PEREIRA, Samuel Arruda Rodrigues. Adenovírus em infecções respiratórias agudas infantis em Fortaleza-Ce, de 2001 a 2013. 2014. 84 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T16:03:18Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_sarpereira.pdf: 1580211 bytes, checksum: 9d5e0e702f11da8e7784d09fe1eea6f8 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T16:31:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_sarpereira.pdf: 1580211 bytes, checksum: 9d5e0e702f11da8e7784d09fe1eea6f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T16:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_sarpereira.pdf: 1580211 bytes, checksum: 9d5e0e702f11da8e7784d09fe1eea6f8 (MD5) Previous issue date: 2014 / 4 ABSTRACT Human adenovirus (HAdV) is commonly viral agent associated with infections of the respiratory tract, both upper and lower, mainly in children under the age of five. HAdV are cl assified into seven species (A - G) and divided into 54 types. Hexon protein is primarily responsible for inter - and intra - group antigenic variation of the virus. The aim s of this study ware to characterize the periods of circulation and the diversity of species and types of HAdV found in Fortaleza, Ceará - Brazil, for 150 consecutive months (from January 2001 to June 2013). Indirect immunofluorescence assay (IFA) was used for the detection o f HAdV, respiratory syncytial virus, influenza A and B, parainfluenza virus 1, 2 and 3; and direct immunofluorescence assay (DFA) was used for detection of human metapneumovirus (HMPV). PCR and nested PCR followed by sequencing the six hypervariable region s of the hexon gene were used to characterize the species and types of HAdV. HAdV were detected 290 (3.41%) of the 8,517 samples, 60 (20.69%) of those found in coinfection with one, two or three viruses. A total of 190 (65,52%) HAdV were molecularly charac terized: 162 HAdV belonging to species B (85.72%), 21 to HAdV - C (11.11%) and 6 to HAdV - 3 (3, 17%), getting a strain without identification. The species circulated throughout the period the predominance of species B in almost all years analyzed. Seven diff erent types were identified circulating in Fortaleza during the analysis period. The predominant types were 3 (67.73%) and 7 (17.80%). HAdV - 3 was found in all the years and the HAdV - 7 was not observed in years 2006, 2010 and 2011. Only in 2011, all kinds o f species identified C circulated, and the only representative of the species and the HAdV - 4, began to be identified in our population only from 2007. Better understanding of the circulation of HAdV can be achieved if the monitoring is continuous and asso ciated with the use of methods of greater sensitivity in the detection of these viruses. / O adenovírus humano (ADVh) é um agente viral comumente relacionado a infecções do trato respiratório, tanto superior quanto inferior, principalmente em crianças com idade inferior a cinco anos. Os ADVh são classificados em sete espécie (A-G) e divididos em 54 tipos. A proteína hexon é a principal responsável pela variação antigênica inter e intragrupos desse vírus. O objetivo desse estudo foi caracterizar os períodos de circulação e a diversidade de espécie e tipos de ADVh encontrados em Fortaleza, Ceará – Brasil, durante 150 meses consecutivos (janeiro de 2001 a junho de 2013). A imunofluorescência indireta (IFI) foi utilizada para a detecção dos ADVh, vírus sincicial respiratório, influenza A e B, parainfluenza 1, 2 e 3, já a imunofluorescência direta (IFD) foi utilizado na detecção do metapneumovírus humano (MPVh) . A PCR e Nested-PCR seguida do sequenciamento das seis primeiras regiões hipervariável do gene Hexon foram utilizadas para caracterizar as espécies e tipos dos ADVh. Os ADVh foram detectados 290 (3,41%) das 8.517 amostras, sendo 60 (20,69%) destas encontradas em coinfecção com um, dois ou três vírus. Um total de 190 (65,52%) ADVh foram molecularmente caracterizados, sendo 162 pertencente