Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-11T14:30:51Z No. of bitstreams: 2 TESE Martival dos Santos Morais.pdf: 1372263 bytes, checksum: 97bef849598ed434e1aaf79c81c67be2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T14:30:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Martival dos Santos Morais.pdf: 1372263 bytes, checksum: 97bef849598ed434e1aaf79c81c67be2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-20 / Devido à importância alimentar da cultura da mandioca (Manihot esculenta) na Paraíba, tornamse necessários estudos sobre a etiologia e epidemiologia de doenças fúngicas da cultura, bem como sobre a produção de celulases pelos fungos fitopatogênicos causadores. Os objetivos deste trabalho foram quantificar as doenças e isolar fungos patogênicos da cultura no Estado, avaliar a produção de celulases pelos isolados, otimizar a produção por Colletotrichum gloeosporioides URM 7080 e purificar parcialmente a FPAse (Atividade em Papel de Filtro). Para quantificar a incidência das doenças, foram avaliados dois plantios em 21 municípios, sendo selecionadas duas áreas de amostragem em cada plantio, cada uma abrangendo 150 plantas. A comparação das médias em cada município foi realizada através da análise de variância e teste de Tukey a 5%. Foram detectadas as doenças mancha parda (MP), mancha branca (MB), antracnose (AC) e a podridão radicular (PR). A MP foi observada em todos os municípios, seguindo-se da MB. A AC foi detectada em pouco mais 70%. A PR foi observada em Imaculada. Os estudos epidemiológicos foram realizados na cidade de Alagoa Nova, tendo como amostragem 75 plantas. As MP, MB e AC foram influenciadas fortemente pelo índice pluviométrico e atingiram 13,3; 4,7 e 3,3 % de severidade, enquanto para a AACPD (Área Abaixo da Curva de Progresso das Doenças), 61,02; 32,45 e 15,28 durante um ano de avaliação. A produção de celulases por 27 isolados das espécies C. gloeosporioides e F.oxysporum foi conduzida sob fermentação submersa à 120 rpm, 30 °C durante 7 dias, tendo CMC (Carboximetilcelulose) como fonte de carbono. As atividades foram quantificadas por meio do grau de hidrólise de tiras de papel de filtro (FPAse) e CMC (CMCase). As atividades mais elevadas foram obtidas por C. gloeosporioides, isolados 23 e 22, com 23,13 e 1,51 U/mL para FPAse e CMCase, respectivamente. Para G (-glucosidase), 0,0014 U/mL, pelo isolado 13. Na otimização, utilizou-se farelo de entrecasca de mandioca (MA) e palma forrageira triturada (PA) nas concentrações 0,5, 0,75 e 1%, pH inicial 5,0, 6,0 e 7,0; agitações 80, 110 e 140 rpm e temperaturas de 28, 32 e 36 °C em experimento fatorial fracionário 25 com 32 ensaios + 4 repetições no ponto central. Os melhores parâmetros para produção foram: 1% de MA, 0,5% de PA, 28° C, com o pH inicial 5,0 para FPAse ou pH 7,0 para CMCase; pH inicial 5,0 e 36° C para βG e agitação de 140 rpm para as três enzimas. Nessas condições a FPAse atingiu 5,50 U/mL com o meio adicionado de fluoreto de fenilmetilsulfonida (PMSF) em 3,167 mg/mL de biomassa micelial após 144h. Na purificação parcial, a precipitação em sulfato de Amônia F60-80% resultou 1,29 Um/L e a cromatografia de exclusão molecular em DEAE-celulose (Dietilaminoetil-celulose), 0,81 U/mL, com 14,79 % de rendimento. As maiores taxas de atividade foram observadas na aplicação do pH de valor 6,0 e temperatura 60 °C, mantendo-se estável a 60 °C e pH 5,0 após 180 minutos.

