Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-04T19:58:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Juliana Maria Azevedo de Lyra.pdf: 3132284 bytes, checksum: e317cb1f9c952adb3328b338bdfc02be (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T22:53:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Juliana Maria Azevedo de Lyra.pdf: 3132284 bytes, checksum: e317cb1f9c952adb3328b338bdfc02be (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T22:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Juliana Maria Azevedo de Lyra.pdf: 3132284 bytes, checksum: e317cb1f9c952adb3328b338bdfc02be (MD5) Previous issue date: 2014-03-21 / FACEPE / Infecções fúngicas tem aumentado sua incidência, principalmente em imunocomprometidos. No Brasil, os fungos são responsáveis por cerca de 10% das infecções hospitalares, sendo as espécies de Candida responsáveis por cerca de 50% dos casos, seguidas pelo Aspergillus e Cryptococcus neoformans. O diagnóstico fúngico é dado pelo exame direto, que possui reduzida sensibilidade, e cultura que é tecnicamente laboriosa e demorada. A detecção do genoma de fungos apresenta diversas vantagens como a instalação precoce da terapia antifúngica diminuindo a mortalidade relacionada à infecção fúngica, e o tempo de internação dos pacientes em unidades de saúde. Este estudo tem como objetivo o desenvolvimento e avaliação de teste molecular para a detecção de infecção fúngica em pacientes imunocomprometidos através de PCR do tipo multiplex utilizando a sequência ITS como alvo, e sequências de rDNA específicas para detecção de 6 espécie de fungos de importância para a saúde humana: A. fumigatus, C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. neoformans. Dos 84 pacientes analisados, 46 foram adultos em tratamento oncológico e 38 neonatos. Das 144 amostras de sangue submetidas a PCR convencional com os iniciadores para a detecção da região ITS, 84 foram positivas e 60 negativas. As amostras positivas foram submetidas a PCR multiplex para a determinação da espécie do fungo. 46 foram positivas para uma ou mais espécie fúngica, sendo as espécies mais encontradas a C. parapsilosis (23,8%), C. glabrata (19,0%), C. neoformans (14,2%), C. tropicalis e C. albicans (ambas 4,7% dos casos). A baixa frequência de C. albicans possivelmente está relacionada ao uso profilático do antifúngico fluconazol. A PCR convencional apresentou sensibilidade de 67,3% (53,2-79,0), especificidade de 47,2% (36,6-58,0), valor preditivo positivo de 44,0% (33,4-55,3) e valor preditivo negativo de 70,0% (56,6-80,8) em relação ao diagnóstico da doença, baseado na clínica, comprovação microbiológica e teste terapêutico. As curvas melting da PCR em tempo real utilizando o sistema de detecção SYBR Green obtidas pela amplificação da sequência subclonada de rDNA de cada espécie em plasmídeo apresentaram formato alargado, possivelmente devido a homologia entre o iniciador e diferentes regiões das sequências de rDNA das espécies de fungos estudadas, principalmente nas espécies de Candida, permitindo a amplificação inespecífica em diferentes temperaturas de anelamento avaliadas. As curvas de amplificação das sequências subclonadas de rDNA de cada espécie utilizando o sistema TaqMan apresentaram reprodutibilidade, e especificidade nos experimentos utilizando o par de iniciador e sonda especifico para uma dada espécie com sequências de rDNA clonadas das demais espécies de fungos analisadas, executando o teste para C. neoformans, mostrando o potencial do teste para utilização em amostras clínicas. / Fungal infections have increased its incidence, especially in immunocompromised patients. In Brazil, the fungi are responsible for about 10 % of nosocomial infections, with Candida species account for about 50% of cases, followed by Aspergillus and Cryptococcus neoformans. Fungal diagnosis is made by direct examination, which has reduced sensitivity, and culture that is technically laborious and time consuming. The detection of the fungal genome has several advantages as the early onset of antifungal therapy decreased mortality related to fungal infection, and length of stay of patients in healthcare facilities. This study aims at the development and evaluation of molecular test for the detection of fungal infection in immunocompromised patients by multiplex PCR using ITS sequence targeted and specific rDNA sequences for detection of 6 species of fungi of importance to the human health: A. fumigatus, C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis and C. neoformans. Of the 84 patients studied, 46 were adults undergoing cancer treatment and 38 neonates. 