à espécie ADVh-B (85,72%), 21 à ADVh-C (11,11%) e 6 à ADVh-E (3,17%), ficando um cepa sem identificação. As espécies circularam durante todo o período analisados sendo observado o predomínio da espécie B em quase todos os anos. Sete diferentes tipos foram identificados circulando em Fortaleza durante o período analisado. Os tipos predominantes foram o 3 (67,73%) e o 7 (17,80%). O ADVh-3 foi encontrado em todos os anos, já o ADVh-7 não foi observado nos anos de 2006, 2010 e 2011. Somente em 2011 todos os tipos identificados da espécie C circularam, e o único representante da espécie E, o ADVh-4, começou a ser identificado na nossa população apenas a partir de 2007. O melhor conhecimento da circulação de ADVh poderá ser alcançado se a vigilância for contínua e associada ao uso de métodos de maior sensibilidade na detecção desses vírus.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Grandes avanços no desenvolvimento de metodologias laboratoriais para a investigação de vírus respiratórios tem ocorrido nos últimos anos. No primeiro experimento, mostramos que as técnicas de RT-PCR, "shell vial" e isolamento viral em cultura de células obtiveram limites de detecção de Influenza A e B comparáveis, mas todos os testes rápidos comerciais avaliados tiveram baixo desempenho. Em segundo experimento, foram comparadas diferentes técnicas para a detecção de vírus respiratórios em 412 amostras de lavado nasal coletados de adultos com infecção respiratória aguda (2001-¬2003). As técnicas de RT-PCR e imunofluorescência direta (IFD) foram comparadas com 0 isolamento de Influenza A e B em cultura de células. A concordância geral entre os três ensaios foi de 96 por cento, sendo a sensibilidade obtida para a RT-PCR de 92,3 por cento e a especificidade de 98,5 por cento e para a IFD os valores de 93,6 por cento e 97,2 por cento, respectivamente. Para a detecção de Adenovírus foram comparados os testes de PCR, nested-PCR e IFD, sendo obtida positividade (4,1 por cento) somente na nested-PCR. Amostras negativas nos ensaios anteriores foram submetidas a detecção de Metapneumovirus humano por imunofluorescência indireta (IFI) em comparação com a RT-PCR e demonstrou sensibilidade de 45 por cento. Os ensaios de IFD e RT-PCR demonstraram boa ap1icação na rotina diagnóstica de Influenza, mas os testes rápidos devem ser aplicados com cautela. Para a detecção de Adenovírus e Metapneumovirus humano os ensaios de imunofluorescência obtiveram baixos desempenhos, devendo ser aplicado as metodologias moleculares para esse vírus / Laboratory tests performance for respiratory viruses has shown substantial increase in the past years. A first step experiment for comparison of influenza virus limit of detection resulted in similar values for RT-PCR, shell vial and cell cultures methods, but worse values for all commercial rapid antigen detections kits evaluated with same control strains. In a second step, 412 nasal washes from adults presenting with acute respiratory symptoms (2001-2003) were submitted to comparative studies for respiratory viruses detection. A duplex RT-PCR and direct immunofluorescence (DFA) assays were compared to Influenza A and B virus isolation (reference method) in MDCK cells. The overall concordance between the three assays was 96%. RT-PCR reached 92.3% sensitivity and 98.5% specificity and for DFA the corresponding values were 93.6% and 97.2%, respectively. A PCR, nested-PCR, and DFA assays were evaluated for detection of Adenovirus and positivity (4.1%) were only obtained on Nested-PCR. Selected negative samples were evaluated for human Metapneumovirus by indirect fluorescence assay (IFA) in comparison with RT-PCR and sensitivity was 45%. DFA and RT-PCR could be applied in different routine sets for influenza diagnosis and rapid antigen detection kits may be used with caution. For Adenovirus and Metapneumovirus fluorescence assays detection were disappointed and molecular tests are recommended for these viruses. / FAPESP: 01/125796 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