Submitted by GUILHERME APARECIDO FIM JÚNIOR null (guilhermejunior10@hotmail.com) on 2016-02-17T01:43:30Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO__Versão final_PRONTA.pdf: 1645895 bytes, checksum: 10c9b401bd06621d8b3c2c0f30593583 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-17T16:39:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fimjunior_ga_me_jabo.pdf: 1645895 bytes, checksum: 10c9b401bd06621d8b3c2c0f30593583 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-17T16:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fimjunior_ga_me_jabo.pdf: 1645895 bytes, checksum: 10c9b401bd06621d8b3c2c0f30593583 (MD5) Previous issue date: 2015-12-17 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se estabelecer a etiologia infecciosa da mastite subclínica ovina em duas diferentes fases de lactação e a frequência desta enfermidade nas diferentes raças. Além disso, buscou-se definir as características diagnósticas da contagem de células somáticas (CCS) para o diagnóstico da mastite subclínica ovina, adotando diferentes classes de contagens de CCS, assim como estabelecer um valor de triagem para a CCS como método diagnóstico. O trabalho experimental foi realizado em um rebanho formado por 407 ovelhas das raças Santa Inês, Texel, Ile de France e Dorper, localizado na Embrapa Pecuária Sudeste em São Carlos, São Paulo. O California Mastitis Testis (CMT) foi realizado para o diagnóstico preliminar da mastite. Após a antissepsia dos tetos, amostras de leite foram colhidas no início de lactação e ao desmame, em duas parições consecutivas para confirmação da etiologia infecciosa da doença por meio de análises microbiológicas e para a determinação da CCS. Para cada uma das raças os valores de CCS foram divididos em quatro classes. O total de 1457 metades mamárias foi investigado, das quais 203 (13,9%) apresentaram mastite subclínica. Estafilococos coagulase-negativos (ECN) foram os agentes etiológicos com maior ocorrência isoladamente e em associação, 58,1% e 60,6%, respectivamente, seguidos por Streptococcus spp. (19,7%). Dentre os ECN, a espécie encontrada com maior frequência foi Staphylococcus xylosus (87,7%). A raça Santa Inês apresentou significativamente maior número de casos de mastite subclínica (p<0,05). Boas e ótimas concordâncias para associação entre CMT e CCS foram obtidos paras todas as raças, exceto Ile de France. Diferentes pontos de corte para CCS foram determinados para as raças estudadas em ambas as fases de lactação. Maiores valores de sensibilidade e especificidade para a CCS foram obtidos para as raças Ile de France e Dorper na lactação, enquanto ao desmame destacaram-se as raças Texel e Dorper. Não houve concordâncias ideais ao comparar as reações de CMT e CCS para a triagem da mastite subclínica. Os resultados do teste variaram de acordo com a raça ovina. A CCS pode ser utilizada para triagem da mastite subclínica em ovelhas de corte de acordo com a prevalência da doença em cada raça, auxiliando técnicos e produtores a melhorar o controle da enfermidade nos rebanhos. / This study aimed to establish the infectious etiology of subclinical mastitis in two different stages of lactation and the frequency of this disease in different breeds sheep. Furthermore, we sought to define the diagnostic characteristics of somatic cell count (SCC) for the diagnosis of subclinical mastitis in these sheep breeds, adopting different classes of SCC, and establish a screening value for SCC as diagnostic method. The experimental work was carried out in a herd composed of 407 sheep of Santa Inês, Texel, Ile de France and Dorper breeds, located in the Embrapa Southeast Livestock, São Carlos, São Paulo. The California Mastitis Test (CMT) was performed for a preliminary diagnosis of mastitis. After antisepsis of the teats, milk samples were collected in early lactation and weaning in two consecutive calvings for confirmation of infectious etiology of the disease by microbiological analysis and the determination of SCC. For each breed, CCS values were divided into four classes. We investigated 1,457 mammary glands, from which 203 (13.9%) had subclinical mastitis. Coagulase-negative staphylococci (CNS) were the etiological agents with higher occurrence isolated or in an association, 58.1% and 60.6%, respectively, followed by Streptococcus spp. (19.7%). Among the CNS, the most frequent species was Staphylococcus xylosus (87.7%).The Santa Inês breed had a significantly higher number of cases of subclinical mastitis (p < 0.05). Good and excellent concordances to the association between CMT and SCC were obtained for all breeds except Ile de France. Different cutoff points to SCC were determined for the studied breeds in both stages of lactation. Higher sensitivity and specificity of SCC cutoff points were obtained for the Ile de France and Dorper breeds during lactation, where as weaning stood out the Texel and Dorper breeds. There were no complete concordances to compare CMT and SCC reactions to the screening of subclinical mastitis. The test results varied according to the breed of sheep. The SCC can be used for screening of subclinical mastitis in sheep according to the prevalence of the disease in each breed, assisting technicians and producers to improve the control of the disease in herds. / FAPESP: 2013/23054-9