144 of blood samples with conventional PCR primers for detection of the ITS region, 84 were positive and 60 negative. The positive samples were subjected to multiplex PCR to determine the species of fungus. 46 were positive for one or more fungal species and the species most commonly found in C. parapsilosis (23.8%), C. glabrata (19.0%), C. neoformans (14.2%), C. tropicalis and C. albicans (both 4.7% of cases). The low frequency of C. albicans is probably related to the prophylactic use of antifungal fluconazole. Conventional PCR had a sensitivity of 67.3% (53.2 to 79.0), specificity of 47.2% (36.6 to 58.0), positive predictive value of 44.0% (from 33.4 to 55,3) and negative predictive value of 70.0% (56.6 to 80.8) compared to diagnosis based on clinical, microbiological and therapeutic proof test. The melting curves of real-time PCR using SYBR Green obtained by amplification of rDNA subcloned sequence of each species present in plasmid extended, possibly due to the homology between the initiator sequences and regions of rDNA of fungal species format studied, especially in Candida species, allowing nonspecific amplification at different annealing temperatures evaluated. The amplification curves of the subcloned rDNA sequences of each type using the TaqMan system showed reproducibility and specificity of the experiments using the pair of primer and probe specific for a species with cloned rDNA sequences of other species of fungi analyzed by running test for C. neoformans, showing the potential for use in clinical test samples.

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T17:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Boriollo_MarceloFabianoGomes_M.pdf: 3800617 bytes, checksum: 80d09e21425e702b4878942993acc893 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Um total de setenta e cinco amostras de Cândida albicans isoladas da cavidade oral de escolares saudáveis, do município de Piracicaba, estado de São Paulo, região sudeste do Brasil, com idades variando entre seis e nove anos, provenientes de cinco classes socioeconômicas e oito escolas, foram estudadas. Com base nos dados da literatura, o propósito da presente pesquisa foi analisar os graus de associação (similaridade) entre esses isolados, através da técnica de eletroforese de proteínas intracelulares em gel de poliacrilamida, em sistema descontínuo (SDS-PAGE), com ênfase nos estudos de caracterização epidemiológica desses microrganismos. As amostras foram inoculadas em 50 mL de meio de cultura YPD. Decorrido o tempo de incubação, as amostras foram centrifugadas a 3.000 x g, por 5 minutos. Os sedimentos obtidos foram ressuspensos em água destilada gelada, lavados e fracionados em alíquotas de 0,5mL, os quais foram submetidos ao processo de extração de proteínas por pérolas de vidro. As concentrações de proteínas das amostras foram padronizadas para 800ug/500uL, as quais foram mantidas a - 75 °C até o momento de uso. Os extratos celulares obtidos, foram submetidos à técnica de SDS-PAGE. Após a corrida eletroforética os géis foram revelados. As bandas de proteínas, indicativas do perfil eletroforético de cada amostra, receberam valores 1 (um) para a presença de bandas e 0 (zero) para a ausência das mesmas, numa comparação entre os "lanes". O conjunto desses dados permitiu a confecção de matrizes de dados binários com intervalo de confiança de ±1,245, as quais foram plotadas no pacote estatístico NTSYS-pc 1.70 aplicando o coeficiente de associação (similaridade) de Dice. Essas matrizes de similaridade foram tratadas pelo algoritmo UPGMA, que gerou os dendrogramas que possibilitaram as análises dos graus de similaridade existentes entre os isolados de Cândida albicans. Os resultados obtidos mostraram a formação de vários "clusters", presentes nos dendrogramas UPGMA, com características heterogêneas, contendo as amostras de escolares provenientes de diferentes classes socioeconômicas e escolas. Essa heterogeneidade sugere a existência de