MESQUITA, Jacó Ricarte Lima de. Perfil clínico-epidemiológico de Infecções respiratórias agudas causadas por adenovírus em crianças atendidas em hospital de referência da cidade de Fortaleza - CE. 2007. 129 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T16:52:46Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_jrlmesquita.pdf: 2245768 bytes, checksum: 086a0b17335d4e5f2a595a2fb4c67791 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:24:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_jrlmesquita.pdf: 2245768 bytes, checksum: 086a0b17335d4e5f2a595a2fb4c67791 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_jrlmesquita.pdf: 2245768 bytes, checksum: 086a0b17335d4e5f2a595a2fb4c67791 (MD5) Previous issue date: 2007 / Adenoviruses (Ad) are important etiological agents of acute respiratory infections (ARI) in children, particularly between six months and five years old. This was a retrospective study, whose objectives were: to perform clinical and epidemiologic profile of adenoviral respiratory infections in children attended in Hospital Infantil Albert Sabin, in the city of Fortaleza, from January 2001 to December 2006; to observe the detection frequency of Ad in cases of ARI in children attended in that hospital; to describe the main clinical features of adenoviral respiratory infections; to search for the existence of a seasonal pattern of adenoviral infections in the city of Fortaleza; to determine the isolation rate of Ad in HEp-2 cell lines inoculated with samples of nasopharyngeal secretions (NPS) considered positive to Ad by indirect immunofluorescence (IIF); and to create a collection of Ad strains for future studies on antigenic and genomic diversity of these agents. NPS samples of 3,070 children with ARI up to seven days of the onset of symptoms were collected. IIF was applied to all of the samples, and among them, 54 were positive to Ad. Forty one of those positive samples were inoculated into HEp-2 cells, resulting in 32 viral isolations. Other 103 randomly choosen negative samples were also inoculated, resulting in more three isolations, reaching the number of 57 confirmed cases of Ad infections. The detection frequency of Ad was 1.86% of total number of cases of ARI and 6.1% of cases of viral ARI. It was not observed any seasonal pattern or correlation to rainy or dry season. Most cases of adenoviral ARI occurred in children aged seven to 24 months, representing 63.15% of cases. Ad ARI was observed mainly in children attended in the out-patient facility (50.88%), and the predominant diagnosis was upper respiratory tract infection (70.18%). The main clinical features in Ad patients were fever, cough, rhinorrhea, anorexia, vomiting or diarrhea, nasal obstruction, and dyspnea. The main therapeutic management for Ad patients was use of nebulization (about 42% of patients) / Os adenovírus (Ad) são agentes importantes de infecções respiratórias agudas (IRAs) em crianças, especialmente entre seis meses e cinco anos de idade. Este foi um estudo retrospectivo que teve como objetivos: estabelecer o perfil epidemiológico e clínico das infecções respiratórias agudas causadas por Ad em crianças atendidas no Hospital Infantil Albert Sabin, na cidade de Fortaleza, no período de janeiro de 2001 a dezembro de 2006; observar a freqüência de detecção de Ad em casos de IRAs em crianças atendidas nesse hospital; descrever as principais características clínicas das infecções respiratórias causadas por Ad; pesquisar a existência de padrão de sazonalidade do Ad na cidade de Fortaleza; determinar a taxa de isolamento do Ad em cultura de células HEp-2 inoculadas com amostras de secreções de nasofaringe (SNF) consideradas positivas para Ad por imunofluorescência indireta (IFI); e criar um banco de cepas de Ad para futuros estudos sobre diversidade antigênica e genômica desses agentes. Foram coletadas