Resumo: Pseudomonas aeruginosa e uma bacteria gram-negativa responsavel por diversas doencas e manifestacoes clinicas. Sua virulencia permite a infeccao e colonizacao de individuos pertencentes a grupos de risco, como imunocomprometidos, queimados e portadores de fibrose cistica. O presente estudo visa o desenvolvimento de uma vacina a base de Lipopolissacarideo (LPS), antigeno consagrado em diversos protocolos de imunizacao. Este antigeno foi conjugado a proteina, constituindo uma vacina conjugada. Vacinas conjugadas sao imunogenos nao-proteicos que, ao serem ligados a uma proteina, adquirem uma nova propriedade: geracao de memoria imunologica. A proteina utilizada no estudo e o toxoide tetanico (toxina inativada do Clostridium tetani, TT). Ainda, capacita neonatos e criancas a interagirem com um antigeno contra o qual nao responderiam normalmente. A tecnica de conjugacao utilizada foi a aminacao redutiva direta, avaliada como simples e de baixo custo. Atraves da adaptacao do protocolo de Shen e colaboradores, foi possivel conjugar o Lipopolissacarideo ao toxoide tetanico (LPS-TT). Avaliou-se a resposta in vivo atraves de aplicacoes intraperitoneais do imunogenos em camundongos Swiss, atraves de dois protocolos: o primeiro avalia a formacao de anticorpos anti-pseudomonas pela imunizacao com LPS, LPS e TT ou LPS-TT. O segundo avalia a formacao de anticorpos utilizando LPS, LPS e TT, ou LPS-TT apos aplicacao intraperitoneal de bacterina (celula inativada de P. aeruginosa). Os grupos que foram imunizados com LPS e TT e LPS-TT (20 e 40 ƒÊg/ml) apresentaram resposta de anticorpos aglutinantes superior ao controle LPS.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Del mes de enero al mes de octubre del año 2008 en el Servicio de Microbiología del Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyn – ESSALUD, se colectaron 186 cepas de Pseudomonas aeruginosa resistentes al Imipenem (IMP) y al Meropenem (MEM) o con resistencia Intermedia a los dos antibióticos o a uno de ellos. Utilizando el Método Fenotípico de Doble Difusión en Disco con Monodiscos de EDTA; se llegó a detectar 13 cepas de P. aeruginosa positivas para MBLs, correspondiente al 6.99 % de las cepas testadas; de las cuales, el 53.84 % de la sinergia (efecto de la metaloenzima) se manifestó en el disco de Meropenem, el 30.75 % se manifestó en ambos discos (Imipenem y Meropenem) y solo el 15.38 % se manifestó en el disco de Imipenem. El 100 % de cepas de P. aeruginosa en las que se detectó las metaloenzimas provinieron de pacientes hospitalizados, de estos aislados el 69.76 % correspondieron al sexo masculino; el 61. 53 % de casos corresponden a pacientes cuyas edades están entre 70 a 90 años, y sólo el 14.14% de casos fueron en menores de 1 año y jóvenes. Las muestras biológicas en las que aisló a P. aeruginosa productora de MBLs fueron: orina, aspirado bronquial, BAL, herida no operatoria, secreción otica, líquido de diálisis peritoneal y sangre; fue orina en la que se aisló el mayor número de casos: 46. 15 %; en el Servicio de Medicina‐1, se detecto más casos 30.76 %, seguido de Cardiología y UCI con 23.07 %. Se detectó la enzima MBLs en cepas peruanas de Pseudomonas aeruginosa y se estableció la incidencia en 6.99 %, la cual es inferior a las reportadas por otros países, por lo cual se debe hacer estudios multicentricos para establecer la incidencia real. / In the study, 186 samples of Pseudomonas aeruginosa strains resistant to the Imipenem (IMP) and the Meropenem (MEM) or with Intermediate resistance to both antibiotic and one of them were collected in the Service of Microbiology of the Guillemo Almenara Irigoyen National Hospital ‐ ESSALUD from the month of January to the month of October of the year 2008. Using the Phenotypical Method of Double Disc Diffusion with Monodiscs of EDTA; 13 positive strains of Pseudomonas aeruginosas for MBLS were detected (6.99 % of the sampled strains): of them, the 53.85% of the