polimorfismo nessa espécie. A aplicação de proteínas intracelulares para análise numérica de Cândida albicans, permite a determinação preliminar dos agrupamentos desses isolados, independentemente de suas origens. A diversidade e heterogeneidade dos "clusters", detectáveis nos diversos dendrogramas, obtidos pela análise do perfil eletroforético dos extratos proteicos dessa espécie, sugerem que a caracterização infraespecífica mais apurada deve envolver marcadores menos sujeitos a interferências de expressão, como por exemplo, aqueles que exploram o polimorfismo de ácidos micléicos / Abstract: A total of seventy five samples of Candida albicans, isolated from the oral cavities of healthy scholars living in Piracicaba city, São Paulo state, southeast area of Brazil, with ages varying from six to nine year-old, and coming from five distinct socioeconomic levels and eight schools, were studied. Based on the literature data, the purpose of the present research was to analyze the association (similarity) degrees existing among those isolates, through the whole-cell polyacrylamide gel electrophoresis technique (SDS-PAGE), with emphasis in to ascertain the possible epidemiological relationships among such microorganisms. The samples were inoculated in YPD culture medium, and after the incubation, they were centrifuged at 3,000 x g for 5 minutes. The obtained sediments were washed in cold distilled water and the whole-cell proteins were extracted by disruption with glass beads. The protein concentration of the samples was standardized for 800mg/500mL, which were maintained at -75°C, until the moment of use. The obtained cell extracts were submitted to SDS-PAGE technique. After the electrophoresis, the gels were revealed and the protein bands received values 1 for the presence of bands and 0 for the absence of the same ones, in a lanes' comparison. The collection of those data allowed the confection of several binary data matrices with a confidence interval of ±1,245, which were plotted on the NTSYS-pc 1.70 version statistical package applying the association coefficient of Dice, which generated similarity (So) matrices. Those similarity matrices were treated by the UPGMA algorithm, that allowed the analyses of similarity levels among Candida albicans isolates by dendrograms. The results showed the formation of several clusters with heterogeneous composition, including samples not related to their respective socioeconomic levels or schools. These heterogeneity suggests the high degree of polymorphism in such species. The application of whole-cell proteins for Candida albicans numerical analysis allows the preliminary determination of groupings of those isolates, independently of their origins. The clusters' diversity and heterogeneity detected in the several dendrograms suggest that, a more accurate infraspecific characterization should involve markers less subject to expression interference, as for example, those that explore the nucleic acids' polymorphism / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-28T13:15:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pedroso_JoseAssis_D.pdf: 9362945 bytes, checksum: 9e466a8351fed8fb3d34f35c3ff7b843 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A atividade antimicrobiana é uma importante propriedade de um cimento endodôntico quando da obturação de canais radiculares. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar as propriedades antimicrobianas desses cimentos. Para tanto foram utilizados quatro cimentos endodônticos: Endo-Fill, Endométhasone, Sealer 26 e AR Plus, nos seguintes tempos após manipulação: imediatamente, 24 horas, 48 horas e 7 dias, e cinco microrganismos: Candida albicans, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Streptococcus sanguis e Actinomyces naeslundii. Foram empregados dois métodos: a) difusão em ágar e b) contato direto através de observação da curva de crescimento dos microrganismos em meio líquido. Quanto ao método de difusão em ágar, obteve-se os seguintes resultados: 1) Os cimentos endodônticos testados apresentaram variações de atividade antimicrobiana, sendo esta, de um modo geral, mais pronunciada nos estágios iniciais de manipulação; 2) Todos os cimentos tiveram ação antimicrobiana pelo menos por contato direto; 3) O cimento Endo-Fill