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Eficácia de uma vacina comercial contra a raiva frente a desafios com amostras de vírus de campo comparados ao desafio padrão no teste NIH

Souza, Fernando José Pires de [UNESP] 22 June 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-22Bitstream added on 2014-06-13T18:55:49Z : No. of bitstreams: 1 souza_fjp_me_jabo.pdf: 289543 bytes, checksum: 6ec4fdfeb3984ff7356fa03db7b0aed6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No Brasil, a potência das vacinas veterinárias contra a raiva é avaliada pelo teste NIH (“National Institutes of Health”), no qual o desempenho de uma vacina, medido pela DE50 em camundongos, é comparado ao desempenho de uma vacina de referência. São consideradas aprovadas as partidas com potência igual ou superior a 1,0 UI. O presente estudo comparou o desafio viral com vírus fixo CVS, utilizado como padrão no teste de potência NIH, a desafios com três amostras virais isoladas de bovinos naturalmente infectados. O objetivo foi verificar se as amostras de vírus de campo apresentariam virulência maior que a do CVS, o que poderia sugerir a inadequação do teste NIH para a avaliação das vacinas contra a raiva e, portanto, inferir que as vacinas aprovadas por esse teste poderiam não proteger suficientemente o rebanho. Apesar da grande variabilidade que o teste NIH pode apresentar, as três repetições desafiadas com CVS apresentaram semelhança em um intervalo de confiança de 95%, e nos desafios realizados com três amostras de vírus de campo a vacina utilizada protegeu mais do que nos desafios com CVS. Conclui-se que a virulência das amostras de vírus de campo utilizadas não foi maior que a virulência do CVS, em camundongos, e que o rigor do desafio padrão mostrou-se adequado para a avaliação da potência pelo teste NIH e, portanto, para o controle da qualidade de vacinas contra a raiva. / The potency of veterinary rabies vaccines in Brazil is evaluated by the NIH (National Institutes of Health) potency test, in which the ability of a vaccine to induce protection in mice (ED50) is compared with a reference vaccine. The batches are approved when the potency is equal or superior to 1.0 IU. The present study compared CVS strain challenges (standard strain for the potency test) with challenges that used three wild isolates of natural occurrence in cattle. The aim was to verify if the wild strains could be more virulent than the CVS. If this occurred, the NIH potency test would prove inadequate to evaluate rabies vaccines. Therefore, one could infer that the approved vaccines might not provide sufficient herd protection. Despite the great variability of NIH test, all three repetitions that were challenged with CVS were similar at a 95% confidence-level; and when challenged with wild strains, the vaccine provided better protection than the one achieved at CVS challenge. In conclusion, wild strains virulence was not greater than CVS virulence in mice. The strictness of standard challenge proved to be adequate for potency evaluation by NIH test, and consequently, for the quality control evaluation of rabies vaccines.
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Caracterização antigênica e genotípica de isolados do vírus rábico, de quirópteros da cidade de Botucatu-SP e região

Menozzi, Benedito Donizete [UNESP] 24 February 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-24Bitstream added on 2014-06-13T20:51:48Z : No. of bitstreams: 1 menozzi_bd_me_botfm.pdf: 416353 bytes, checksum: fadddb2ae9090426b38baad78b5ac3f0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os morcegos há algum tempo vem recebendo crescente importância em Saúde Pública, pois são considerados os principais reservatórios do vírus da raiva em grande parte do mundo inclusive no Brasil. Apesar dos morcegos manterem ciclos epidemiológicos da raiva há séculos, foi nas últimas décadas que a raiva em morcegos teve seu reconhecimento, por meio de pesquisas sobre o papel destes animais no ciclo epidemiológico da doença e também sobre suas variantes e suas implicações no desenvolvimento de novos reservatórios para o vírus da raiva, principalmente em regiões onde a doença em cães foi controlada. O estado de São Paulo, sob coordenação do Instituto Pasteur, realiza a vigilância epidemiológica para raiva por meio dos laboratórios credenciados para seu diagnóstico, no Laboratório do Serviço de Diagnóstico de Zoonoses da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia – UNESP - Botucatu - SP está credenciado recebendo material para diagnóstico de diversos municípios da região. Entre os anos de 2003 e 2010 foram diagnosticadas como