Orientador: Ana Marisa Fusco de Almeida / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Maristela Pereira / Banca: Luis Octávio Regasini / Resumo: A criptococose é uma micose sistêmica e oportunista causada principalmente pelas leveduras Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. Entre as principais manifestações clínicas estão o desenvolvimento de meningite, encefalite, meningoencefalite e infecções pulmonares. Estima-se que mais de um milhão dos casos de criptococose ocorrem por ano em indivíduos HIV positivos, o que classifica esta doença como a terceira mais importante entre as infecções fúngicas sistêmicas. A ecologia deste gênero está diretamente relacionada ao meio ambiente, sendo a espécie C. neoformans, comumente encontrada em excretas secas de pombos (Columbia livia) e a espécie C. gattii é encontrada, principalmente, em plantas, como espécies de Eucalyptos. O tratamento da criptococose é realizado com os fármacos antifúngicos, anfotericina B e fluconazol, sendo este último de ação fungistática utilizado para tratamento de longo prazo, que apesar de eficiente, pode causar uma série de reações adversas e ainda desenvolvimento de resistência. Tendo em vista o difícil controle da levedura e o tratamento, este trabalho tem como objetivo principal, a pesquisa de substâncias naturais com alto potencial antifúngico com finalidade saneante e medicamentosa, combatendo a levedura em seu nicho ecológico natural e também atuando no combate à infecção no hospedeiro. Uma forma de diminuir os casos desta infecção é através do processo de desinfecção ambiental com produtos saneantes, os quais apresentam capacidade fungicida. Por meio do projeto Biota/FAPESP, foram selecionados dois triterpenóides quinonamétideos extraídos de Maytenus ilicifolia, a maitenina e a pristimerina, as quais apresentaram potentes CIMs anti-Cryptococcus, mais de 90 % de eficiência na desinfecção e baixa toxicidade, o que revela que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryptococcosis is a systemic mycosis caused mainly by opportunistic yeast Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. Among the main clinical manifestations are the development of encephalitis, meningoencephalitis and pulmonar infections. It is estimated that more than one million cases of cryptococcosis occur per year in HIV positive individuals, which classifies the disease as the third among the most importante systemic fungal infections. The ecology of this genus is directly related to the environment. Specie C. neoformans is commonly found in dried excremento of pigeons (Columbia livia) and the species C. gattii is found primarily in plants such as Eucalyptus species. Cryptococcosis treatment is performed with the antifungal drugs amphotericin B and fluoconazole, the later being of a fungistatic used to treat long-term, while effective, may cause a number of adverse reactions and also the development of resistence. Given the difficult control of the yeast and treatment, this work has as main objective, the research of natural substances with high potential antifungal drug with purpose and saneante, fighting yeast in their natural ecological niche and also acting in fighting infection in the host. One way to reduce the cases of infection is through the capacity fungicide. Through the Project BIOTA / FAPESP, we selected two quinonametides triterpenids extracted from Maytenus ilicifolia, the maitenin and pristimerin, which showed potente anti-Cryptococcus MICs, more than 90 % of the disinfection efficiency and low toxicity... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Cezinande de Meira / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: A contaminação bacteriana do útero após o parto é um evento quase unânime em vacas, em que a Escherichia coli (E. coli) é o principal micro-organismo encontrado. Apesar disto, a ativação de mecanismos de defesa local e sistêmica eliminam gradualmente os contaminantes ao longo do puerpério fisiológico. Porém, algumas bactérias possuem fatores de virulência, que facilitam sua instalação e permanência no tecido hospedeiro, propiciando o desenvolvimento de infecções uterinas. Embora o mecanismo não esteja completamente elucidado, certifica-se que a presença de E. coli nos primeiros dias pós-parto favorece o crescimento de Trueperella pyogenes num período mais tardio, bactéria frequentemente associada à infecção uterina. Com isto, objetivou-se estabelecer a dinâmica e perfil da microbiota uterina relacionando os fatores de virulência das E. coli isoladas do útero