Accurate identification of pathogens and vectors is essential in epidemiological studies of mosquito-borne pathogens. However, the members of the communis and punctor complexes are difficult to distinguish because they are highly cryptic species, with little to no species-specific morphological characters. The objective of this thesis is to develop molecular tools, including RFLP and DNA barcoding using cytochrome oxidase I (COI), internal transcribed spacer 2 (ITS2) and the intron of ribosomal protein S12 (RPS12) to facilitate identification of the members of these two complexes in Manitoba. A distinct interspecific distance for COI was found between the members of the communis complex included here, and diagnostic RFLP profiles were developed for Oc. communis and Oc. churchillensis. Relatively low average interspecific genetic distances using COI, ITS2 and RPS12 were observed between the members of the punctor complex, indicates no discernable boundaries between these species based on DNA barcoding.

Accurate identification of pathogens and vectors is essential in epidemiological studies of mosquito-borne pathogens. However, the members of the communis and punctor complexes are difficult to distinguish because they are highly cryptic species, with little to no species-specific morphological characters. The objective of this thesis is to develop molecular tools, including RFLP and DNA barcoding using cytochrome oxidase I (COI), internal transcribed spacer 2 (ITS2) and the intron of ribosomal protein S12 (RPS12) to facilitate identification of the members of these two complexes in Manitoba. A distinct interspecific distance for COI was found between the members of the communis complex included here, and diagnostic RFLP profiles were developed for Oc. communis and Oc. churchillensis. Relatively low average interspecific genetic distances using COI, ITS2 and RPS12 were observed between the members of the punctor complex, indicates no discernable boundaries between these species based on DNA barcoding.

Orientador: Claudio de Oliveira / Banca: Cristina Yumi Miyaki / Banca: Francisco Langeani Neto / Banca: Anderson Luís Alves / Banca: Mateus Pepinelli / Resumo: A identificação da diversidade biológica é um desafio nos dias atuais frente aos 10 a 15 milhões de espécies estimadas. Neste sentido, o uso de ferramentas moleculares para a identificação e caracterização de espécies tem-se mostrado promissor. Há mais de 40 anos o uso dessas ferramentas tem auxiliado na identificação de espécies, principalmente para os grupos em que ainda faltam estudos taxonômicos, são muitos especiosos e/ou se caracterizam por possuir espécies morfologicamente muito semelhantes. Recentemente foi feita uma proposta para a identificação molecular das espécies, denominada DNA barcode, com o objetivo de criar um sistema padronizado, rápido e eficaz de identificação de espécies para toda vida eucariótica. O método utiliza um fragmento de 655 pb do gene mitocondrial COI que funciona como um código de barras de DNA. A metodologia se fundamenta na premissa de que a variação nucleotídica intra-específica é sempre menor que a variação nucleotídica encontrada entre espécies, permitindo assim separá-las com uma taxa de erro insignificante. A metodologia já se mostrou bastante eficaz com resolução maior que 90% para diversos grupos animais. A bacia do Alto rio Paraná drena uma área de aproximadamente 890 mil km2 e está inserida numa das regiões mais exploradas e impactadas do Brasil. É considerada a região mais bem estuda do ponto de vista ictiofaunístico da América do Sul, apresentando uma diversidade de aproximadamente 350 espécies. No entanto, esse número ainda é incerto, frente ao elevado número de espécies já reconhecidas e não descritas e à existência de regiões ainda pouco exploradas na bacia. Assim, o uso da metodologia de identificação por DNA barcode se mostra bastante promissor para o estudo e caracterização dessa importante fauna.Diante do exposto, os objetivos do presente trabalho foram: verificar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The identification of biological diversity is a challenge due the estimated species numbers of 10 to 15 million. Thus, the use of molecular tools for identification and characterization of species has shown promising. These tools has been used for more than 40 years to aid in the species identification, mainly in groups with few taxonomic studies, with high number of species and with morphologically similar species. Recently, a new proposal to species identification was presented, called DNA barcode. The main objective is the creation of a standardized, fast and efficient methodology to identification of all eukaryotic life. The method uses a fragment of 655 bp from mitochondrial COI gene. The basis of successes of this methodology is the fact of the intraspecific nucleotide variation is lower than the interspecific variation, allowing the separation of species with insignificant error rate. The DNA barcode has proven effective, showing a resolution greater than 90% for many animal groups. The Paraná River Basin drains an area of approximately 890,000 km2 and is located in the most exploited and impacted region of Brazil. It is considered the best studied basin from South America with 350 species of fishes recognized. However, the number of species is still uncertain due the high number of species recognized but not yet described and the occurrence of regions unexplored. Thus, the DNA barcode configure a useful tool to the study and characterization of this important fauna. The objectives of this study were: assessing the efficacy of the DNA barcode methodology to identify the species from this basin; analyzing carefully the cases of possible cryptic species and; to deposit in the BOLD system the sequences obtained to contribute with barcode database. We analyzed 1360 specimens belonging to 214 nominal species and 42 species identified to the genus level. The barcode sequences were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:46:48Z : No. of bitstreams: 1 pereira_lhg_dr_botib.pdf: 1889620 bytes, checksum: 9614c8052d2837c8baf39d9c84bc9fe9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A identificação da diversidade biológica é um desafio nos dias atuais frente aos 10 a 15 milhões de espécies estimadas. Neste sentido, o uso de ferramentas moleculares para a identificação e caracterização de espécies tem-se mostrado promissor. Há mais de 40 anos o uso dessas ferramentas tem auxiliado na identificação de espécies, principalmente para os grupos em que ainda faltam estudos taxonômicos, são muitos especiosos e/ou se caracterizam por possuir espécies morfologicamente muito semelhantes. Recentemente foi feita uma proposta para a identificação molecular das espécies, denominada DNA barcode, com o objetivo de criar um sistema padronizado, rápido e eficaz de identificação de espécies para toda vida eucariótica. O método utiliza um fragmento de 655 pb do gene mitocondrial COI que funciona como um código de barras de DNA. A metodologia se fundamenta na premissa de que a variação nucleotídica intra-específica é sempre menor que a variação nucleotídica encontrada entre espécies, permitindo assim separá-las com uma taxa de erro insignificante. A metodologia já se mostrou bastante eficaz com resolução maior que 90% para diversos grupos animais. A bacia do Alto rio Paraná drena uma área de aproximadamente 890 mil km2 e está inserida numa das regiões mais exploradas e impactadas do Brasil. É considerada a região mais bem estuda do ponto de vista ictiofaunístico da América do Sul, apresentando uma diversidade de aproximadamente 350 espécies. No entanto, esse número ainda é incerto, frente ao elevado número de espécies já reconhecidas e não descritas e à existência de regiões ainda pouco exploradas na bacia. Assim, o uso da metodologia de identificação por DNA barcode se mostra bastante promissor para o estudo e caracterização dessa importante fauna.Diante do exposto, os objetivos do presente trabalho foram: verificar... / The identification of biological diversity is a challenge due the estimated species numbers of 10 to 15 million. Thus, the use of molecular tools for identification and characterization of species has shown promising. These tools has been used for more than 40 years to aid in the species identification, mainly in groups with few taxonomic studies, with high number of species and with morphologically similar species. Recently, a new proposal to species identification was presented, called DNA barcode. The main objective is the creation of a standardized, fast and efficient methodology to identification of all eukaryotic life. The method uses a fragment of 655 bp from mitochondrial COI gene. The basis of successes of this methodology is the fact of the intraspecific nucleotide variation is lower than the interspecific variation, allowing the separation of species with insignificant error rate. The DNA barcode has proven effective, showing a resolution greater than 90% for many animal groups. The Paraná River Basin drains an area of approximately 890,000 km2 and is located in the most exploited and impacted region of Brazil. It is considered the best studied basin from South America with 350 species of fishes recognized. However, the number of species is still uncertain due the high number of species recognized but not yet described and the occurrence of regions unexplored. Thus, the DNA barcode configure a useful tool to the study and characterization of this important fauna. The objectives of this study were: assessing the efficacy of the DNA barcode methodology to identify the species from this basin; analyzing carefully the cases of possible cryptic species and; to deposit in the BOLD system the sequences obtained to contribute with barcode database. We analyzed 1360 specimens belonging to 214 nominal species and 42 species identified to the genus level. The barcode sequences were... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Claudio de Oliveira / Abstract: The coastal drainages of Southern and Southeastern Brazil are part of the Eastern basin, currently composed by different drainages. The large distribution area and variety of habitats along these drainages have a direct influence on the species diversity and their high level of endemism. However, this region has been suffered intense exploration and loss of habitat due to anthropic actions. The present study aimed to identify Operational Taxonomic Units (OTUs) of the Loricariidae and to delimit ecoregions through their distribution patterns. A total of 499 partial sequences of the mitochondrial COI gene were analyzed, belonging to 47 Loricariidae species. 58 OTUs were delimited along 31 drainages of Southeastern and Southern coastal revealing a previously unrecognized genetic diversity for some groups. The 31 drainages based on Parsimony Analysis of Endemicity (PAE), were divided in five groups, characterizing areas that are favorable to the delimitation of ecoregions. The Jacuí, Ribeira de Iguape and Paraíba do Sul rivers presented fairly exclusive faunas in relation to morphological and genetic patterns, being essential for preservation. The stream capture and paleoclimatic events are largely responsible for the distribution of the Loricariidae along the drainages. / Resumo: Os rios costeiros da região Sul e Sudeste do Brasil fazem parte do complexo hidrográfico da bacia do Leste, que abriga diferentes drenagens isoladas atualmente, entre as quais destacamse, na região Sul e Sudeste as do Paraíba do Sul, Ribeira de Iguape, Itajaí e Jacuí. A grande área de distribuição e variedade de habitats ao longo dessas drenagens têm influência direta na diversidade de espécies e no seu alto nível de endemismo. No entanto, essa região vem sofrendo intensa exploração e perda de habitas por ações antrópicas. Trabalhos de zoneamento dessa região vêm sendo realizados com o intuito de fornecer melhores dados para a sua preservação. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo identificar unidades taxonômicas operacionais (OTUs) da família Loricariidae e delimitar ecorregiões através de seus padrões de distribuição. Foram analisadas 499 sequências parciais do gene mitocondrial Citocromo c Oxidase subunidade I (COI), representantes de 47 espécies de Loricariidae e encontradas 58 OTUs distribuídas ao longo de 31 drenagens da região costeira Sul e Sudeste do Brasil, revelando uma diversidade genética antes não reconhecida para alguns grupos. As 31 drenagens, com base na Análise de Parcimônia de Endemismo (PAE), foram divididas em cinco grupos, caracterizando áreas propícias à delimitação de ecorregiões. As drenagens Jacuí, Ribeira de Iguape e Paraíba do Sul, apresentaram faunas bastante exclusivas em relação a padrões morfológicos e genéticos, sendo imprescin... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Natural hybridization is reproduction (without artificial influence) between two or more species/populations which are distinguishable from each other by heritable characters. Natural hybridizations among marine fishes were highly underappreciated due to limited research effort; it seems that this phenomenon occurs more often than is commonly recognized. As hybridization plays an important role in biodiversity processes in the marine environment, detecting hybridization events and investigating hybridization is important to understand and protect biodiversity. The first chapter sets the framework for this disseration study. The Cohesion Species Concept was selected as the working definition of a species for this study as it can handle marine fish hybridization events. The concept does not require restrictive species boundaries. A general history and background of natural hybridization in marine fishes is reviewed during in chapter as well. Four marine fish hybridization cases were examed and documented in Chapters 2 to 5. In each case study, at least one diagnostic nuclear marker, screened from among ~14 candidate markers, was found to discriminate the putative hybridizing parent species. To further investigate genetic evidence to support the hybrid status for each hybrid offspring in each case, haploweb analysis on diagnostic markers (nuclear and/or mitochondrial) and the DAPC/PCA analysis on microsatellite data were used. By combining the genetic evidences, morphological traits, and ecological observations together, the potential reasons that triggered each hybridization events and the potential genetic/ecology effects could be discussed. In the last chapter, sequences from 82 pairs of hybridizing parents species (for which COI barcoding sequences were available either on GenBank or in our lab) were collected. By comparing the COI fragment p-distance between each hybridizing parent species, some general questions about marine fish hybridization were discussed: Is there any correlation between genetic similarity and the potential for hybridization in marine fishes? In some particular geographic locations that have the existence of several different hybridization reports, are the species involved in hybridization among those reports all closely related or distantly related? Can any associations between parent species’ similarities and hybrid spots be found?