nesse período, amostras de SNF de 3070 crianças com até sete dias de sintomas de IRA. Todas as amostras foram submetidas a IFI e, dessas, 54 se mostraram positivas para Ad. Quarenta e uma dessas amostras positivas foram inoculadas em monocamadas de células HEp-2, obtendo-se isolamento viral em 32 delas. Outras 103 amostras negativas por IFI, escolhidas aleatoriamente, foram inoculadas, resultando em três isolamentos adicionais, totalizando 57 casos confirmados de infecção por Ad. A freqüência de detecção de Ad foi de 1,86% em relação ao total de casos de IRAs e 6,1% das IRAs virais. Não foi observado um padrão de sazonalidade nem correlação com período chuvoso ou seco. A maior parte das IRAs por Ad ocorreu em crianças na faixa etária entre sete e 24 meses com 63,15% dos casos. As IRAs por Ad foram observadas principalmente em crianças atendidas em ambulatórios (50,88%), e o diagnóstico predominante foi a infecção de vias aéreas superiores (70,18%). Os principais sintomas e sinais apresentados pelos pacientes com IRA por Ad foram febre, tosse, coriza, anorexia, vômitos e/ou diarréia, obstrução nasal e dispnéia. A principal conduta terapêutica aplicada em casos de IRAs por Ad foi o uso de aerossol / salbutamol (42,11%)

Doenças infecciosas veiculadas pela água são causa comum de enfermidades em seres humanos no mundo inteiro. Dentre os patógenos causadores destas doenças, os vírus merecem destaque, pois possuem a capacidade de sobreviver em ambientes aquáticos e de permanecer infectantes por meses. A avaliação da balneabilidade das águas brasileiras é monitorada através da densidade de coliformes termotolerantes (CT), classificando as águas de recreação em próprias ou impróprias. Este trabalho tem como objetivo detectar e quantificar genomas de Adenovirus (AdV) e Enterovirus (EV) em amostras de água das praias de Ipanema e do Lami em Porto Alegre – RS e avaliar as condições de balneabilidade através da quantificação de CT. A metodologia utilizada foi reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para os vírus e o método de tubos múltiplos para quantificação de CT. Entre os meses de novembro de 2011 e abril de 2012, foram coletadas 36 amostras de água: 18 amostras de Ipanema e 18 da praia do Lami. Em 30 (83,3%) das 36 amostras coletadas foi detectada a presença de genomas virais. Genoma de AdV foi detectado em 28 (77,8%) amostras, enquanto de EV foi detectado apenas em 8 amostras (22,2%). Em contraste com as baixas concentrações de CT, a pesquisa de AdV e EV demonstrou alta positividade (83,3%), o que demonstra a baixa correlação entre os micro-organismos utilizados como marcadores fecais e a presença de genomas virais em amostras de água. / Waterborne diseases are a common cause of illness in humans worldwide. Among the pathogens causing these diseases, the viruses are noteworthy because they have the ability to survive in aquatic environments and remain infective for months. In Brazil the evaluation of recreational waters is made by monitoring the density of fecal coliform (FC), classifying recreational waters in appropriate or inappropriate. This work aims to detect and quantify genomes of Adenovirus (AdV) and Enterovirus (EV) in water samples from Ipanema and Lami beaches in Porto Alegre - RS and assess the conditions of bathing by quantifying FC. The methodology used was real time polymerase chain reaction (qPCR) for virus and multiple tube technique for FC. Between the months of November 2011 and April 2012 were collected 36 water samples: 18 samples in Ipanema and 18 in Lami. In 30 (83.3%) of the 36 samples the presence of viral genomes was detected. AdV genome was detected in 28 (77.8%) samples, while the EV was only detected in 8 samples (22.2%). In contrast to the low concentrations of FC, research of EV and AdV showed a high positivity (83.3%), which demonstrates the low correlation between micro-organisms used as fecal markers and the presence of viral genomes in water samples.