positivas pelas provas de IFD e Prova Biológica, 19 amostras de quirópteros não hematófagos. Estes isolados foram caracterizados antigenicamente pelo painel de anticorpos monoclonais cedido pelo CDCOPAS (Centers of Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USAOrganização Pan-americana de Saúde), revelando que sete destes isolados pertenciam a variante 3, que tem os morcegos hematófagos da espécie Desmodus rotundus como reservatório, além de um morcego insetívoro do gênero Myotis que apresentou variante 4 característica do também morcego insetívoro Tadarida brasiliensis, além de outros três perfis não compatíveis, NC-1, NC-2 e NC-3. Todos os isolados foram submetidos a RT-PCR e seus produtos tiveram o gene da nucleoproteína (N) viral parcialmente... / For some time ago, bats are receiving an increased importance in Public Health because they are considered the main reservoirs of rabies virus around the world, including Brazil. Although bats remain the rabies epidemiological cycles for centuries, only in the last decades the rabies in bats had its recognition, throughout researches focused on the role of these animals in the epidemiological cycle of the disease and also on their variants and their implications in the development of new reservoirs for rabies virus, mainly in regions where the disease in dogs was controlled. The state of São Paulo, coordinated by the Institute Pasteur, performs epidemiological surveillance for rabies through registered laboratories for its diagnosis. The labs of Zoonosis Diagnostic Service, School of Veterinary Medicine and Animal Science - UNESP - Botucatu - SP is registered for receiving material for diagnosis of some municipalities of the region. Between 2003 and 2010, 19 samples of nonhematophagous bats were diagnosed as positive by IFD and Biological Evidence. These isolates were antigenically characterized by the panel of monoclonal antibodies donated by PAHO-CDC (Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA Pan-American Health), revealing seven of these isolates belonged to variant 3, which has the vampire bat Desmodus rotundus as reservoir, as well as an insectivorous bat of the genus Myotis presenting variant 4, characterisitc of the other insectivorous bat Tadarida brasiliensis, and other three profiles are not compatible, NC-1, NC-2 and NC-3. All isolates were assayed by RT-PCR and their products had the nucleoprotein gene (N) viral partially sequenced, generating a phylogenetic tree that grouped these isolates into four clusters, designated as lineages Nyctinomops, Myotis, Desmodus rotundus, and a new lineage of rabies virus not... (Complete abstract click electronic access below)
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Circulação do vírus rábico em gambás (Didelphis albiventris e Didelphis aurita) nos municípios de Torre de Pedra, Bofete e Anhembi-São Paulo /

Bacchiega, Thais Silva. January 2014 (has links)
Orientador: Carlos Roberto Teixeira / Coorientador: Jane Megid / Banca: Flávia Karina Delella / Banca: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Resumo: A raiva é uma zoonose, que se caracteriza como uma encefalite aguda e letal. Atualmente, sabe-se que o vírus da raiva possui vários ciclos epidemiológicos e diversos animais podem servir como seus reservatórios, perpetuando-o no ciclo silvestre e urbano. Esse estudo teve como objetivo avaliar a prevalência de anticorpos neutralizantes (AN) contra a raiva no soro de gambás das espécies Didelphis albiventris e Didelphis aurita por meio da técnica de soroneutralização (Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test - RFFIT). A pesquisa foi conduzida nas cidades de Anhembi, Torre de Pedra e Bofete, localizadas no centro oeste de São Paulo. Soro de 67 animais, a maioria do sexo masculino e na idade adulta, foram avaliados. A positividade para anticorpos neutralizantes antirábicos foi de 17,9%. Esse resultado evidencia a circulação do vírus da raiva em gambás e serve de alerta tanto à comunidade científica quanto às autoridades governamentais envolvidas nas pesquisas e controle da raiva / Abstract: Rabies is a zoonotic disease, which is characterized as an acute and lethal encephalitis. Currently, it is known that rabies virus has several cycles and several epidemiological animals may serve as reservoirs of the virus perpetuating it in wild and urban cycle. This study aimed to evaluate the presence of antirabies neutralizing antibodies (NA) in the serum of the opossum Didelphis albiventris e Didelphis aurita by means of a virus neutralizing (Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test - RFFIT). The survey was conducted in the cities of Anhembi, Torre de Pedra and Bofete, located in the center west of São Paulo. Sera from 67 animals were examined, most males in adulthood. The percentage of animals that presented neutralizing antibodies was 17.9%. This result shows the circulation of the rabies virus in skunks and serves to alert both the scientific community and government authorities involved in the research and rabies control / Mestre
