danos fotooxidativos induzidos pela luz VIS. A investigação do potencial de uso da API, da CRI e do BTC na proteção contra a radiação UVA e luz VIS mostrou que o uso de tais antioxidantes e da sua combinação visando a fotoproteção da pele é mais seguro na faixa da luz VIS. Além disso, concluiu-se que API é o mais promissor entre os antioxidantes estudados em relação à segurança e à eficácia, e apresenta elevado potencial de uso na proteção contra a luz VIS. / Considering that ultraviolet A (UVA) radiation and visible light (VIS) present high potential to generate singlet oxygen (1O2) and cause oxidative stress, it is important to search for substances that are able to prevent or minimize the impact of such event on the skin, since currently, there are few organic UV-filters on the market that offer broad protection against UVA I and there is no organic UV-filter which provide VIS light protection. Previous studies showed that some antioxidants, such as apigenin (API), chrysin (CRI) and beta-carotene (BTC) can neutralize 1O2 and exhibit potential for use in photoprotection. Therefore, the aim of this study was to evaluate the safety of API, CRI and BTC, by performing photostability, photoreactivity and phototoxicity assays, and also its efficacy, through the determination of the protection against cell death induced by melanin photosensitization, which generates 1O2, and also the assessment of membrane protection against photooxidative damage. Firstly, API, CRI and BTC photostability was evaluated after exposure to UVA and VIS light by using HPLC. The phototoxicity of the antioxidants subjected to UVA and VIS light, using cultured fibroblasts (Balb 3T3 clone A31), melanocytes (melan-a) and melanoma (B16F10) was also performed. In order to assess efficacy, API, CRI and BTC effect on the viability of B16F10 cells with melanin basal levels and after melanogenesis induction as well as their effect on membrane protection using mimetic liposome model were evaluated after VIS light exposure. Results of photostability studies showed that the antioxidants, isolated or combined, were considered photostable in both ranges (UVA/VIS and VIS). In the photoreactivity study API, CRI and the combination (API + CRI + BTC) were considered weakly photoreactive after UVA/VIS exposure. However, in the presence of VIS light, none of the compounds exhibited photoreactivity. In the phototoxicity study, phototoxic potential was observed for CRI, BTC and the combination (API + CRI + BTC) after UV/VIS irradiation in the three studied cell lines. API showed no phototoxic potential only in the assay performed with fibroblasts. In the VIS range, BTC showed phototoxic potential in the three cell lines; however, for the other antioxidants (API and CRI) and their combination (API + CRI + BTC) there was variance in response among different cell lines. Efficacy studies showed that the studied antioxidants were able to protect cells from death induced by melanin photosensitization, and API effect was superior to that of CRI and BTC. In membrane protection study, only API provided protection against VIS photooxidative induced damage. The investigation of the potential use of API, CRI and BTC for protection against UVA and VIS light showed that the use of such antioxidants and their combination aiming skin photoprotection is safer in the VIS range. Furthermore, it was concluded that API is the most promising antioxidant regarding safety and efficacy and presents high potential for use in protection against VIS light.

Orientador: Marco Antonio Tecchio / Banca: Hélio Grassi Filho / Banca: Luiz Antonio Junqueira Teixeira / Resumo: Objetivou-se avaliar a influência de porta-enxertos, fontes e doses de potássio na duração dos estádios fenológicos, na produção e nas características físicas e químicas dos cachos e bagas da uva 'Niagara Rosada'. O experimento foi realizado nos ciclos produtivos de 2016 e 2017 na Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP, no município de Botucatu-SP, situado a 22º 51' 55" S e 48º 27' 22" O e a 810 m. O sistema de condução utilizado nas videiras foi a espaldeira baixa no espaçamento de 2,0 x 0,8 m. O delineamento experimental foi de blocos casualizados em esquema fatorial 4 x 2 x 2, sendo quatro doses (0, 75, 150, 300 kg K2O ha1), duas fontes de potássio (cloreto de potássio e sulfato de potássio) e dois porta-enxertos ('IAC 572' e 'IAC 766'). Em cada ciclo de produção, a aplicação dos tratamentos foi parcelada em duas vezes durante o ciclo, sendo a metade da dose aplicada na época da poda e outra no início da maturação dos frutos. As variáveis analisadas durante os ciclos foram a avaliação dos estádios fenológicos, análise de K disponível no solo e diagnose foliar. Na colheita foram avaliadas: produção, produtividade, massa fresca, comprimento e