das vacas, 24 horas após a parição, com a presença bacteriana no ambiente uterino na segunda semana pós-parto. O estudo foi conduzido em 75 vacas holandesas preto e branca (HPB) com parto e puerpério isento de complicações. Decorridas 24 horas do parto (Momento 1) foi realizada avaliação ginecológica através da palpação retal, observada a coloração da mucosa vaginal e aferição da temperatura retal. Destes animais foram coletadas, em condições de assepsia, amostras da secreção loquial visando-se o cultivo microbiológico, antibiograma e a citologia uterina. O período pós-parto foi monitorado quanto às intercorrências e alterações da esfera reprodutiva e produtiva. No 14º dia pósparto (Momento 2), foram realizados os mesmos procedimentos, além da ultrassonografia transretal. Amostras de sangue foram coletadas, em ambos os momentos, para a caracterização da capacidade fagocítica dos neutrófilos pelo teste do nitroblue tetrazolium (NBT) estimulado (ES) e não estimulado (NE) e realização de hemograma. Nas E. coli isoladas foram ... / Abstract: Bacterial contamination of the uterus after delivery is almost an unanimous event in cows, in which the Escherichia coli (E. coli) is the main micro-organism found. Despite this, the activation of local and systemic defense mechanisms gradually eliminate contaminants throughout the physiological puerperium. However, some bacterias possess virulence factors that facilitate its installation and remain in the host tissue, leading to the development of uterine infections. Although the mechanism is not fully elucidated, it is certified that, the presence of E. coli in the first days postpartum favors the growth of Trueperella pyogenes in a later period, bacteria often associated with uterine infection. Thus, aimed to establish the dynamics and profile of uterine microbiota relating the virulence factors of E. coli isolated from the uterus of cows 24 hours after calving, with the bacterial presence in the uterine environment in the second postnatal week. The study was conducted on 75 Holstein cows with normal delivery and postpartum without complications. After 24 hours of parturition (Moment 1), gynecological evaluation was performed by rectal palpation, observed staining of the vaginal mucosa and measurement of rectal temperature. Samples of secretion loquial were collected aseptically of these animals, aiming the microbiological culture, antibiogram and uterine cytology. The postpartum period was uneventful and monitored for changes in the reproductive and productive sphere. On the 14th day postpartum (Time 2), the same procedures were were performed, apart from transrectal ultrasonography. Blood samples were collected at both moments, to characterize the phagocytic ability of neutrophils by the nitroblue tetrazolium test (NBT) stimulated (S) and unstimulated (US) and hemogram. In E. coli isolates were investigated different genes associated with virulence factors (VF) by PCR. Rapid uterine involution, characterized by diameter of the ... / Mestre

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Telma Blanca Lombardi Bedran / Banca: Alessandra Nara de Souza Rastelli / Resumo: A utilização de óleos essenciais tem sido amplamente difundida no tratamento de doenças infecciosas que acometem a cavidade oral por serem eficazes contra patógenos presentes em biofilme. Dentre estes produtos de origem natural, destaca-se o Terpinen-4-ol um biocida membrana-ativo, com amplo espectro de ação contra bactérias gram-positivas, gram-negativas e bactérias multi-resistentes. Neste estudo, investigou-se o efeito antimicrobiano do Terpinen-4-ol sobre culturas planctônicas e biofilmes de Streptococcus mutans (S. mutans) e a expressão gênica de glucano de ligação de proteína A (gbpA) envolvido na adesão em biofilme. A atividade antimicrobiana do Terpinen-4-ol (0.059 % a 0.95 %) foi avaliada pelo teste de microdiluição em caldo com a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) para o microrganismo na forma planctônica. O biofilme formado em placa de cultura celular foi tratado com diferentes concentrações de Terpinen-4-ol e o metabolismo celular do biofilme resultante foi avaliado por meio de ensaio de hidróxido de 2,3-bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfo-fenil) -2H-tetrazólio-5-caboxanilide (XTT). A análise do biofilme formado sobre blocos de esmalte e dentina tratados com Terpinen-4-ol (0.24 % e 0.95 %) e Clorexidina (CHX 0.12 %) durante 60 segundos foi realizada por meio de ensaio de XTT e razão espectral (verde/vermelho) das imagens