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Eficácia de uma vacina comercial contra a raiva frente a desafios com amostras de vírus de campo comparados ao desafio padrão no teste NIH /

Souza, Fernando José Pires de. January 2009 (has links)
Orientadora: Adolorata Aparecida Bianco Carvalho / Banca: Maria da Gloria Buzinaro / Banca: Luzia Helena Queiroz / Resumo: No Brasil, a potência das vacinas veterinárias contra a raiva é avaliada pelo teste NIH ("National Institutes of Health"), no qual o desempenho de uma vacina, medido pela DE50 em camundongos, é comparado ao desempenho de uma vacina de referência. São consideradas aprovadas as partidas com potência igual ou superior a 1,0 UI. O presente estudo comparou o desafio viral com vírus fixo CVS, utilizado como padrão no teste de potência NIH, a desafios com três amostras virais isoladas de bovinos naturalmente infectados. O objetivo foi verificar se as amostras de vírus de campo apresentariam virulência maior que a do CVS, o que poderia sugerir a inadequação do teste NIH para a avaliação das vacinas contra a raiva e, portanto, inferir que as vacinas aprovadas por esse teste poderiam não proteger suficientemente o rebanho. Apesar da grande variabilidade que o teste NIH pode apresentar, as três repetições desafiadas com CVS apresentaram semelhança em um intervalo de confiança de 95%, e nos desafios realizados com três amostras de vírus de campo a vacina utilizada protegeu mais do que nos desafios com CVS. Conclui-se que a virulência das amostras de vírus de campo utilizadas não foi maior que a virulência do CVS, em camundongos, e que o rigor do desafio padrão mostrou-se adequado para a avaliação da potência pelo teste NIH e, portanto, para o controle da qualidade de vacinas contra a raiva. / Abstract: The potency of veterinary rabies vaccines in Brazil is evaluated by the NIH (National Institutes of Health) potency test, in which the ability of a vaccine to induce protection in mice (ED50) is compared with a reference vaccine. The batches are approved when the potency is equal or superior to 1.0 IU. The present study compared CVS strain challenges (standard strain for the potency test) with challenges that used three wild isolates of natural occurrence in cattle. The aim was to verify if the wild strains could be more virulent than the CVS. If this occurred, the NIH potency test would prove inadequate to evaluate rabies vaccines. Therefore, one could infer that the approved vaccines might not provide sufficient herd protection. Despite the great variability of NIH test, all three repetitions that were challenged with CVS were similar at a 95% confidence-level; and when challenged with wild strains, the vaccine provided better protection than the one achieved at CVS challenge. In conclusion, wild strains virulence was not greater than CVS virulence in mice. The strictness of standard challenge proved to be adequate for potency evaluation by NIH test, and consequently, for the quality control evaluation of rabies vaccines. / Mestre
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Resposta imune inata em sistema nervoso central de camundongos experimentalmente infectados com amostras de vírus rábico isoladas de diferentes espécies / Imune inate and adaptative viral response in central nervous system of mice experimentally infected with rabies virus strains isolated forom different species

Allendorf, Susan Dora [UNESP] 01 July 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-01Bitstream added on 2015-05-14T16:58:53Z : No. of bitstreams: 1 000829408.pdf: 2465739 bytes, checksum: 3b6cd69550973141a95f15638eea0959 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O controle da raiva é mundialmente reconhecido como um dos grandes desafios mundiais. As diferentes variantes virais isoladas das diversas espécies animais apresentam características imunogênicas distintas assim como na sequência de nucleotídeos, o que permite sua classificação em variantes e genótipos. Além disso, diferenças na patogenicidade também foram observadas através de inoculação experimental em camundongos e cultivo celular. Os mecanismos pelos quais o vírus rábico (RABV) infecta um indivíduo e se perpetua na natureza ainda não