synergy (effect of metal‐enzyme) was present in the disc of Meropenem, the 30.75% was present in both discs (Imipenem and Meropenem) and only the 15.38% was present in the disc of Imipenem. The 100% of the P. aeruginosa strains in which metal‐enzyme was detected belonged to hospitalized patients and the 69.76% of them belonged to masculine sex. The 61.54 % of cases correspond to patients whose ages are between 70 to 90 years, and only the 15.38% of the cases were in minors of 1 year and young people. The biological samples, in which the producing P. aeruginosa of MBLs was isolated, were: urine, inhaled bronchial, BAL, non operating wound, ear secretion, liquid of dialysis peritoneal and blood; but it was in the urine in that the greater number of cases was isolated the 46. 15 %. In the Service of Medicine‐1 were detected mayor number of cases (23.07%) followed for Cardiology and UCI (23.07%). The MBLs enzyme was detected in Pseudomonas aeruginosa peruvian strains. The incident was of 6.99% that is lower tanning the incident reported in other countries. For which Multicentral studies must be done for establish the real incident. / Tesis

A Pseudomonas aeruginosa é um dos principais agentes etiológicos de infecções nosocomiais em todo o mundo. A resistência aos antimicrobianos é um problema crescente na prática clínica, particularmente, com P. aeruginosa, devido a múltiplos mecanismos de resistência intrínseca e extrínseca. Como há uma escassez de novos antibióticos para o tratamento de bacilos Gram-negativos, particularmente com ação anti-Pseudomonas, houve a necessidade de resgatar antigos antibióticos, como as polimixinas. Não existem ensaios clínicos randomizados avaliando a eficácia das polimixinas contra as bactérias multirresistentes. Estes sugerem que as polimixinas tenham eficácia aceitável, porém há limitações que impedem de chegar a uma conclusão definitiva, como a co-administração de outros antibióticos e a falta de um grupo controle. Existem alguns estudos comparativos com colistina (polimixina E) e outros antibióticos. Apenas um estudo comparou ambas polimixinas (B e E) com outros antimicrobianos para o tratamento de diversas infecções causadas por Acinetobacter baumannii. As bacteremias são infecções graves com alta mortalidade e vários estudos já demonstraram que quando são causadas por P. aeruginosa a morbi-mortalidade é bastante importante. Neste estudo comparamos a eficácia da polimixina B endovenosa com outros antibióticos para o tratamento de bacteremia por Pseudomonas aeruginosa. Um total de 255 pacientes tiveram pelo menos um episódio de bacteremia, mas apenas 133 pacientes puderam ser incluídos no estudo. Vários pacientes foram excluídos porque foram ao óbito em menos de 48 horas após a coleta das hemoculturas ou receberam menos que 48 horas de tratamento. Pode-se certamente deduzir daí a gravidade deste tipo de infecção. Este estudo é o primeiro acessando a eficácia da polimixina B contra antibióticos comparadores e o primeiro a acessar apenas infecções bacterêmicas. Os pacientes tratados com polimixina B começaram tratamento apropriado mais tarde que o grupo comparador, mas esta variável não foi estatisticamente significativa. Nós também demonstramos que a terapia com polimixina B foi associada a uma maior incidência de toxicidade renal do que os antibióticos comparados (11/45, 24,4% versus 4/88, 4,5%) assim como foi mostrado num recente estudo de coorte comparativo e sugerido em outros estudos anteriores. Nosso estudo mostrou que o tratamento da bacteremia por P. aeruginosa com polimixina B tem menor eficácia, demonstrado por apresentar maior mortalidade hospitalar, comparado com outros antibióticos, 66,7% (30/45) e 28,4% (25/88), respectivamente. O risco de mortalidade hospitalar foi quase o dobro para os pacientes tratados com polimixina B. Embora não demonstrado no nosso estudo, a optimização da dosagem da polimixina B poderia diminuir este efeito prejudicial.

