Cryptococcus neoformans e C. gattii são as principais espécies do gênero que causam infecção no homem, C. albidus e C. laurentii são espécies menos envolvidas. O presente trabalho teve por objetivos avaliar a patogenicidade in vivo, os fatores e os genes relacionados à virulência, e verificar o perfil de suscetibilidade ao fluconazol de 10 isolados ambientais de cada uma das espécies: C. neoformans, C. albidus e C. laurentii, antes e após a inoculação em camundongos BALB/c imunocompetentes; pesquisar os sorotipos, mating types e realizar a tipagem molecular. Proteinase, fosfolipase, urease, produção de melanina e crescimento à 37ºC foram pesquisados utilizando metodologias clássicas, e a pesquisa dos genes e determinação dos sorotipos e mating types foram feitas por PCR. A tipagem molecular foi realizada por PCR-fingerprinting, com os iniciadores (GACA)4 e M13. A determinação da CIM do fluconazol foi realizada pelo método da microdiluição em caldo. Todos os isolados de C. neoformans foram sorotipos A e MAT-alfa. A inoculação em animais mostrou que 9 isolados de C. neoformans mataram 100% deles em até 33 dias, e 1 levou os animais à morte num período entre 40 e 82 dias; 9 isolados foram recuperados dos pulmões e cérebro dos animais em 7 e 14 dias, e um deles levou todos os animais à morte em 12 dias, sendo possível recuperá-lo somente no 7º dia. Os animais inoculados com C. albidus e C. laurentii permaneceram vivos até negativação das culturas dos órgãos avaliados. C. albidus foi isolado principalmente do fígado e dos pulmões até 10 dias após a inoculação, C. laurentii dos pulmões e do cérebro até 120 dias. Todos os isolados das 3 espécies produziram cápsula antes e após a inoculação. Todos C. neoformans, 6 C. albidus e 6 C. laurentii cresceram à 37ºC antes e depois da inoculação. Melanina foi produzida por todos os isolados de C. neoformans e nenhum C. albidus nas duas ocasiões; e por 6 e 9 isolados de C. laurentii, antes e depois da inoculação, respectivamente. Seis isolados de C. neoformans e 1 de C. laurentii produziram proteinase nas duas ocasiões. Sete isolados de C. albidus produziram proteinase antes e todos depois da inoculação. Fosfolipase foi produzida por todos C. neoformans e C. albidus, e por 6 C. laurentii nas duas ocasiões. A avaliação da atividade da urease realizada em meio líquido foi positiva em 24 a 48 horas pelos isolados de C. neoformans e C. laurentii, e em 24 a 96 horas por C. albidus. A CIM de fluconazol variou de 2 a 8 ug/mL para C. neoformans, de 8 a >= 64 ug/mL para C. albidus, e de 1 a 64 ug/mL para C. laurentii, nas duas ocasiões. Todos os isolados de C. neoformans apresentaram os genes lacase (Lac1), fosfolipase (PLB1), proteinase (cnap1), calcineurina (CNA1), urease (URE1), e ERG11, com os oligonucleotídeos utilizados. A PCR com ERG11 mostrou uma banda no gel de agarose para todos C. albidus, porém nenhum dos outros genes pesquisados foram amplificados em C. albidus e C. laurentii. A tipagem molecular por PCR-fingerprinting dos isolados de C. neoformans revelou 2 tipos moleculares: VNI (7 isolados) e VNII (3 isolados). A maioria dos isolados de C. albidus apresentou homogeneidade nos padrões de bandas gerados, e C. laurentii foi a espécie que demonstrou maior diversidade genética por esta metodologia. Concluímos que a passagem dos isolados pelos animais não alterou os fenótipos estudados e nenhuma alteração foi detectada pela análise molecular. No entanto, verificamos a grande heterogeneidade molecular dos isolados de C. laurentii estudados. / Species of Cryptococcus neoformans and C. gattii are the main ones in the genus causing infection in man while C. albidus and C. laurentii are less involved. This study evaluated the in vivo pathogenicity, factors and genes related to virulence and the susceptibility to fluconazole before and after inoculation in immunocompetent BALB/c mice of ten environmental isolates of C. neoformans, C. albidus and C. laurentii. Serotypes, mating types and molecular typing were also determined to complete the evaluation. Enzymes like proteinases, phospholipase, urease, production of melanin and growth at 37oC were investigated by classical methods, but gene characterization and determination of serotypes and mating types were investigated by PCR. Molecular typing was done by PCR-fingerprinting with primers (GACA)4 and M13. The microdilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of flucozanole. All C. neoformans isolates were serotype A and MAT-alfa and 9 of them when inoculated in animals killed 100% in up to 33 days. One isolate inoculated killed the animals in 40 to 82 days. Nine isolates were recovered from the animal lungs and brain in 7 and 14 days and the one which killed all animals in 12 days was only recovered on the 7th day. Animals inoculated with C. albidus and C. laurentii were alive until the tissue cultures of evaluated organs were negative. C. albidus was isolated mainly from the liver and lungs in up to 10 days after inoculation and strains of C. laurentii from the lungs and brain in up to 120 days. All isolates in the 3 species were capsule producers before and after inoculation. All strains of C. neoformans, 6 C. albidus and 6 C. laurentii grew at 37oC both before and after inoculation. All C. neoformans produced melanin and 6 C. laurentii produced it before inoculation and nine after. None was produced by C. albidus. Six isolates of C. neoformans and one of C. laurentii produced proteinases in both situations, before and after inoculation. Seven C. albidus isolates produced the protein hydrolyzing enzyme before inoculation and all after. Phospholipase enzyme was produced by all C. neoformans, and C. albidus and by 6 C. laurentii in both conditions, before and after inoculation. Urease activity was detected between 24 and 48 hours after incubation in a liquid medium for C. neoformans and C. laurentii cultures and after 24 to 96 hours for C. albidus. Fluconazole MICs ranged from 2 to 8 ug/ mL for C. neoformans isolates, from 8 to >= 64 ug/mL for C. albidus and from 1 to 64 ug/mL for C. laurentii in both conditions. Genes laccase (Lac1), phopholipase (PLB1) proteinase (cnap1), calcineurine (CNA1), urease (URE1) and ERG11, detected with the primers used were present in all C. neoformans. With exception of ERG11, which showed a band in agarose electrophoresis by all C. albidus, the other genes were not amplified in C. albidus and C. laurentii. Molecular typing by PCR-fingerprinting showed two molecular types in C. neoformans: VNI in 7 isolates and VNII in 3 isolates. Most C. albidus showed homogenous patterns in the bands generated and C. laurentii was the species with the higher genetic diversity by this methodology. It is concluded that isolate inoculations in animals does not alter phenotypes and no alteration is detected by molecular analysis. However, the high molecular heterogeneity of C. laurentii was detected.