obtidas por Microscopia Confocal de Varredura a Laser (MCVL). A expressão gênica de gbpA foi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of essential oils has been widespread in the treatment of infectious diseases that affect the oral cavity to be effective against pathogens in biofilms. Among these natural products, there is the Terpinen-4-ol a biocide membrane-active, with broad spectrum of action against gram-positive bacteria, gram-negative and multi-resistant bacteria. In this study, we investigated the antimicrobial effect of Terpinen-4-ol on planktonic and biofilm cultures of Streptococcus mutans (S. mutans) and gene expression gbpA (glucan binding protein A) involved in the adhesion of biofilm. The antimicrobial activity of Terpinen-4-ol (0.059 % to 0.95 %) was assessed by the broth microdilution test for the determination of MIC and MBC for the microorganism in planktonic form. The biofilm formed in cell culture plate were treated with different concentrations of Terpinen-4-ol and cell metabolism resulting plaque was assessed using the hidróxido de 2,3-bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfo-fenil) -2H-tetrazólio-5-caboxanilide (XTT). The analysis of the biofilm formed on enamel blocks and dentin treated with Terpinen-4-ol (0.24 % and 0.95 %) and chlorhexidine (CHX 0.12 %) for 60 seconds was performed by XTT assay and spectral Ratio (Green/Red) of images obtained by microscopy Laser Scanning Confocal (CLSM). The gbpA gene expression was investigated by quantitative RT-PCR after S. mutans have been exposed to Terpinen-4-ol and CHX for 15 and 30 minutes. The data were normally distributed and therefore p... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Fernando Antônio de Ávila / Banca: Hélio José Montassier / Banca: José Moacir Marin / Banca: Ariel Eurides Stella / Banca: Oliveiro Caetano de Freitas Neto / Resumo: Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é uma categoria de E. coli de interesse em saúde pública, pois é responsável por causar diarréia, principalmente em crianças de países em desenvolvimento. Um total de 68 estirpes EPEC isoladas de humanos e animais (búfalos, ovinos e suínos) foram analisadas para marcadores de virulência e submetidos à sorotipagem, subtipagem do gene eae e similaridade clonal por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Os resultados da PCR demonstraram que seis isolados de humanos possuíam o gene bfp (EPEC típica), enquanto que 62 estirpes possuíam apenas o gene eae (EPEC atípica). Essas estirpes de EPEC pertenciam a 39 sorotipos (O: H) incluindo sorotipos clássicos de EPEC que estão relacionados a doenças em humanos, como O26:H11, O128:H2 e outros sorotipos relacionados a pessoas com diarreia, como O8:H16 e O76:H7. Seis tipos de intimina foram detectados entre as 68 estirpes de EPEC. São elas a 1, 2, 1, , e . A análise do PFGE, após a digestão Xbal, foi realizada nas 68 estirpes de EPEC. Os isolados se mostraram heterogêneos no PFGE e apresentaram 55 perfis diferentes. Quanto a filogenia, a maioria das estirpes de EPEC foram classificadas dentro do grupo B1. Além disso, algumas estirpes foram classificadas no grupo D, que são constituídos por estirpes de E. coli que podem causar infecções extra-intestinais. A presença de tipos de EPEC potencialmente patogênicas para humanos e EPEC isoladas de animais com características genéticas e fenotípicas em comum indica que a transmissão de agentes zoonoticos pode ocorrer. Portanto, o papel destes animais como reservatórios de EPEC deve ser considerado nas investigações de surtos de diarreia / Abstract: Escherichia coli (EPEC) is a category of E. coli in interest in public health, as it is responsible for causing diarrhea, especially in children in developing countries. A total of 68 strains of EPEC isolated from humans and animals (buffalo, sheep and pigs) were analyzed for virulence markers, serotyping, subtyping of the eae gene and similarity clonal by electrophoresis in pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The PCR results showed that six human isolates had the bfp gene (typical EPEC), and 62 strains only had the eae gene (atypical EPEC). These strains belonged to 39 EPEC O: H serotypes including classical EPEC that are related to diseases in humans, such as O26: H11, O128: H2 and other serotypes that were related to people with diarrhea, as O8: H16 and O76:H7. Six types of intimin were detected among the 68 strains of EPEC, and 1, 2, 1, , and . The PFGE analysis, after XbaI digestion was performed on 68 strains of EPEC. The isolates were shown in heterogeneous PFGE and had 55 different profiles. Regarding the Phylogeny most strains of EPEC were classified into the group B1. Furthermore, some strains have been classified in group D, which consist of the E. coli strains that cause extra-intestinal infections. The presence of potentially pathogenic for humans types of EPEC and EPEC strains isolated from animals that may indicate disease transmission between animals and humans can occur and have an impact on public health. Furthermore, the role of these animals as EPEC carriers should be considered in outbreak investigations diarrhea. Keywords: EPEC, virulence genes, PFGE, zoonosis / Doutor