foram totalmente esclarecidos. Entretanto alguns fatores que levam ao sucesso da infecção já foram estabelecidos, entre os mais importantes podemos citar a capacidade de induzir a apoptose das células de defesa e preservar a integridade e funcionalidade dos neurônios. Estes eventos são mediados por citocinas que regulam diversos genes envolvidos nesse complexo processo ainda pouco compreendido. Considerando a diversidade de linhagens virais circulantes e a complexidade dos eventos envolvidos na neuroinvasão do RABV o presente projeto avaliou os genes mais importantes envolvidos na expressão gênica do processo de resposta immune inata e adaptativa após infecção e avaliou a patogenicidade de diferentes amostras virais através da inoculação experimental em camundongos SPF (Specific Pathogen Free) realizando a quantificação viral por qRT-PCR e imunofluorescência das amostras coletadas / Rabies control is considered a worldwide challenge. Different virus strains (RABV) are isolated from different species, they have distinct immunogenic characteristics as well in their nucleotides sequence, allowing their classification into variants and genotypes. Furthermore, differences in pathogenicity have also been observed through experimental inoculation in mice and cell cultures. The mechanisms by which RABV infects an individual and perpetuated the infection in nature have not been fully clarified. However some factors that lead to successful infection are already established, among the most important we can mention the ability to induce apoptosis of T cells and maintain the integrity and functionality of neurons. These events are mediated by cytokines that regulate several genes involved in this complex process still poorly understood. Considering the diversity of viral strains circulating and the complexity of events involved in the neuroinvasiveness of RABV this project aims to study the gene expression pathway, innate and adaptative immune response and pathogenicity of different virus strain by means of experimental inoculation in mice, clinical evaluation and avaliating viral replication by DFA and qRT-PCR / FAPESP: 2012/00895-5
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Eficácia terapêutica de RNAs de interferência (siRNAS) e avaliação da resposta imune em camundongos infectados com vírus da raiva de origem de cão e de morcego

Appolinario Harary, Camila Michele [UNESP] 30 June 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-30Bitstream added on 2015-01-26T13:31:00Z : No. of bitstreams: 1 000793459_20150730.pdf: 67573 bytes, checksum: 8cd10155b604ea2ad8c1fb4a12985559 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:20:54Z: 000793459_20150730.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:16Z : No. of bitstreams: 1 000793459.pdf: 562560 bytes, checksum: 09173f21b75d508f46944df86d0d6039 (MD5) / A raiva é uma doença infecciosa letal que mata mais de 55 mil pessoas por ano em todo o mundo, embora a morte possa ser evitada se um tratamento pósexpositivo baseado no uso de vacina anti-rábica e imunoglobulinas for aplicado a tempo. Após o aparecimento dos sinais clínicos, não existe qualquer terapia eficaz disponível. As citocinas e quimiocinas são cruciais no desenvolvimento da resposta imune do hospedeiro. Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica de citocinas e quimiocinas relacionadas à resposta imune e também avaliar a eficácia da terapia com siRNAs em camundongos inoculados com virus de cão ou de morcego. Os resultados demonstraram que o perfil de expressão de citocinas e quimiocinas foi intrínseco `a variante viral e a produção precoce destas sugere ser mais importante do que seus níveis de expressão para a sobrevivência na raiva. Em relação à avaliação da terapia com siRNAs, embora nenhuma diferença tenha sido observada na taxa de letalidade entre os grupos tratados e não-tratados, a avaliação clínica de animais inoculados com a variante de cão mostrou menor severidade da doença clínica no grupo tratado quando comparado ao seu controle, associado a uma baixa expressão do gene N e de todos os marcadores imunológicos avaliados aos 5 dias. Os resultados deste estudo forneceram alguma evidência da eficácia da terapia com siRNA em infecções causadas pela variante de cão, a despeito da causada pela variante de morcego / Rabies is a lethal infectious disease that kills more than 55 thousand persons per year worldwide although death can be avoided if a post-exposure prophylaxis based in anti-rabies vaccine and immune globulins can be applied on time. After the onset of clinical signs, there is no effective therapy available. Cytokines and chemokines