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Final Hugo.pdf: 1981769 bytes, checksum: 0f3cf22d17120d73b392f22413e85375 (MD5) Previous issue date: 2007-08-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The vulvovaginal candidiasis (VVC) it is one of the most frequent vaginal infections. The yeasts of the genus Candida are the etiologic agents of this infection, being Candida albicans the majority responsible. However, an increase has been verifying in the incidence of infections caused by other species ( C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis and C. krusei). With intention of presenting an inclination for the process of identification of Candida's five species, commonly isolated of the vulva and vagina, it was made the analysis of species - specific molecular markers for the region ITS1 -5.8S-ITS2, of the rDNA. The analysis of the nucleotides sequences of that region came quite conserved for the strains of a same species and, parallel, divergent among the species of the genus. The markers were translated in nucleotides segments, of the whic h it was possible to develop species -specific oligonucleotides technically proper, besides ranches enzymatic inter and intra -specific capable of to identify/differentiate Candida's species. A parallel analysis of the " fingerprint ", generated by simple PCR, it verified the inadequability of the use of the universal oligonucleotídeos ITS1, ITS2, ITS3 and ITS4 for the identification of those species. In a contrary way, the developed species -specific oligonucleotides came efficient corroborating, in practice, with the hypothesis presented in this work. Restriction enzymes selected for the differentiation of Candida's species they constitute an alternative to be explored hereafter, in experiments of PCR-RFLP. / A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma das mais freqüentes infecções vaginais. As leveduras do gênero Candida são os agentes etiológicos desta infecção, sendo Candida albicans a responsável majoritária. Contudo, tem -se verificado um aumento na incidência de infecções causadas por outras espécies (C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. krusei). Com intuito de apresentar um viés para o processo de identificação das cinco espécies de Candida, comumente isoladas da vulv a e vagina, foi feita a análise de marcadores moleculares espécie-específicos para a região ITS1-5.8S-ITS2, do rDNA. A análise das seqüências nucleotídicas dessa região apresentou-se bastante conservada para as cepas de uma mesma espécie e, paralelamente, divergente entre as espécies do gênero. Os marcadores se traduziram em segmentos nucleotídicos, dos quais foi possível dese nvolver oligonucleotídeos espécie-específicos tecnicamente apropiados, além de sítios enzimáticos inter e intraespecíficos capazes de identificar/diferenciar as espécies de Candida. Uma análise paralela do fingerprint , gerado por simples PCR, constatou a inadequabilidade do uso dos oligonucleotídeos universais ITS1, ITS2, ITS3 e ITS4 para a identificação dessas espécies. De forma contrária, os oligonucleotídeos espécie -específicos desenvolvidos apresentaram-se eficientes corroborando, na prática, com a hipótese apresentada neste trabalho . Enzimas de restrição selecionadas para a diferenciação das espécies de Candida constituem uma alternativa a ser explorada futuramente, em experimentos de PCR -RFLP.

Orientador: Reinaldo José Silva / Resumo: Trematódeos do gênero Synthesium infectam o intestino de diversas famílias de odontocetos em todo o mundo. No entanto, a identificação e o status taxonômico de Synthesium ainda são confusos e, principalmente, baseados em análises morfológicas. As informações genéticas ainda são excassas. O presente estudo teve como objetivo investigar a diversidade de parasitos intestinais do gênero Synthesium colhidos de diferentes odontocetos, através de comparações morfológicas e moleculares. Foram estudados parasitos de golfinhos encontrados mortos em praias ou acidentalmente capturados em redes de pesca de diferentes regiões. Durante a necropsia, o intestino delgado foi removido e armazenado a -20°C. Posteriormente, os intestinos foram abertos, lavados em água corrente sobre peneira de 150 μm e o conteúdo examinado sob estereomicroscópio. Os trematódeos encontrados foram fixados e preservados em etanol 70% para análises morfológicas e moleculares. Os trematódeos foram preparados em lâminas temporárias e as análises morfométricas diagnósticas foram feitas em um sistema computadorizado para análise de imagens. O DNA genômico dos trematódeos foi extraído e amplificado utilizando-se primers com alvo no DNA ribossomal (menor subunidade do DNA ribossomal - gene SSU - e região intergênica - ITS1) e DNA mitocondrial (nicotinamida dinucleotídeo dehidrogenase subunidade 3 - gene ND3 - e citocromo c oxidase subunidade I - gene COI). Os resultados morfológicos e moleculares apontam a existência de p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

No Brasil, o cultivo de ameixeira tem atingido significativa importância econômica em termos de rentabilidade. Embora rentável, a cultura exige cuidados constantes em relação aos danos provocados por doenças. Entre elas, o \'amarelo\', causado por fitoplasmas, tem se mostrado como uma doença de relevância nos países produtores desta fruta. Em pomares comerciais localizados em Paranapanema-SP, foram observadas ameixeiras (Prunus salicina) exibindo sintomas típicos de \'amarelos\', caracterizados por superbrotamento de ramos, redução no comprimento de entrenós, além de amarelecimento, deformação e redução do limbo foliar. Com objetivo de identificar o fitoplasma e determinar o modelo de colonização do hospedeiro pelo patógeno foi desenvolvido o presente estudo. Para isto, em três pomares, foram amostradas plantas sintomáticas, assintomáticas e sadias, pertencentes às variedades Gulfblaze e Azteca. O DNA total foi extraído de folhas e ramos e usado em duplo PCR com os iniciadores R16mF2/mR1 e R16F2n/R2, visando a detecção do fitoplasma. Os resultados confirmaram a presença de fitoplasma pela amplificação de fragmentos de DNA de 1,2 kb do gene 16S rRNA. Os produtos de PCR gerados por dez isolados de fitoplasmas de cada variedade foram clonados e três clones de cada isolado foram sequenciados. Uma vez que nenhum polimorfismo foi encontrado, uma sequência consenso foi selecionada para cada isolado e um isolado foi escolhido como representativo para cada variedade. Estas sequências foram designadas por PlY-BR01 e PlY-BR02, com 1.246 pb, e depositadas no GenBank sob os números de acesso KF499086 e KF499087, respectivamente. A sequência do 16S rRNA do fitoplasma da ameixeira apresentou 100% de identidade com o fitoplasma representante do grupo 16SrI-B (AY265208). A análise de RFLP virtual e o cálculo do coeficiente de similaridade, permitiram classificar o fitoplasma da ameixeira no grupo 16SrI-B. A análise filogenética revelou que o mesmo está estritamente relacionado ao subgrupo 16SrI-B. No estudo da colonização das plantas pelo patógeno, amostras da copa e raiz foram coletadas mensalmente, durante um ano, de plantas infectadas das variedades Gulfblaze e Azteca. O DNA total foi extraído e submetido ao PCR em Tempo Real com os iniciadores UniRNAForward/UniRNAReverse, para quantificar o fitoplasma nos tecidos do hospedeiro. O fitoplasma foi detectado tanto em amostras de copa como de raiz, em todas as árvores infectadas de ambas as variedades. A concentração do mesmo nos tecidos vegetais variou de 5,77x105 a 1,93x109 e 6,18x105 a 3,92x109 N°cópias/100 ng de DNA total, na copa e na raiz, respectivamente. O experimento mostrou uma flutuação sazonal na concentração do fitoplasma, sendo as maiores concentrações encontradas no verão, embora o fitoplasma tenha permanecido na parte aérea do hospedeiro mesmo no período mais frio, que compreende a fase de dormência da planta. Com base nestes resultados, ficou evidente que as amostras retiradas da copa e coletadas durante o período mais quente do ano são as mais adequadas para os procedimentos de detecção do fitoplasma, visando confirmar a diagnose feita com base na sintomatologia. / In Brazil, the cultivation of plum trees has achieved significant economic importance in terms of profitability. Although profitable, the culture demands attention in relation to damages provoked by diseases. Among them, the \'yellow\', caused by phytoplasmas, is a relevant disease present in the plum producing countries. In commercial orchards located in Paranapanema-SP region, were observed plum trees (Prunus salicina) exhibiting typical symptoms of \'yellow\', characterized by intense shoot proliferation, shortened internodes, generalized yellowing, leaf malformation and small leaves. The present study was conducted in order to identify the phytoplasma associated with symptomatic plants and determine the pattern of host colonization by the pathogen. Therefore, were sampled symptomatic, asymptomatic and healthy plants of the varieties Gulfblaze and Azteca, grown in three commercial orchards. Total DNA was extracted from leaves and shoots and submitted to nested PCR primed with R16mF2/mR1 and R16F2n/R2, in order to detect phytoplasma. The results confirmed the presence of phytoplasma by amplification of DNA fragments of 1.2 kb from 16S rRNA gene. The PCR products generated by ten phytoplasma isolates of each variety were cloned and three clones of each isolate were sequenced. Since no polymorphism was found, a consensus sequence was selected for each isolate and an isolate was chosen as representative for each variety. These sequences were designated by PlYBR01 and PlY-BR02, with 1,246 bp, and deposited in GenBank under the accession numbers KF499086 and KF499087, respectively. The sequence of the 16S rRNA of the phytoplasma founded in plum trees showed 100% identity with the phytoplasma representative of 16SrI-B group (AY265208). The virtual RFLP analysis and the calculation of the similarity coefficient, allowed classify the phytoplasma present in plum trees as a member of 16SrI-B group. Phylogenetic analysis supported that this phytoplasma is closed related to the 16SrI-B subgroup. In the study about plant colonization, the samples from leaves, shoots and root were monthly collected, for one year, from the infected plants of the varieties Gulfblaze and Azteca. Total DNA was extracted and submitted to the Real Time PCR with primers UniRNAForward/UniRNAReverse, in order to quantify phytoplasma in host tissues. The phytoplasma was detected in both aerial parts and roots in all infected trees of the two varieties. The concentration of the pathogen in plant tissues ranged from 5.77 x105 to 1.93 x109 and 6.18 x105 to 3.92 x109 N°copies/100ng total DNA in aerial parts and roots, respectively. The experiment showed a seasonal fluctuation in the concentration of the phytoplasma in plants, with the highest concentrations found in summer, although the phytoplasma have remained in the shoots of the host even in the coldest period, comprising the dormant phase of the plant. Based on these results, it was evident that the samples collected from the aerial parts and during the hottest period of the year are the most appropriate for detection of phytoplasma to confirm the diagnosis based on symptomatology.