apresentou maiores halos de inibição durante os períodos experimentais, principalmente em relação à C. albicans e A. naeslundii, sendo que para S. sanguis somente até 48 horas após manipulação do cimento. Houve ação antimicrobiana somente por contato direto frente a E. faecalis e S. aureus; 4) O cimento AR Plus para a C. albicans apresentou atividade antimicrobiana até 48 horas após manipulação do cimento; 5) Endométhasone mostrou atividade antimicrobiana apenas imediatamente após o seu preparo para todos os microrganismos e marcada diminuição de sua atividade à medida em que aumentou-se o tempo após manipulação; 6) Sealer 26 foi efetivo somente por contato direto em todos os tempos testados, com exceção do S. aureus que apresentou pequeno halo de inibição no período imediato; 7) E. faecalis foi o microrganismo mais resistente e C. albicans o mais sensível. Quanto ao contato direto: 1) No tempo de manipulação imediato, Endo-Fill e Endométhasone tiveram maior ação antimicrobiana e esses cimentos não diferiram entre si. O Sealer 26 foi o que teve menor ação antimicrobiana; 2) Nos demais tempos de manipulação não houve diferenças estatisticamente significantes entre os cimentos estudados; 3) Para A. naeslundii e S. aureus o cimento que apresentou maior inibição foi o Endo-Fill; 4) Para E. faecalis não houve diferença estatisticamente significante entre os cimentos; 5) Para S. sanguis os cimentos Endo-Fill e Endométhasone apresentaram as maiores inibições de crescimento; 6) Para C. albicans o Endométhasone apresentou maior inibição; 7) E. faecalis foi o microrganismo mais resistente e S. sanguis e S. aureus os mais sensíveis; 8) Não houve diferença estatisticamente significante quanto a dissolução dos cimentos. Concluímos que a atividade antimicrobiana de cada cimento diminui com o decorrer do tempo e depende da vulnerabilidade do microrganismo envolvido / Abstract: The antimicrobial activity is an important property of an endodontic sealer during the root canal filling. Thus, the objective of the present study was to analyze the antimicrobial properties of endodontic sea1ers. For these reasons four sealers were used: Endo-Fill Endométhasone, Sea1er 26 and AR-Plus, in different moments after manipulation: immediately, 24 hours, 48 hours and 7 days, against five microorganisms: Candida albicans, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Streptococcus sanguis and Actinomyces naeslundii. Two methods were used: a) agar diffusion method and b) direct contact trough the observation of the microbial growth in liquid media. In relation to the agar diffusion method the results showed that: 1) All tested sea1ers showed variation in antimicrobial activity, generally, more pronounced immediately after manipulation; 2) All sealers had antimicrobial activity at least by direct contact; 3) Endo-Fill presented larger inhibition haloes during the experimental periods, mainly in relation to Candida albicans and Actinomyces naeslundii, for Streptococcus sanguis it happened only until 48 hours after the sealer manipulation. There was antimicrobial action only under direct contact with Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus; 4) AR Plus for the Candida albicans presented antimicrobial activity up to 48 hours after manipulation; 5) Endométhasone just showed antimicrobial activity against all bacteria after immediately prepared and showed marked decrease in its activity with the increase of storage time; 6) Sealer 26 was effective only", under direct contact in every time tested except for the Staphylococcus aureus that presented small inhibition haloe in the immediate period; 7) Enterococcus faeca1is was the most resistant microorganism and Candida albicans the most susceptible. In relation to the direct contact method the results were the following: 1) In the immediate manipulation time Endo-Fill and Endométhasone presented the largest antimicrobial activity and there was no statistically significant difference between them. However, Sea1er 26 had the smallest antimicrobial activity; 2) In the other manipulation times there were no statistically significant differences among the sealeres tested; 3) For Actinomyces naeslundii and Staphylococcus aureus the sea1er that presented the greatest antimicrobial activity was Endo-Fill; 4) For