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-20T13:02:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Candidemia em neonatos....pdf: 1628589 bytes, checksum: 5b0ac1e6a9d71e1864e058583212fc7a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-20T13:02:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Candidemia em neonatos....pdf: 1628589 bytes, checksum: 5b0ac1e6a9d71e1864e058583212fc7a (MD5) Previous issue date: 2015-02-19 / CAPEs / Infecções fúngicas hematológicas em neonatos ocorrem comumente associadas a diversos fatores. Dentre estas infecções destaca-se candidemia, a qual tem se tornado cada vez mais frequente. Os fatores relacionados incluem prematuridade e uso de dispositivos terapêuticos invasivos, determinando altos indíces de morbi-mortalidade. Neste contexto, medidas preventivas às infecções fúngicas e instituição do tratamento adequado podem melhorar o cenário atual. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi diagnosticar infecções fúngicas em neonatos, definir o perfil epidemiológico e caracterizar os agentes etiológicos quanto a virulência e susceptibilidade antifúngica. Assim, amostras de sangue foram coletadas e processadas para exame direto e cultura. A virulência das leveduras foi avaliada através da capacidade de adesão dos agentes às células HeLA e produção de biofilme. Os testes de susceptibilidade antifúngica foram procedidos de acordo com o Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI) utilizando anfotericina B, voriconazol, fluconazol e as equinocandinas. Também foram incluídas nos testes cepas controle (ATCC) de Candida tropicalis e C. parapsilosis. No diagnóstico, foram verificadas estruturas fúngicas em parasitismo compatíveis com leveduras, sendo isoladas C. parapsilosis, C. albicans, C. haemulonii, C. guilliermondii, C. famata e C. glabrata. A espécie mais isolada foi C. parapsilosis superando a ocorrência de C. albicans. Os dados epidemiológicos indicam como fatores associados aos casos de candidemia a prematuridade, baixo peso ao nascer, uso de dispositivos médico-invasivos e maior acometimento do sexo masculino. Com relação à virulência, isolados de C. albicans e C. glabrata foram os que apresentam maior capacidade de adesão às células HeLa e cepas de C. albicans e C. parapsilosis produziram biofilmes fortes. Também foi possível detectar raros casos de resistência aos antifúngicos testados. Os resultados obtidos ressaltam a importância do acompanhamento micológico em neonatos para minimizar o índice de morbi-mortalidades por infecções fúngicas, particularmente, candidemia. / Hematologic fungal infections in newborns occur commonly associated with many factors. Among these infections stands out candidemia, which has become increasingly common. Related factors including prematurity and use of invasive therapeutic devices, determining high levels of morbidity and mortality. In this context, preventive measures to fungal infections and institution of appropriate treatment can improve the current situation. Thus, the objective of this study was to diagnose fungal infections in neonates, set the epidemiological profile and characterize the etiologic agents in virulence and antifungal susceptibility. Blood samples were collected and processed for direct examination and culture. The virulence of yeast was assessed by the ability of agents adhere to HeLa cells and biofilm production. The antifungal susceptibility testing was proceeded according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) using amphotericin B, voriconazole, fluconazole and echinocandins. Also were included in the test control strains (ATCC) of Candida tropicalis and C. parapsilosis. At diagnosis, fungal structures were observed in parasitism compatible with yeast, being isolated C. parapsilosis, C. albicans, C. haemulonii, C. guilliermondii, C. famata and C. glabrata. The most frequent species was C. parapsilosis surpassing the occurrence of C. albicans. Epidemiological data indicate some factors associated with cases of candidemia as prematurity, low birth weight, use of invasive medical devices and greater prevalence of males. Regarding the virulence isolates of C. albicans and C. glabrata were those with greater ability to adhere to HeLa cells and strains of C. albicans and C. parapsilosis produced strong biofilms. It was possible to detect rare cases of antifungal resistance. The results highlight the importance of mycological monitoring in neonates to minimize the morbidity and mortality rate due to fungal infections, particularly candidemia.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-07-27T21:51:06Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇAO FINAL - Julia Uecker.pdf: 1793822 bytes, checksum: e6a91bc415ec8e15d94438df9730dc76 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-31T19:02:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇAO FINAL - Julia Uecker.pdf: 1793822 bytes, checksum: e6a91bc415ec8e15d94438df9730dc76 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:02:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇAO FINAL - Julia Uecker.pdf: 1793822 bytes, checksum: e6a91bc415ec8e15d94438df9730dc76 (MD5) Previous issue date: 2018-03-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Bactérias ácido lácticas (BAL) são as principais representantes dos probióticos em alimentos, proporcionando efeitos benéficos à saúde do hospedeiro. Devido aos efeitos já relatados na literatura, a procura por novas linhagens com essas características tem sido relevante. Assim, o objetivo deste estudo foi isolar, identificar e caracterizar BAL presentes em alimentos de origem láctea com potencial probiótico, bem como analisar o efeito antimicrobiano, a capacidade antioxidante e a presença de fatores de virulência e de resistência. Para isso, foram isolados 40 micro-organismos de diferentes produtos lácteos (yakult®, san bios®, leite de vaca, Ricota, queijo minas frescal e kefir), escolhidos 17 micro-organismos de forma aleatória para as analises futuras, como: avaliação das propriedades probióticas pelos testes de tolerância ao pH, sais biliares e trato gastrointestinal superior; determinação das propriedades antioxidantes pelos métodos de captura do radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH) e reação ao ácido tiobarbitúrico (TBARS); atividade antimicrobiana frente à micro-organismos patogênicos pelos métodos difusão em poços e difusão em discos; susceptibilidade a antimicrobianos; aspectos de segurança por diversos métodos e detecção de genes com potencial fator de virulência relacionados à adesão, agregação e resistência à vancomicina, além da identificação molecular do 16S rDNA pelo método de Sanger. Por meio dos resultados obtidos observou-se que todos os micro-organismos apresentaram alguma característica probiótica relacionada; todos apresentaram potencial antioxidante pelo método DPPH, porém pelo método TBARS apenas três microorganismos apresentaram inibição da peroxidação lipídica. A análise antimicrobiana por difusão em poços demonstrou que os micro-organismos R1, F3 e F4 apresentaram inibição frente a Escherichia coli; R1 e R9 frente a Listeria monocytogenes e K1, K2, R1, R5, e R9 apresentaram ação antimicrobiana frente ao Staphylococcus aureus. A atividade antimicrobiana