Orientador: Maria José Soares mendes Giannini / Coorientador: Ana Marisa Fusco-Almeida / Coorientador: Oscar Zaragoza / Banca: Marcia de Souza Carvalho Melhem / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Maristela Pereira / Banca: Christiane Pienna Soares / Resumo: A incidência de infecções fúngicas oportunistas tem aumentado nas últimas décadas devido à crescente proporção de pacientes imunocomprometidos em nossa sociedade. Candida krusei é descrita como um dos agentes de infecções fúngicas em pacientes susceptíveis. Embora sua prevalência seja baixa entre as infecções fúngicas (2-7%), a resistência intrínseca ao fluconazol torna esta levedura importante no contexto relacionado à epidemiologia e na procura de novas alternativas terapêuticas. Modelos de organismos não mamíferos são alternativas viáveis para estudar a virulência de fungos e eficácia de drogas. Neste trabalho utilizou-se Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans como modelos para estudar a virulência e avaliar a eficácia antifúngica de anfotericina B e fluconazol durante a infecção por C. krusei, bem como cultura de macrófagos e testes de agrotransformação. No modelo de G. mellonella foi realizada a caracterização completa da interação de C. krusei por meio da determinação do índice de fagocitose, quantificação da densidade hemocitária, melanização, estudos de filamentação, carga fúngica e histopatologia. Além disso, foi realizado estudo de eficácia antifúngica entre G. mellonella e C. elegans mostrando resultados compatíveis entre os dois modelos. Além disso, utilizou-se cultura de macrófagos RAW 267.7 para verificar o efeito das duas drogas sobre a fagocitose e produção de citocinas quando as células foram infectadas com C. krusei. Não houve alterações quanto à fagocitose nesse modelo, entretanto a produção de TNF-α mostrou-se excessivamente aumentada com o tratamento com anfotericina sugerindo que além do efeito direto da droga existem também mecanismos de imunomodulação envolvidos nessa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The incidence of opportunistic fungal infections has increased in the last decades due to the increasing proportion of immunocompromised patients. Candida krusei is described as one of the agents of fungal infections in susceptible patients. Although its prevalence is low among fungal infections (2-7%), the intrinsic resistance to fluconazole makes this yeast important in this context related to epidemiology and new therapies. Models of non-mammalian are viable alternatives to study virulence of fungi and drug efficacy. In this work we used Galleria mellonella and Caenorhabditis elegans as models for studying virulence and evaluate the efficacy of antifungal agent's amphotericin B, fluconazole and caspofungin during infection by C. krusei, and C. albicans, as well as, macrophages and agrotransformation studies. The model of G. mellonella was done full characterization of the interaction with C. krusei by determining the phagocytosis index, measuring the density haemocytic, melanization, filamentation studies, fungal burden and histopathology. In addition, we conducted a study of antifungal efficacy between G. mellonella and C. elegans showing compatible results between the two models. Furthermore, we used macrophage culture RAW 267.7 to determine the effect of drugs amphotericin B and fluconazole on phagocytosis and production of cytokines when the cells were infected with C. krusei and C. albicans. There was no change on the phagocytosis in this model, however, the production of TNF-α was shown to be excessively increased with treatment with amphotericin suggesting that in addition to the direct effect of the drug, immunomodulation mechanisms are also involved in this response. The construction of transformants... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Moisés João Zotti / Resumo: Plutella xylostella (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Plutellidae), a traça-das-crucíferas, é um dos principais insetos-praga de crucíferas (Brassicaceae) no Brasil e em todo o mundo. Embora possa ser controlada tanto com inseticidas sintéticos como biológicos, populações de P. xylostella podem ser selecionadas rapidamente para a resistência a vários inseticidas químicos ou biológicos. Além disso, diferentes populações de P. xylostella podem surgir devido ao isolamento geográfico, resultando em isolamento reprodutivo e em populações fisiologicamente distintas, com diferentes sensibilidades a várias táticas de controle. Tal variação requer sistemas de gestão adaptados às populações em particular. Os bioinseticidas mais comuns utilizados para controlar P. xylostella baseiam-se na bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis (Bacillaceae) (Bt). Apesar de muitos estudos focarem a ação do Bt em diversas pragas agrícolas, como P. xylostella, por exemplo, muitas dúvidas ainda persistem particularmente quanto aos seus efeitos subletais, mecanismo de ação e toxicidade das proteínas Bt. Assim, o objetivo desta pesquisa foi analisar a virulência e os efeitos subletais de proteínas Cry, bem como investigar fatores que afetam a suscetibilidade de insetos ao Bt (níveis de proteína, bactérias do intestino médio e mutações no gene ABCC2) em cinco populações brasileiras e uma da Inglaterra de P. xylostella. Foram realizados bioensaios de suscetibilidade com 5 populações brasileiras (PC, PA, Px, SBT e Bt) e uma da Inglaterra (UK) de P.xylostella e as proteínas Cry1Ac, Cry2Aa e Cry1IE de B. thuringiensis, estimando-se a virulência e avaliando os efeitos subletais das toxinas. Como as toxinas Cry2Aa e Cry1IE não causaram mortalidade nas lagartas de todas as populações, os testes foram realizados apenas com Cry1AC. Também foram conduzidos experimentos enzimáticos e ... / Abstract: Plutella xylostella (Linnaeus , 1758) (Lepidoptera: Plutellidae), diamonback moth, is a major insect pest of crucifers (Brassicaceae) in Brazil and worldwide. Although it can be controlled with synthetic insecticides such as biological products, populations of P. xylostella can be quickly selected for resistance to several chemical or biological insecticides. In addition, different populations of P. xylostella may arise due to geographic isolation, resulting in reproductive isolation and physiologically distinct populations with different sensitivities to various control tactics. This variation requires management systems tailored to particular populations. The most common insecticides used to control P. xylostella based on entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis (Bacillaceae) (Bt). Although many studies focus on the action way of Bt to several agricultural pests such as P. xylostella, for example, many doubts still persist particularly regarding their sublethal effects, mechanism of action and toxicity of Bt proteins. The objective of this research was to analyze the virulence and sublethal effects of Cry proteins, as well investigate factors affecting the susceptibility of Diamondback to Bt (protein level, the midgut bacteria and mutations in the ABCC2 gene) in five Brazilian populations and one population from England. Susceptibility bioassays with 5 Brazilian populations (PC, PA, PX, SBT and Bt) and one from England (UK) of P. xylostella and Cry1Ac, Cry2Aa, and Cry1IE Bt toxins were performed by estimating its virulence and sublethal effects. How Cry2Aa Cry1IE toxins did not cause larvae mortality for all populations, tests were performed just with Cry1Ac. Enzymatic and molecular experiments with the larvae guts were also performed to investigate the factors that affecting the susceptibility of insects to toxins produced by Bt. In those bioassays were analyzed total protein, the ... / Mestre

Orientador: Lívia Nordi Dovigo / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Banca: Clovis Wesley Oliveira de Souza / Resumo: Este estudo teve por finalidade: I. estabelecer um protocolo reprodutível utilizando a metodologia dos halos de precipitação em meio Ágar para avaliação da produção de fosfolipase e proteinase pela espécie Candida albicans (C. albicans); II. analisar a expressão dos fatores de virulência de Ca após inativação fotodinâmica (IF) mediada pela curcumina (CUR). No primeiro estudo utilizou-se 30 isolados clínicos e uma cepa de referência de C. albicans para obtenção de suspensões celulares (108ufc/mL) que foram plaqueadas nos meios específicos. Três