FAZANARO, F. Avaliação in vitro da interferência de lectinas vegetais e do diterpeno casbano isolado de Croton nepataefolius sobre o crescimento de formas planctônicas e biofilmes de Pseudomonas aeruginosa. 2010. 67 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2010. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-08-23T13:11:44Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_ffazanaro.pdf: 1292003 bytes, checksum: 9138c1913c4c03fbc9c6f15a3e3b4a63 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-26T15:58:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_ffazanaro.pdf: 1292003 bytes, checksum: 9138c1913c4c03fbc9c6f15a3e3b4a63 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T15:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_ffazanaro.pdf: 1292003 bytes, checksum: 9138c1913c4c03fbc9c6f15a3e3b4a63 (MD5) Previous issue date: 2010 / This work shows the biological activities of lectins isolated from Vatairea macrocarpa and Vatairea guianensis seeds and the vegetable compound diterpen casban, isolated from Croton nepetaefolius on the growth of Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027) that causes otites externa. The in vitro activity of the two lectins and vegetable compound casbane diterpene were compared on cultures of P. aeruginosa in polystyrene microplates. The bacterial cells were tested such in planktonic as in biofilm forms. The lectins tested were not capable to inhibit the growth and biofilm production of P. aeruginosa in the experimental conditions. On the other hand, the casbane diterpene was capable to inhibit the growth of planctonic forms of P. aeruginosa at the concentrations of 500, 250 and 125 µg/mL. However, the inhibition of biofilm production was not observed at the same concentrations. The casbane diterpene isolated from Croton nepetaefolius can be used, after the realization of other studies, as an antibiotic biotechnological tool on planktonic forms of P. aeruginosa / Este trabalho mostra as atividades biológicas de lectinas isoladas de sementes de Vatairea macrocarpa e de Vatairea guianensis e do composto vegetal diterpeno casbano, isolado do Croton nepetaefolius, sobre o crescimento de Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), causadora de otite externa. Comparou-se a ação in vitro das duas lectinas e do composto vegetal diterpeno casbano sobre culturas de P. aeruginosa em placas de poliestireno. As células bacterianas foram testadas tanto em sua forma planctônica como na de biofilme. As lectinas testadas não foram capazes de inibir o crescimento da forma planctônica e a formação de biofilme da P. aeruginosa nas condições experimentais. Por outro lado, o diterpeno casbano foi capaz de inibir o crescimento de P. aeruginosa na forma planctônica, nas concentrações de 500, 250 e 125 µg/mL. Entretanto, não foi observada inibição da formação do biofilme da P. aeruginosa nas concentrações utilizadas neste estudo. O diterpeno casbano isolado de Croton nepetaefolius poderá ser utilizado, após a realização de outros estudos, como ferramenta biotecnológica antimicrobiana sobre as formas planctônicas de P. aeruginosa

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / No Hospital São Paulo, um hospital terciario de 600 leitos, a presenca de P. aeruginosa produtora de metalo-β-lactamase tem sido encontrada desde 2000 (a primeira, SPM-1, foi isolada em 1997). Durante a periodo entre 2000 e 2001, 25 das 128 amostras avaliadas produziam SPM au IMP (88 por cento e 12 por cento das P. aeruginosa resistentes a imipenem, respectivamente). Durante o ano de 2004, as 10 primeiras amostras consecutivas de P. aeruginosa isoladas par mes foram selecionadas para a producao de MβL. Um total de 120 isolados foram submetidas ao teste de hidro1ise contra imipenem, PCR para a identificacao do gene de MβL seguido de sequenciamento de DNA. Todos as isolados produtores de IMP foram avaliados para a presenca de integrons de c1asse 1. A similaridade genetica dos isolados produtores de MβL foram avaliados pelo PFGE. Entre os 120 isolados de P. aeruginosa, 46 (38,1 por cento) foram capazes de hidrolizar imipenem. 