Doenças infecciosas veiculadas pela água são causa comum de enfermidades em seres humanos no mundo inteiro. Dentre os patógenos causadores destas doenças, os vírus merecem destaque, pois possuem a capacidade de sobreviver em ambientes aquáticos e de permanecer infectantes por meses. A avaliação da balneabilidade das águas brasileiras é monitorada através da densidade de coliformes termotolerantes (CT), classificando as águas de recreação em próprias ou impróprias. Este trabalho tem como objetivo detectar e quantificar genomas de Adenovirus (AdV) e Enterovirus (EV) em amostras de água das praias de Ipanema e do Lami em Porto Alegre – RS e avaliar as condições de balneabilidade através da quantificação de CT. A metodologia utilizada foi reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para os vírus e o método de tubos múltiplos para quantificação de CT. Entre os meses de novembro de 2011 e abril de 2012, foram coletadas 36 amostras de água: 18 amostras de Ipanema e 18 da praia do Lami. Em 30 (83,3%) das 36 amostras coletadas foi detectada a presença de genomas virais. Genoma de AdV foi detectado em 28 (77,8%) amostras, enquanto de EV foi detectado apenas em 8 amostras (22,2%). Em contraste com as baixas concentrações de CT, a pesquisa de AdV e EV demonstrou alta positividade (83,3%), o que demonstra a baixa correlação entre os micro-organismos utilizados como marcadores fecais e a presença de genomas virais em amostras de água. / Waterborne diseases are a common cause of illness in humans worldwide. Among the pathogens causing these diseases, the viruses are noteworthy because they have the ability to survive in aquatic environments and remain infective for months. In Brazil the evaluation of recreational waters is made by monitoring the density of fecal coliform (FC), classifying recreational waters in appropriate or inappropriate. This work aims to detect and quantify genomes of Adenovirus (AdV) and Enterovirus (EV) in water samples from Ipanema and Lami beaches in Porto Alegre - RS and assess the conditions of bathing by quantifying FC. The methodology used was real time polymerase chain reaction (qPCR) for virus and multiple tube technique for FC. Between the months of November 2011 and April 2012 were collected 36 water samples: 18 samples in Ipanema and 18 in Lami. In 30 (83.3%) of the 36 samples the presence of viral genomes was detected. AdV genome was detected in 28 (77.8%) samples, while the EV was only detected in 8 samples (22.2%). In contrast to the low concentrations of FC, research of EV and AdV showed a high positivity (83.3%), which demonstrates the low correlation between micro-organisms used as fecal markers and the presence of viral genomes in water samples.

Doenças infecciosas veiculadas pela água são causa comum de enfermidades em seres humanos no mundo inteiro. Dentre os patógenos causadores destas doenças, os vírus merecem destaque, pois possuem a capacidade de sobreviver em ambientes aquáticos e de permanecer infectantes por meses. A avaliação da balneabilidade das águas brasileiras é monitorada através da densidade de coliformes termotolerantes (CT), classificando as águas de recreação em próprias ou impróprias. Este trabalho tem como objetivo detectar e quantificar genomas de Adenovirus (AdV) e Enterovirus (EV) em amostras de água das praias de Ipanema e do Lami em Porto Alegre – RS e avaliar as condições de balneabilidade através da quantificação de CT. A metodologia utilizada foi reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para os vírus e o método de tubos múltiplos para quantificação de CT. Entre os meses de novembro de 2011 e abril de 2012, foram coletadas 36 amostras de água: 18 amostras de Ipanema e 18 da praia do Lami. Em 30 (83,3%) das 36 amostras coletadas foi detectada a presença de genomas virais. Genoma de AdV foi detectado em 28 (77,8%) amostras, enquanto de EV foi detectado apenas em 8 amostras (22,2%). Em contraste com as baixas concentrações de CT, a pesquisa de AdV e EV demonstrou alta positividade (83,3%), o