variáveis independentes (nº de replicatas, cor de fundo e instrumento de leitura) originaram oito protocolos de leitura. A reprodutibilidade intra e interexaminadores da medida de produção de enzima (Pz) foi avaliada por meio do Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI). A enzima proteinase apresentou dois protocolos com ―Boa‖ reprodutibilidade intraexaminador (CCI ≥ 0,71) para todos os examinadores e o protocolo que utilizou leituras em triplicata sobre as fotografias contra luz natural atribuiu maior reprodutibilidade interexaminador para os valores de Pz-proteinase. Três protocolos com ‗Boa' concordância intraexaminador de Pz-fosfolipase foram selecionados para a análise interexaminador. Tanto as leituras em paquímetro como as realizadas em computador, em triplicata, mostraram reprodutibilidade ‗Muito Boa'. No estudo II, a concentração de CUR a 0,1µM foi utilizada associada a iluminação LED para promover dose subletal de IF. O grupo tratamento (C+L+) teve suas células fotossensibilizadas com CUR e iluminadas. O grupo controle positivo consistiu de amostras que receberam apenas CUR (C+L-), e o controle negativo não recebeu nem CUR nem luz (C-L-). A capacidade de adesão foi avaliada por meio das unidades formadoras de colônias (ufc/mL) e do método XTT. A formação de biofilme foi analisada ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to: I. to establish a reproducible protocol using the agar-Based methodology to evaluate the production of the phospholipase and proteinase by the species Candida albicans (C. albicans); II. to analyze the expression of virulence factors after photodynamic inactivation (PDI) mediated by curcumin (CUR). In the first study 30 clinical isolates and a reference strain of the C. albicans were used to obtain cell suspensions (108CFU/mL) that were plated in specific media. Three independent variables (number of replicates, background color and reading instrument) originated eight reading protocols. The intra- and inter-examiner reproducibilityof the enzyme production measure (Pz) was assessed using the intraclass correlation coefficient (ICC). The enzyme proteinase presented two protocols with "good" intra-rater reproducibility (ICC≥0.71) and the readings in triplicate against natural light showed the highest inter-examiner reproducibility for Pz-proteinase values. Three protocols with 'Good' intra-rater agreement for Pz-phospholipase were selected for interexaminer analysis. Caliper and computer readings, performed in triplicate, showed 'Very Good' reproducibility. In Study II, CUR at 0,1μM was used with LED light to promote sublethal dose of the PDI. The treatment group (C+L+) had its cells photosensitized with CUR and illuminated. The control group consisted of the samples that received only CUR (C+L-), and another which received neither CUR or light (C-L-). The adhesion ability was evaluated by means of CFU/mL and the XTT method. Biofilm formation was analyzed by means of CFU/mL, XTT and Crystal Violet (CV). The ability to secrete degradative enzymes was evaluated by the agarbased method and a colorimetric method. The results CFU/mL, XTT, CV were evaluated using a one-way multivariate analysis of the variance (MANOVA) and when statistically significant effects were detected, One... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Márcia Garcia Ribeiro / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Resumo: A diarreia é causa comum de morbimortalidade em potros neonatos. Os principais agentes causais de origem bacteriana na enterite em potros são: Salmonella spp., Escherichia coli, Clostridium difficile, Clostridium perfringens e Rhodococcus equi. Foram colhidas 80 amostras de fezes de potros com diarreia e 26 sem diarreia, perfazendo 106 animais com idade até três meses de idade, de diferentes raças, provenientes de propriedades do interior do estado de São Paulo. Foi investigado fatores de virulência de Escherichia coli, caracterização dos sorotipos de Salmonella spp., detecção de toxinas de Clostridium difficille e Clostridium perfringens, e perfil de sensibilidade microbiana das linhagens de E. coli e Salmonella spp. Foram isoladas 64 (60,3%) estirpes de Escherichia coli, o gene fimH em 34 (53,9%) linhagens, o gene ag43 em 33 (52,3%) estirpes e o gene papC em seis (9,5%) isolados. Foram isoladas 17 (16,0%) linhagens do gênero Salmonella. Foram identificadas 20 linhagens de Clostridium perfringens,17 positivos para toxina A e três a toxina A beta 2. Duas amostras de fezes foi isolado Clostridium difficile, produtores das toxinas