0 sequenciamento dos amplicons demonstrou que 20 por cento dos 80 por cento dos isolados de P. aeruginosa carreavam blaIMP-1 e blaSPM-1, respectivamente. Todos os isolados produtores de IMP-1 pertenciam ao mesmo clone, enquanto os isolados produtores de SPM-1 apresentaram uma grande diversidade genetica. A analise dos dados c1inicos dos pacientes que apresentaram infeccao por P. aeruginosa mostrou que a urina parece ter um papel importante na aquisicao de P. aeruginosa resistentes a carbapenemicos no Hospital São Paulo e que o uso previa de carbapenemicos e um fator de risco importante na aquisicao de amostras produtoras de MI3L. Os dados sugerem que as medidas de prevencao de disseminacao de P. aeruginosa carreadoras de MβL no Hospital São Paulo no ano de 2004 foram ineficazes / At Hospital São Paulo, a 600-bed tertiary care university hospital, the presence of metallo-β-lactamase producing P. aeruginosa has been detected since 2000 (the first strain, a SPM producer, was isolated in 1997). During the 2000-2001 period, 25 of 183 evaluated strains produced SPM or IMP (88% and 12% of the imipenem-resistant P. aeruginosa, respectively). During 2004, the 10 first consecutive imipenem resistant P. aeruginosa strains isolated monthly were screened for the production of MβL. A total of 120 isolates were submitted to hydrolysis test against imipenem, PCR for described MßL genes, and DNA sequencing. IMP-producing isolates were further evaluated with primers targeting class 1 integrons. The genetic relatedness of MßL-producing isolates was evaluated by PFGE. Among the 120 P. aeruginosa isolates, 46 (38,1%) were able to hydrolyze imipenem. Sequencing of the amplicons showed that 20% and 80% of the P. aeruginosa isolates carried blaIMP-1 and blaSPM-1, respectively. All IMP-1-producingisolates belonged to the same genotype, while the SPM-1-producing isolates showed a great genetic diversity. Analysis of the clinical data of patients with P. aeruginosa infections reveals that the urinary site seems to be important in the acquisition of carbapenem-resistant P. aeruginosa at Hospital São Paulo and that the previous use of carbapenens is an important risk factor for the acquisition of MßL-producing strains. These data show that the nosocomial infection control measures for prevention of dissemination of P. aeruginosa carring MßL in patients hospitalized at Hospital São Paulo in 2004 were not effective. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:50Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10895.pdf: 1239975 bytes, checksum: fe176974c14d400d198cabc963cd2f6c (MD5) / Introducao: No Brasil, a disseminacao de um clone endemico de P. aeruginosa produtor de SPM-1, uma metalo-ƒÀ-lactamase (MƒÀL) codificada por um plasmideo, tem sido frequentemente reportada. Recentemente, uma alta variedade genomica foi observada entre os isolados de P. aeruginosa produtores de SPM-1. Assim, os principais objetivos deste trabalho foram realizar a implantacao da metodologia MLST para tipagem molecular destes microrganismos em nosso laboratorio e dessa forma caracterizar a evolucao filogenetica do clone de P. aeruginosa produtor da MƒÀL SPM-1; comparar o poder discriminatorio e a reprodutibilidade desta tecnica com as tecnicas de PFGE e ribotipagem automatizada para tipagem molecular de P. aeruginosa e avaliar a capacidade do MLST de discriminar amostras que foram classificadas sob ribogrupos distintos, mas com padroes de PFGE identicos. Metodos: Um total de 50 amostras de P. aeruginosa produtoras de SPM-1 foram coletadas de nove centros brasileiros. Tres amostras de P. aeruginosa produtoras de IMP-1 e duas amostras de P. aeruginosa nao produtoras de MƒÀL foram incluidas no estudo. A tecnica de MLST foi padronizada conforme descrito por Curran et al. As sequencias obtidas foram comparadas com as existentes no banco de dados mundial de MLST para P. aeruginosa (www.pubmlst.org/paeruginosa) para que dessa forma fosse determinado o perfil alelico e, subsequentemente, o tipo de sequencia (ST). Para a analise filogenetica foi utilizado o metodo de Jukes-Cantor e Neighbor-Joining. Um total