are crucial for host immune response development. This study had as purpose to evaluate the gene expression of cytokines and chemokynes related to the immune response and also to evaluate the efficacy of siRNAs therapy in mice inoculated with dog or bat virus. Results demonstrated that the gene expression profile was intrinsic to virus variant and the precocious production seemed to be more important than their expression levels for rabies survival. Therapy with siRNAs therapy showed no difference in the lethality rate between treated groups and controls but clinical evaluation of animals inoculated with dog variant showed less severity of clinical disease in the treated group compared with control, also associated with a low expression of N gene and of all immune markers evaluated at 5 days. Results provided some evidence of the efficacy of siRNAs therapy in infections due to dog variant but not due to bat variant in the present study
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Resposta imune inata em sistema nervoso central de camundongos experimentalmente infectados com amostras de vírus rábico isoladas de diferentes espécies /

Allendorf, Susan Dora. January 2014 (has links)
Orientador: Jane Megido / Banca: Hélio Langoni / Banca: Maria Luiza Carrieri / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Banca: Paulo Eduardo Brandão / Resumo: O controle da raiva é mundialmente reconhecido como um dos grandes desafios mundiais. As diferentes variantes virais isoladas das diversas espécies animais apresentam características imunogênicas distintas assim como na sequência de nucleotídeos, o que permite sua classificação em variantes e genótipos. Além disso, diferenças na patogenicidade também foram observadas através de inoculação experimental em camundongos e cultivo celular. Os mecanismos pelos quais o vírus rábico (RABV) infecta um indivíduo e se perpetua na natureza ainda não foram totalmente esclarecidos. Entretanto alguns fatores que levam ao sucesso da infecção já foram estabelecidos, entre os mais importantes podemos citar a capacidade de induzir a apoptose das células de defesa e preservar a integridade e funcionalidade dos neurônios. Estes eventos são mediados por citocinas que regulam diversos genes envolvidos nesse complexo processo ainda pouco compreendido. Considerando a diversidade de linhagens virais circulantes e a complexidade dos eventos envolvidos na neuroinvasão do RABV o presente projeto avaliou os genes mais importantes envolvidos na expressão gênica do processo de resposta immune inata e adaptativa após infecção e avaliou a patogenicidade de diferentes amostras virais através da inoculação experimental em camundongos SPF (Specific Pathogen Free) realizando a quantificação viral por qRT-PCR e imunofluorescência das amostras coletadas / Abstract: Rabies control is considered a worldwide challenge. Different virus strains (RABV) are isolated from different species, they have distinct immunogenic characteristics as well in their nucleotides sequence, allowing their classification into variants and genotypes. Furthermore, differences in pathogenicity have also been observed through experimental inoculation in mice and cell cultures. The mechanisms by which RABV infects an individual and perpetuated the infection in nature have not been fully clarified. However some factors that lead to successful infection are already established, among the most important we can mention the ability to induce apoptosis of T cells and maintain the integrity and functionality of neurons. These events are mediated by cytokines that regulate several genes involved in this complex process still poorly understood. Considering the diversity of viral strains circulating and the complexity of events involved in the neuroinvasiveness of RABV this project aims to study the gene expression pathway, innate and adaptative immune response and pathogenicity of different virus strain by means of experimental inoculation in mice, clinical evaluation and avaliating viral replication by DFA and qRT-PCR / Doutor
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Eficácia terapêutica de RNAs de interferência (siRNAS) e avaliação da resposta imune em camundongos infectados com vírus da raiva de origem de cão e de morcego /

Appolinario Harary, Camila Michele. January 2014 (has links)