que demonstra a baixa correlação entre os micro-organismos utilizados como marcadores fecais e a presença de genomas virais em amostras de água. / Waterborne diseases are a common cause of illness in humans worldwide. Among the pathogens causing these diseases, the viruses are noteworthy because they have the ability to survive in aquatic environments and remain infective for months. In Brazil the evaluation of recreational waters is made by monitoring the density of fecal coliform (FC), classifying recreational waters in appropriate or inappropriate. This work aims to detect and quantify genomes of Adenovirus (AdV) and Enterovirus (EV) in water samples from Ipanema and Lami beaches in Porto Alegre - RS and assess the conditions of bathing by quantifying FC. The methodology used was real time polymerase chain reaction (qPCR) for virus and multiple tube technique for FC. Between the months of November 2011 and April 2012 were collected 36 water samples: 18 samples in Ipanema and 18 in Lami. In 30 (83.3%) of the 36 samples the presence of viral genomes was detected. AdV genome was detected in 28 (77.8%) samples, while the EV was only detected in 8 samples (22.2%). In contrast to the low concentrations of FC, research of EV and AdV showed a high positivity (83.3%), which demonstrates the low correlation between micro-organisms used as fecal markers and the presence of viral genomes in water samples.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-03-04T20:33:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 313813.pdf: 1957580 bytes, checksum: c466ffed4187341cf53bf6eaeeb68449 (MD5) / Dentre os patógenos humanos de veiculação hídrica, destacam-se os vírus de transmissão fecal-oral, como é o caso dos adenovírus (HAdV), rotavírus-A (RVA), vírus da hepatite A (HAV) e urino-oral como o poliomavírus (JCPyV). Estes vírus estão envolvidos, principalmente em episódios de gastroenterites, podendo causar ainda infecções respiratórias, conjuntivites, meningite asséptica, encefalites e sérias complicações em pacientes imunocomprometidos, além do que, possuem a característica de serem estáveis e permanecerem longos períodos no ambiente e por isso são apontados como potenciais indicadores ambientais de contaminação por efluentes humanos. Nesse contexto, a hipótese desse estudo foi que os vírus de transmissão fecal e urinária são prevalentes nas águas de consumo humano, não possuem correlação com perfis físico-químicos e de nutrientes, além de possuírem potencial infeccioso. Assim os principais objetivos desse trabalho foram: 1) Estudar a incidência de HAdV, JCPyV, HAV e RVA em águas de mananciais superficiais utilizadas para consumo humano; 2) Analisar a correlação viral com parâmetros físico-químicos e de nutrientes da água; 3) Estudar a relação da sazonalidade com a presença de contaminação viral 4) Avaliar a integridade, infecciosidade e realizar estudos filogenéticos de HAdV nas matrizes aquáticas estudadas. Três sítios de coletas, na cidade de Florianópolis-SC, foram selecionados: Sítio 1) Lagoa do Peri (em quatro Micro-ambientes (MA): i) MA1 centro ii), MA2 local preservado, iii) MA3 local degradado e iv) MA4 local de coleta de água para consumo humano e atividades recreacionais); Sítio 2) Fonte/Nascente natural de água, utilizada para consumo humano sem tratamento prévio e Sítio 3) Solução Alternativa de Abastecimento Coletivo (SAC), água utilizada para abastecimento humano, previamente clorada. Para as análises virais, dois litros de água foram coletados mensalmente, durante um ano e processadas (método de adsorção-eluição e reconcentração em dispositivo Centriprep®). Posteriormente, o material genético foi extraído e a presença e quantificação viral determinada por qPCR. As análises físico-químicas e de nutrientes das águas contemplaram todos os Micro-ambientes da Lagoa do Peri (físico-químicas foram realizadas in situ, utilizando Sonda Multiparâmetros (YSI-85) e as de nutrientes determinadas em laboratório). Os HAdVs detectados nas amostras provenientes do