de cinco STs foram identificadas entre as 55 amostras de P. aeruginosa estudadas. Todos os isolados de P. aeruginosa produtores de SPM-1 apresentaram perfil alelico identico e, dessa forma, receberam a mesma ST (ST277), com excessao dse uma amostra proveniente de Belo Horizonte, a qual recebeu a ST235. As tres amostras de P. aeruginosa produtoras de IMP-1 foram classificadas sob a mesma ST (ST593), enquanto que as amostras nao produtoras de MƒÀL apresentaram perfis alelico ainda nao existentes no banco de dados, e assim, duas novas STs foram criadas para estas amostras (ST594 e ST595). O clone endemico brasileiro de P. aeruginosa produtor de SPM-1 (ST277) mostrou perfil alelico identico ao de uma cepa isolada na Austria (ID 275), em setembro de 2006. Variacao em um unico locus da ST277 foi encontrada em uma amostra proveniente da Austria (ID279), isolada em janeiro 2007. Similaridade entre cinco dos sete alelos foi encontrada entre as amostras deste estudo pertencentes a ST277 e uma amostra isolada no Canada (ID 148), em 1990. Conclusao: Nossos dados sugerem que as amostras de P. aeruginosa produtoras de SPM-1 descendem de um ancestral comum e que podem possuir relacao ancestral com os isolados da Austria e mais remotamente com a amostra do Canada / TEDE

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A Pseudomonas aeruginosa é um dos principais agentes etiológicos de infecções nosocomiais em todo o mundo. A resistência aos antimicrobianos é um problema crescente na prática clínica, particularmente, com P. aeruginosa, devido a múltiplos mecanismos de resistência intrínseca e extrínseca. Como há uma escassez de novos antibióticos para o tratamento de bacilos Gram-negativos, particularmente com ação anti-Pseudomonas, houve a necessidade de resgatar antigos antibióticos, como as polimixinas. Não existem ensaios clínicos randomizados avaliando a eficácia das polimixinas contra as bactérias multirresistentes. Estes sugerem que as polimixinas tenham eficácia aceitável, porém há limitações que impedem de chegar a uma conclusão definitiva, como a co-administração de outros antibióticos e a falta de um grupo controle. Existem alguns estudos comparativos com colistina (polimixina E) e outros antibióticos. Apenas um estudo comparou ambas polimixinas (B e E) com outros antimicrobianos para o tratamento de diversas infecções causadas por Acinetobacter baumannii. As bacteremias são infecções graves com alta mortalidade e vários estudos já demonstraram que quando são causadas por P. aeruginosa a morbi-mortalidade é bastante importante. Neste estudo comparamos a eficácia da polimixina B endovenosa com outros antibióticos para o tratamento de bacteremia por Pseudomonas aeruginosa. Um total de 255 pacientes tiveram pelo menos um episódio de bacteremia, mas apenas 133 pacientes puderam ser incluídos no estudo. Vários pacientes foram excluídos porque foram ao óbito em menos de 48 horas após a coleta das hemoculturas ou receberam menos que 48 horas de tratamento. Pode-se certamente deduzir daí a gravidade deste tipo de infecção. Este estudo é o primeiro acessando a eficácia da polimixina B contra antibióticos comparadores e o primeiro a acessar apenas infecções bacterêmicas. Os pacientes tratados com polimixina B começaram tratamento apropriado mais tarde que o grupo comparador, mas esta variável não foi estatisticamente significativa. Nós também demonstramos que a terapia com polimixina B foi associada a uma maior incidência de toxicidade renal do que os antibióticos comparados (11/45, 24,4% versus 4/88, 4,5%) assim como foi mostrado num recente estudo de coorte comparativo e sugerido em outros estudos anteriores. Nosso estudo mostrou que o tratamento da bacteremia por P. aeruginosa com polimixina B tem menor eficácia, demonstrado por apresentar maior mortalidade hospitalar, comparado com outros antibióticos, 66,7% (30/45) e 28,4% (25/88), respectivamente. O risco de mortalidade hospitalar foi quase o dobro para os pacientes tratados com polimixina B. Embora não demonstrado no nosso estudo, a optimização da dosagem da polimixina B poderia diminuir este efeito prejudicial.