por difusão em disco demonstrou que os micro-organismos Y1, Y2, SB4, SB6, R1, R5, R9, L1, L2, L4, K1 e K2 apresentaram inibição frente a E. coli; SB4, SB6, F1, F2 e L4 frente a Salmonella Enteretidis; frente a L. monocytogenes SB6 e L4 apresentaram ação inibitória; e em relação a S. aureus foi observada atividade antimicrobiana quando analisados os micro-organismos L4 e L5. Os micro-organismos foram classificados como homofermentativos, gelatinase, lipase e DNAse negativa; α-hemolíticos, não formadores de biofilme, e não apresentam genes de virulência como agg, asa e genes de resistência como vanA. Assim, conclui-se que os micro-organismos R9 (Lactococcus lactis subsp. Lactis) e L1 (Leuconostoc citreum), destacaram-se como micro-organismos promissores com potencial de uso como probiótico, bem como apresentaram características antimicrobianas e antioxidantes satisfatória. Este resultado torna-se de suma importância, visto o possível uso destes na produção futura de alimentos. / Lactic acid bacteria (BAL) are the main representatives of probiotics in foods, providing beneficial effects to host health. Due to the effects already reported in the literature, the search for new lineages with these characteristics has been relevant. Thus, the objective of this study was to isolate, identify and characterize BAL present in dairy foods with probiotic potential, as well as to analyze the antimicrobial effect, the antioxidant capacity and the presence of virulence and resistance factors. To that end, 40 microorganisms from different dairy products (yakult, San Bios, fresh cow's milk, Ricotta, Frescal cheese and Kefir) were selected, and 17 microorganisms were randomly chosen for future analyzes, such as: evaluation of the probiotic properties by pH, bile salts and upper gastrointestinal tolerance tests; determination of the antioxidant properties by the methods of capture of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH) and reaction with thiobarbituric acid (TBARS); antimicrobial activity against pathogenic microorganisms by well diffusion and disk diffusion methods; susceptibility to antimicrobials; safety aspects by several methods and detection of genes with potential virulence factor related to adhesion, aggregation and vancomycin resistance, as well as the molecular identification of 16S rDNA by the Sanger method. By means of the obtained results it was observed that all the microorganisms presented some related probiotic characteristic; all presented antioxidant potential by the DPPH method, but by the TBARS method only three microorganisms showed inhibition of lipid peroxidation. Antimicrobial analysis by well diffusion showed that the microorganisms R1, F3 and F4 showed inhibition against Escherichia coli; R1 and R9 against Listeria monocytogenes and K1, K2, R1, R5, and R9 presented antimicrobial action against Staphylococcus aureus. The antimicrobial activity by disk diffusion showed that the microorganisms Y1, Y2, SB4, SB6, R1, R5, R9, L1, L2, L4, K1 and K2 showed inhibition against E. coli; SB4, SB6, F1, F2 and L4 against Salmonella Enteretidis; against L. monocytogenes SB6 and L4 presented inhibitory action; and in relation to S. aureus, antimicrobial activity was observed when the L4 and L5 microorganisms were analyzed. The microorganisms were classified as homofermentative, gelatinase, lipase and DNAse negative; α-hemolytic, non-biofilm forming, and do not show virulence genes such as agg, wing and resistance genes such as vanA. Thus, it was concluded that the microorganisms R9 (Lactococcus lactis subsp. Lactis) and L1 (Leuconostoc citreum) have been shown to be promising microorganisms with potential for use as probiotics, as well as satisfactory antimicrobial and antioxidant properties. This result becomes of paramount importance, considering the possible use of these in future food production.

Nomuraea rileyi é um entomofungo que infecta principalmente lepidópteros representantes da superfamília Noctuoidea, que inclui pragas-chave de diversas culturas de grande importância econômica. No entanto, a susceptibilidade das espécies a este agente é variável, mesmo entre representantes da mesma família e até de mesmo gênero. Um dos fatores responsáveis por esta susceptibilidade diferenciada pode ser a composição lipídica da cutícula larval. O objetivo deste estudo foi avaliar a estrutura e composição cuticular de larvas de lepidópteros e sua relação com a susceptibilidade a N. rileyi. Foram utilizadas as espécies Anticarsia gemmatalis, Mythimna sequax, Rachiplusia nu e Spodoptera cosmioides e duas linhagens do fungo (CH87551 e UB93150). Larvas de segundo instar foram obtidas a partir da criação massal no Laboratório de Controle de Pragas da Universidade de Caxias do Sul e submetidas a suspensões de 107, 108 e 109 conídios/mL por 24 horas e após, transferidas para recipientes de 200mL contendo dietas artificiais específicas. Os bioensaios foram mantidos em condições controladas e avaliados diariamente por 14 dias. Para análise da composição lipídica cuticular, exúvias oriundas da metamorfose larval-pupal foram submetidas à extração com hexano e posteriormente à diclorometano-metanol. Para obtenção das exúvias de M. sequax, as larvas foram alimentadas com Lolium multiflorum. Os extratos obtidos foram analisados por cromatografia de camada delgada e seus componentes separados por cromatografia em coluna aberta, cujas frações resultantes foram analisadas por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas (GCMS). Imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV) foram obtidas de larvas de segundo ínstar de cada espécie, submetidas uma suspensão de 108 conídios/mL e analisadas 24, 48 e 72 horas após a exposição ao patógeno. Os resultados demonstraram que as espécies avaliadas foram diferentemente afetadas por N. rileyi e, mesmo pelas diferentes linhagens avaliadas. A CL50 (log dose) obtida com as linhagens CH e UB foi de 6,73 e 7,97 para A. gemmatalis e 8,26 e 9,16 para R. nu respectivamente. S. cosmioides foi susceptível apenas à linhagem UB, porém a taxa de mortalidade foi de apenas 11,5% na maior concentração e M. sequax não foi susceptível a nenhuma das linhagens avaliadas. A composição lipídica cuticular apresentou diferenças quali-quantitativas entre as larvas. Os principais componentes identificados em A gemmatalis, M. sequax e R nu foram hidrocarbonetos, respondendo por 72,3, 74,5 e 83,6% respectivamente, com menor diversidade de compostos para M. sequax. Ácidos graxos lineares e ramificados (C14 a C20) foram identificados, com diferentes composições em cada uma das espécies. Identificou-se um aldeído e um álcool graxo em A. gemmatalis e outro aldeído graxo em R. nu. Em S. cosmioides, o componente majoritário identificado foi vitamina E, com mais de 70%. Nas imagens de MEV foi possível observar conídios de N. rileyi aderidos à superfície cuticular das quatro espécies avaliadas, especialmente na região abdominal e nos pseudopodes, mesmo depois de 48 horas após contato, sobretudo em S. cosmioides e M. sequax, espécies nas quais muitos dos conídios visualizados apresentaram tubo germinativo crescendo paralelamente à superfície. As espécies que se mostraram mais susceptíveis nestes bioensaios foram as que apresentaram, além de grandes quantidades de alcanos, as maiores diversidades destes compostos. As espécies menos susceptíveis apresentaram pouca quantidade e/ou variedade de alcanos ou ainda algum composto antioxidante, como no caso da vitamina E. Os resultados obtidos sugerem que, além das diferenças na composição lipídica e na estrutura cuticular das larvas, a variabilidade de N. rileyi pode estar relacionada à susceptibilidade diferenciada observada nas espécies, no entanto o potencial de uso deste agente como ferramenta no manejo integrado de pragas é considerável e precisa ser mais bem compreendido e explorado. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Nomuraea rileyi is an entomofungus that mainly infects lepidopteran representatives of the Noctuoidea superfamily, which includes key-pests of various crops of large economic importance. Nevertheless, the susceptibility of species in relation to this agent is variable, even among representatives of the same family or genus. One of the factors responsible for this differentiated susceptibility might be the lipid composition of the larval cuticle. The aim of this study was to assess the cuticular structure and composition of lepidopteran larvae and their relationship with the susceptibility to N. rileyi fungi. The species Anticarsia gemmatalis, Mythimna sequax, Rachiplusia nu and Spodoptera cosmioides and two strains of the fungus (CH87551 and UB93150) were used. Second instar larvae were obtained from the mass creation of the Pest Control Laboratory at the University of Caxias do Sul and subjected to suspensions of 107, 108 and 109 conidia/mL for 24 hours and subsequently transferred to 200mL containers containing specific artificial diets. The bioassays were maintained in controlled conditions and assessed daily for 14 days. In order to perform an analysis of the cuticular lipid composition, exuviae derived from the larval-pupal metamorphosis were subjected to extraction with hexane and with dichloromethane-methanol afterwards. For obtaining the M. sequax exuviae, the larvae were fed with Lolium multiflorum. The obtained extracts were analyzed by means of slender layer chromatography and their components were separated using open column chromatography components, whose resulting fractions were analyzed through gas chromatography attached to mass detector (GCMS). Images of scanning electron microscopy (SEM) were obtained from second instar larvae of each species, subjected to a suspension of 108 conidia/mL and analyzed 24, 48 and 72 hours after exposure to the pathogen. The results showed that the assessed species were differently affected by N. rileyi fungi or even by different assessed strains. The LC50 (log dose) obtained with the CH and UB strains was 6,73 and 7,97 for A. gemmatalis and 8,26 and 9,16 for R. nu respectively. S. cosmioides was susceptible only to the UB strain, but the mortality was limited to 11.5% in the highest concentration and M. sequax was not susceptible to any of the assessed strains. The cuticular lipid composition showed qualitative and quantitative differences between the larvae. The main components identified in A. gemmatalis, M. sequax and R. nu were hydrocarbons, accounting for 72,3, 74,5 and 83,6% respectively, with lower diversity of compounds for M. sequax. Linear and branched fatty acids (C14 to C20) have been identified, with different compositions in each one of the species. It was found an aldehyde and a fatty alcohol in A. gemmatalis and other fatty aldehyde in R. nu. In S. cosmioides, the major identified component was vitamin E, with more than 70%. In the SEM images, it was possible to observe conidia of N. rileyi attached to the cuticular surface of the four assessed species, especially in the abdominal region and in pseudopods, even after 48 hours of contact, mainly in S. cosmioides and M. sequax, species in which many observed conidia showed germ tube growing in tandem with the surface. The species that were more likely in these bioassays were the ones that presented, in addition to large amounts of alkanes, the greatest diversities of these compounds. The less susceptible species showed little quantity and/or variety of alkanes or even some antioxidant compound, as in the case of the vitamin E. The obtained results suggest that, besides differences in the lipid composition and cuticular structure of the larvae, the variability of N. rileyi might be related to the differentiated susceptibility observed in species, however, the potential usage of this agent as a tool for holding an integrated pest management is sizeable and needs to be better understood and explored.

Orientador: Wanderley Dias da Silveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T18:03:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nakazato_Gerson_D.pdf: 8124428 bytes, checksum: 0945b4124057f20c385fd7c7658685be (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Duas linhagens de Escherichia co/i patogênicas isoladas de aves (APEC) com sinais clínicos de septicemia (517 e 521) e wna isolada de aves com sinais clínicos de 5índrome de Cabeça Inchada (5CIl O) foram selecionadas, do conjunto de 49 linhagens pertencentes ao Laboratório de Biologia Molecular Bacteriana, após a caracterização das mesmas quanto à presença das capacidades de adesão e invasão em células HEp-2 e HeLa, perfil de resistência a diferentes antimicrobianos, presença de genes (detectados por PCR) relacionados à patogenicidade, e perfil de DNA plasmidial. Teste de REP-PCR também foi realizado para separação destas linhagens em grupos clonais. Os plasmídios dessas linhagens foram transferidos, através de conjugação, para a linhagem receptora não patogênica, E. co/i HBI0l. A análise das amostras recombinantes obtidas, através das características estudadas, demonstrou que somente aquelas transconjugantes derivadas da linhagem 517, uma delas denominada de 517-1, apresentaram adesão e invasão nessas culturas celulares utilizadas, indicando que os genes responsáveis por estas características estão localizados no plasmídio que foi transferido (70 MDa). Pelo fato das capacidades de adesão e invasão das linhagens 521 e SCIl O não terem sido detectadas em transconjugantes em que ocorreram as transferências de plasmídios existentes nestas duas linhagens, indica que os genes responsáveis por estas características não são plasmídio-mediado, podendo, ou serem cromossômicos, ou mesmo serem plasmidiais, porém com controle de genes cromossômicos. A mutação da amostra 517-1, com o transposon TnphoA levou à perda das capacidades de adesão e/ou invasão em células HEp-2 e HeLa, o que indica que o processo de inserção do transposon tenha ocorrido em genes relacionados aos processos citados. O gene tsh (hemaglutinina termo-sensível) presente na linhagem 521, e os genes relacionados ao sistema de aerobactina presentes nas linhagens SCIlO ifepC) e 521 (iucA), também não foram identificados nas amostras transconjugantes. Com isso, sugere-se que estes genes possam estar localizados no cromossomo destas linhagens, bem como os genes de adesão e invasão dessas linhagens. Esta observação pode indicar a presença de possíveis "ilhas de patogenicidade" nestas linhagens, porém outros estudos devem ser realizados para que esta hipótese se confirme. A produção de colicinas (Ia, Ib, El, E3, B, K) pela linhagem SCIlO também foi passível de ser transferida para a linhagem bacteriana receptora, o que indica que esta característica é expressa por genes presentes no plasmídio transferido (120 MDa). Através de testes de invasão na linhagem celular HEp-2, Microscopia Eletrônica de Varredura e teste de F AS verificou-se que a capacidade de invasão celular presente na linhagem S 17 é diferente daquelas descritas para outras E. coZi invasivas, Salmonella spp. e Shigella sp / Abstract: Two pathogenic Escherichia coZi strains isolated from avian (APEC) showing c1inical signs of septicemia (817 and 821), and one isolated from avian showing c1inical signs of 8wollen Head 8yndrome (8H8 1 O), were selected from a total of 49 strains belonging to the Laboratory of Bacterial Molecular Biology, after a biological characterization regarding the presence of adhesion and invasion capacities to HEp-2 and HeLa cells, resistance profile to different antimicrobial drugs, presence of genes (detected by PCR) associated with pathogenicity, and plasmidial DNA profile. REP-PCR assay also was performed for separation of these strains in c10nal groups. Plasmids from these strains were transferred by conjugation assays to the non-pathogenic E. coZi strain HB 1 O 1. The analysis of the obtained recombinants strains, demonstrated that only recombinant strains derived from 817, one of these designated as 817-1, showed adhesion and invasion to these cells, indicating that the genes responsible for these characteristics are located in the transferred plasmid (70 MDa). 8ince the adhesion and invasion capacities of 821 and 8H8 1 O strains were not detected in recombinant strains where the transference of plasmids presents in these two strains occurred, indicates that the genes responsible for these characteristics are not plasmid-mediated. The location of these genes could be chromosomal, or thus plasmidial, but with chromosomal control. The mutation of 817-1 strain, with TnphoA transposon, resulted in the lost of adhesion and/or invasion capacities to HEp-2 and HeLa cells, which indicate that the transposon insertion process had occur at genes associated with the described processo The tsh gene (temperature-sensitive hemagglutinin) from 821 strain, and aerobactin genes from 8H810 ifepC) and 821 (iucA) strains, also were not found in the recombinants strains. These results suggest that these genes could be located in chromosomal regions as well as the adhesion and invasion genes from these strains. This observation could indicate that the presence of possible "pathogenicity islands" in these strains, but other studies must be realized for confirmation of this hypothesis. The production of colicins (Ia, Ib, El, E3, B and K) by strain 8H810 also was transferred to the recipient strain, which indicate that this characteristic is expressed by genes located at the transferred plasmid (120 MDa). Using invasion assays to HEp-2 cells, 8canning Electron Microscopy and FA8 assay, it was possible to observe that the cellular invasion capacity from 817 strain is different of those processes described by others invasive E. coZi, Salmonella spp. and Shigella sp / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T05:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ananias_Marcelo_M.pdf: 2055583 bytes, checksum: 5fd8a44119cef5e936f452b0c65edb49 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A patogenicidade de Escherichia coli em infecções extra-intestinais (ExPEC) depende das propriedades de virulência bacterianas. Estas, geneticamente, distribuem-se por diversas ilhas associadas a patogenicidade ¿ blocos gênicos contíguos ¿ responsáveis por expressar fatores que permitem às bactérias colonizarem, sobreviverem e assim, agredirem a integridade do hospedeiro. Para setenta e três (73) amostras de E. coli oriundas de pacientes septicêmicos isoladas por hemocultura foram detectadas a sorogrupagem (antígeno O), produção de hemolisinas, produção de enzimas e letalidade em camundongos, assim como o estudo molecular pela PCR de genes dos principais FV relacionados a ExPEC: adesinas ¿ fímbria tipo 1 (fimH), fímbria S (sfaD/E) e fímbria P (papC), além dos alelos 1, 2 e 3 da adesina fimbrial P (papG), adesina afimbrial (afaB/C); cápsula K1/K5 (kpsMTII); sideróforos - aerobactina (iucD), yersiniabactina (fyuA) e salmoquelina (iroN); toxinas ¿ hemolisina (hlyA), fator necrozante citotóxico do tipo 1 (cnf1) e toxina autotransportadora secretada (sat); miscelâneos ¿ invasão do endotélio microvascular cerebral (ibeA), resistência sérica (traT), colicina V (cvaC) e proteína uropatogênica específica (usp). Nenhuma amostra demonstrou atividade proteolítica. A produção de hemolisina foi detectada em 20,5% das amostras. Os sorogrupos O associados a UPEC prevaleceram em 52,1% das amostras contra 13,7% de outros sorotipos. Rugosas e não-tipáveis totalizaram 34,2%. Os resultados da PCR identificaram prevalência acima de 70% para os genes fimH, fyuA, kpsMTII e iucD. Entre 30% e 70% estiveram prevalentes os genes papC e papG, sat, iroN, usp e traT. Os genes sfaD/E, hlyA, cnf1, cvaC, ibeA e afaB/C estiveram presentes em no máximo 20% das amostras. O alelo de maior incidência para papG foi o 2; contudo, o alelo 3 apresentou maiores índices de associação com os outros fatores de virulência e o alelo 1 não foi detectado. A alta prevalência de amostras encapsuladas (74,0%) e hábeis em seqüestrar ferro (75,3%) condiz com a origem septicêmicas das amostras em estudo, que necessariamente devem driblar o sistema imunológico do hospedeiro e seqüestrar ferro. Todavia, os genes com baixa prevalência parecem desempenhar significativa função na ausência dos genes com maior prevalência neste estudo / Abstract: The pathogenicity of Escherichia coli in extraintestinal infections (ExPEC) depends to virulence properties bacterial. This, genetically, spread by several pathogenicity associated islands ¿ genic blocks contiguous ¿ responsible to express factors that allow to bacteria colonize, survive and thus, hurt the host integrity. Seventh tree strains of E. coli isolated from septicemic patients by means of hemoculture, it was detected antigen O sorogroup, production of hemolysins, enzymes e mouse lethality, plus the molecular study by PCR of the main genes associated of virulence factors in ExPEC: adhesins ¿ type 1 fimbriae (fumH), S fimbriae (sfaD/E) and fimbriae P (papC), and the alleles 1, 2 and 3 of adhesin P fimbrial, afimbrial adhesin (afaB/C); capsule K1/K5 (kpsMTII); siderophores ¿ aerobactin (iucD), yersiniabactin (fyuA) and salmochelin (ironN); toxins ¿ hemolysin (hlyA), necrotizing cytotoxic factor type 1 (cnf1) and toxin autotransporter secreted (sat); miscellaneous ¿ brain microvascular endothelial cells invasion (ibeA), seric resistance (traT), colicin V (cvcA) and specific uropathogenic protein (usp). No strain showed proteolytic activity. Hemolysin production was detected in 20,5% of strains. The O sorogroups associated to UPEC prevalent in 52,1% of strains against 13,7% of others sorogroups. Wrinkled and no-type totalized 34,2%. The results of the PCR identified prevalence above 70% for the genes fimH, fyuA, kpsMTII and iucD. Between 30-70% are prevalent the genes papC and papG, sat, iron, usp and traT. The genes sfaD/E, hlyA, cnf1, cvaC, ibeA and afaB/C bave been presents in the maxim 10% of strains. The allele with higher prevalence to papG was 2; but, the allele 3 presented higher numbers of association with others virulence factors. The high prevalence of encapsulated strains (74,0%) and able to uptake iron (75,3%) is according to the origin septicemic of strains studied, that necessarily may escape of the immunological system of host and uptake iron. Howerver, the genes with low prevalence seems to display an important function in the lack of the genes prevalent in this study / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores : Jose Francisco Hofling, Mary Anny Foglio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:40:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mardegan_RitadeCassia_D.pdf: 1623661 bytes, checksum: 6efd1058d06bb35d4bbde2640edda2e8 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O uso de extratos vegetais com fins medicinais é uma das mais antigas formas de prática medicinal da humanidade. Visto que nos últimos anos, a freqüência das infecções fúngicas sistêmicas, principalmente as oportunistas invasivas, têm crescido drasticamente o objetivo deste estudo foi: 1 - testar a atividade dos extratos (diclorometanico e metanólico) de Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Casearia sylvestris, Arctium lappa, Arrabidaea chica e Tabebuia avellanedae para determinar o potencial antifúngico em cepas padrão de Cândida spp (C. albicans, C. dubliniensis, C. parapsilosis, C. tropicalis e C. krusei) e em amostras clinicas de Candida albicans através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e; 2 - avaliar a capacidade desses extratos em inibirem a atividade das proteinases produzidas por C. albicans, um dos mais importantes fatores de virulência dessa espécie. Foram incluídos nos testes para analisar a inibição da atividade proteolítica os inibidores de protease (Amprenavir e Ritonavir) e a Pepstatina A. Nossos resultados demonstraram CIMs variadas em relação a sensibilidade de cada cepa. O extrato metanólico de Arrabidaea chica foi o mais efetivo na inibição do crescimente de várias espécies de Candida, inclusive em relação aos isolados clinicos de C. albicans, seguido dos extratos diclorometanicos de Arctium lappa e Mentha piperita. Nos testes de inibição das proteinases de Candida albicans os que se destacaram foram os extratos diclorometanico de Arrabidaea chica, Casearia sylvestris e Mentha piperita. Desta forma concluímos que o extrato metanólico de A. chica e os extratos diclorometanicos de A. lappa, M. piperita e C. sylvestris obtiveram relevante atividade antifúngica in vitro contra uma variedade de espécies de Candida sendo promissores como agente antifúngico. / Abstract: The use of plants as medicinal substances is one of the most old medicine practices of the humanity. In the last years, the frequency of systemic yeast infection, mainly the opportunistic, has been increased. The overall aims of the present study were: 1 - to test the extract activity (dichloromethane and methanolic) from Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Casearia sylvestris, Arctium lappa, Arrabidaea chica and Tabebuia avellanedae to determine the antifungal activity using strains of Candida spp (C. albicans, C. dubliniensis, C. parapsilosis, C. tropicalis e C. krusei) and in clinical isolates of C. albicans by determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and 2 - evaluate the capacity of the extracts to inhibit the activity of proteinases produced by C. albicans, one of the most important virulence factor of these specie. It has been included as a control to evaluate the inhibition of proteolitic activity Amprenavir e Ritonavir and Pepstatina A. Our results showed a variety of MIC patterns according to the strain sensibility. The methanolic extract of Arrabidaea chica was the most effective in inhibiting the growth of a variety of Candida species, including the clinical isolates of C. albicans, followed by dichloromethane extract of Arctium lappa and Mentha piperita. In relation of the proteinases inhibitory tests from C. albicans the most effective extracts tested were dichloromethane of Arrabidaea chica, Casearia sylvestris and Mentha piperita. In conclusion the methanolic extract from A. chica and dichloromethane extracts from A. lappa, M. piperita e C. sylvestris have relevant antifungal activity against a range of Candida specie in vitro and are promising antifungal agents. / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-11-19T17:05:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 1754949 bytes, checksum: 32fc5784ffa91959642465ef80f3019f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-20T13:06:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 1754949 bytes, checksum: 32fc5784ffa91959642465ef80f3019f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T13:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 1754949 bytes, checksum: 32fc5784ffa91959642465ef80f3019f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Paracoccidioides is a termodimorphic fungus that causes paracoccidioidomycosis (PCM), the most frequent systemic mycosis that affects mainly the rural population in Latin America. The fungus grows as yeast when grown at 35-37° C and as mycelium at temperatures below 28° C. The establishment and severity of the disease depends on factors inherent to the fungus and the host. The diversity presented among isolates of the same genus has been explored between the microorganisms and attempt to clarify differences possibly related to virulence existing between isolates that cause the same disease. The secretion of proteins in a cell is a highly dynamic mechanism and is directly involved in the first pathogen contact with the host cells, enabling their survival, multiplication and dissemination. In order to try to elucidate this diversity the proteomic profile of secretome of two isolates of Paracoccidioides, PbEpm83 and Pb01, that in our experimental conditions of infection showed different behaviors was characterized. The use of Ultra Performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (UPLC-MSE) allowed the identification of 92 proteins / isoforms among the strains. Of the 92 proteins identified, 36 were preferentially secreted in PbEpm83 and 35 preferentially secreted in Pb01. Among the identified we can highlight proteins related to various biological processes: adhesion to the ECM, proteins related to thermal and oxidative