largura dos cachos, massa fresca de bagas e engaços. No mosto da uva foram avaliados o teor de sólidos solúveis (SS), Acidez titulável (AT), relação (SS/AT) e pH. Concluiu-se que, a adubação potássica incrementou os teores de potássio no solo nas camadas de 0-20 e 20-40 cm, e os teores de potássio e cálcio nas folhas na época da flor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of rootstocks, sources and rates of potassium in the production and physicochemical characteristics of bunches and berries of grape 'Niagara Rosada'. The experiment was conducted in the productive cycles of 2016 and 2017 at the Experimental Farm of the Faculty of Agricultural Sciences- UNESP, located in Botucatu, SP (22º 51' 55" S and 48º 27' 22" O and 810 m). The plants were spaced 2,0 x 0,80 m, in espalier support system low. The experimental design was a randomized complete block design in a 4 x 2 x 2 factorial scheme, with four rates (0, 75, 150, 300 kg K20 ha-1), two potassium sources (potassium chloride and potassium sulfate) and two rootstocks ('IAC 572' and 'IAC 766'). The application of the treatments were divided in two times in the cycle, half of the rate in the season of pruning and another half in the beginning of the maturation of the fruits. During the cycle were evaluated the phenological stages, potassium contents in the soil and nutritional leaf samples. At harvest, were evaluated: production; productivity; fresh weight, length and width of bunches, weight of berries and stems. The must grape was evaluated for soluble solids (SS), titratable acidity (TA), relationship SS/TA and pH. It was concluded that, potassium fertilization increased the potassium contents in the layers of 0-20 and 20-40 cm, and in the potassium contents and leaf compensation at the time of flowering. Potassium fertilization is not influential in production, productivity and physical and chemical characteristics ... / Mestre

Orientador: Erasmo José Paioli Pires / Coorientador: Marco Antonio Tecchio / Banca: Mara Fernandes Moura / Banca: Sarita Leonel / Resumo: O experimento foi realizado em um vinhedo experimental do Centro APTA de frutas do Instituto Agronômico (IAC), localizado no município de Jundiaí-SP durante as safras de 2011 e 2012, com o objetivo de avaliar a influência de porta-enxertos no comportamento de cultivares de uvas viníferas, labruscas e híbridas para vinho. Foram avaliadas as cultivares Isabel, Bordô, Cabernet Sauvignon, Cabernet Franc, Merlot, Syrah, Sauvignon Blanc, IAC 138-22 „Máximo‟, IAC 116-31 „Rainha‟, IAC 21-14 „Madalena‟, BRS Lorena e BRS Violeta enxertadas nos porta-enxertos „IAC 766‟ e „Ripária do Traviú‟. O delineamento experimental utilizado foi em blocos inteiramente casualizados. As variáveis avaliadas em dois ciclos produtivos foram: a duração do ciclo; a curva de maturação; o número de cachos por planta; a produtividade; as características físicas dos cachos e bagas; os teores de sólidos solúveis; acidez titulável; pH; a relação sólidos solúveis/acidez e os teores de antocianinas totais. Pelos resultados, verificou-se que para produtividade, houve interação significativa entre as cultivares e os porta-enxertos em ambos os ciclos. Para as características físicas dos cachos, bagas, engaço e número de bagas por cacho, constaram-se influência significativa das cultivares, sobre essas características, nas duas safras. Na duração do ciclo, não houve interação copa e porta-enxerto. No entanto, pode-se observar influência desses fatores separadamente. As cultivares Merlot e Syrah tiveram maior duração do ciclo e a Sauvignon Blanc apresentou o menor ciclo, nos dois anos avaliados. Na evolução da maturação, para o ano de 2011 os teores de SS e pH nas cultivares Isabel, ... / Abstract: The experiment was conducted in an experimental area of the Centro APTA de frutas do Instituto Agronômico (IAC), located in Jundiaí-SP during the growing seasons of 2011 and 2012, with the objective of evaluating the influence of rootstocks on the behavior of grapes cultivars, wine grapes, hybrid and common. Were evaluated the cultivars of wine grapes Isabel, Bordô, Cabernet Sauvignon, Cabernet Franc, Merlot, Syrah, Sauvignon Blanc, IAC 138-22 'Máximo', IAC 116-31 'Rainha', IAC 21-14 'Madalena', BRS Lorena and BRS Violeta grafted on rootstocks 'IAC 766' and 'Ripária do Traviú'. The experimental design used was randomized blocks. The variables evaluated in two production cycles were: the phenological stages duration, the maturation curve, the number of bunches per plant; productivity; physical characteristics of clusters and berries, the soluble solids, titratable acidity, pH, the relation soluble solids / acidity and total anthocyanin content. By the results, showed that for productivity, there were significant interaction between cultivars and rootstocks in both