Stuttgart, Univ., Diss., 2004.

Universiẗat, Diss., 2005--Würzburg.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2000. / Titre de l'écran-titre (visionné le 12 juillet 2005). Bibliogr. Présenté aussi en version papier.

Universiẗat, Diss., 2003--Jena.

Zugl.: Giessen, Universiẗat, Diss., 2008.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-16Bitstream added on 2014-08-13T18:01:10Z : No. of bitstreams: 1 000736352_20150816.pdf: 622518 bytes, checksum: 9cd0a00890850158d786a74933e00102 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-17T11:07:08Z: 000736352_20150816.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-17T11:07:54Z : No. of bitstreams: 1 000736352.pdf: 2845178 bytes, checksum: cd1b9d03cabd50c9aedba9d2463f1aa2 (MD5) / Nas últimas décadas, a epidemiologia das infecções por Candida spp. e o perfil de susceptibilidade a drogas vêm sofrendo importantes alterações. A emergência dessas espécies, como agente de infecções invasivas, tem se destacado principalmente entre pacientes imunocomprometidos. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a epidemiologia das infecções por Candida spp. no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, e auxiliar no suprimento de dados para o melhor controle da infecção hospitalar. Os objetivos específicos incluíram a comparação entre as metodologias tradicional, automatizada e molecular de identificação em nível de espécie atualmente disponíveis nesta instituição, avaliar o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos, bem como a produção de biofilme por estes isolados e caracterizar, utilizando ferramentas de biologia molecular, genes envolvidos na produção de biofilme de C. albicans e C. parapsilosis e o emprego dos introns do grupo I para genotipagem de C. albicans. Um total de 196 isolados de Candida spp. provenientes de hemocultura de pacientes foram avaliados. As espécies mais frequentes foram C. albicans (39,3 44,4%) e C. parapsilosis (33,2-42,3%). Foi observada boa correlação (>80%) entre os métodos de identificação avaliados – fenotípico tradicional, automatizado e molecular; e a caracterização dos introns do grupo I detectou predominância de C. albicans genótipo A (74%). O método tradicional é o mais simples e de baixo- custo, e o método automatizado mais rápido na liberação do resultado, quando comparados às técnicas moleculares, as quais apresentam maior poder discriminatório. Sugere-se a utilização do meio cromogênico, em paralelo ao método de identificação selecionado, para auxiliar na interpretação dos resultados, principalmente nas espécies mais frequentes. O método empregado em laboratórios de rotina deve ser considerado quando ... / Over the last decade, there have been important changes in the epidemiology of Candida infections and antifungal agents used to treat these infections. In recent years, Candida species have emerged as important causes of invasive infections mainly among immunocompromised patients. The principal aim of this study was to evaluate the epidemiology of infectious Candida species isolated in our hospital and accordingly supply data for hospital infection control The other aims were to compare the traditional, automated and molecular methods used to identify Candida isolates to the species level current available in the Clinical Hospital of the Boucatu Medical School, UNESP, to evaluate the drug susceptibility as well as to biofilm production by this yeasts and to characterize, by molecular tools, several genes involved in biofilm production of C. albicans and C. parapsilosis and the use of group I introns to genotype the species C. albicans. A total of 196 Candida strains that were isolated from blood specimens of hospitalized patients were included in the study. The most common Candida species identified were C. albicans (39,3-44,4%) and C. parapsilosis (33,2-42,3%). According to the insertion of group I introns, the genotype A of C. albicans were the most frequent (74%). The evaluation of traditional phenotypic methods, the automated and some molecular revealed good agreement (>80%) and since both phenotypic methods were simple and cost effective and automated were few time-consuming when compared to molecular techniques, they should be considered in the routine lab identification of Candida species. The chromogenic media must be employed to avoid misinterpretations, independently of the method used. Antifungal susceptibility testing was performed by the reference microdilution method (CLSI) and all strains showed good susceptible against the drugs evaluated (fluconazole, voriconazole, anidulafungin and ...