Orientador: Jane megid / Banca: Hélio Langoni / Banca: Paulo Eduardo Brandão / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Resumo: A raiva é uma doença infecciosa letal que mata mais de 55 mil pessoas por ano em todo o mundo, embora a morte possa ser evitada se um tratamento pósexpositivo baseado no uso de vacina anti-rábica e imunoglobulinas for aplicado a tempo. Após o aparecimento dos sinais clínicos, não existe qualquer terapia eficaz disponível. As citocinas e quimiocinas são cruciais no desenvolvimento da resposta imune do hospedeiro. Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica de citocinas e quimiocinas relacionadas à resposta imune e também avaliar a eficácia da terapia com siRNAs em camundongos inoculados com virus de cão ou de morcego. Os resultados demonstraram que o perfil de expressão de citocinas e quimiocinas foi intrínseco 'a variante viral e a produção precoce destas sugere ser mais importante do que seus níveis de expressão para a sobrevivência na raiva. Em relação à avaliação da terapia com siRNAs, embora nenhuma diferença tenha sido observada na taxa de letalidade entre os grupos tratados e não-tratados, a avaliação clínica de animais inoculados com a variante de cão mostrou menor severidade da doença clínica no grupo tratado quando comparado ao seu controle, associado a uma baixa expressão do gene N e de todos os marcadores imunológicos avaliados aos 5 dias. Os resultados deste estudo forneceram alguma evidência da eficácia da terapia com siRNA em infecções causadas pela variante de cão, a despeito da causada pela variante de morcego / Abstract: Rabies is a lethal infectious disease that kills more than 55 thousand persons per year worldwide although death can be avoided if a post-exposure prophylaxis based in anti-rabies vaccine and immune globulins can be applied on time. After the onset of clinical signs, there is no effective therapy available. Cytokines and chemokines are crucial for host immune response development. This study had as purpose to evaluate the gene expression of cytokines and chemokynes related to the immune response and also to evaluate the efficacy of siRNAs therapy in mice inoculated with dog or bat virus. Results demonstrated that the gene expression profile was intrinsic to virus variant and the precocious production seemed to be more important than their expression levels for rabies survival. Therapy with siRNAs therapy showed no difference in the lethality rate between treated groups and controls but clinical evaluation of animals inoculated with dog variant showed less severity of clinical disease in the treated group compared with control, also associated with a low expression of N gene and of all immune markers evaluated at 5 days. Results provided some evidence of the efficacy of siRNAs therapy in infections due to dog variant but not due to bat variant in the present study / Mestre
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Neuropatologia experimental induzida pelos Rabdovírus Itacaiunas e Curionopolis: um estudo da resposta imune inata

BARRETO, Leilane de Holanda 14 April 2011 (has links)
Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-20T15:56:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5) / Rejected by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br), reason: Aguardar as orientações on 2017-10-10T16:50:18Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:01:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-23T16:49:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T16:49:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5) Previous issue date: 2011-04-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Muitos esforços têm sido dedicados para o entendimento da neuropatogênese das encefalites virais a partir de trabalhos experimentais. Porém, poucos estudos investigaram a neuropatologia experimental de rabdovírus amazônicos, como a induzida pelos vírus Itacaiunas e Curionopolis, recentemente agrupados em um novo gênero denominado Bracorhabdovirus, proposto para a família Rhabdoviridae. Esses vírus apresentam tropismo por neurônios do SNC de camundongos neonatos infectados experimentalmente, entretanto, pouco se conhece a respeito da resposta imune do SNC contra esses agentes. O presente trabalho analisou aspectos da resposta imune de células residentes do SNC de camundongos neonatos, após infecção experimental pelos vírus Itacaiunas e Curionopolis, in vivo e in vitro. Para alcançar esses objetivos, foram utilizadas técnicas histoquímica e imunohistoquímica para detecção de microglias ativadas e astrócitos, respectivamente, em secções de cérebros de camundongos infectados. A quantificação das células ativadas foi realizada em regiões do hipocampo, utilizando técnicas estereológicas. Além disso, foi investigada a expressão de citocinas pró e antiinflamatórias produzidas por células do SNC em cultivos primários infectados com os vírus Itacaiunas e Curionopolis