stress, cell rescue, defense and virulence, proteins with immunogenic capacity, proteins related to defense against antifungal, heat shock proteins, among others. Our analysis showed that most of the proteins identified using non-conventional secretory pathways. Among the identified proteins there are already related proteins as virulence factors, such as, ATP synthase, mitochondrial Peroxiredoxin PRX 1, fructose bisphosphate aldolase, Didpeptidil peptidase, Thioredoxin, TCTP, Hsp70 and Hsp88. Our results highlight the importance of secreted proteins in the establishment of infection and that these species, within the same genus, maintain differences in the levels of protein expression that may reflect their behavior in the success of the infection. / Paracoccidioides é um fungo termodimórfico causador da paracoccidioidomicose (PCM), a mais frequente micose sistêmica que afeta, principalmente, a população rural na América Latina. O fungo cresce como levedura quando cultivado à 35-37 °C e como micélio à temperaturas inferiores à 28 °C. O estabelecimento e severidade da doença dependem de fatores inerentes ao fungo bem como ao hospedeiro. A diversidade apresentada entre isolados de um mesmo gênero tem sido explorada entre micro-organismos e procura elucidar diferenças possivelmente relacionadas à virulência existentes entre isolados que causam a mesma doença. A secreção de proteínas em uma célula é um mecanismo altamente dinâmico e que está diretamente envolvido nos primeiros contatos do patógeno com as células do hospedeiro, capacitando sua sobrevivência, multiplicação e disseminação. A fim de tentar elucidar essa diversidade o perfil proteômico do secretoma de dois isolados de Paracoccidioides, PbEpm83 e Pb01, pertencentes à duas espécies filogenéticas diferentes, que em nossas condições experimentais de infecção apresentaram comportamentos diferentes foi caracterizado. A utilização da Cromatografia Líquida de Ultraperformance acoplada à Espectrometria de Massas (UPLC-MSE) permitiu a identificação de 92 proteínas/isoformas entre as amostras testadas. Das 92 proteínas identificadas, 36 foram preferencialmente secretadas em PbEpm83 e 35 preferencialmente secretadas em Pb01. Dentre as identificadas podemos destacar proteínas relacionadas à vários processos biológicos: adesão à MEC, proteínas relacionadas ao estresse térmico e oxidativo, resgate celular, defesa e virulência, proteínas com capacidades imunogênicas, proteínas relacionadas à defesa contra antifúngicos, proteínas de choque térmico, entre outras funções. Nossas análises mostraram que a maioria das proteínas identificadas utilizam vias secretórias não-convencionais. Entre as proteínas identificadas estão proteínas já relacionadas como fatores de virulência: ATP sintase, Peroxirredoxina mitocondrial PRX 1, Frutose bifosfato aldolase, Didpeptidil peptidase, Tioredoxina, TCTP, Hsp70 e Hsp88. Nossos resultados ressaltam a importância das proteínas secretadas no estabelecimento da infecção e que estas espécies dentro do mesmo gênero mantêm diferenças nos níveis de expressão proteica que podem refletir em seu comportamento no sucesso da infecção.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-01-27T16:27:50Z No. of bitstreams: 2 Tese - Fábio Silvestre Ataides - 2014.pdf: 2285867 bytes, checksum: 7c53025bcd16ddc4bc411b6f0415905a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-28T11:43:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Fábio Silvestre Ataides - 2014.pdf: 2285867 bytes, checksum: 7c53025bcd16ddc4bc411b6f0415905a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-28T11:43:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Fábio Silvestre Ataides - 2014.pdf: 2285867 bytes, checksum: 7c53025bcd16ddc4bc411b6f0415905a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-08-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The Candida species are associated with clinical manifestations that can characterize from superficial infections up to systemic involvement. Non-albicans species are considered emerging, and Candida parapsilosis is the main etiological agent in several casuistics. The secondary alcohol dehydrogenase (SADH) gene amplification and restriction fragment analysis by enzyme digestion BanI allows differentiation of C. parapsilosis in a species complex formed by C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis and C. metapsilosis that may present behaviors different virulence and response to antifungal agents. Thus, this study aims to identify the species of the C. parapsilosis complex, obtained from mycology collection of the Mycology Laboratory of the Institute of Tropical Pathology and Public Health, Federal University of Goiás, using molecular methods, as well as the characterization of factors virulence and in vitro susceptibility to different antifungal agents. For the distinction between the species, was performed a polymerase chain reaction followed by digestion with restriction enzyme BanI. After the identification of 87 isolates from blood (54) and nails (33), the determination of virulence factors such as proteases, esterase, phospholipase, hemolysins, adhesion, biofilm formation and switching phenomenon were performed. The profile of in vitro susceptibility to amphotericin B, fluconazole, itraconazole, voriconazole, posaconazole and caspofungin were performed using the Etest® method. The results showed that C. parapsilosis sensu stricto is the most common in our region (78), followed by C.orthopsilosis (5) C. metapsilosis (4). There was no difference between the behavior of virulence by the three species, but noted that there is divergence in the susceptibility to antifungal agents. Isolates of C. parapsilosis sensu stricto were less susceptible to amphotericin B, itraconazole and caspofungin compared with the susceptibility patterns of C. orthopsilosis and C. metapsilosis. A percentage of 10.2% of the isolates of C. parapsilosis sensu stricto no were susceptible to caspofungin. This paper reports the first identification of species of the C. parapsilosis complex in the state of Goiás, Brazil, and shows the importance of determining antifungal susceptibility to appropriate therapy. / As espécies do gênero Candida estão relacionadas com manifestações clínicas que podem caracterizar desde infecções superficiais até um acometimento sistêmico. Espécies não-albicans, são consideradas emergentes, sendo que Candida parapsilosis é o principal agente etiológico em várias casuísticas. A amplificação do gene Secondary Alcohol Dehydrogenase (SADH) e a análise dos fragmentos de restrição pela enzima de digestão BanI, permite a diferenciação de C. parapsilosis em um complexo de espécies formado pela C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis e C. metapsilosis, que podem apresentar comportamentos diferentes de virulência e resposta aos antifúngicos. Deste modo, este trabalho se propõe a identificar as espécies pertencentes ao complexo C. parapsilosis, obtidas da micoteca do Laboratório de Micologia do Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública da Universidade Federal de Goiás, usando métodos moleculares, bem como a caracterização dos fatores de virulência, e perfil de suscetibilidade in vitro a diferentes agentes antifúngicos. Para a distinção entre as espécies foi realizado a reação em cadeia da polimerase (PCR) seguido de digestão pela enzima de restrição BanI. Após a identificação de 87 isolados obtidos de sangue (54) e de unhas (33), foi realizada a determinação dos fatores de virulência como proteinases, esterase, fosfolipase, hemolisinas, aderência, formação de biofilme e fenômeno switching. O perfil de suscetibilidade a anfotericina B, fluconazol, itraconazol, voriconazol, posaconazol e caspofungina foi realizado usando-se o método de Etest®. Os resultados mostraram que C. parapsilosis sensu stricto é a mais frequente na nossa região (78), seguido de C. orthopsilosis (5) e C. metapsilosis (4). Não se verificou diferença entre o comportamento de virulência pelas três espécies, mas foi observado que há divergência na suscetibilidade aos agentes antifúngicos. Isolados de C. parapsilosis sensu stricto foram menos suscetíveis a anfotericina B, itraconazol e caspofungina quando comparados com os padrões de suscetibilidade de C. orthopsilosis e C. metapsilosis. Um percentual de 10,2% dos isolados de C. parapsilosis sensu stricto apresentaram-se não suscetíveis a caspofungina. Este trabalho relata pela primeira vez a identificação de espécies do complexo C. parapsilosis no estado de Goiás, Brasil, e mostra a importância de determinação de suscetibilidade antifúngica para uma terapia adequada.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-06T15:21:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Vivian do N. Pereira.pdf: 2756512 bytes, checksum: 9892b08404437328cce673864effe453 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-06T15:21:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Vivian do N. Pereira.pdf: 2756512 bytes, checksum: 9892b08404437328cce673864effe453 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-06T15:21:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Vivian do N. Pereira.pdf: 2756512 bytes, checksum: 9892b08404437328cce673864effe453 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-06T15:21:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Vivian do N. Pereira.pdf: 2756512 bytes, checksum: 9892b08404437328cce673864effe453 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Candidemia is an infection recognized as public health problem related to health assistance. Filling the knowledge gaps through epidemiological studies and diagnostic tools to respond emerging threats that may be involved in the disease process is among the actions to eliminate these infections. The objective of this research was to study the Candida yeasts isolated from blood cultures of patients admitted in 11 hospitals of Manaus in 2013, as well to study the clinical epidemiological aspects of candidemia, the antifungal profile of susceptibility and virulence factors. The detection of yeasts in the collected samples was performed by conventional methodology. The antifungal susceptibility was determined using E-Test® strips. The studied virulence factors were proteinase, phospholipase, hemolysin and biofilm formation. During the study period, there were 85 cases of infection in the blood of 81 patients with Candida spp. In relation to gender, 67.9% were male, the median age of adult patients was 53 years and between pediatric patients was 60 days. The main risk conditions were: previous use of antibiotics (98.6%), presence of central venous catheter (95.9%), ICU (84.9%), use of protectors of gastric mucosa (84.4 %) and one-third of patients are from natal care and 72.8% of patients had up to 1 year old. According to the clinical course of patients, 40.7% died. C. albicans was the most frequently isolated species (34.57%), followed by C. tropicalis (32.1%) and Candida parapsilosis (17.28%). A susceptibility test was performed against Caspofungin, Micafungin, and Voriconazole, where the resistance 12.1%, 4.3% and 4.3% was respectively found. The virulence factors related to production of enzymes was: Proteinase with 56.4% of the isolates being producers, Phospholipase 36.2% and 78.7% hemolysin with this capability being more expressive in the species C. albicans. The biofilm formation was present in 34% of the isolates whose C. tropicalis was the most significant in this factor. The importance of epidemiology studies and local phenotypic studies may contribute to improve decision-making process and propose more effective measures for control and prevention of these infections. / As Candidemias são Infecções Relacionadas à Assistência a Saúde que são reconhecidamente um problema de saúde pública, e dentre as várias ações como medidas de eliminação destas infecções, estão o preenchimento das lacunas de conhecimento para responder as ameaças emergentes, isto se dá por estudos epidemiológicos, de diagnóstico e dos fatores que podem estar envolvidos no processo de adoecimento. O objetivo deste trabalho foi estudar as leveduras do gênero Candida isoladas a partir de hemoculturas de pacientes internados em 11 Hospitais de Manaus no ano de 2013, bem como estudar os aspectos clínicos epidemiológicos das candidemias, o perfil de susceptibilidade antifúngica e fatores de virulência. A detecção das leveduras presentes nas amostras coletadas foi realizada por meio de metodologia convencional. A susceptibilidade antifúngica foi determinada utilizando fitas de Etest® seguindo as recomendações do fabricante. Os fatores de virulência estudados foram: proteinase, fosfolipase, hemolisinas e formação de biofilme. No período de estudo, foram registrados 85 casos de infecção na corrente sanguínea de 81 pacientes por Candida spp. Em relação ao gênero 67,9% eram do sexo masculino, a mediana das idades entre os pacientes adultos foi de 53 anos e entre os pediátricos de 60 dias. As principais condições de risco foram: o uso prévio de antibióticos (98,6%), presença de cateter venoso central (95,9%), internação em UTI/CTI (84,9%), uso de gastroprotetores (84,4%) e um terço dos pacientes são procedentes de maternidades, e 72,8% dos pacientes tinham até 1 ano de idade. Segundo a evolução clínica dos pacientes, 40,7% foram a óbito. C. albicans foi a espécie isolada com mais frequência (34,57%), seguido de C. tropicalis (32,1%), C. parapsilosis (17,28%). Foi realizado teste de susceptibilidade frente a Caspofungina, Micafungina e Voriconazol, onde a resistência encontrada foi de 12,1%, 4,3% e 4,3% respectivamente. Os fatores de virulência relacionados à produção de enzimas foram: Proteinase com 56,4% dos isolados sendo produtores, Fosfolipase 36,2% e Hemolisina 78,7 com esta capacidade; sendo mais expressiva nas espécies de C. albicans. A formação de biofilme estava presente em 34% dos isolados, sendo a C. tropicalis a mais expressiva neste fator. A importância de estudos de epidemiologia e estudos fenotípicos locais podem contribuir para a melhoria da tomada de decisão e propor medidas mais efetivas de controle e prevenção destas infecções.