Orientador: Debora de Barros Barbosa / Coorientadora: Andresa Aparecida Berretta e Silva / Banca: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Denise Pedrini Ostini / Banca: Luiz Fernando Gorup / Banca: Elaine Cristina Guerbach Conti / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de produção de nanopartículas de prata através do extrato da casca de romã, e produzir formulações contendo estas nanopartículas para uso em feridas. Elas foram testadas quanto à ação antimicrobiana, citotóxica e potencial cicatrizante. Para a produção das nanopartículas de prata propôs-se uma síntese utilizando-se como base duas metodologias já estabelecidas na literatura, utilizando-se para reação carboximetilcelulose, propilenoglicol, nitrato de prata, água e extrato da casca de romã como agente redutor. O extrato da casca de romã foi caracterizado em parâmetros como pH, massa seca e quantidade de taninos bioativos (ácido elágico e totais fenólicos expressos em ácido gálico). Os totais fenólicos do extrato foram também dosados após seu aquecimento nas diferentes condições de tempo e temperatura propostos para as sínteses das nanopartículas de prata (12 minutos, 1 hora e 2 horas, à 50ºC e 100ºC). As nanopartículas de prata produzidas foram, então, adicionadas a uma solução contendo compostos para produção de formulações para serem utilizadas no tratamento de feridas. Elas foram caracterizadas através de espectroscopia UV-Visível, microscopia eletrônica de varredura (MEV), potencial zeta e dosagem de íons remanescentes após as reações. A atividade antimicrobiana tanto das nanopartículas como de suas formulações contra Candida albicans SC 5314 e Staphylococcus aureus ATCC 25923 foi avaliada por meio do método da microdiluição. ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to investigate the production of silver nanoparticles through peel extract of pomegranate, and produce formulations containing these particles to be used in wound healings. Its antimicrobial action, cytotoxicity and healing potential were tested. The synthesis of silver nanoparticles were based on two methods proposed in the literature with some modifications, which were used carboxymethylcellulose, propylene glycol, silver nitrate, water and peel extract of pomegranate as reducing agent. The peel extract was characterized by pH, dry mass and bioactive tannins (elagic acid and total phenols expressed as galic acid). The total phenols were also quantified after being heated at 50ºC and 100ºC for 12 minutes, 1 hour and 2 hours. Then, silver nanoparticles were added in a solution containing products to develop a formulation to be tested in wound healing. They were characterized by UV-Vis spectroscopy, scanning electron microscopy (SEM), zeta potential and the quantification of remaining silver ions after the synthesis reaction. The antimicrobial activity of the nanoparticles and formulations were tested against Candida albicans (SC 5314) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923) by microdilution method. After submitting the peel extract to different conditions of temperature and times (50ºC and 100ºC for 12 minutes, 1 hour and 2 hours), it was noted that the values of the minimum inhibitory concentration was not affected and were 391 μg/ml and 781 μg/ml for S. aureus and C. albicans. The formation of silver nanoparticles was confirmed through the formation of characteristic peaks in the UV-Vis spectroscopy and SEM images, and it was observed that the reaction at 50ºC for 12 min produced silver nanoparticles with regular forms and better dispersed in the formulation. The synthesis proposed promoted... / Doutor

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:19Z : No. of bitstreams: 1 Publico-149.pdf: 1437447 bytes, checksum: cba255301df36690895e45efbaee7f29 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Candida albicans faz parte da microbiota humana, entretanto pode causar infecção disseminada a depender das condições imunológicas do hospedeiro. Trata-se da espécie mais virulenta do gênero Candida, além de ser isolada com freqüência em infecções superficiais e sistêmicas. Alguns fatores de virulência são atualmente propostos para C. albicans, incluindo: adesão a células epiteliais e endoteliais do hospedeiro, a capacidade de secretar enzimas hidrolíticas, a transição de levedura à hifa e a capacidade de combate ao estresse oxidativo, gerado por células fagocitárias Objetivos: caracterizar atributos de virulência em diferentes isolados clínicos de C. albicans; analisar o relacionamento genético intraespecífico e, determinar o perfil de susceptibilidade dos mesmos. Material e Métodos: Foram incluídos 51 isolados sequencialmente obtidos de 7 pacientes alocados em 3 grupos: a) 3 pacientes que foram apenas colonizados (17 isolados); b) 3 pacientes colonizados que evluíram com candidemia e alta hospitalar (27 isolados); e c) 1 paciente colonizado que evoluiu com candidemia