por ensaios imunoenzimáticos (ELISA), a partir de sobrenadantes de co-culturas enriquecidas de microglias/neurônios e de astrócitos/neurônios. Foi também analisada a expressão de óxido nítrico por citoquímica utilizando o reagente DAF-FM diacetato (4-amino-5-methylamino-2,7′-difluorofluorescein diacetate). Os resultados mostraram que cérebros de camundongos infectados com os vírus Curionopolis 2d.p.i. e Itacaiunas 4 e 7d.p.i. apresentaram discreta ativação microglial, porém, em camundongos infectados com o vírus Curionopolis 5d.p.i houve intensa ativação. A imunohistoquímica revelou marcação de poucos astrócitos em animais infectados com os vírus Curionopolis 2d.p.i e Itacaiunas 4 e 7d.p.i. no hipocampo. Por outro lado, nos camundongos infectados com Curionopolis 5d.p.i., houve aumento de astrócitos, principalmente na região da fissura hipocampal. Os resultados obtidos a partir dos ensaios imunoenzimáticos mostraram que houve grande produção de IL-12p40 nas culturas de células do SNC infectadas com os vírus, 48 e 96h.p.i. Baixos níveis de TGF-β foram detectados após 48 horas de infecção com os vírus em estudo, no entanto, observou-se aumento da expressão dessa citocina após 96h.p.i. Também foi demonstrado, com 48 horas de infecção, baixos níveis da citocina IL-10, aumentando após 96 horas para ambos os vírus, principalmente nas co-culturas enriquecidas de microglias/neurônios infectados pelo vírus Itacaiunas. Culturas de células do SNC infectadas com os vírus Itacaiunas 48 e 96h.p.i. e Curionopolis 48h.p.i. mostraram discreta produção de óxido nítrico, porém houve aumento nessa produção em culturas infectadas com o vírus Curionopolis 96h.p.i. Esses resultados sugerem que há predominância de uma resposta pró-inflamatória nos tempos iniciais da infecção para ambos os vírus e uma tentativa de modulação dessa resposta com a produção de citocinas antiinflamatórias nos tempos tardios. / Experimental studies are making many efforts to understand the neuropathogenesis of viral encephalitis. However, a few is known about the Central Nervous System (CNS) response against amazonic rhabdovirus. The virus Itacaiunas e Curionopolis were classified preliminary as members of the Rhabdoviridae family. It was suggested for these virus to be included in a new genus, Bracorhabdovirus. They are neurotropic virus and little is known about the inflammatory response of the CNS against these virus. This study examined aspects of the immune response of newborn mice CNS resident cell after experimental infection by Itacaiunas and Curionopolis virus, in vivo and in vitro. To achieve these goals, histochemical and immunohistochemical techniques were used to detect activated microglia and astrocytes, respectively, in sections of the brains of infected mice. The quantification of these cells were performed in hippocampal regions using stereological techniques. Furthermore, was investigated the expression of proinflammatory and anti-inflammatory cytokines produced by CNS cells in primary cultures infected with virus Itacaiunas and Curionopolis by using enzyme immunoassay (ELISA) from supernatants co-cultures enriched of microglia/neurons and astrocytes/neurons. The expression of nitric oxide was also analyzed by using cytochemical reagent DAF-FM diacetate (4-amino-5-methylamine-2,7-difluorofluorescein-diacetate). As a result, age matched control animals of each group did not present activated microglia or astrocytosis, as well as, both Curionopolis and Itacaiunas infected subjects early after the inoculation (2d.a.i. and 4d.a.i respectively). However at 5th d.a.i., Curionopolis infections significant increase in the number of activated microglias and reactive astrocytes were detected whereas at the 7th d.a.i. after Itacaiunas infection only minimal activation of microglia and reactive astrocytosis was detected. The results from immunoassays showed great production of IL-12p40 in cultures of CNS cells infected with both virus, 48 and 96 hours after infection (h.a.i.). Low levels of TGF-β and IL-10 were detected after 48 hours of infection with both virus, however, was observed increased expression of this cytokines after 96 hours. CNS cell cultures infected with Curionopolis virus 48h.p.i. and Itacaiunas virus 48 and 96h.a.i. showed a slight production of nitric oxide, but it was increased in cultures infected with Curionopolis virus 96h.a.i. These results suggest that the proinflammatory response is dominant in both virus, however, it seems that the anti-inflammatory cytokines try to modulate the inflammatory response of the late days pos-inoculation.

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