Plantas apresentando folhas com deformações do tipo bolhas, menor quantidade de vagens de tamanho reduzido e contendo menor número de sementes, vagens que não completaram a maturação e coloração verde da parte aérea no final do ciclo foram observadas em campos de produção. As plantas foram analisadas visando à detecção de fitoplasmas e a sua identificação molecular. Para isto, o DNA total das plantas amostradas foi submetido ao teste de duplo PCR conduzido com primers específicos para a região do 16S rDNA de fitoplasmas. As amplificações evidenciaram que fitoplasmas estavam presentes em tecidos de plantas sintomáticas. O duplo PCR realizado com primers grupo-específicos revelou a ocorrência de fitoplasmas afiliados aos grupos 16SrI e 16SrIII. As análises virtuais de RFLP, baseadas no sequenciamento da referida região genômica, permitiram identificar um dos fitoplasmas como pertencente ao subgrupo 16SrI-B. Os valores de coeficientes de similaridade, calculados com base nos padrões de restrição gerados in silico por 17 enzimas, confirmaram a identidade deste fitoplasma. Ainda, mapas de restrição mostraram que o fitoplasma encontrado em plantas de soja apresentava sítios putativos de restrição idênticos a um fitoplasma típico do grupo 16SrI-B. A análise filogenética, envolvendo o fitoplasma alvo deste estudo e fitoplasmas representantes de alguns grupos e subgrupos relatados no Brasil, mostrou que o fitoplasma da soja estava estritamente relacionado com aqueles componentes do grupo 16SrI. O fitoplasma em estudo emergiu do mesmo ramo da árvore filogenética também compartilhado por fitoplasmas do grupo 16SrI, confirmando os resultados dos demais testes moleculares. Os resultados gerados neste trabalho evidenciaram que a soja pode ser considerada como mais um hospedeiro de fitoplasmas pertencentes aos grupos 16SrI e 16SrIII, os quais tem sido relatados em associação com diversas doenças de plantas que ocorrem no Brasil. Este estudo também gera informações que podem contribuir para aumentar os conhecimentos sobre este emergente grupo de agentes causais de doença. / Plants exhibiting leaf deformation type bubbles, low quantities of pods of reduced size containing few seeds, pods not mature, and green color of stem and leaves in the end of crop growth were observed in commercial fields. The plants were tested for the detection of phytoplasmas and their molecular identification. For this, the total DNA of plants sampled was submitted to nested PCR assays conducted with universal primers for amplification of a fragment corresponding to the 16S rDNA of phytoplasmas. The amplifications revealed the presence of phytoplasmas in tissues of symptomatic plants. For identification, nested PCR performed with group-specific primers demonstrated the occurrence of phytoplasmas affiliated to the groups 16SrI and 16SrIII. The virtual RFLP analysis, based on the sequencing of DNA fragments generated from nested PCR with universal primers, allowed the identification of a phytoplasma belonging to the subgroup 16SrI-B. The values of similarity coefficients, calculated on the basis of restriction patterns generated in silico for 17 enzymes, confirmed the identity of this phytoplasma. Furthermore, restriction maps showed that the phytoplasma found in soybean plants had putative restriction sites identical to those phytoplasma of the group 16SI-B. Phylogenetic analysis, involving the phytoplasma identified in the present study and representatives of some groups and subgroups previously reported in Brazil, showed that the soybean phytoplasma was closely related to phytoplasmas belonging to group 16SrI. The studied phytoplasma and phytoplasmas belonging to group 16SrI emerged from the same branch, confirming the results obtained by PCR and RFLP analysis. Also, based on the results, soybean could be considered as a host for phytoplasmas belonging to the group 16SrI and 16SrIII, which has been reported in association with various diseases that occur in Brazil. The present study may contribute to improve the knowledge about this emerging group of causal agents of disease.