e óbito (7 isolados). Foram determinados os seguintes fatores de virulência: taxas de crescimento máximas, atividade de proteinase específica, atividade de fosfolipase, aderência de células de C. albicans à células epiteliais bucais humanas (CEBH), ensaio de morfogênese,formação do biolfilme. Foram realizados teste de susceptibilidade a antifúngicos (TSA) pelo método de microdiluição em caldo, utilizando anfotericina B, fluconazol, itraconazol, 5-fluorocitosina, caspofungina e anidulafungina. Para avaliar a variabilidade genética empregou-se técnica de microssatélites utilizando o “primer” M13, com posterior montagem de dendrograma. Foi também empregada a genotipagem ABC. Resultados: Observou-se que todas as cepas apresentaram similar taxa de crescimento, à exceção de um isolado (657B). As amostras apresentaram capacidade de aderência a CEBH e formação de hifa variáveis, não havendo associação direta entre estes atributos e o desfecho clínico do paciente. Na avaliação de secreção de Saps, os isolados do paciente 7, pertencente ao grupo III (candidemia/óbito), apresentaram os maiores valores de secreção desta enzima entre os isolados avaliados, seguida das cepas do paciente 4 (candidemia/alta). A produção de fosfolipase em nosso estudo foi homogênea para todos os isolados testados à exceção dos isolados do paciente 4 (candidemia/alta), o qual apresentou diversas cepas com atividade de fosfolipase negativa. Os pacientes 4 (candidemia/alta), e 7 (candidemia/óbito), obtiveram as maiores taxas de formação de biofilme entre todos os isolados testados. Quanto ao TSA, não houve ocorrência de resistência entre os isolados, porém uma única cepa (170 A) apresentou-se SDD frente a 5-fluorocitosina. As técnica de microssatelite e genotipagem ABC evidenciam que aquelas cepas dos grupos II e III apresentam uma menor variabilidade genética do que aquelas oriundas de pacientes do grupo I (somente colonização). Conclusão: Foi possível verificar que além do “status” imunológico do paciente, os aspectos intrínsecos de cada cepa são importantes determinantes do sucesso de sua trajetória como patógeno. Adicionalmente, destacamos a importância de ferramentas moleculares na detecção de genótipos melhor adaptados ao organismo humano, possivelmente responsáveis pelos piores prognósticos clínicos em ambiente hospitalar. / Introduction: Candida albicans is part of the human microbiota, but it can cause disseminated infection depending on the host immunity status. It is the most virulent species of the genus Candida as well as is frequently isolated from superficial and systemic infections. Some putative virulence factors have been recently proposed for C. albicans, including: adhesion to host epithelial and endothelial cells, the ability to secrete hydrolytic enzymes, yeast-to-hypha transition and the capability to combat oxidative stress generated by phagocytic cells Objectives: to characterize virulence attributes of different C. albicans clinical isolates; to analyze intraspecific genetic relatedness and to determine antifungal susceptibility of clinical isolates collected from a specific clinical scenario. Material and Methods: We have investigated 51 isolates sequentially obtained from 7 patients divided into 3 different groups: a) 3 patients who were only colonized (17 isolates); b) 3 colonized patients who had candidemia and were discharged (27 isolates); and c) 1 colonized patient who died of candidemia (7 isolates). We have investigated the following virulence factors: maximum growth rates, proteinase and phospholipase activity, adherence to human buccal epithelial cells, morphogenesis and biofilm formation. We also performed antifungal susceptibility testing by using broth microdilution method with amphotericin B, fluconazole, itraconazole, 5-fluorocytosine, caspofungin and anidulafungin. To investigate genetic variability, we have used a microsatellite technique with primer M13, followed by dendrogram construction, in addition to A, B, C genotyping. Results: We have found that all the isolates except strain 657B presented similar growth rates. The strains exhibited variable ability to adhere to buccal epithelia and to for hyphae. Therefore, we could not establish a direct relationship between these virulence attributes and patients clinical outcome. Strains obtained from patient 7, belonging to group III (candidemia/death) had the highest levels of proteinase activity, seconded by the isolates collected from patient 4 (candidemia/discharge). Phospholipase activity was essentially the same for all the isolates investigated in the present study, except from some patient 4 strains (candidemia/discharge) which were phospholipase negative. Isolates from patients 4 (candidemia/discharge), and 7 (candidemia/death) showed the highest levels of biofilm formation. We could not detect resistance to antifungal drugs among the isolates. However, a unique strain was DDS to 5-fluorocytosine (170 A). Microsatelite and A, B, C typing demonstrated that isolates from groups II and III (candidemia) showed lower genetic variability than the strains belonging to group I (only colonized). Conclusion: It was possible to verify that besides host immunity, each isolate had particular aspects which could be important factors to guarantee their success as pathogens. In addition, we emphasize the importance of molecular tools to detect genotypes well adapted to the human organism, which are likely responsible for worse prognosis in the hospital environment. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-13T21:50:01Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeVitro.PDF: 1286315 bytes, checksum: 4d1c857679d9f07646fb49d7ee1eb83d (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-15T16:01:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeVitro.PDF: 1286315 bytes, checksum: 4d1c857679d9f07646fb49d7ee1eb83d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-15T16:01:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeVitro.PDF: 1286315 bytes, checksum: 4d1c857679d9f07646fb49d7ee1eb83d (MD5) Previous issue date: 2007 / Com o número crescente de pacientes sob imunossupressão induzida por doenças ou fármacos, as infecções fúngicas disseminadas estão se tornando problemas sérios de saúde, principalmente em ambiente hospitalar, e novas abordagens para a terapia antifúngica precisam ser investigadas. Grande parte das infecções disseminadas é provocada pela espécie Candida albicans sendo o fluconazol o fármaco de escolha, mas o surgimento de fenômenos de resistência fúngica tem sido relatado. Com o intuito de investigar o efeito do fluconazol associado a nanoestruturas sobre espécies de Candida, neste trabalho foram desenvolvidas nanoemulsões e nanocápsulas de poli-e- caprolactona contendo fluconazol. Análises morfológicas e físico-químicas das nanoestruturas foram realizadas revelando formato esférico e tamanho médio variando de 136,5 a 180,2 nm para as nanoemulsões (NE) e de 203,6 a 213,6 nm para as nanocápsulas (NC). Ambas as dispersões apresentaram características homogêneas e demonstraram estruturas monodispersas. O percentual de encapsulação do fluconazol nas NE e NC foi de 49,2 ± 0,65 e 45,6 ± 0,52, respectivamente. Procedimentos de purificação por diálise direta foram efetuados e as nanoestruturas foram testadas contra suspensões celulares de Candida albicans e Candida parapsilosis e seus efeitos avaliados por turbidimetria, contagem de células, teste de viabilidade celular por colorimetria com o reativo Brometo de 3-[4,5-dimetiltriazol-2-il]-2,5 difeniltetrazólio (MTT) e por quantificação de ergosterol utilizando fármaco livre, nanoemulsões e nanocápsulas de fluconazol submetidas ou não aos procedimentos de purificação. Os resultados demonstraram diferentes efeitos ocasionados pela presença das nanoestruturas contra C. albicans e C. parapsilosis quando comparados aos efeitos do fármaco livre. As nanoestruturas purificadas por diálise apresentaram um efeito com perfil de dose dependência frente à inibição do crescimento de Candida. Os resultados variaram segundo os métodos e as análises estatísticas não demonstraram correlação entre as diferentes metodologias. As duas espécies de Candida parecem se comportar de forma diferente quando expostas às nanoestruturas de fluconazol ou à presença de nanoestruturas livres de fármaco. Entretanto, muitos estudos ainda são necessários para se evidenciar o efeito das nanopartículas sobre o fenômeno de resistência das espécies de Candida testadas frente às nanoemulsões e nanocápsulas de fluconazol. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Nosocomial fungal infections are becoming serious health problems due to the growing number of patients under natural or induced immunossupression and there is a need for new approaches on antifungal therapy. The great part of disseminated fungal infections is related to Candida spp. and in many cases the drug of choice is fluconazole, which broad use has been related to fungal resistance emergence. Little is known about the activity of antifungal drugs associated to drug delivery systems in resistance phenomena. In this work we developed fluconazole nanoemulsions and poly-e- caprolacton nanocapsules by polymer interfacial deposition followed by solvent displacement in order to investigate the effect of fluconazole associated to nanostructures against Candida spp. The nanostructures were tested against Candida albicans and Candida parapsilosis cells suspensions and their effect was evaluated by turbidimetric, colorimetric and ergosterol quantification assays. Morphological and physical-chemical analysis of the nanostructures revealed spherical shape and mean size varying from 136,5 to 180,2 nm for nanoemulsions (NE) and from 203,6 to 213,6 nm for nanocapsules (NC). Both dispersions have presented homogeneous and monodisperse. The drug loading for