A Pseudomonas aeruginosa é um dos principais agentes etiológicos de infecções nosocomiais em todo o mundo. A resistência aos antimicrobianos é um problema crescente na prática clínica, particularmente, com P. aeruginosa, devido a múltiplos mecanismos de resistência intrínseca e extrínseca. Como há uma escassez de novos antibióticos para o tratamento de bacilos Gram-negativos, particularmente com ação anti-Pseudomonas, houve a necessidade de resgatar antigos antibióticos, como as polimixinas. Não existem ensaios clínicos randomizados avaliando a eficácia das polimixinas contra as bactérias multirresistentes. Estes sugerem que as polimixinas tenham eficácia aceitável, porém há limitações que impedem de chegar a uma conclusão definitiva, como a co-administração de outros antibióticos e a falta de um grupo controle. Existem alguns estudos comparativos com colistina (polimixina E) e outros antibióticos. Apenas um estudo comparou ambas polimixinas (B e E) com outros antimicrobianos para o tratamento de diversas infecções causadas por Acinetobacter baumannii. As bacteremias são infecções graves com alta mortalidade e vários estudos já demonstraram que quando são causadas por P. aeruginosa a morbi-mortalidade é bastante importante. Neste estudo comparamos a eficácia da polimixina B endovenosa com outros antibióticos para o tratamento de bacteremia por Pseudomonas aeruginosa. Um total de 255 pacientes tiveram pelo menos um episódio de bacteremia, mas apenas 133 pacientes puderam ser incluídos no estudo. Vários pacientes foram excluídos porque foram ao óbito em menos de 48 horas após a coleta das hemoculturas ou receberam menos que 48 horas de tratamento. Pode-se certamente deduzir daí a gravidade deste tipo de infecção. Este estudo é o primeiro acessando a eficácia da polimixina B contra antibióticos comparadores e o primeiro a acessar apenas infecções bacterêmicas. Os pacientes tratados com polimixina B começaram tratamento apropriado mais tarde que o grupo comparador, mas esta variável não foi estatisticamente significativa. Nós também demonstramos que a terapia com polimixina B foi associada a uma maior incidência de toxicidade renal do que os antibióticos comparados (11/45, 24,4% versus 4/88, 4,5%) assim como foi mostrado num recente estudo de coorte comparativo e sugerido em outros estudos anteriores. Nosso estudo mostrou que o tratamento da bacteremia por P. aeruginosa com polimixina B tem menor eficácia, demonstrado por apresentar maior mortalidade hospitalar, comparado com outros antibióticos, 66,7% (30/45) e 28,4% (25/88), respectivamente. O risco de mortalidade hospitalar foi quase o dobro para os pacientes tratados com polimixina B. Embora não demonstrado no nosso estudo, a optimização da dosagem da polimixina B poderia diminuir este efeito prejudicial.