Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: José Eduardo Cezar Sampaio / Banca: Juliana Rico Pires / Resumo: A periodontite é uma doença infecciosa caracterizada pela secreção de uma variedade de mediadores inflamatórios que levam a destruição dos tecidos de suporte dental, incluindo o osso alveolar e possível perda dos dentes, em associação com a infecção por múltiplas espécies de bactérias gram-negativas. Estima-se que mais de 400 espécies microbianas colonizam o biofilme dental e algumas das espécies bucais relacionadas à doença periodontal apresentem-se no biofilme subgengival incluindo Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola. Entretanto, outros microrganismos podem também estar relacionados a patologia desta doença, como Filifactor alocis, Prevotella tannerae e Candida albicans. Estes microrganismos juntamente com seus subprodutos como as endotoxinas liberadas no meio extracelular levam ao estímulo da glicoproteina Indutora de Metaloproteinases (EMMPRIN-CD147) a qual estimula a liberação de metaloproteinases da matriz (MMPs) pelas células do hospedeiro, por exemplo, fibroblastos e células endoteliais levando assim a destruição tecidual. Com o objetivo de detectar novos patógenos relacionados à doença periodontal como F. alocis, P. tannerae, C. albicans e T. denticola e também avaliar a glicoproteína EMMPRIN (CD- 147) e sua correlação com MMP-2 e MMP-9 em amostras de fluido subgengival de pacientes com periodontite crônica, foram coletadas amostras de fluido subgengival de sítios sadios e doentes de 20 indivíduos com periodontite crônica antes do tratamento periodontal básico, e após um período de 60 dias do tratamento foi realizada nova coleta de sítios sadios e doentes. Os respectivos DNAs foram extraídos e trechos do gene 16S foram amplificados e posteriormente realizados PCR convencional para a análise microbiológica dos microrganismos em estudo. Para a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontitis is an infectious disease characterized by the secretion of a variety of inflammatory mediators that lead to destruction of tooth supporting tissues, including the possible loss of alveolar bone and teeth, in association with infection with multiple species of gram-negative bacteria. It is estimated that more than 400 species of microorganisms colonize the biofilm and some oral species related to periodontal disease is present in the subgingival including Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Treponema denticola. However, other organisms may also be related to pathology of this disease, as Filifactor allocis, Prevotella tannerae and Candida albicans. These microorganisms along with subproducts such as endotoxins released into the extracellular lead to the stimulation of metalloproteinase inducer glycoprotein (EMMPRIN, CD-147), which stimulates the release of MMPs by host cells, like fibroblasts and endothelial cells, thus leading to tissue destruction . The objective of this study was to detect new pathogens relationed with periodontal disease such as F. allocis, P. tannerae, C. albicans, T. denticola and also the glycoprotein EMMPRIN (CD-147) and its correlation with MMP-2 and MMP-9 in subgingival fluid samples of patients with chronic periodontitis. Fluid were collected from healthy and disease subgingival sites of 20 healthy individuals with chronic periodontitis before basic periodontal treatment, and after a period of 60 days of treatment was performed new collection of healthy and diseased sites. Their DNAs were extracted and portions of the 16S gene were amplified and subsequently performed conventional PCR for the microbiological analysis of the microorganisms this study. For immunological analysis and quantification of EMMPRIN (CD-147), MMP-2 and MMP-9 was used... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-23Bitstream added on 2014-06-13T20:57:37Z : No. of bitstreams: 1 toledo_fa_me_arafo.pdf: 482803 bytes, checksum: fe7932ab1cc5d556039baeb6cb760c08 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A periodontite é uma doença infecciosa caracterizada pela secreção de uma variedade de mediadores inflamatórios que levam a destruição dos tecidos de suporte dental, incluindo o osso alveolar e possível perda dos dentes, em associação com a infecção por múltiplas espécies de bactérias gram-negativas. Estima-se que mais de 400 espécies microbianas colonizam o biofilme dental e algumas das espécies bucais relacionadas à doença periodontal apresentem-se no biofilme subgengival incluindo Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola. Entretanto, outros microrganismos podem também estar relacionados a patologia desta doença, como Filifactor alocis, Prevotella tannerae e Candida albicans. Estes microrganismos juntamente com seus subprodutos como as endotoxinas liberadas no meio extracelular levam ao estímulo da glicoproteina Indutora de Metaloproteinases (EMMPRIN-CD147) a qual estimula a liberação de metaloproteinases da matriz (MMPs) pelas células do hospedeiro, por exemplo, fibroblastos e células endoteliais levando assim a destruição tecidual. Com o objetivo de detectar novos patógenos relacionados à doença periodontal como F. alocis, P. tannerae, C. albicans e T. denticola e também avaliar a glicoproteína EMMPRIN (CD- 147) e sua correlação com MMP-2 e MMP-9 em amostras de fluido subgengival de pacientes com periodontite crônica, foram coletadas amostras de fluido subgengival de sítios sadios e doentes de 20 indivíduos com periodontite crônica antes do tratamento periodontal básico, e após um período de 60 dias do tratamento foi realizada nova coleta de sítios sadios e doentes. Os respectivos DNAs foram extraídos e trechos do gene 16S foram amplificados e posteriormente realizados PCR convencional para a análise microbiológica dos microrganismos em estudo. Para a... / Periodontitis is an infectious disease characterized by the secretion of a variety of inflammatory mediators that lead to destruction of tooth supporting tissues, including the possible loss of alveolar bone and teeth, in association with infection with multiple species of gram-negative bacteria. It is estimated that more than 400 species of microorganisms colonize the biofilm and some oral species related to periodontal disease is present in the subgingival including Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Treponema denticola. However, other organisms may also be related to pathology of this disease, as Filifactor allocis, Prevotella tannerae and Candida albicans. These microorganisms along with subproducts such as endotoxins released into the extracellular lead to the stimulation of metalloproteinase inducer glycoprotein (EMMPRIN, CD-147), which stimulates the release of MMPs by host cells, like fibroblasts and endothelial cells, thus leading to tissue destruction . The objective of this study was to detect new pathogens relationed with periodontal disease such as F. allocis, P. tannerae, C. albicans, T. denticola and also the glycoprotein EMMPRIN (CD-147) and its correlation with MMP-2 and MMP-9 in subgingival fluid samples of patients with chronic periodontitis. Fluid were collected from healthy and disease subgingival sites of 20 healthy individuals with chronic periodontitis before basic periodontal treatment, and after a period of 60 days of treatment was performed new collection of healthy and diseased sites. Their DNAs were extracted and portions of the 16S gene were amplified and subsequently performed conventional PCR for the microbiological analysis of the microorganisms this study. For immunological analysis and quantification of EMMPRIN (CD-147), MMP-2 and MMP-9 was used... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Ana Paula Miranda Vieira (anapaula.mvieira@hotmail.com) on 2018-03-18T23:25:55Z No. of bitstreams: 1 Ana Paula Miranda Vieira - Mestrado.pdf: 1718785 bytes, checksum: f8a4ee381763d62564106bf81536ad0b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-03-19T12:15:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_apm_me_araca_int.pdf: 1718785 bytes, checksum: f8a4ee381763d62564106bf81536ad0b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-19T12:15:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_apm_me_araca_int.pdf: 1718785 bytes, checksum: f8a4ee381763d62564106bf81536ad0b (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Objetivo: Este estudo sintetizou um novo nanosistema carreador de clorexidina (CLX) baseado em nanopartículas magnéticas de óxido de ferro (NMOFs) e quitosana (QS), e avaliou seu efeito antimicrobiano sobre biofilmes de Candida albicans e Streptococcus mutans: Metodologia: O nanosistema NMOFs-QS-CLX foi preparado pela interação de CLX sobre NMOFs revestidas com QS, e caracterizado por difração de raios X, espectroscopia de absorção na região do infravermelho médio com transformada de