A/B. Infere-se no presente estudo a complexidade etiológica na enterite de potros até três meses de idade, a baixa relação dos fatores de virulência de E. coli pesquisados com linhagens isoladas de animais com diarreia, a relevância em saúde pública dos sorotipos de Salmonella spp. identificados nos potros, o predomínio da toxina A nos isolados de C. perfringens e C. difficile, e a necessidade da adoção de tratamento das enterites com respaldo dos testes de sensibilidade microbiana / Abstract: Diarrhea is a common cause of morbidity and mortality in neonatal foals. The main causative agents of bacterial of enteritis in foals are: Salmonella spp., Escherichia coli, Clostridium difficile, Clostridium perfringens and Rhodococcus equi. Were collected 80 stool samples from foals with diarrhea and 26 without diarrhea, totaling 106 animals, aged three months old, different races and from properties in the state of São Paulo. Were investigated virulence factors from E. coli, characterization of the serotypes of Salmonella spp., detection of toxins of Clostridium perfringens and Clostridium difficille, and antimicrobial susceptibility to E. coli and Salmonella spp. strains. Were isolated 64 (60.3%) E. coli strains, the detection of the fimH gene in 34 (53.9%) strains, the gene ag43 in 33 (52.3%) strains and gene papC in six (9 , 5%) isolated. We isolated 17 (16.0%) strains of Salmonella. Were identified 20 strains of Clostridium perfringens, 17 detected the toxin A and three the toxin A beta 2. Two stool specimens was isolated Clostridium difficile toxin producer A / B. It is inferred in the present study the complexity enteritis in foals up to three months, the low ratio of virulence factors of E. coli strains isolated from animals with diarrhea, the public health relevance of the serotypes of Salmonella spp. identified in foals, the prevalence of toxin A in isolates of C. perfringens and C. difficile, and the need to adopt the treatment of bacterial enteritis in foals with the backing of microbial sensitivity tests / Mestre

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Coorientador: Sérgio Antônio De Bortoli / Banca: Antônio Carlos Busoli / Banca: Luís Garrigós Leite / Resumo: O isolamento geográfico de populações de uma mesma espécie de inseto pode resultar em alterações fisiológicas, originando populações com suscetibilidade diferente às diversas táticas de controle. Plutella xylostella, a traça-das-crucíferas é uma praga cosmopolita específica das Brassicaceaes, apresentando problemas de resistência à inseticidas químicos e biológicos. O objetivo deste trabalho foi determinar a influência da variabilidade populacional da traça-das-crucíferas na eficiência das táticas de controle com micro-organismos entomopatogênicos. Foram utilizados os métodos de sequenciamento do gene COI e ISSR-PCR para aferir a variabilidade populacional entre quatro populações da praga, e estudou-se a suscetibilidade delas às táticas de controle com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (20 isolados), nematoides entomopatogênicos (quatro espécies) e bactérias simbiontes de nematoides entomopatogênicos (dez isolados), avaliando-se o consumo foliar, a multiplicação do entomopatógeno no hospedeiro e estudando os aspectos biológicos em busca de efeitos subletais. . Foram selecionados seis isolados de B. bassiana e as quatro espécies de nematoides, pois foram as mais virulentas à praga. As populações são distintas devido sua variabilidade e isso resulta em diferenças no desenvolvimento de insetos que sobrevivem a aplicação dos entomopatógenos, inclusive na virulência de Steinernema brazilense sobre a população de Jaboticabal. Foi constatada também a redução de consumo foliar nos tratamentos com os entomopatógenos / Abstract: The geographical isolation of same species populations can result in physiological changes, resulting in populations with different susceptibility to various control tactics. Plutella xylostella, is a specific pest of Brassicaceaes widely spread around the globe, presenting problems with chemical and biological insecticides resistance. The aim of this study was to determine the influence of Diamondback moth populational variability in the efficiency of control tactics with entomopathogenic microorganisms. The methods used were sequencing of the COI gene and ISSR-PCR to measure the population variability among four populations of the pest, and the study of their susceptibility to tactics control with the entomopathogenic fungus B. bassiana (twenty strains), entomopathogenic