Foram submetidas a prova do \"California Mastitis Test\"(CMT), 468 vacas leiteiras pertencentes a seis propiedades rurais produtoras de leite tipo B, localizadas na região do Município de Barretos, SP. Das 56 (12,0 por cento ) fêmeas reagentes a esta prova, 48 (1O,3 por cento ) foram confirmadas através do isolamento e identificação do agente etiológico. A elevada concordância (85,71 por cento ) verificada entre, a prova do CMT e o exame bacteriológico, confirma a eficiência desta prova na detecção de transtôrnos da glândula mamária não perceptíveis clínicamente, uma vez que nenhuma das fêmeas analisadas apresentou sinais da enfermidade. A contagem leucocitária e a pesquisa do teor de cloretos efetuadas nas 56 fêmeas reagentes a prova do CMT, apresentaram concordâncias de 87,5 por cento e 50,0 por cento , respectivamente, em relação ao exame bacteriológico. O Staphylococcus aureus foi o agente etiológico mais frequente (52,08 por cento ) nos casos de mastite bovina. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 56 amostras reagentes a prova do CMT, revelou que 30 (53,57 por cento ) amostras apresentaram tempo de redução não condizente com o número de microrganismos determinado, isto é, tempo de redução menor que 3 l/2 horas e contagem total de microrganismos inferior a 500.000 microrg/ml. Observou-se, ainda, que destas 30 amostras, 26 (86,67 por cento ) apreesentaram contagens leucocitárias superiores a 2.500.000 leucócitos/ml., sugerindo deste modo, uma provável interferência dos leucócitos quando em número elevado, na prova da redução do azul de metileno. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 30 amostras negativas a prova do CMT, revelou que 27 (90,0 por cento ) amostras apresentaram o tempo de redução condizente com o número de microrganismos determinado, o que confirma a importância de sua utilização na rotina do Serviço de Inspeção. A provãvel interferência dos leucócitos não compromete a eficiência desta prova, pois as variações observadas ocorrem no sentido de abreviar o tempo de redução, sendo muito pequena a probabilidade de aceitação de um produto com o número de microrganismos superior ao permitido pelo Ministério da Agricultura. Dentre as provas utilizadas pelo Serviço de Inspeção na detecção da mastite bovina a nível de Estabelecimentos Industriais a prova de Whiteside foi a que apresentou maior sensibilidade e especificidade, capaz de revelar a presença de leite anormal em rebanhos cuja prevalência desta doença foi igual ou superior a 7,0 por cento das fêmeas ou 1,4 por cento dos quartos analisados. A pesquisa do teor de cloretos apresentou menor sensibilidade e especificidade, incapaz de revelar a presença de leite anormal em todos os rebanhos analisados. Entretanto, este fato não invalida a utilidade de sua aplicação, pois esta prova pode ser de fundamental importância na detecção de fraudes no leite. A prevalência da mastite bovina em até 20,0 por cento das fêmeas leiteiras ou em ate 5,0 por cento dos quartos examinados, não foi suficiente para colocar os quesitos analisados nas amostras de leite, fora dos padrões normais. Acredita-se que estes padrões devam ser objeto de estudos posteriores. / Four-hundred and sixty-eigth milk cows, belonging to six type B milk producing dayry farms, located in the region of Barretos, SP, Brazil were submitted to \"California Mastitis Test\", of the fifty-six (12,0 per cent ) cows positive to the mentioned test, forty eigth (10,31) had the diagnosis confirmed throght isolation and identification of the etiologic agent. High agreement (85,7 per cent ) was obtained between CMT and bacteriologic examination, which confirms the efficiency of CMT in the detection of diseases of the mammary glands, not perceptible by clinical examination, as none the animals examined presented signs of disease. Leucocyte count and determination of chloride level performed on the fifty-six reactors presented agreement of 87,5 per cent and 50,0 per cent , respectively, with bacteriological examination. Staphylococcus aureus was the most frequently isolated bacterium (52,08 per cent of cases). Comparison between total plate count and reductase test, performed on thirty samples negative to CMT, showed that twenty-seven samples (90,0 per cent ) presented a reduction time compatible with the number of microorganisms present, confirming the importance of reductase test regarding inspection. The theoretical interference of leucocytes was not important in practice, as variations observed were abreviation of reduction time, rendering the propability of accepting a product with a number of microorganisms over legal limits very small. Considering tests used by the Inspection Service for detection of bovine mastitis, the Whiteside test presented highest sensivity and specificity, as it was capable of reveling abnormal milk when prevalence was 7,0 per cent and over, considering animals and 1,1 per cent considering quarters. Chloride level presented lower sensitivity and specificity as it was unable to detect abnormal milk in all dairy farms. However it is very important in the detection of frauds. Prevalence of mastitis of up to 20,0 per cent of animals or of 5,0 per cent of quarters was not sufficient to bring the total milk produced below standards.

Foram submetidas a prova do \"California Mastitis Test\"(CMT), 468 vacas leiteiras pertencentes a seis propiedades rurais produtoras de leite tipo B, localizadas na região do Município de Barretos, SP. Das 56 (12,0 por cento ) fêmeas reagentes a esta prova, 48 (1O,3 por cento ) foram confirmadas através do isolamento e identificação do agente etiológico. A elevada concordância (85,71 por cento ) verificada entre, a prova do CMT e o exame bacteriológico, confirma a eficiência desta prova na detecção de transtôrnos da glândula mamária não perceptíveis clínicamente, uma vez que nenhuma das fêmeas analisadas apresentou sinais da enfermidade. A contagem leucocitária e a pesquisa do teor de cloretos efetuadas nas 56 fêmeas reagentes a prova do CMT, apresentaram concordâncias de 87,5 por cento e 50,0 por cento , respectivamente, em relação ao exame bacteriológico. O Staphylococcus aureus foi o agente etiológico mais frequente (52,08 por cento ) nos casos de mastite bovina. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 56 amostras reagentes a prova do CMT, revelou que 30 (53,57 por cento ) amostras apresentaram tempo de redução não condizente com o número de microrganismos determinado, isto é, tempo de redução menor que 3 l/2 horas e contagem total de microrganismos inferior a 500.000 microrg/ml. Observou-se, ainda, que destas 30 amostras, 26 (86,67 por cento ) apreesentaram contagens leucocitárias superiores a 2.500.000 leucócitos/ml., sugerindo deste modo, uma provável interferência dos leucócitos quando em número elevado, na prova da redução do azul de metileno. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 30 amostras negativas a prova do CMT, revelou que 27 (90,0 por cento ) amostras apresentaram o tempo de redução condizente com o número de microrganismos determinado, o que confirma a importância de sua utilização na rotina do Serviço de Inspeção. A provãvel interferência dos leucócitos não compromete a eficiência desta prova, pois as variações observadas ocorrem no sentido de abreviar o tempo de redução, sendo muito pequena a probabilidade de aceitação de um produto com o número de microrganismos superior ao permitido pelo Ministério da Agricultura. Dentre as provas utilizadas pelo Serviço de Inspeção na detecção da mastite bovina a nível de Estabelecimentos Industriais a prova de Whiteside foi a que apresentou maior sensibilidade e especificidade, capaz de revelar a presença de leite anormal em rebanhos cuja prevalência desta doença foi igual ou superior a 7,0 por cento das fêmeas ou 1,4 por cento dos quartos analisados. A pesquisa do teor de cloretos apresentou menor sensibilidade e especificidade, incapaz de revelar a presença de leite anormal em todos os rebanhos analisados. Entretanto, este fato não invalida a utilidade de sua aplicação, pois esta prova pode ser de fundamental importância na detecção de fraudes no leite. A prevalência da mastite bovina em até 20,0 por cento das fêmeas leiteiras ou em ate 5,0 por cento dos quartos examinados, não foi suficiente para colocar os quesitos analisados nas amostras de leite, fora dos padrões normais. Acredita-se que estes padrões devam ser objeto de estudos posteriores. / Four-hundred and sixty-eigth milk cows, belonging to six type B milk producing dayry farms, located in the region of Barretos, SP, Brazil were submitted to \"California Mastitis Test\", of the fifty-six (12,0 per cent ) cows positive to the mentioned test, forty eigth (10,31) had the diagnosis confirmed throght isolation and identification of the etiologic agent. High agreement (85,7 per cent ) was obtained between CMT and bacteriologic examination, which confirms the efficiency of CMT in the detection of diseases of the mammary glands, not perceptible by clinical examination, as none the animals examined presented signs of disease. Leucocyte count and determination of chloride level performed on the fifty-six reactors presented agreement of 87,5 per cent and 50,0 per cent , respectively, with bacteriological examination. Staphylococcus aureus was the most frequently isolated bacterium (52,08 per cent of cases). Comparison between total plate count and reductase test, performed on thirty samples negative to CMT, showed that twenty-seven samples (90,0 per cent ) presented a reduction time compatible with the number of microorganisms present, confirming the importance of reductase test regarding inspection. The theoretical interference of leucocytes was not important in practice, as variations observed were abreviation of reduction time, rendering the propability of accepting a product with a number of microorganisms over legal limits very small. Considering tests used by the Inspection Service for detection of bovine mastitis, the Whiteside test presented highest sensivity and specificity, as it was capable of reveling abnormal milk when prevalence was 7,0 per cent and over, considering animals and 1,1 per cent considering quarters. Chloride level presented lower sensitivity and specificity as it was unable to detect abnormal milk in all dairy farms. 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Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Juliana Dias Martins.pdf: 1294689 bytes, checksum: c255ebaebb32633087fe7f7d358cd8e8 (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / The bovine mastitis consists of an inflammation of the mammary gland, with acute to chronic evolution, which occurs when an infectious agent attacks the mammary gland. It is characterized by physical, chemical and sensory alterations of the milk, caused by microorganisms that invade the mammary gland and cause pathological changes in the glandular tissue. Mastitis can be classified according to the form of presentation as clinical or subclinical. Several symptoms are observed in the clinical form of the disease such as the secretion of milk with lumps, pus or watery aspect, and edemaciated stiff and febrile teats and udder. On the other hand, no symptoms can be observed in the mammary gland and milk in subclinical cases. Mastitis is a major cause of economic losses in dairy cattle farms, mainly due to reduced milk production, changes in the composition and increased somatic cell count (CCS). The objective of this study was to evaluate the prevalence of the main bacteria that cause (clinical and subclinical) bovine mastitis, and to check the sensitivity to various antimicrobial agents of clinical mastitis. The agents most frequently isolated from clinical mastitis were Streptococcus uberis and Staphylococcus aureus and the antibiogram demonstrated greater sensitivity and efficacy of the active principles linezolid, amikacin, gentamicin and imipenen regarding the isolated agents. In subclinical mastitis Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis and Staphylococcus sp. Were the agents most frequently identified and that determined the highest mean values of CCS. The average CCS of cows with subclinical mastitis was approximately 743 x 103 cs/mL. The study was conducted in eight dairy farms in the State of Goiás. The results were obtained by frequency analysis. In conclusion, that the results emphasize the importance of assessing the sensitivity profile of microorganisms that cause clinical mastitis in each herd studied allowing greater precision in medication prescription for future cases of clinical mastitis and for dry cow therapy. The use of other techniques such as real time PCR is also important for the detection of the main microorganisms causin subclinical mastitis, which can be indicated as a routine method, due to its specificity, providing a precise bacteriological diagnosis. / A mastite bovina constitui-se num processo inflamatório da glândula mamária, com evolução aguda a crônica; ocorre quando um agente infeccioso agride a glândula mamária. Caracteriza-se por alterações físicas, químicas e sensoriais do leite, provocadas por microrganismo que invadem a glândula mamária e provocam modificações patológicas no tecido glandular. A mastite pode ser classificada quanto à forma de apresentação, em clínica ou subclínica. A forma clínica observa-se vários sintomas como secreção de leite com grumos, pus ou de aspecto aquoso, tetos e úbere apresentando edemaciados, rígidos e febris. Na forma subclínica os sinais na glândula mamária e no leite são inaparentes. A mastite constitui uma das principais causas de perdas econômicas nas explorações de bovinos leiteiros, devido principalmente à redução na produção de leite, alterações na composição e aumento da contagem de células somáticas (CCS). Objetivou-se neste trabalho, avaliar a prevalência das principais bactérias causadoras da mastite bovina (clínica e subclínica), e verificar o perfil de sensibilidade dos agentes a diversos antimicrobianos da mastite clínica. Os agentes mais isolados da mastite clínica foram Streptococcus uberis e Staphylococcus aureus e o antibiograma demonstrou uma maior eficácia dos principios ativos linezolid, amikacina, gentamicina e imipenene, frente aos agentes isolados. Na mastite subclínica Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Staphylococcus sp foram os agentes mais frequentemente identificados e que determinaram maiores valores médios de CCS. A CCS média dos rebanhos com mastite subclínica foi de aproximadamente 743 x 103cel/mL. O estudo foi realizado em oito propriedades leiteiras, localizadas no Estado de Goiás. Os resultados encontrados foram analizados pela análise de frequência. Conclui-se que os resultados obtidos ressaltam a importância da avaliação do perfil de sensibilidade de microrganismos causadores de mastite clínica em cada rebanho estudado, possibilitando maior precisão na prescrição medicamentosa para os futuros casos de mastite clínica e a terapia da vaca seca. É importante também a utilização de outras técnicas como a de PCR em tempo real para a detecção dos principais microrganismos causadores de mastite subclínica, a qual pode ser indicada como método a ser utilizado na rotina, devido a sua especificidade, fornecendo um diagnóstico bacteriológico preciso.