Enterococcus faecalis there was no statistically significant difference among the sealers in relation to the antimicrobial activity; 5) For Streptococcus sanguis, Endo-Fill and Endométhasone presented the greatest antimicrobial activity; 6) For Candich albicans Endométhasone presented the greatest antimicrobial activity; 7) Enterococcus faecalis was the most resistant microorganism and Streptococcus sanguis and Staphylococcus aureus the most susceptibles; 8) There was no statistically significant differences in relation to the sealers dissolution. It was concluded that the antimicrobial activity of each sealer decreases by the time and depends on the microbial susceptibility to them / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador : Jacks Jorge Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-01T16:21:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_NadjaRodriguesde_D.pdf: 2154762 bytes, checksum: 630af7fce371ffa49f82b89764258413 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Uma das principais infecções oportunistas em pacientes imunocomprometidos é a candidose oral, presente em mais que 90% dos pacientes infectados pelo HIV. Um total de 204 amostras de leveduras provenientes de pacientes infectados pelo HIV (n=173) e controles (n=31) foram identificadas e avaliadas quanto à resistência a antifúngicos. Candida albicans correspondeu a 57,8% (n=100) das amostras identificadas e 42, 1% foram de outras espécies, sendo 13 C. krusei, 9 C. lusitaniae e 8 C. tropicalis. Também foram isoladas 2 amostras de C. intermedia e 1 de C. norvegensis. Sensibilidade para anfotericina B (AMPH), fluconazol (FLCZ), miconazol (MCZ) e itraconazol (ITCZ) foi determinada por microdiluição. Do total de amostras, 29 isolados de C. albicans e 14 de outras espécies apresentaram baixa susceptibilidade para FLCZ. Dois isolados de C. tropicalis, 5 de C. krosei e 1 de C. norvegensis foram resistentes ao FLCZ. Cinco isolados de C. tropicalis, 12 de C. krusei, 4 de C. glabrata, 2 de C. intermedia e 1 de C. norvegensis foram resistentes ao ITCZ. Este estudo demonstrou a aumento da diversidade de espécies de Candida na cavidade bucal de pacientes infectados pelo HIV, associado à emergência de espécies incomuns de Candida, assim como a sensibilidade a agentes antifúngicos destes isolados / Abstract: Oral candidosis is one of the main opportunistic fungal infections amongst immunocompromised individuais, and affects more than 90% of HIV-infected patients.Two hundred and fouryeasts isolatesfrom oral cavities of HIV-infectedand control patients were identified and tested for antifungal resistance. C. albicans corresponded to 57.8% of the isolates while 42.1% were identified as other species, from which 13 were subsequently identified as C. krusei, 9 as C. lusitaniae, and 8 as C. tropicalis. There were also 2 isolates of C. intermedia and 1 of C. norvegensis. Antifungal resistance of the isolatesto amphotericinB (AMPH),fluconazole (FLCZ), miconazole (MCZ) and itraconazole (ITCZ) was measured by microdilution. Out of 204 isolates, 29 of C. albicans and 14 of other species had low susceptibility to FLCZ. Two isolates of C. tropicalis, 5 of C. krusei, and 1 C. norvegensiswere resistant to FLCZ. Five isolates of C. tropicalis, 12 of C. krusei, 4 of C. glabrata, 2 of C. intermedia, and 1 of C. norvegensis were resistant to ITCZ. This study demonstrated increased diversity of Candida species in the oral cavity of HIV-infected patients, associated with the emergence uncommon species, as well as the sensibility of these isolates to antifungal agents / Doutorado / Doutor em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador : Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T09:01:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mardegan_RitadeCassia_M.pdf: 3327019 bytes, checksum: 4a0cdbba906f141149dbc279b1888678 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Um total de 158 amostras de Candida albicans isoladas da cavidade oral de crianças, com idades entre 24 e 36 meses, divididas em dois grupos: Cárie ativas (104 amostras) e Livres de Cárie ( 54 amostras) foram estudadas. Com base nos dados da literatura, a proposição da presente pesquisa foi: 1) analisar e comparar a produção de proteinases e fosfolipases de Candida albicans, entre os