Fourier, microscopia eletrônica de transmissão e dispersão dinâmica de luz. A concentração inibitória mínima (CIM) do nanosistema NMOFs-QS-CLX capaz de inibir as cepas no estado planctônico foi determinada de acordo com o método de microdiluição em caldo. Na sequência, biofilmes simples e mistos de C. albicans e S. mutans foram formados durante 24 horas em poços de placas de 96 poços na presença do nanosistema contendo CLX a 39 (NMOFs-QS-CLX39) ou 78 μg/mL (NMOFs-QS-CLX78). Ainda, biofilmes pré-formados (24 horas) foram tratados durante 24 horas com o nanosistema nas mesmas concentrações. O efeito antibiofilme foi avaliado através da contagem do número de células cultiváveis, quantificação da biomassa total e avaliação da atividade metabólica. Controles apropriados foram incluídos em todas as análises. Os dados foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis e por ANOVA a um critério, seguidos dos testes Student-Newman-Keuls e Holm-Sidak, respectivamente (α = 0,05). Resultados: Os resultados de caracterização confirmaram a formação do nanosistema NMOFs-QS-CLX, sem alteração das propriedades cristalinas das NMOFs. Além disso, as bandas de absorção características de cada composto foram identificadas no espectro do infravermelho, e o diâmetro médio do nanosistema foi menor que 40 nm. Os resultados de CIM mostraram que o nanosistema foi ligeiramente mais efetivo do que a CLX na inibição do crescimento dos microrganismos testados. Biofilmes formados na presença do nanosistema NMOFs-QS-CLX39 atingiram patamares quantitativos similares àqueles observados para CLX a 78 µg/mL. Ainda, para os biofilmes simples e mistos, o nanosistema NMOFs-QS-CLX78 mostrou efeitos redutores superiores ou similares àqueles encontrados para CLX a 78 µg/mL e NMOFs-QS-CLX39. Conclusão: O nanosistema NMOFs-QS-CLX foi efetivo tanto na inibição da formação de biofilmes como sobre biofilmes pré-formados de C. albicans e S. mutans em culturas simples ou mistas. O desenvolvimento desse nanosistema instaura inúmeras possibilidades para exploração de terapias baseadas em nanopartículas magnéticas como carreadoras de drogas usadas na área médico-odontológica. / Aim: This study synthesized a new chlorhexidine(CHX)-carrier nanosystem based on iron oxide magnetic nanoparticles (IONPs) and chitosan (CS), as well as evaluated its antimicrobial effect on biofilms of Candida albicans and Streptococcus mutans. Method: The IONPs-CS-CHX nanosystem was prepared by CHX interaction to CS-coated IONPs and characterized by X-ray powder diffraction, Fourier transform infrared spectroscopy, transmission electron microscopy and dynamic light scattering. Minimum inhibitory concentration (MIC) of the IONPs-CS-CHX nanosystem was determined according to the broth microdilution assay. After, mono- and dual-species biofilms of C. albicans and S. mutans were formed for 24 hours into wells of 96-well plates in the presence of the nanosystem containing CHX at 39 (IONPs-CS-CHX39) or 78 μg/mL (IONPs-CS-CHX78). Moreover, pre-formed biofilms (24 h) were treated for 24 h with the nanosystem at the same concentrations. The antibiofilm effect was determined by quantification of cultivable cells, total biomass and metabolic activity. Appropriate controls were included in all analyzes. Data were analyzed by Kruskal-Wallis’ test and one-way ANOVA, followed by Student-Newman-Keuls and Holm-Sidak tests (α = 0.05). Results: Characterization results confirmed the nanosystem formation without altering the crystalline properties of the IONPs. In addition, the characteristic absorption bands of each compound were identified in the infrared spectrum, and the mean diameter of the nanosystem was lower than 40 nm. MIC results showed that the nanosystem was slightly more effective than CLX in inhibiting the growth of the microorganisms tested. Biofilms formed in the presence of IONPs-CS-CHX39 attained similar quantitative levels to those observed for CHX at 78 μg/mL. Further, for mono- and dual-species biofilms, IONPs-CS-CHX78 showed similar or superior antibiofilm effects when compared with IONPs-CS-CHX39 and free CHX at 78 μg/mL. Conclusion: The IONPs-CS-CHX nanosystem was able to reduce biofilm formation and pre-formed biofilms of C. albicans and S. mutans in single or mixed cultures. The development of this nanosystem establishes several possibilities for exploration of magnetic nanoparticle-based therapy as drug carrier used in health area. / 16-18/404721

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Ana Lúcia Machado / Banca: Francisco de Assis Nollo Junior / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Soraya Coelho Leal / Resumo: Esta investigação teve os seguintes objetivos: 1. avaliar in vitro o efeito da Terapia Fotodinâmica (PDT) utilizando diferentes concentrações de curcumina e doses de luz LED na inativação de suspensões planctônicas de S. aureus resistente (MRSA) e susceptível à meticilina (MSSA) e a citotoxicidade dos parâmetros antimicrobianos dessa terapia em cultura celular de fibroblastos; 2. o efeito fotodinâmico da cloro-alumínio ftalocianina (ClAlFt) veiculada em nano-emulsão catiônica e aniônica e comparar com ClAlFt diluída em solvente orgânico na inativação da C. albicans quando em suspensão planctônica e organizados em biofilmes; 3. o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica utilizando a cloroalumínio ftalocianina em sistema de nanoemulsão em culturas planctônicas e biofilmes de bactérias gram-positivas (MSSA e MRSA). No primeiro estudo, suspensões de MSSA e MRSA foram tratadas com diferentes concentrações de curcumina (entre 0,1 a 20,0 μM) e expostas a diferentes fluências de LED azul (18; 25 e 37,5 J/cm2). Em seguida, diluições seriadas foram obtidas e alíquotas de 25 μl de cada diluição foram plaqueadas em meio de cultura Mannitol Salt Agar. Após o período de incubação de 48 horas a 37°C, as unidades formadoras de colônias foram determinadas (UFC/mL). Para as células L929, essas foram incubadas por 20 minutos com curcumina e irradiadas em seguida com LED (37,5 J/cm2). A viabilidade celular após a PDT foi avaliada utilizando o teste de MTT e as alterações morfológicas foram avaliadas pela microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados foram submetidos à análise descritiva, Análise de Variância (ANOVA) e post hoc de Tukey (α= 5%). As concentrações de 5, 10 e 20 μM resultaram em completa inativação do MSSA quando associadas a qualquer fluência de energia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this investigation was to evaluate: 1. the Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin for in vitro inactivation of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) and susceptible S. aureus (MSSA) and its citotoxic effects against L929 fibroblasts; 2. the photodynamic potential of aluminum-chloride-phthalocyanine (ClAlPc) entrapped in cationic and anionic nanoemulsions (NE) to inactivate C. albicans planktonic and biofilm cultures compared with free ClAlPc; 3. the photodynamic effect of ClAlPc encapsulated in NE on methicillin susceptible and resistant S. aureus suspensions and biofilms. In the first study, suspensions of MSSA and MRSA were treated with different concentrations of curcumin and exposed to LED. Serial dilutions were obtained from each sample, and colony counts were quantified. For fibroblasts, the cell viability subsequent to the curcumin-mediated photodynamic therapy was evaluated using the MTT assay and morphological changes were assessed by SEM analysis. Curcumin concentrations ranging from 5.0 to 20.0 μM in combination with any tested LED fluences resulted in photokilling of MSSA. However, only the 20.0 μM concentration in combination with highest fluence resulted in photokilling of MRSA. This combination also promoted an 80% reduction in fibroblast cell metabolism and morphological changes were present, indicating that cell membrane was the main target of this phototherapy. In the second study, fungal suspensions were treated with different types of delivery systems containing ClAlPc. After 30 minutes, the drug was washed-out and samples were illuminated with LED source (660 ± 3 nm). Negative control samples were not exposed to ClAlPc or light. For planktonic suspensions, colonies were counted (CFU/ml) and cell metabolism was evaluated by XTT assay. (Kruskal-Wallis and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador :Rosilene Fernandes da Rocha / Doutor

Banca: Mario Tsunezi Shimizu / Banca: Carmelinda Schimidt Unterkircher / Banca: Oslei Paes de Almeida / Banca: José Francisco Höfling / Banca: Esther Birman / Resumo: A presença do gênero Candida e a produção de enzimas histolíticas pelas amostras isoladas, foram observadas na saliva e no fluido gengival de pacientes com periodontite crônica do adulto e em indivíduos com periodonto saudável. Foram também verificados as quantidades de anticorpos anti-Candida as classes IgG. IgA. IgM e IgE na saliva e soro e das classes IgG. IgA e IgM no fluido do sulco gengival dos mesmos pacientes, através da reação ELISA. As leveduras do gênero Candida, principalmente C. albicans foram isoladas da saliva em maior número de pacientes com periodontite crônica do adulto em relação aos controles, com diferença estatisticamente significativa. A média da quantidade de UFC/ml de Candida isoladas, foram maiores para os pacientes com periodontite, porém esta diferença não foi estatisticamente significativa. As amostras de Candida isoladas de ambos os grupos, produziram enzimas histolíticas (hialuronidase, condroitin-sulfatose, proteinase e fosfolipase), que são considerados fatores de patogenicidade na doença periodontol. Apenas uma amostra de cada grupo (C albicans) não produziu nehuma dos quatro enzimas pesquisadas. Os níveis de imunoglobulinos anti-Candida das classes IgG. IgM e IgA na saliva, IgG e IgA no soro e IgG e IgM no fluido do sulco gengival foram estatisticamente superiores nos pacientes com periodontite crônico do adulto em relação aos indivíduos com periodonto saudável, sugerindo resposta imune humoral do organismo dos pacientes com periodontite às leveduras do gênero Candida / Abstract: The presence of Candida and the production of histolytic enzyms by the isolated samples were observed in the saliva and gingival fluid in adult chronic periodontitis patients and health ones. It was also verified the quantity of antibodies against Candida (IgG, IgA, IgM and IgE) in the saliva and sera of the same patients through ELISA technique. Yeasts of the genus Candida mainly C. albicans were isolated from saliva in higher number from adult chronic periodontitis patients in relation to the controle with statistically significant difference. The meon of the quantity of isolated Candida (UFC/ml) were higher for periodontítis patients, although this difference was not statistically significative. Samples of Candida isolated from both groups produced hystolytic enzymes (hyaluronidase, condroitin sulfatase, proteinase, phospholipase) that are considered patogenicity factors in periodontol diseases. Only one sample of each group (C albicans) didn't produce the four analysed enzymes. The antibodies levels against Candida (IgG, IgM and IgA in saliva, IgG and IgA in sera and IgG and IgM in gingival Fluid), were statistically higher in adult chronic periodontitis patients in relation to periodontically health individuals, suggesting humoral immune response by periodontitis patients to the yeasts of the genus Candida

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Co-orientador: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: A alta incidência de candidoses causadas por Candida albicans e a capacidade de adaptação desta espécie, assim como resistência aos antifúngicos impulsionam o desenvolvimento de pesquisas com terapias alternativas para controle dessa infecção. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência de Lactobacillus rhamnosus e produtos do seu metabolismo contra C. albicans, avaliando-se a patogenicidade e a expressão de genes que regulam a formação do biofilme de C. albicans, in vitro e in vivo em modelo invertebrado de Galleria mellonella. Foram utilizadas cepas de C. albicans ATCC 18804 e L. rhamnosus ATCC 9595 (provenientes do Laboratório de Microbiologia do Instituto de Ciências e Tecnologia de São José dos Campos / UNESP). Para o estudo foram preparadas duas suspensões de L. rhamnosus, uma contendo a porção celular e a outra com o sobrenadante da cultura, livre de células. O estudo da patogenicidade in vitro de C. albicans foi avaliado pelos testes de formação de biofilme e quantificação de UFC/mL de C. albicans, análise da atividade metabólica pelo método do XTT e filamentação de C. albicans. A análise da curva de sobrevivência de Galleria mellonella foi utilizada para a avaliação in vivo da influência de L. rhamnosus na infecção causada por C. albicans. Os genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 e ALS3 de C. albicans foram quantificados pela RT-PCR após a interação em modelo de biofilme. No estudo in vitro L. rhamnosus foi capaz de inibir a formação do biofilme, filamentação e reduzir a atividade metabólica de C. albicans. Esses efeitos também foram observados quando utilizado a suspensão do sobrenadante da cultura de L. rhamnosus, apontando possível produção de substâncias com efeito inibitório. Os resultados obtidos in vivo apontam que L. rhamnosus e seu sobrenadante protegeram G. mellonella da infecção por C. albicans, porém a suspensão do sobrenadante apresentou melhores resultados, visto.... / Abstract: The high incidence of candidiasis caused by Candida albicans and the adaptability of this species, as well as resistance to antifungal drive the development of research on alternative therapies to control this infection. The aim of this study was to evaluate the influence of Lactobacillus rhamnosus and products of their metabolism against C. albicans, evaluating the pathogenicity and the expression of genes that regulate the formation of C. albicans biofilms in vitro and in vivo in invertebrate model Galleria mellonella. Strains of C. albicans ATCC 18804 and L. rhamnosus ATCC 9595 were used (from the Microbiology Laboratory of the Institute of Science and Technology of São José dos Campos / UNESP). For the study were prepared from L. rhamnosus two suspensions, one containing the serving cell and the other with the culture supernatant free cells. The study of in vitro pathogenicity of C. albicans was assessed by biofilm formation testing and quantitation of CFU / ml of C. albicans, analysis of metabolic activity by XTT method and C. albicans filamentation. The analysis of the Galleria mellonella survival curve was used to evaluate in vivo the influence of L. rhamnosus in infection caused by C. albicans. Genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 and ALS3 of C. albicans were quantified by RT-PCR after interacting in biofilm model. In vitro evaluation L. rhamnosus was able to inhibit biofilm formation, filamentation and reduce the metabolic activity of C. albicans. These effects were also observed when using the suspension culture supernatant of L. rhamnosus, indicating the possible of production substances with inhibiting effect. The results obtained in vivo indicate that L. rhamnosus and its supernatant protected G. mellonella of C. albicans infection, but the suspension of the supernatant showed better results, as it increased the survival caterpillar G. mellonella. The results of gene expression have shown that .... / Mestre

Orientador: Débora Barros Barbosa / Banca: Wirley Gonçalves Assunção / Banca: Cristiane Yumi Koga Ito / Resumo: O objetivo do presente estudo foi verificar a atividade antimicrobiana de uma resina acrílica à base de poli (metil metacrilato) (PMMA) contendo nanopartículas de prata frente ao microorganismo Candida albicans. Utilizou-se a resina acrílica termopolimerizável Lucitone 550 e as nanopartículas de prata foram sintetizadas por meio da redução dos íons prata do nitrato de prata pelo citrato de sódio. A forma e o tamanho das partículas foram confirmados por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET), tendo-se obtido partículas na forma esférica e com tamanhos médios de 5 e 10 nm. A resina acrílica foi proporcionada de acordo com as instruções do fabricante e a solução coloidal de nanopartículas de prata foi adicionada ao componente líquido da resina acrílica nas concentrações de 0,05%, 0,5% e 5% baseadas na massa do polímero. Após o processamento, os espécimes foram esterilizados por radiação de Co-60. Foram analisados a adesão de microorganismos à superfície do poli (metil metacrilato)/prata (PMMA/Ag) e a formação de biofilme por Candida albicans sobre a superfície polimérica através de microscopia de luz e de MEV. Os resultados mostraram redução estatisticamente significante (P < 0,05) da adesão de microorganismos à superfície do nanocompósito para os grupos com 0,05 e 0,5% de nanopartículas de prata com tamanho de 5nm quando comparados ao grupo controle. A microscopia de luz nãomostrou diferença na formação de biofilme entre os grupos dos nanocompósitos e o grupo controle. A MEV sugeriu uma redução na quantidade de células na superfície dos grupos contendo nanopartículas de prata, especialmente até 12 horas de crescimento fúngico. Os resultados sugerem ação inibitória sobre a adesão e formação de biofilme por Candida albicans quando da adição de nanopartículas de prata de tamanho 5 nm à resina acrílica nas concentrações de 0,05% e 0,5% / Abstract: The aim of this study was to verify the antimicrobial activity of a poly (methyl methacrylate) acrylic resin containing silver nanoparticles against Candida albicans microorganism. The heat-polymerized acrylic resin Lucitone 550 was used and the silver nanoparticles were synthesized through the reduction of silver ions of silver nitrate by sodium citrate. The shape and size of the particles were confirmed by scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM), and showed spherical particles with medium size of 5 and 10 nm. The acrylic resin was proportioned according to the manufacturer's instructions and the silver nanoparticles colloid solution was added to the liquid of the acrylic resin in 0.05%, 0.5% and 5% of concentration based on the polymer mass. After being processing, the specimens were sterilized by Co-60 radiation. The adhesion of cells of Candida albicans and the biofilm formation on the surface of the polymer were evaluated by light microscopy and SEM. The results demonstrated significantly reduction (P < .05) of the microorganisms adhesion on the surface of the nanocomposites for the groups containing 0.05 and 0.5% of silver nanoparticles with size of 5nm when compared to the control group. The light microscopy did not show difference in the biofilm formation among the groups evaluated. The SEM images suggested reduction of growth of Candida albicans cells for the nanocomposite groups, mainly up to the period of 12 hours. It was concluded that the addition of silver nanoparticles with size of 5 nm to the PMMA in 0.05% and 0.5% concentrations showed antimicrobial effect against Candida albicans / Mestre

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-03-29T17:35:36Z No. of bitstreams: 5 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T17:35:36Z (GMT). No. of bitstreams: 5 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Previous issue date: 2015-04-23 / CAPES / A frequência de infecções hospitalares por fungos patogênicos tem aumentado substancialmente nas últimas décadas, acarretando altos níveis de mortalidade que atingem até 60% dos óbitos, frequentes em pacientes graves internados em Unidades de Terapia Intensiva. Testes específicos para diagnóstico de septicemia por Candida albicans possuem altos custos e necessitam um longo tempo para a obtenção de resultados. Diante desse quadro e considerando a necessidade da constante busca por alternativas no diagnóstico de septicemias por Candida albicans, nesse trabalho foi desenvolvido e avaliado uma nova plataforma de sensoriamento para um imunossensor óptico, baseado em Ressonância Localizada de Plasmon. Ressonância de Plasmon corresponde a oscilação coletiva dos elétrons de condução em resposta à excitação óptica promovida pela aplicação de um campo eletromagnético externo. A plataforma de sensoriamento corresponde a uma lâmina de vidro com nanopartículas de prata aderidas em sua superfície e funcionalizadas com anticorpos monoclonais anti-candida da classe das imunoglobulinas IgG. As nanopartículas utilizadas foram avaliadas por microscopia eletrônica de transmissão e espectroscopia de absorção, indicando a presença de nanoestruturas com diâmetro médio de 15 nm. Moléculas de cisteamina foram utilizadas como ligantes no processo de funcionalização de anticorpos e glicina foi explorada como bloqueadores dos sítios não funcionalizados da plataforma. Os experimentos com diferentes concentrações de anticorpos foram realizados em quadruplicadas. Foi observado que quando adicionada cisteamina, glicina e anticorpos o pico de ressonância de Plasmon do sistema sofre um deslocamento para a região vermelha do espectro. Verificou-se deslocamentos do pico de Plasmon de até 30 nm. Na avaliação da plataforma como sensor de antígeno de Candida albicans, a detecção de diferentes concentrações de antígeno foi demonstrada. Plataformas de sensoriamento foram imersas em solução de PBS contendo antígenos nas alíquotas de 50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL e 300 ng/mL, por um período de 1 hora, seguido de lavagem com água MiliQ. Os resultados mostram a capacidade do sistema em identificar alíquotas maiores que 50 ng/mL de antígeno de Candida albicans, indicando a possibilidade do uso da plataforma desenvolvida como imunossensor para Candida. / The frequency of hospital infections by pathogenic fungi has increased substantially in recent decades, leading to high levels of mortality reaching up to 60% of deaths, common in critically ill patients in intensive care units. Specific tests for the diagnosis of sepsis due to Candida albicans have high cost and require a long time to obtain results. Given this situation and considering the need for constant search for alternatives in the diagnosis of septicemia by Candida albicans, this work was developed and evaluated a new sensing platform for an optical immunosensor based on Resonance Localized Plasmon. Plasmon resonance corresponds to collective oscillation of conduction electrons in response to optical excitation promoted by the application of an external electromagnetic field. The sensing platform corresponds to a glass slide with nanoparticles of silver adhered on its surface and functionalized with monoclonal anti-candida antibodies of the IgG class of immunoglobulins. The nanoparticles used were evaluated by transmission electron microscopy and absorption spectroscopy, indicating the presence of nanostructures with an average diameter of 15 nm. Cysteamine molecules were used as ligands in the antibodies functionalization process and glycine as blockers of non-functionalized sites of the platform. Experiments with different concentrations of antibodies were performed in quadruplicate. It was observed that when added cysteine, glycine peak and antibodies specific Plasmon resonance is shifted to the red region of the spectrum. Peak shifts were found to Plasmon up to 54 nm. In the evaluation of the platform as a Candida albicans antigens sensor different antigen concentrations was demonstrated. The sensing platforms were immersed in PBS solution containing dilutions of antigens in 50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL to 300 ng/mL for a period of 1 hour, followed by washing with MilliQ water. The results show the system ability to identify higher dilutions than 50 ng/mL of Candida albicans antigen, indicating the possibility of the use of the platform as developed immunosensor for Candida.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:48:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Colagenases são enzimas proteolíticas capazes de degradarem diferentes tipos de colágeno e apresentam alta especificidade a estas moléculas. Dentre os vários organismos capazes de produzirem estas enzimas, estão as leveduras. As colagenases têm as mais variadas aplicações. Destacam-se as aplicações na indústria de fármacos, onde são utilizadas no tratamento de cicatrizes hipertróficas, na indústria de cosméticos (dermocosméticos), usadas no tratamento de acnes e rugas, e na indústria alimentícia, no amaciamento de carne. O presente trabalho objetivou a seleção de espécies do gênero Candida, produtoras de colagenase extracelular, a determinação das condições de cultivo para a produção da enzima através de processo fermentativo e a caracterização bioquímica parcial da colagenase. Para isto, foram realizados experimentos de fermentação com o auxílio de planejamentos estatísticos (fracionário- 26-2 e completo-23) para a seleção das melhores condições de produção. No estudo de seleção identificou-se que a espécie Candida albicans URM3622 apresentou maior atividade colagenolítica qualitativa no meio ágar-gelatina (halo = 25 mm), e quantitativa (5,0 U/ml) utilizando azocoll como substrato. A análise dos dados do planejamento estatístico fracionário (26-2) demonstrou que entre as variáveis estudadas (pH, tempo de produção, velocidade de agitação, temperatura, concentrações do inóculo e do substrato), a concentração do substrato (gelatina) e a velocidade de agitação foram as variáveis mais significativas para a produção da colagenase. Com base nestes resultados foram executados dois planejamentos estatísticos completos (23) sucessivos nos quais foram estudados, a concentração do substrato, a velocidade de agitação e o pH. Estes planejamentos demonstraram que todas as variáveis foram significativas para a produção da enzima e que a produção máxima foi obtida utilizando o pH 7,0, a velocidade de agitação de 160 rpm e a concentração de substrato de 2%. Sob estas condições foi obtida uma atividade colagenolítica de 6,7 ± 0,2 (U/ml). No estudo da caracterização parcial da enzima observou-se que a enzima apresentou o pH 8,2 como ótimo para a sua atividade e a temperatura ótima de 45 ºC. A colagenase mostrou-se estável aos valores de pH na faixa de 7,2 a 8,2 e à temperatura na faixa de 28 °C a 45 °C. Os resultados obtidos demonstram que a Candida albicans (URM3622), é uma fonte viável de colagenase, sendo assim a sua produção é de interesse para as indústrias farmacêutica, cosmética e alimentícia