Micro-ambiente 4 da Lagoa do Peri, Fonte/Nascente e da SAC foram avaliados quanto a sua integridade (por meio de tratamento com enzimático com DNAse), infecciosidade (por meio do ensaio de placa de lise (EPL) e por cultura celular integrada ao RT-qPCR (ICC-et-RT-qPCR), bem como submetidos a estudos filogenéticos. Das amostras analisadas 93% (67/72) foram positivas para HAdV, 45,8% (33/72) para RVA, 13,8% (10/72) para JCPyV e 12,5% (9/72) para HAV. A distribuição sazonal viral foi determinada e o HAdV mostrou-se o mais prevalente em todas as estações. Os estudos físico-químicos e de nutrientes nos MAs da Lagoa do Peri não apresentaram diferenças espaciais significativas, concluindo que a lagoa é homogênea em sua coluna d'água. Quanto a correlação viral com parâmetros físico-químicos e de nutrientes, apenas JCPyV e nitrito correlacionaram-se positivamente no MA4. A integridade e infecciosidade de HAdV foi determinada, sendo que nas amostras do MA4 da Lagoa do Peri 83% (10/12) continham partículas íntegras, 66% ( 8/12) infecciosas por EPL e 75% (9/12) infecciosas por ICC-et-RT-qPCR; Na Fonte/Nascente 66% (8/12) continham partículas íntegras, 33% (4/12) infecciosas por EPL e 58% (7/12) infecciosas por ICC-et-RT-qPCR; Na SAC 58% (7/12) continham partículas de HAdV íntegras, 8% (1/12) infecciosas por EPL e 25% (3/12) infecciosas por ICC-et-RT-qPCR. Os estudos filogenéticos de HAdV demonstraram que o sorotipo circulante prevalente foi o 2 (HAdV-2 respiratório). Em conclusão, estes resultados demonstraram a fragilidade do sistema de segurança sanitária, principalmente em águas de mananciais superficiais utilizadas para abastecimento e consumo da população. Frente a ampla distribuição e persistência dos vírus de veiculação hídrica, há necessidade de implementar o monitoramento e remoção viral no processo de potabilização da água, o que traria reflexos positivos na manutenção da saúde humana e ambiental

O controle da infecção por Trypanosoma cruzi dependente da resposta de linfócitos T CD8+. Porém, o parasito faz a indução subótima destes linfócitos, que pode ser corrigida pela vacinação genética. Não se sabe como T. cruzi induz uma resposta ruim dos linfócitos T CD8+, nem como a vacinação reverte esta resposta. Estas questões foram objeto de estudo da presente tese. O envolvimento do imunoproteassomo foi investigado na indução de imunidade in vivo em animais triplamente deficientes das subunidades 1i, 2i e 5i (TKO), indicando que o imunoproteassomo é essencial para o processamento dos epítopos de T. cruzi relacionados à imunidade protetora de linfócitos T CD8+ gerados durante a infecção e na vacinação. Também foi observado que T. cruzi, mas não adenovírus, é capaz de tornar uma resposta ótima de linfócitos transgênicos induzidos in vivo em subótima. A interferência do parasito envolveu a supressão ativa do priming dos linfócitos T CD8+ mediada por linfócitos T CD4+ CD25- Foxp3+ de modo independente de IL-10, mas parcialmente dependente de TGF- e CTLA-4. / The control of infection by Trypanosoma cruzi relies on the response of CD8+ T cells. However, the parasite suboptimally induces these lymphocytes, which can be corrected by genetic vaccination. It is unknown how T. cruzi induces a poor response of CD8+ T cells and how vaccination reverts this. These questions were subject of study in this thesis. The involvement of the immunoproteasome was investigated in the in vivo induction of immunity in mice triply deficient of the subunits β1i, β2i e β5i (TKO), indicating that the immunoproteasome is essential for the processing of T. cruzi epitopes related to the protective immunity of CD8+ T cells generated upon infection and vaccination. Also, it was observed that T. cruzi, and not adenovirus, is capable of turning an optimal response of in vivo-induced transgenic CD8+ T cells into suboptimal. The parasite interference involved the active suppression of CD8+ T cell priming mediated by CD4+ CD25- Foxp3+ lymphocytes, in an IL-10-independent, but TGF-β and CTLA-4 partially dependent manner.

O controle da infecção por Trypanosoma cruzi dependente da resposta de linfócitos T CD8+. Porém, o parasito faz a indução subótima destes linfócitos, que pode ser corrigida pela vacinação genética. Não se sabe como T. cruzi induz uma resposta ruim dos linfócitos T CD8+, nem como a vacinação reverte esta resposta. Estas questões foram objeto de estudo da presente tese. O envolvimento do imunoproteassomo foi investigado na indução de imunidade in vivo em animais triplamente deficientes das subunidades 1i, 2i e 5i (TKO), indicando que o imunoproteassomo é essencial para o processamento dos epítopos de T. cruzi relacionados à imunidade protetora de linfócitos T CD8+ gerados durante a infecção e na vacinação. Também foi observado que T. cruzi, mas não adenovírus, é capaz de tornar uma resposta ótima de linfócitos transgênicos induzidos in vivo em subótima. A interferência do parasito envolveu a supressão ativa do priming dos linfócitos T CD8+ mediada por linfócitos T CD4+ CD25- Foxp3+ de modo independente de IL-10, mas parcialmente dependente de TGF- e CTLA-4. / The control of infection by Trypanosoma cruzi relies on the response of CD8+ T cells. However, the parasite suboptimally induces these lymphocytes, which can be corrected by genetic vaccination. It is unknown how T. cruzi induces a poor response of CD8+ T cells and how vaccination reverts this. These questions were subject of study in this thesis. The involvement of the immunoproteasome was investigated in the in vivo induction of immunity in mice triply deficient of the subunits β1i, β2i e β5i (TKO), indicating that the immunoproteasome is essential for the processing of T. cruzi epitopes related to the protective immunity of CD8+ T cells generated upon infection and vaccination. Also, it was observed that T. cruzi, and not adenovirus, is capable of turning an optimal response of in vivo-induced transgenic CD8+ T cells into suboptimal. The parasite interference involved the active suppression of CD8+ T cell priming mediated by CD4+ CD25- Foxp3+ lymphocytes, in an IL-10-independent, but TGF-β and CTLA-4 partially dependent manner.

Adenovirus humanos são responsáveis por infecção respiratória aguda (IRA) em crianças e adultos, sendo os das espécies B e C mais frequêntes. Com o objetivo de estudar a variabilidade genética de HAdVs, 3087 amostras de aspirado de nasofaringe foram colhidas de crianças, em São Paulo, de 1995 à 2006. A PCR direcionada ao gene VA-RNA detectou 677 adenovírus (22%). O sequenciamento dos genes hexon, fibra e região E3 foram utilizados para determinar os sorotipos e estudar sua variabilidade genética. Dos 677 adenovírus, 69% são da espécie B, 23% da C e 0,7% da E. Variabilidades genéticas foram observadas em todas as regiões estudadas, por meio de mutações, evidenciadas por substituições, recombinações e deleções. Os genes que apresentaram maior variabilidade foram VA-RNA e E3 ORF7.7. Genomas virais de DNA, como dos adenovírus, podem se manter estáveis em condições diversas, contudo, a pressão sofrida por esses genomas, através da resposta imunológica do hospedeiro, fazem com que seu mecanismos evolutivos entrem em operação e variabilidades genéticas sejam observadas. / Human adenoviruses (HAdV) cause acute respiratory disease (ARD) in children and adults, being the adenovirus from species B and C the most frequently detected. With the aim of study the genetic variability of HAdV, 3087 nasopharyngeal aspirate were collected from children in São Paulo, from 1995 to 2006. PCR assay directed to adenovirus VA-RNA gene detected 677 HAdV (22%). Sequencing of the hexon and fiber genes and the E3 region were done to determine the serotypes and study genetic variability. Among the 677 adenoviruses detected 69 % were classified as species B, 23% as species C and 0,7 % as species E. Genetic variability was observed in all studied region, specially at the 7.7Orf of the E3 region and the VA-RNA gene. Genetic modifications were observed as recombination, substitutions and deletions. It is known that viral DNA genomes, as adenovirus, remain genetically stable under a variety of conditions, however, the pressure of the host on these viruses make that their evolutionary mechanisms come to operation and genetic variability are observed.