dois grupos; 2) relacionar a diversidade fenotípica quanto à produção dessa enzima com o polimorfismo genético, através da técnica de AP-PCR. As amostras isoladas e identificadas como Cândida albicans, foram processadas para cultivo em meio de cultura Ágar proteinase e Agar fosfolipase e incubadas a 37°C por 7 e 4 dias, respectivamente. Após esse período, foi medida a atividade enzimática das cepas proteinase e fosfolipase positivas, classificando-as com os índices, O (negativa),1 (positiva) e 2 (positiva elevada). Todas as amostras foram submetidas á técnica de AP-PCR, usando o "primer" arbitrário AP-3. As análises enzimáticas revelaram não haver diferenças estatisticamente significativas entre os dois grupos estudados. A técnica de AP-PCR foi eficaz em demonstrar o polimorfismo genético de C. albicans intra indivíduos, revelando maior diversidade clonal em indivíduos cárie ativos em relação aos livres de cárie e a construção de dendogramas de similaridade demonstrou que linhagens clonais semelhantes ocorrem apenas intra indivíduos e não entre indivíduos. Os resultados obtidos permitiram observar que o perfil enzimático independe das características genotipicas das cepas / Abstract: A total of 158 samples of Candida albicans isolated from the oral cavities of healthy children, with ages ranging from 24 to 36 months divided in two groups, caries active and caries free were studied. Based on the literature, the aims of the present study were: 1) to analyze and to compare between the groups, proteinase and phospholipase produced by Candida albicans; 2) to correlate the phenotypic diversity of this enzyme with the genetic polymorphism using the AP-PCR method. The samples isolated and identified as C. albicans were inoculated in proteinase agar and phospholipase agar media and then incubated at 37°C for 7 days and 4 days respectively. After the incubation period, the enzimatic activity of the positive proteinase and phospholipase strains was measured according to the indexes O (zero) 1 (one) and 2 (two). All the samples were subjected to AP-PCR method, using the arbitrary primer AP-3. The enzymatic analysis showed no statistically significant differences between the groups studied. The AP-PCR method was effective to demonstrate the genetic polymorphism in the C. albicans intra individually, revealing a greater clonal diversity in caries actives children in relation to caries free, ones the construction of dendograms of similarity showed clonal lineage intra individual only. The results allowed the observation that the enzimatic profile does not depend on' the genotypic characteristics of the strains / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

A dissertation in partial compliance with the Master's Diploma in Technology: Homoeopathy, Technikon Natal, 1996. / The aim of the study was to establish the effect of a Helonias complex on the growth of Candida albicans in vitro in terms of growth rate, maximum specific growth rate, latent period before maximum specific growth rate and percentage germ tube production so as to establish the area of action of homoeopathic remedies / M

Candida albicans is a polymorphic yeast that can cause life threatening systemic infections in immuno-compromised individuals. One key attribute of C. albicans that enhances its pathogenicity is the ability to switch morphologies between filamentous and vegetative modes in response to specific environmental conditions. Stressful changes in such cellular conditions commonly cause a rapid inhibition of global protein synthesis leading to altered programmes of gene expression. In Saccharomyces cerevisiae, fusel alcohols signal nitrogen scarcity and induce pseudohyphal growth enabling yeast colonies to spread towards nutrient replete areas. These alcohols also inhibit protein synthesis by targeting the translation initiation factor, eIF2B. eIF2B is the guanine nucleotide exchange factor for eIF2, which supports eIF2-GTP production and represents a key regulated step in translation initiation. eIF2-GTP interacts with Met-tRNAiMet to form the ternary complex which is essential for translation initiation. Fusel alcohols target eIF2B leading to reduced levels of ternary complex and reduced protein synthesis. In Candida albicans, a variety of cell biological and