nematodes (four species) and symbiotic bacteria of entomopathogenic nematodes (ten strains), evaluating leaf consumption, the multiplication of the pathogen in the host and studying the biological aspects in search of sub lethal effects. Six isolates of B. bassiana and four species of nematodes were selected, as were the more virulent to the pest. The populations are distinct because due the genetic, variability and and that results in differences in the development of insects that survive the entomopathogens application, including the virulence of Steinernema brazilense on the population of Jaboticabal. It was also found to reduce leaf consumption in the emtomopathogens treatments / Mestre

Orientador: Joaquim Gonçalves Machado Neto / Banca: José Bento Pereira Lima / Banca: Júlio César Galli / Resumo: O temefós é o larvicida mais utilizado no país, mas tem-se constatado populações resistentes a este inseticida em diversos locais, e a necessidade de substituição por outro larvicida com mecanismo de ação tóxica diferente ao temefós. O diflubenzuron (DFB), inibidor de síntese de quitina, destaca-se com grande potencial para substituir o temefós. Objetivou-se determinar a razão de resistência (RR95) de larvas de duas populações de campo (Pop. A e Pop. B) ao temefós; avaliar a eficácia do DFB para as duas populações, em condições laboratoriais; e avaliar a eficácia do DFB para as duas populações, em condições de campo, em recipientes de plástico, vidro e borracha, com a concentração de 0,25 mg/L. Em condições de laboratório, os ensaios foram realizados em sala climatizada com 26 ± 2ºC, para avaliar a razão de resistência das populações de campo ao temefós, por meio de ensaios concentração-resposta, e para avaliar a eficácia do DFB. Em condições de campo, os testes foram realizados à sombra, em abrigo coberto, com médias de tempfoitura de 22,4°C e umidade relativa do ar de 61%, para a avaliação da eficácia do DFB às três populações de larvas, em recipientes de plástico, vidro e borracha. A população suscetível Rockefeller foi utilizada como padrão de referência em todos os testes. O período de cotrole do DFB foi determinado com o tempo em que o DFB causou mortalidade de larva ≥ 80%. A RR95 é de 7,5 para da Pop. A e de 3,9 para a Pop. B. Nos ensaios de laboratório, o DFB causou inibição total da emergência de adultos viáveis das Pop. A e B a partir da concentração 2,0 μg/L. Nos testes de campo, o DFB é eficaz no controle da cepa suscetível por quatro semanas nos recipientes de plástico e borracha, e por três semanas em vidro. Para a Pop. A... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The temephos is the most widely used larvicide in the country, but it has been found resistant populations this insecticide in sevfoil places, and the need for replacement by another larvicide with different mechanism of toxic action to temephos. The diflubenzuron (DFB), chitin synthesis inhibitor, stands out with great potential to replace temephos. The aim were to determine the resistance reason (RR95) of larvae of two field populations (Pop A and Pop B) to temephos; to evaluate the efficacy of the DFB for both populations, under laboratory conditions; and to evaluate the effectiveness of the DFB for both populations, in the field conditions, in plastic, glass and rubber test vessels, with a concentration of 0.25 mg/L. Under laboratory conditions, bioassays were performed in controlled room with tempfoiture 26 ± 2°C, to evaluate the resistance reason of field populations to temephos, by concentração-response tests, and to evaluate the effectiveness of the DFB. In field conditions, tests were carried out in the shade, under cover, with avfoige tempfoitures of 22.4°C and relative humidity of 61%, to evaluate the effectiveness of the DFB to three populations of larvae in plastic, glass and rubber test vessels. The susceptible population Rockefeller was used as a reference standard in all tests. The residual period of the DFB was determined over time that DFB caused larval mortality ≥ 80%. The RR95 is 7.5 to Pop A and 3.9 to Pop B. In laboratory bioassays, the DFB caused complete inhibition emergence of viable adult of Pop A and B at the concentration 2.0 μg/L. In field tests, the DFB is effective in controlling the susceptible strain for four weeks in plastic and rubber test vessels, and for three weeks in glass test vessel. To Pop A, the DFB is effective for five weeks in all test vessels, and to Pop B, for three weeks in glass and plastic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre