Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-30Bitstream added on 2014-06-13T20:25:45Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_apd_dr_arafo.pdf: 832813 bytes, checksum: 759c5af5e6cd507196080c8dc6e34faa (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Esta investigação teve os seguintes objetivos: 1. avaliar in vitro o efeito da Terapia Fotodinâmica (PDT) utilizando diferentes concentrações de curcumina e doses de luz LED na inativação de suspensões planctônicas de S. aureus resistente (MRSA) e susceptível à meticilina (MSSA) e a citotoxicidade dos parâmetros antimicrobianos dessa terapia em cultura celular de fibroblastos; 2. o efeito fotodinâmico da cloro-alumínio ftalocianina (ClAlFt) veiculada em nano-emulsão catiônica e aniônica e comparar com ClAlFt diluída em solvente orgânico na inativação da C. albicans quando em suspensão planctônica e organizados em biofilmes; 3. o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica utilizando a cloroalumínio ftalocianina em sistema de nanoemulsão em culturas planctônicas e biofilmes de bactérias gram-positivas (MSSA e MRSA). No primeiro estudo, suspensões de MSSA e MRSA foram tratadas com diferentes concentrações de curcumina (entre 0,1 a 20,0 μM) e expostas a diferentes fluências de LED azul (18; 25 e 37,5 J/cm2). Em seguida, diluições seriadas foram obtidas e alíquotas de 25 μl de cada diluição foram plaqueadas em meio de cultura Mannitol Salt Agar. Após o período de incubação de 48 horas a 37°C, as unidades formadoras de colônias foram determinadas (UFC/mL). Para as células L929, essas foram incubadas por 20 minutos com curcumina e irradiadas em seguida com LED (37,5 J/cm2). A viabilidade celular após a PDT foi avaliada utilizando o teste de MTT e as alterações morfológicas foram avaliadas pela microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados foram submetidos à análise descritiva, Análise de Variância (ANOVA) e post hoc de Tukey (α= 5%). As concentrações de 5, 10 e 20 μM resultaram em completa inativação do MSSA quando associadas a qualquer fluência de energia... / The aim of this investigation was to evaluate: 1. the Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin for in vitro inactivation of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) and susceptible S. aureus (MSSA) and its citotoxic effects against L929 fibroblasts; 2. the photodynamic potential of aluminum-chloride-phthalocyanine (ClAlPc) entrapped in cationic and anionic nanoemulsions (NE) to inactivate C. albicans planktonic and biofilm cultures compared with free ClAlPc; 3. the photodynamic effect of ClAlPc encapsulated in NE on methicillin susceptible and resistant S. aureus suspensions and biofilms. In the first study, suspensions of MSSA and MRSA were treated with different concentrations of curcumin and exposed to LED. Serial dilutions were obtained from each sample, and colony counts were quantified. For fibroblasts, the cell viability subsequent to the curcumin-mediated photodynamic therapy was evaluated using the MTT assay and morphological changes were assessed by SEM analysis. Curcumin concentrations ranging from 5.0 to 20.0 μM in combination with any tested LED fluences resulted in photokilling of MSSA. However, only the 20.0 μM concentration in combination with highest fluence resulted in photokilling of MRSA. This combination also promoted an 80% reduction in fibroblast cell metabolism and morphological changes were present, indicating that cell membrane was the main target of this phototherapy. In the second study, fungal suspensions were treated with different types of delivery systems containing ClAlPc. After 30 minutes, the drug was washed-out and samples were illuminated with LED source (660 ± 3 nm). Negative control samples were not exposed to ClAlPc or light. For planktonic suspensions, colonies were counted (CFU/ml) and cell metabolism was evaluated by XTT assay. (Kruskal-Wallis and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:09Z : No. of bitstreams: 1 000843223.pdf: 1441368 bytes, checksum: c87084a3d4f9e2c1fd32be68729a4c4b (MD5) / Streptococcus sanguinis e Streptococcus mitis são colonizadores pioneiros do biofilme bucal e podem causar endocardite bacteriana. Candida albicans está presente na cavidade bucal de forma comensal, possui capacidade de formar biofilme e causar candidose bucal. O objetivo desse trabalho foi avaliar as interações entre C. albicans com S. sanguinis e S. mitis em biofilmes e suas influências in vivo em modelo experimental de invertebrado Galleria mellonella. Para o estudo da interação de C. albicans (ATCC 18804) com S. sanguinis (ATCC 7073) e S. mitis (ATCC 4945) foram formados biofilmes monoespécie e multiespécies de C. albicans com os micro-organismos (na concentração de 107 células/mL) em fundo de placa de 96 poços por 48 h, incubados em estufa a 37 °C com 5% CO2. Após crescimento, os biofilmes foram desprendidos e obtidas diluições decimais as quais foram semeadas em meios seletivos. Após incubação por 48 h/37 °C foi obtida a contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL). Em paralelo, foram realizados ensaios colorimétricos com o sal XTT, a fim de mensurar a atividade metabólica de C. albicans nos biofilmes isolados e associados, seguindo de leitura a 492 nm, e o resultado expresso em absorbância (Abs). No estudo in vivo, primeiro foram determinadas as concentrações subletais dos micro-organismos, e inoculadas em G. mellonella, e observado o efeito de C. albicans, S. mitis e S. sanguinis nas lagartas, avaliando se curva de sobrevivência. Avaliação morfológica dos biofilmes foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados de contagem de UFC/mL e da atividade metabólica foram submetidos à análise de normalidade, e como foi observada distribuição normal, os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes t de Student (para duas variáveis) e Tukey (para três ou mais variáveis), considerando-se diferença estatística quando p <0,05. Os dados obtidos na curva de.. / Streptococcus sanguinis and Streptococcus mitis are pioneering colonizers of oral biofilm and can cause bacterial endocarditis. Candida albicans is present in the oral cavity in a commensal manner and also has the ability to form biofilm and cause oral candidiasis. The aim of this study was to evaluate the interactions between C. albicans with S. sanguinis and S. mitis biofilms and their influences in vivo on an experimental invertebrate model of Galleria mellonella. To study the interaction of C. albicans (ATCC 18804) with S. sanguinis (ATCC 7073) and S. mitis (ATCC 4945) monospecies and multispecies biofilms were formed of C. albicans and with micro-organisms (a concentration of 107 cells/ml) in the bottom of a 96-well plate for 48 h, incubated at 37 °C with 5% CO₂. After growth, biofilms were detached, and decimal dilutions were plated on selective media. After incubation for 48 h/37 °C the count of colony forming units per milliliter (CFU/mL) was obtained. Alongside, XTT salt colorimetric assays were carried in order to measure the metabolic activity of isolated and associated C. albicans biofilms, following reading at 492 nm, and the result expressed in absorbance (Abs). In the in vivo study, first the sublethal concentrations of microorganisms were determined, and inoculated into G. mellonella, and the effect of C. albicans, S. mitis and S. sanguinis in caterpillars was observed, evaluating the survival curve. Morphological evaluation of the biofilms was performed by scanning electron microscopy (SEM). The count of CFU/mL and metabolic activity were submitted to normality analisis, and as a normal distribution was observed, the results were statistically analyzed by Student's t test (for two variables) and Tukey (for three or more variables) considering statistical difference at p < 0.05. The G. mellonella survival curves data were analyzed by log-rank method. Streptococci influenced the reduction of biofilms of C. albicans and ....

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:42Z : No. of bitstreams: 1 000846451.pdf: 1430012 bytes, checksum: b36ec304aba3d25dcd4c3440e3fd6a9e (MD5) / Dental materials act as substrates for the adhesion of microorganisms, and consequently, for biofilm development. Given that the surface characteristics of materials may interfere in the initial adhesion, changes in these characteristics may inhibit or reduce the adhesion of bacteria and fungi, thus preventing the development of diseases. Another aspect to consider is that, in the oral cavity, surfaces are covered with saliva, forming a thin film referred to as acquired salivary pellicle. In order to simulate oral conditions, in vitro studies have used preconditioning in human saliva before biofilm formation. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of plasma polymerized films on the surface characteristics of dental materials (acrylic resin, titanium and zirconia), as well as on the biofilm formation on these materials, with and without preconditioning in human saliva. For this purpose, the monomer hexamethyldisiloxane HMDSO was used as precursor in the PECVD (Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition) process. Deposition parameters were varied to produce a range of films with hydrophobic or hydrophilic characteristics. Specimens of each material without film deposition were used as controls. Characterization of the films was performed by Fourier Transformed infrared spectroscopy (FTIR), scanning electron microscopy (SEM), contact angle measurements and surface free energy, X-ray photoelectron spectroscopy (XPS), and profilometry. To evaluate biofilm formation, half of the test specimens (10 × 2 mm) of the experimental and control groups were stored in previously prepared 16 human saliva and afterwards incubated with 1 × 107 cells/mL of both Candida albicans (for acrylic resin) and Porphyromonas gingivalis (for titanium and zirconia). Samples without preconditioning in saliva were also incubated in the respective microorganisms... (Complete abstract electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:10:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-06-05Bitstream added on 2014-11-10T11:57:21Z : No. of bitstreams: 1 000134804.pdf: 2170606 bytes, checksum: a9bb17090b4e19e238785aceaee3fa1d (MD5) / O presente estudo teve como objetivo a produção de um anticorpo monoclonalreativo com leveduras do gênero Candida. Esplenócitos de camundongosBALB/c previamente imunizados com Candidaforam fusionados in vitro comcélulas de mieloma Sp2-0Ag14 e os híbridos resultantes mantidos em cultura a37°C com 5% de C02. Os sobrenadantes das células em crescimento foram testados por ELISA para a produção de anticorpos. Os pontos positivos {0,29%)foram clonados para obter-se o anticorpo monoclonal e posteriormenteexpandidos in vivo emperitônio de camundongo. O anticorpo produzido peloclone foi purificado e isotipado. O anticorpo monoclonal foi denominado 76C e éuma lgMK. O 76C é dirigido para um epítopo de mananoproteína da paredecelular de Candida, cuja natureza ainda não foi completamente elucidada. Oanticorpo 76C foi analisado por DOT SLOT contra diferentes cepas de Candidareagindo positivamente com 87,5% das amostras testadas. O anticorpomonoclonal (76C) será uma ferramenta útil no estudo sorológico de pacientescom candidose invasiva. / The aim of this study was to obtain a reactive monoclonal antibody against Candida albicans. Spleen celIs of BALB/c mice previously immunized withCandida were fused in vitro with mielorna cells Sp2-0Ag14. The resultant hybridcells were kept in culture medium at 5% C02.The suspension growing cells were tested by ELISA to check the antibodies titer. The positive colonies were cloned to achieve the monoclonal antibody and further expanded in mice peritoneum. The antibody produced was purified and isotope. The monoclonal antibody was denominated 76C. The 76C was directed against mannoprotein molecules from Candida cell surface, which has not yet been completely investigated to find outlhe specific nature of epitope. The antibody 76C was analyzed by DOT BLOTagainst different Candida species and there were positives results in 87,5% of the tested samples_ The monoclonal antibody 76C will be a useful tool to investigate oligomannoside epitope from mannan and could be applied in sera diagnosis in invasive candidiasis and in studies of glicidic epitope.

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-06-12Bitstream added on 2015-01-26T13:30:29Z : No. of bitstreams: 1 000134842.pdf: 2303477 bytes, checksum: e0bcdeb6fe2e5b917ac56afb68d49171 (MD5) / A presença de leveduras do gênero candida e staphylococcus na cavidade bucal humana adquire importância, pois pode atuar como microbiota suplementar e, em determinadas situações, ocasiona doença bucal ou sistêmica. O objetivo do presente trabalho foi correlacionar a presença de leveduras do gênero Candida e espécies de Staphylococcus na cavidade bucal humana. Enxágüe bucal foram coletados de setenta indivíduos e, a seguir semeados em ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol e agar Baird-Parker. Após crescimento, os microrganismos foram isolados e identificados através das provas bioquímicas. Os dados foram analisados através de análise de variância (Anova). Leveduras do gênero Candida foram encontradas em 71,42% dos indivíduos examinados, sendo C.albicans a mais frequente. staphylococcus spp. foram isolados em 92,85% das cavidades bucais, sendo 41 cepas coagulase-negativas (63%). Das cepas coagulase positivas, nove eram S.aureus, 11 S.hyicus e quatro S.schleiferi subespécie coagulans. Não ocorreu entretanto correlação entre as quantidades de unidades formadoras de colônia de Candida e Staphylococcus encontradas nos enxágües bucais dos indivíduos examinados / The presence of Candida genus yeasts and staphylococci in the human oral cavity is very important because they can act as supplementary microbiota and in certain situations can cause oral or systemic diseases. The aim of this study was to correlate the presence of Candida genus yeasts and species of staphylococci in the human oral cavity. Oral riinsings were colected from 70 people and the cultived in Sabouraud glucose agar with chloramphenicol and Baird-Parker ágar. After the incubation period, the microrganisms were isolated and identified through biochemical tests. The Candida genus yeasts were found in 71,42% of the examined people, and C.albicans were isolated from 92,85% of the oral cavities. Fourty-one Staphylococcus negative for coagulase (63%) were found. Among the Staphylococcus samples positive for coagulase nine were S.aureus, 11 S.hyicus and four S.schleiferi subspecies coagulans. There was no correlation between the quantities (cfu) of Candida and staphylococci isolated from the oral rinsings of the examined people

Orientadora: Débora Barros Barbosa / Coorientadora: Aline Satie Takamiya / Banca: Douglas Roberto Monteiro / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Resumo: O objetivo geral desse estudo foi sintetizar e caracterizar nanobiomateriais compostos por nanopartículas de prata (AgNP) e glicerofosfato de cálcio (CaGP) sintetizados por rotas químicas utilizando - se borihidreto de sódio ou citrato de sódio e fitoquímica por meio de extrato da casca de romã, e avaliar seu efeito antimicrobiano contra cepas de referência de Cand ida albicans (ATCC 10231) e Streptococcus mutans (ATCC 25175) e sua citotoxicidade em células de fibroblastos (L929). Além do agente redutor, para as sínteses químicas variou - se a concentração de prata (1 ou 10%), a apresentação do CaGP (micro ou nanoparti culado), o solvente utilizado na síntese (água deionizada ou isopropanol) e a forma dos nanocompostos (em suspensão, seco em estufa ou liofilizado). Para a síntese fitoquímica utilizou - se o extrato da casca desidrata da romã, obtido por percolação em etano l (70%) e com os compostos totais fenólicos expressos em ácido gálico e a concentração de ácido elágico quantificados respectivamente por método colorimétrico e HPLC. A caracterização dos nanocompostos e dos controles contendo somente AgNP foi feita por UV - Vis, MEV, e EDX. A ação antimicrobiana foi avaliada por meio da mínima contração inibitória de acordo com o método da microdiluição (CLSI M27 - A2 e M07 - A9), enquanto que a viabilidade celular dos fibroblastos foi quantificada utilizando - se método fluorimét rico (Alamar Blue). Esses experimentos foram realizados em triplicata em três ocasiões diferentes e os dados de porcentagem de viabilidade celular foram analisados pela A NOVA de um fator seguido do teste de Bonferroni (α=5%). Para todas as sínteses houve formação de AgNP associadas ao CaGP. Contudo pela microscopia somente na concentração de 10% de prata visualizou - se as AgNP decorando... / Abstract: The aim of this study was to synthesize and characterize nanomaterials compounds by silver nanoparticles (AgNP) and calcium glycerophosphate (Ca GP) synthesized by chemical route using sodium borihidreto or sodium citrate, and phytochemical through pomegranate peel extract, and evaluate its antimicrobial effect against reference strains of Candida albicans (ATCC 10231) and Streptococcus mutans (ATCC 25175) and its cytotoxicity in fibroblast cells (L929) . Besides, reducing agent for chemical syntheses, is varied the silver concent ration (1 or 10%), the form of CAGP (micro or nanoparticulate), the solvent used in synthesis (deionized water or isopropanol) and the form of the nanocomposite ( suspended, d ry in incubator or lyophilized). For the phytochemical synthesis, utilized the pe el extract of pomegranate obtained by percolation in ethanol (70%) and total phenolic compounds was expressed in gallic acid standard and ellagic acid concentration respectively quantified by colorimetric method HPLC . The characterization of nanocomposites and controls containing only AgNP was made by UV - Vis spectroscopy, SEM and EDX. The antimicrobial activity was evaluated by the minimum inhibitory concentration according to the microdilution method (CLSI M27 - M07 - A2 and A9), whereas fibroblast cell viability was quantitated using fluorimetric method (Alamar Blue). These experiments were performed in triplicate on three different occasions and the cell viability percentage data were analyzed by one - way ANOVA followed by Bonferroni test ( α = 5%). For all syntheses were associated between AgNP and CaGP. However only by microscopy at a concentration of 10% silver visualized the AgNP decorating the surface of CaGP (synthesis with sodium borihidreto and isopropanol) shrouded... / Mestre

Orientador: Luis Vitor Silva do Sacramento / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Dulce Helena Siqueira da Silva / Resumo: Cordia verbenacea DC. pertence à família Boraginaceae que contém aproximadamente 100 gêneros, com mais de 2000 espécies distribuídas em todo o planeta. Ocorre ao longo de todo litoral brasileiro, sendo considerada, também, uma planta comum na Floresta Tropical Atlântica, possuindo vários nomes populares como maria-preta, maria-milagrosa e catinga-de-barão, sendo o mais comum erva-baleeira, ou simplesmente baleeira. É amplamente utilizada para tratar processos inflamatórios sendo geralmente aplicada topicamente nas áreas atingidas. Foi utilizada pelo laboratório Aché para o desenvolvimento do Acheflan®, primeiro medicamento fitoterápico 100% nacional com registro na Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), utilizado para o tratamento de tendinites crônicas e dores miofaciais. Este trabalho objetivou: traçar um perfil físico-químico da droga vegetal oriunda das partes aéreas de Cordia verbenacea; realizar um estudo anatômico e histoquímico do limbo; realizar um estudo fitoquímico preliminar traçando um perfil do extrato bruto e de suas frações, bem como verificar seus respectivos potenciais anti-Candida. Tricomas tectores e glandulares, estômatos anomocíticos e idioblastos contendo areia cristalina destacam-se como marcadores anatômicos. O estudo histoquímico revelou a ocorrência de lipídios totais, óleos essenciais, terpenoides com grupo carbonila, compostos fenólicos, flavonoides e pectinas. A droga vegetal estudada apresentou resultados favoráveis ao estabelecimento de parâmetros físico-químicos , tais como, perda por dessecação (8,40%), cinzas totais (17,40%) e cinzas insolúveis em ácido (1,02%), com perfil fitoquímico preliminar apontando ocorrência de saponinas, flavonoides, alcaloides, terpenos e taninos. O estudo em CCD foi confirmativo para flavonoides, terpenos e taninos. O extrato bruto e suas frações (aquosa, hexano, n-butanol e acetato de etila) apresentaram resultados ... / Abstract: Cordia verbenacea DC. belongs to the Borraginaceae family, which contains approximately 100 genera and over 2000 species distributed across the planet. This species occurs all along the Brazilian coast, and it's also considered a common plant in the Atlantic Rainforest, having many popular names like maria-preta, maria-milagrosa e catinga-de-barão, the most common erva-baleeira, or simply baleeira. It is widely used to treat inflammatory processes and it's usually applied topically on the affected areas. It was used by the Aché laboratories for the development of Acheflan®, it was the first national herbal medicine registrated in the Brazilian Regulatory Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA), indicated for the treatment of chronic tendinitis and myoface pain. The aim of this work is to obtain a physical-chemical profile of the plant drug derived from branches of Cordia verbenacea; develop a morphological and histochemical study of limbo; develop a preliminary phytochemical study outlining a profile of the crude extract and its fractions, as well as checking their anti-Candida potential. Tector trichomes, glandular trichomes, anomocytic stomats and idioblasts with crystal sands stand out as anatomical markers. The histochemical study revealed the occurrence of lipids, essential oils, terpenoids with the carbonyl group, phenolic compounds, flavonoids and pectins. The drug studied showed favorable results to the establishment of physico-chemical parameters, such as loss on drying (8.40%), total ash (17.40%) and acid insoluble ash (1.02%), and a preliminary phytochemical profile that points occurrence of saponins, flavonoids, alkaloids, terpenes and tannins. The CCD study was confirmatory for flavonoids, terpenes and tannins. The crude extract and its fractions (aqueous, hexane, n-butanol and ethyl acetate) showed interesting results when compared with the results of the essential oil of Cordia verbenaceae literature. The minimum ... / Mestre

Orientador: Eduardo Bagagli / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Leonardo Nimrichter / Banca: Carlos Henrique Camargo / Banca: Radames J. B. Cordeiro / Resumo: Nas últimas décadas, a epidemiologia das infecções por Candida spp. e o perfil de susceptibilidade a drogas vêm sofrendo importantes alterações. A emergência dessas espécies, como agente de infecções invasivas, tem se destacado principalmente entre pacientes imunocomprometidos. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a epidemiologia das infecções por Candida spp. no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, e auxiliar no suprimento de dados para o melhor controle da infecção hospitalar. Os objetivos específicos incluíram a comparação entre as metodologias tradicional, automatizada e molecular de identificação em nível de espécie atualmente disponíveis nesta instituição, avaliar o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos, bem como a produção de biofilme por estes isolados e caracterizar, utilizando ferramentas de biologia molecular, genes envolvidos na produção de biofilme de C. albicans e C. parapsilosis e o emprego dos introns do grupo I para genotipagem de C. albicans. Um total de 196 isolados de Candida spp. provenientes de hemocultura de pacientes foram avaliados. As espécies mais frequentes foram C. albicans (39,3 44,4%) e C. parapsilosis (33,2-42,3%). Foi observada boa correlação (>80%) entre os métodos de identificação avaliados - fenotípico tradicional, automatizado e molecular; e a caracterização dos introns do grupo I detectou predominância de C. albicans genótipo A (74%). O método tradicional é o mais simples e de baixo- custo, e o método automatizado mais rápido na liberação do resultado, quando comparados às técnicas moleculares, as quais apresentam maior poder discriminatório. Sugere-se a utilização do meio cromogênico, em paralelo ao método de identificação selecionado, para auxiliar na interpretação dos resultados, principalmente nas espécies mais frequentes. O método empregado em laboratórios de rotina deve ser considerado quando ... / Abstract: Over the last decade, there have been important changes in the epidemiology of Candida infections and antifungal agents used to treat these infections. In recent years, Candida species have emerged as important causes of invasive infections mainly among immunocompromised patients. The principal aim of this study was to evaluate the epidemiology of infectious Candida species isolated in our hospital and accordingly supply data for hospital infection control The other aims were to compare the traditional, automated and molecular methods used to identify Candida isolates to the species level current available in the Clinical Hospital of the Boucatu Medical School, UNESP, to evaluate the drug susceptibility as well as to biofilm production by this yeasts and to characterize, by molecular tools, several genes involved in biofilm production of C. albicans and C. parapsilosis and the use of group I introns to genotype the species C. albicans. A total of 196 Candida strains that were isolated from blood specimens of hospitalized patients were included in the study. The most common Candida species identified were C. albicans (39,3-44,4%) and C. parapsilosis (33,2-42,3%). According to the insertion of group I introns, the genotype A of C. albicans were the most frequent (74%). The evaluation of traditional phenotypic methods, the automated and some molecular revealed good agreement (>80%) and since both phenotypic methods were simple and cost effective and automated were few time-consuming when compared to molecular techniques, they should be considered in the routine lab identification of Candida species. The chromogenic media must be employed to avoid misinterpretations, independently of the method used. Antifungal susceptibility testing was performed by the reference microdilution method (CLSI) and all strains showed good susceptible against the drugs evaluated (fluconazole, voriconazole, anidulafungin and ... / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Co-orientador: Cristiane Aparecida Pereira Correia / Banca: Silvia Maria Rodrigues Querido / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Resumo: Streptococcus sanguinis e Streptococcus mitis são colonizadores pioneiros do biofilme bucal e podem causar endocardite bacteriana. Candida albicans está presente na cavidade bucal de forma comensal, possui capacidade de formar biofilme e causar candidose bucal. O objetivo desse trabalho foi avaliar as interações entre C. albicans com S. sanguinis e S. mitis em biofilmes e suas influências in vivo em modelo experimental de invertebrado Galleria mellonella. Para o estudo da interação de C. albicans (ATCC 18804) com S. sanguinis (ATCC 7073) e S. mitis (ATCC 4945) foram formados biofilmes monoespécie e multiespécies de C. albicans com os micro-organismos (na concentração de 107 células/mL) em fundo de placa de 96 poços por 48 h, incubados em estufa a 37 °C com 5% CO2. Após crescimento, os biofilmes foram desprendidos e obtidas diluições decimais as quais foram semeadas em meios seletivos. Após incubação por 48 h/37 °C foi obtida a contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL). Em paralelo, foram realizados ensaios colorimétricos com o sal XTT, a fim de mensurar a atividade metabólica de C. albicans nos biofilmes isolados e associados, seguindo de leitura a 492 nm, e o resultado expresso em absorbância (Abs). No estudo in vivo, primeiro foram determinadas as concentrações subletais dos micro-organismos, e inoculadas em G. mellonella, e observado o efeito de C. albicans, S. mitis e S. sanguinis nas lagartas, avaliando se curva de sobrevivência. Avaliação morfológica dos biofilmes foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados de contagem de UFC/mL e da atividade metabólica foram submetidos à análise de normalidade, e como foi observada distribuição normal, os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes t de Student (para duas variáveis) e Tukey (para três ou mais variáveis), considerando-se diferença estatística quando p <0,05. Os dados obtidos na curva de.. / Abstract: Streptococcus sanguinis and Streptococcus mitis are pioneering colonizers of oral biofilm and can cause bacterial endocarditis. Candida albicans is present in the oral cavity in a commensal manner and also has the ability to form biofilm and cause oral candidiasis. The aim of this study was to evaluate the interactions between C. albicans with S. sanguinis and S. mitis biofilms and their influences in vivo on an experimental invertebrate model of Galleria mellonella. To study the interaction of C. albicans (ATCC 18804) with S. sanguinis (ATCC 7073) and S. mitis (ATCC 4945) monospecies and multispecies biofilms were formed of C. albicans and with micro-organisms (a concentration of 107 cells/ml) in the bottom of a 96-well plate for 48 h, incubated at 37 °C with 5% CO₂. After growth, biofilms were detached, and decimal dilutions were plated on selective media. After incubation for 48 h/37 °C the count of colony forming units per milliliter (CFU/mL) was obtained. Alongside, XTT salt colorimetric assays were carried in order to measure the metabolic activity of isolated and associated C. albicans biofilms, following reading at 492 nm, and the result expressed in absorbance (Abs). In the in vivo study, first the sublethal concentrations of microorganisms were determined, and inoculated into G. mellonella, and the effect of C. albicans, S. mitis and S. sanguinis in caterpillars was observed, evaluating the survival curve. Morphological evaluation of the biofilms was performed by scanning electron microscopy (SEM). The count of CFU/mL and metabolic activity were submitted to normality analisis, and as a normal distribution was observed, the results were statistically analyzed by Student's t test (for two variables) and Tukey (for three or more variables) considering statistical difference at p < 0.05. The G. mellonella survival curves data were analyzed by log-rank method. Streptococci influenced the reduction of biofilms of C. albicans and .... / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Cristiane Yumi Koga lto / Banca: Rosilene Fernandes da Rocha / Resumo: A presença de leveduras do gênero candida e staphylococcus na cavidade bucal humana adquire importância, pois pode atuar como microbiota suplementar e, em determinadas situações, ocasiona doença bucal ou sistêmica. O objetivo do presente trabalho foi correlacionar a presença de leveduras do gênero Candida e espécies de Staphylococcus na cavidade bucal humana. Enxágüe bucal foram coletados de setenta indivíduos e, a seguir semeados em ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol e agar Baird-Parker. Após crescimento, os microrganismos foram isolados e identificados através das provas bioquímicas. Os dados foram analisados através de análise de variância (Anova). Leveduras do gênero Candida foram encontradas em 71,42% dos indivíduos examinados, sendo C.albicans a mais frequente. staphylococcus spp. foram isolados em 92,85% das cavidades bucais, sendo 41 cepas coagulase-negativas (63%). Das cepas coagulase positivas, nove eram S.aureus, 11 S.hyicus e quatro S.schleiferi subespécie coagulans. Não ocorreu entretanto correlação entre as quantidades de unidades formadoras de colônia de Candida e Staphylococcus encontradas nos enxágües bucais dos indivíduos examinados / Abstract: The presence of Candida genus yeasts and staphylococci in the human oral cavity is very important because they can act as supplementary microbiota and in certain situations can cause oral or systemic diseases. The aim of this study was to correlate the presence of Candida genus yeasts and species of staphylococci in the human oral cavity. Oral riinsings were colected from 70 people and the cultived in Sabouraud glucose agar with chloramphenicol and Baird-Parker ágar. After the incubation period, the microrganisms were isolated and identified through biochemical tests. The Candida genus yeasts were found in 71,42% of the examined people, and C.albicans were isolated from 92,85% of the oral cavities. Fourty-one Staphylococcus negative for coagulase (63%) were found. Among the Staphylococcus samples positive for coagulase nine were S.aureus, 11 S.hyicus and four S.schleiferi subspecies coagulans. There was no correlation between the quantities (cfu) of Candida and staphylococci isolated from the oral rinsings of the examined people / Mestre