fluconazole in NE and NC was 49,2 ± 0,65 and 45,6 ± 0,52, respectively. The susceptibility assays were carried out with the free drug, the nanoemulsions and the nanocapsules underwent or not to dialysis purification. The results showed different effects caused by the presence of nanostructures against C. albicans and C. parapsilosis when compared to the free drug. The dialyzed nanostructures showed results of dose dependent profile in Candida growing inhibition. Comparisons between the results obtained using the different methods were made and they revealed variations. The two species seem to behave differently when exposed to fluconazole-loaded or unloaded nanostructures. Further studies are necessary in order to elucidate the effect of nanostructures in Candida fluconazole-resistance phenomena.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-10. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:37Z : No. of bitstreams: 1 000860697.pdf: 1733916 bytes, checksum: 319f98dc74fda5996433b386d24f96c0 (MD5) / A alta incidência de candidoses causadas por Candida albicans e a capacidade de adaptação desta espécie, assim como resistência aos antifúngicos impulsionam o desenvolvimento de pesquisas com terapias alternativas para controle dessa infecção. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência de Lactobacillus rhamnosus e produtos do seu metabolismo contra C. albicans, avaliando-se a patogenicidade e a expressão de genes que regulam a formação do biofilme de C. albicans, in vitro e in vivo em modelo invertebrado de Galleria mellonella. Foram utilizadas cepas de C. albicans ATCC 18804 e L. rhamnosus ATCC 9595 (provenientes do Laboratório de Microbiologia do Instituto de Ciências e Tecnologia de São José dos Campos / UNESP). Para o estudo foram preparadas duas suspensões de L. rhamnosus, uma contendo a porção celular e a outra com o sobrenadante da cultura, livre de células. O estudo da patogenicidade in vitro de C. albicans foi avaliado pelos testes de formação de biofilme e quantificação de UFC/mL de C. albicans, análise da atividade metabólica pelo método do XTT e filamentação de C. albicans. A análise da curva de sobrevivência de Galleria mellonella foi utilizada para a avaliação in vivo da influência de L. rhamnosus na infecção causada por C. albicans. Os genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 e ALS3 de C. albicans foram quantificados pela RT-PCR após a interação em modelo de biofilme. No estudo in vitro L. rhamnosus foi capaz de inibir a formação do biofilme, filamentação e reduzir a atividade metabólica de C. albicans. Esses efeitos também foram observados quando utilizado a suspensão do sobrenadante da cultura de L. rhamnosus, apontando possível produção de substâncias com efeito inibitório. Os resultados obtidos in vivo apontam que L. rhamnosus e seu sobrenadante protegeram G. mellonella da infecção por C. albicans, porém a suspensão do sobrenadante apresentou melhores resultados, visto.... / The high incidence of candidiasis caused by Candida albicans and the adaptability of this species, as well as resistance to antifungal drive the development of research on alternative therapies to control this infection. The aim of this study was to evaluate the influence of Lactobacillus rhamnosus and products of their metabolism against C. albicans, evaluating the pathogenicity and the expression of genes that regulate the formation of C. albicans biofilms in vitro and in vivo in invertebrate model Galleria mellonella. Strains of C. albicans ATCC 18804 and L. rhamnosus ATCC 9595 were used (from the Microbiology Laboratory of the Institute of Science and Technology of São José dos Campos / UNESP). For the study were prepared from L. rhamnosus two suspensions, one containing the serving cell and the other with the culture supernatant free cells. The study of in vitro pathogenicity of C. albicans was assessed by biofilm formation testing and quantitation of CFU / ml of C. albicans, analysis of metabolic activity by XTT method and C. albicans filamentation. The analysis of the Galleria mellonella survival curve was used to evaluate in vivo the influence of L. rhamnosus in infection caused by C. albicans. Genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 and ALS3 of C. albicans were quantified by RT-PCR after interacting in biofilm model. In vitro evaluation L. rhamnosus was able to inhibit biofilm formation, filamentation and reduce the metabolic activity of C. albicans. These effects were also observed when using the suspension culture supernatant of L. rhamnosus, indicating the possible of production substances with inhibiting effect. The results obtained in vivo indicate that L. rhamnosus and its supernatant protected G. mellonella of C. albicans infection, but the suspension of the supernatant showed better results, as it increased the survival caterpillar G. mellonella. The results of gene expression have shown that ....