cycles. For the physical characteristics of clusters, berries, stems and number of berries per cluster, were found a significant influence of cultivars, on these characteristics, in both seasons. In the cycle length, there were no interaction crown and rootstock. However, it can be observed the influence of these factors separately. Cultivars Merlot and Syrah cycles lasted longer and Sauvignon Blanc presented the lowest cycle among cultivars in the two years evaluated. On the maturation evolution, for the year 2011 the SS and pH for Isabel cultivars, IAC 21-14 'Madalena' and IAC 138-22 'Máximo' showed progressive behavior, with better adjust polynomial regression of second degree but as regards the ratio SS / acidity all cultivars showed linear increases. In 2012, the maturation of Bordô cultivars, IAC 21-14 'Madalena' and IAC ... / Mestre

Orientador: Luís Henrique Bassoi / Banca: Marco Antonio Tecchio / Banca: Fernando Broetto / Banca: Regina Celia de Matos Pires / Banca: Fernando Braz Tangerino Hernandez / Resumo: Para elaboração de vinhos finos de qualidade são necessários estudos aprofundados de diversas práticas agronômicas. Uma delas é o manejo da irrigação, principalmente quando a videira é cultivada em regiões com baixo índice pluvial como o Semiárido brasileiro. Hipoteticamente, o déficit hídrico a partir da fase fenológica de cacho fechado melhoraria a qualidade da uva para vinho. Com isso, o objetivo do trabalho foi avaliar a influência de estratégias de irrigação com restrição hídrica sobre a fisiologia e produtividade da videira e qualidade da uva para vinho cv. Syrah no Vale do Submédio São Francisco. O experimento foi realizado na Embrapa Semiárido, em Petrolina - PE, durante três consecutivos ciclos de produção (10 de abril a 9 de agosto de 2013 - ciclo 5, 8 de outubro de 2013 a 28 de janeiro de 2014 - ciclo 6, e 7 de maio a 3 de setembro de 2014 - ciclo 7), com 3 tratamentos e 4 repetições. Os tratamentos foram: irrigação plena (IP), onde a aplicação de água foi realizada por gotejamento com base na reposição da evapotranspiração da cultura, durante todo o ciclo de produção; irrigação com déficit controlado (IDC), onde a irrigação por gotejamento foi interrompida na fase de cacho fechado, mas eventualmente realizada conforme o monitoramento da umidade do solo na zona efetiva do sistema radicular da videira, e irrigação com déficit (ID), onde a irrigação por gotejamento foi interrompida na fase de cacho fechado, continuando sem irrigação até a colheita. Foram determinados o potencial hídrico foliar, trocas gasosas, composição isotópica do carbono na videira; os sólidos solúveis totais, pH, acidez total, antocianinas totais, flavonóides, polifenóis totais, taninos e atividade antioxidantes nas bagas; e o número de cachos por planta, massa de cachos por planta, massa média do cacho, e produtividade da videira. A IDC e ID ... / Abstract: The production of fine quality wines requires detailed studies of various agronomic practices. One is the irrigation management, especially when the vine is grown in areas with low rainfall as the Brazilian semiarid. Hypothetically, the water deficit from the phenological stage of closed cluster improves grape quality for wine. Thus, the objective was to evaluate the effect of irrigation strategies with water deficit on plant physiology and yield, and berry quality of wine vine cv. Syrah in the Lower Middle São Francisco Valley. The experiment was carried out at Embrapa Tropical Semi-Arid, in Petrolina, State of Pernambuco, Brazil, for three growing seasons (April 10 to August 9, 2013 - seson 5, October 8, 2013 to January 28, 2014 - season 6, and 7 May to September 3, 2014 - season 7), with 3 treatments and 4 repetitions. The treatments were: full irrigation (FI), where the application of water by drippers was based on the replacement of the crop evapotranspiration throughout the whole season; regulated deficit irrigation (RDI), where irrigation was interrupted in the closed cluster phenological phase, but eventually performed as the soil moisture monitoring in the effective rooting depth of vine, and deficit irrigation (DI), where irrigation was interrupted in closed cluster phase, continuing without water application to harvesting. Measurements of leaf water potential, gas exchange, and carbon isotopic composition in the vine, total soluble solids, pH, titratable acidity, anthocyanins, flavonoids, total polyphenols, tannins, and antioxidants activity in the berries, and number of cluster per plant, cluster mass per plant, average cluster mass, and vine yield were performed. The irrigation strategies RDI e DI promoted moderate water stress in plants, reducing water consumption and weight of 100 berries for the three seasons, reducing the titratable acidity in seasons 5 and 6, and increasing ... / Doutor