genetic assays suggest that fusel alcohols and ethanol inhibit protein synthesis by targeting the translation initiation factor, eIF2B, and they also induce hyphal/pseudohyphal growth, a process that is associated with pathogenesis in C. albicans. In contrast to fusel alcohols, farnesol, aquorum sensing alcohol, does not appear to impact upon eIF2B activity. Rather, biochemical and mass spectrometric analysis suggest farnesol affects the interaction of the mRNA with the small ribosomal subunit during translation initiation. Further elucidation of the effect of farnesol on C. albicans transcript levels and ribosome association by next generation sequencing gave insight into the genes that are differentially expressed following farnesol treatment. While genes involved inmorphological differentiation were generally repressed, those involved in protein synthesis were upregulated, possibly as an adaptive response to inhibition of protein synthesis by farnesol. Intriguingly, the regulation of these functional categories of genes occurred in a co-ordinated manner at either the transcript level or at the level of ribosome association, but rarely was gene expression regulated at both transcriptional and post-transcriptional levels for the same gene.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La Diabetes mellitus tipo 2 (DM2) es una enfermedad crónica altamente prevalente que debe ser rigurosamente monitoreada para evitar complicaciones asociadas a su descompensación, la cual es establecida cuando los sujetos presentan valores de Hemoglobina glicosilada (HbA1c) mayores a 7%. Esto puede asociarse a una acidificación del pH salival, lo que afectaría el crecimiento y diferenciación de levaduras del género Candida provocando aparición de Candidiasis. Es relevante determinar número y especies de levaduras presentes en saliva de pacientes diabéticos y la susceptibilidad de éstas a los distintos antifúngicos para mejorar el enfoque terapéutico. Materiales y Métodos: Se recogieron muestras de saliva no estimulada de 52 pacientes con DM2 de la Asociación de diabéticos de Chile (ADICH). Se les midió pH salival y se cultivaron en placas de Agar Sabouraud, realizando el recuento de colonias en UFC/ml. Se identificaron las especies en forma presuntiva en CHROMAgar Candida® confirmándose luego mediante PCR con partidores específicos. Se cultivaron los aislados de C.Albicans en Agar Sabouraud Tetraciclina con discos de difusión de Nistatina y Fluconazol para medir la susceptibilidad en milímetros. Se utilizó el test de Spearman para correlacionar las variables HbA1c, pH salival y cantidad de UFC/ml; también para HbA1c y susceptibilidad en mm. a los distintos antifúngicos, t-test para comparar ambos grupos y la prueba de Chi cuadrado para comparar valores entre pacientes compensados y no compensados. Se consideraron estadísticamente significativos valores de p < 0,05. Resultados: El 50% de los pacientes estaban descompensados. El 66% del total de levaduras aisladas fue Candida albicans, 43,6% Candida no albicans, destacando C. Glabrata. En pacientes con DM2 descompensada, se observó asociación inversa entre valores de HbA1c y pH salival. A mayor acidificación salival se observó mayor diversidad y cantidad de levaduras del género Candida. No se observó relación entre valores de HbA1c y susceptibilidad a nistatina o fluconazol. Se observó una leve correlación inversa entre pH salival y susceptibilidad a nistatina. Conclusión: La descompensación metabólica en pacientes con DM2 puede resultar en acidificación del pH salival afectando la cuantificación, diversidad de levaduras y la susceptibilidad de éstas a la terapia antifúngica. / Adscrito a Proyecto FIOUCH 13-002

Orientador: Ramon Kaneno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_PriscilaRaquel_M.pdf: 3935077 bytes, checksum: a342a73cd22f638b9ca5c0901503c580 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A atividade imunomoduladora de cogumelos medicinais é atribuída principalmente às J}-glucanas. Neste estudo, avaliamos o efeito de peptidoglucanas extraídas do cogumelo Agaricus blazei (ATF) quanto à atividade candidacida, expressão de receptores de manose e produção de H2O2 e NO por macrófagos peritoneais murinos. Camundongos normais BALB/c receberam três inoculações intraperitoneais de solução salina (grupo controle) ou fração ATF (grupo ATF) e após 48 horas os macrófagos peritoneais foram coletados e ensaiados contra leveduras de Candida albicans. Nossos resultados indicam que o tratamento aumentou a atividade candidacida de macrófagos, produção de H2O2e expressão de receptores de manose, contudo, o tratamento não alterou a produção de NO. Nossos resultados sugerem que a fração ATF pode aumentar a resistência contra agentes infecciosos devido à estimulação da atividade microbicida de macrófagos / Abstract: Immunomodulatory activity of medicinal mushrooms is attributed to glucans. In the present study we avaluated the eifect of peptidoglycans of Agaricus blazei (ATF) on the candidacidal activity, the expression of mannose receptors (MR), production of H2O2 and NO by murine peritoneal macrophages. Normal BALB/c mice were i.p. treated with 3 inoculations of ATF (ATF group) or salt solution (control group) and after 48hr peritoneal macrophages were assayed against Candida albicans yest forms. Our results indicated that the treatment enhanced the candidacidal activity of peritoneal macrophages and increased the H2O2 production and MR expression. However ATF was not able to increase the spontaneous production of NO. The results suggest that ATF can enhance the host resistence against infectious agents due to the stimulation of the microbicidal activity of macrophages / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-24T02:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Totti_MarildaAparecidaGoncalves_D.pdf: 5573911 bytes, checksum: db09b48095e15ef68b81ad95bb3c3fac (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A presença de Candida albicans e o desenvolvimento de candidose na cavidade bucal de camundongos normais e xerostômicos foram avaliados após uma e quatro inoculações com 108 células viáveis de C. albicam; na boca dos animais. A xerostomia foi obtida pela retirada das glândulas salivares maiores dos camundongos (sialoadenectomia) e a recuperação da levedura foi realizada após 1, 2, 3,5, 8, 15 dias e a seguir intervalos regulares de 15 dias. A comprovação da levedura recuperada foi feita através de identificação da espécie e da verificação do fator killer. Candidose foi verificada no epitélio de 6 regiões do dorso da língua dos camundongos em cortes histológicos sagitais corados por H.E e P.A.S. Os resultados obtidos demonstraram: a) que a xerostomia produzida pela sialoadenectomia em camundongos, propiciou recuperação de C. albicans na cavidade bucal dos animais, em maior número e por períodos mais prolongados; b) as quantidades de C. albicans na cavidade bucal de camundongos sialoadenectomizados foram maiores estatisticamente significativas nas recuperações de 30 até 195 dias após 4 inoculações da levedura; c) candidose ocorreu em maior número de animais e as lesões foram mais extensas nos camundongos sialoadenectomizados, em relação aos normais / Abstract: The presence of Candida albicans and candidosis development in the oral cavity of normal and sialoadenectomized mice were evaluated after one and four inoculations, with 108 viable cells of C. albicans in the mouth of the animals. The xerostomia was obtained by surgical removal of the major salivary glands from mice (sialoadenectomy) and the recovery of the yeast was accomplished after 1, 2, 3, 5, 8, 15 days and then in intervals of 15 days. The confirmation of the yeast recovered was established through identification of the species and the verification of the killer factor. Candidosis was verified in the epithelium of six are as of the dorsal mice tongue in sagital histological sections stained with hematoxylin & eosin and periodic acid-Schifr. The results obtained showed: a) that xerostomia produced by the sialoadenectomy in the mice propitiated recovery of C. albicans in the oral cavity of the animals in higher number and for more wide periods; b) The quantity of C. Albicans in the oral cavity of sialoadenectomized mice were larger and statistically significant in the recoveries of 30 to 195 days after four inoculations of the yeast; c) candidosis occured in higher number of animals and the lesions were more extensive in the sialoadenectomized mice in relation to the normal / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Odontologia