O objetivo deste trabalho foi quantificar a formação de biofilme de Candida albicans e avaliar a integridade da superfície de uma resina acrílica termopolimerizável tratada com os sistemas de polimento líquido Biscover LV (Bisco, Schaumburg, USA) e Surface Coat (Kuraray, Tokyo, Japan), após 30 e 90 ciclos de desinfecção química. Um total de 280 corpos de prova (10 X 10 X 2 mm) foram confeccionados, esterilizados e aleatoriamente divididos em 20 grupos (n=14), de acordo com o tipo de polimento (mecânico de 0,3 ou 3 m, Surface Coat e Biscover LV), número de ciclos testados (0, 30 e 90) e solução utilizada: Nenhuma (controle negativo), Hipoclorito de sódio 1% (experimental) e água destilada (controle positivo). Após exposição às respectivas soluções de acordo com o protocolo adotado, as amostras foram imersas em saliva artificial por 2 h para a formação da película adquirida salivar e então inoculadas com 2 mL de suspensão de C. albicans (1.107 cel/mL) para fase de adesão durante 90 min. Após esta fase, as amostras foram lavadas e imersas em TSB estéril por 24 h para crescimento do biofilme em estufa a 37ºC sob agitação. Para quantificação do biofilme, foi utilizado o método de coloração por Cristal Violeta, em 240 espécimes divididos em 20 grupos de 12 amostras cada. Esta análise foi realizada por espectrofotômetro com comprimento de onda de 595 nm para mensuração do nível de absorbância do sobrenadante obtido após a descoloração do biofilme. Para análise qualitativa da integridade da camada de polimento liquido, 2 amostras de cada grupo (uma contaminada e outra não) tiveram suas superfícies fotografadas em seis campos distintos através do microscópio eletrônico de varredura (MEV). Os resultados foram submetidos o teste paramétrico ANOVA, seguido de teste de Tukey (p<0,05). Comparando os tipos de tratamentos de superfície avaliados dentro do mesmo tempo e soluções testadas não pode-se notar diferença estatisticamente significante entre os grupos de 0,3 m e Biscover LV ou 3 m e Surface Coat quando comparados entre si. Porém quando comparados os grupos de 0,3 m e Biscover LV aos grupos de 3 m e Surface Coat, estes apresentaram diferença estatisticamente significante. A análise em MEV dos corpos de prova colonizados demostrou a presença de C. albicans na superfície do corpo de prova sob a forma de leveduras e hifas em todos os grupos, enquanto que nos não colonizados foi observada uma degradação progressiva em todos os tipos de tratamento de superfície a medida que os números de ciclos e os desafios químicos eram aumentados. Apesar disso, o grupo Biscover LV apresentou uma quantidade de biofilme formada compatível com uma superfície lisa (0,3 m), enquanto que Surface Coat apresentou quantidade de biofilme formada compatível com a superfície rugosa (3,0 m). / The aim of this study was to quantify Candida albicans biofilm formation and evaluate the surface integrity of an denture base resin treated with liquid-polish Biscover LV (Bisco, Schaumburg, USA) and Surface Coat (Kuraray, Tokyo, Japan), after 30 and 90 cycles of chemical disinfection. A total of 280 specimens (10 x 10 x 2 mm) were prepared, sterilized and randomly divided into 20 groups (n = 14), according to the type of polishing (mechanical 0.3 or 3 m, Surface Coat and Biscover LV), number of cycles tested (0, 30, 90) and the solution used: none (negative-control), 1% sodium hypochlorite (experimental) and distilled water (positive-control). After exposure to the respective solutions according to the protocol adopted, the samples were immersed in artificial saliva for 2 h to form the acquired salivary pellicle and then inoculated with 2 mL of C. albicans (1.107 cel / mL) for 90 min to adhesion. After this, samples were washed and immersed in TSB for 24 h to biofilm growth at 37°C. For biofilm quantification, the method of crystal violet staining was used in 240 specimens, divided into 20 groups of 12 samples each. This analysis was performed by a spectrophotometer at a wavelength of 595 nm by measuring the level of supernatants absorbance obtained after the biofilms stain release. For qualitative analysis of the integrity of the liquid-polish layer, two samples from each group (one colonized and one not) had their surfaces photographed in six different fields through the scanning electron microscope (SEM). The results were submitted to ANOVA followed by Tukey\'s test (p<0.05). Comparing the types of surface treatments evaluated, within the same time and tested solutions, can not be noted statistically significant difference between groups of 0.3 m and Biscover LV or 3 m and Surface Coat. But when comparing the groups of 0.3 m and Biscover LV to groups of 3 mm and Surface Coat, there was a statistically significant difference. SEM analysis of the colonized specimens demonstrated the presence of C. albicans in the form of yeast and hyphae in all groups. In not colonized surfaces a progressive degradation was observed that was bigger when the number of cycles and chemical challenges were increased. Nevertheless, the group Biscover LV showed a amount of biofilm similar to a smooth surface (0.3 m), while Surface Coat presented an amount compatible with the roughened surface (3.0 m).

A candidose bucal acomete grande número de pessoas mundialmente, sendo associada a condições como imunossupressão, radioterapia, tabagismo, higiene bucal, idade, xerostomia e uso de próteses removíveis. Uma importante abordagem terapêutica para essas infecções consiste nos medicamentos antifúngicos, que podem apresentar efeitos colaterais e resultar na resistência dos patógenos. Nesse contexto, a terapia fotodinâmica (PDT) faz-se interessante como alternativa capaz de minimizar essas limitações. Protocolos de PDT poderão ser mais facilmente assimilados à prática clínica se empregarem materiais já aprovados para uso odontológico. Sendo assim, este estudo propõe avaliar o uso de PDT com eritrosina como fotossensibilizador, irradiada por um LED azul, usando-se um modelo animal. Quarenta camundongos tiveram candidose induzida sobre o dorso da língua por meio de imunossupressão e inoculação com Candida albicans. Após estabelecimento da lesão durante cinco dias, os animais receberam um dentre quatro tratamentos possíveis: aplicação da eritrosina 5% seguida de irradiação pelo LED (E+L+); aplicação de eritrosina, somente (E+L-); salina seguida pela irradiação (EL+); e somente salina (E-L-). A fim de distinguir possíveis efeitos colaterais, os mesmos tratamentos foram aplicados em 12 camundongos sem a indução de candidose. O número de unidades formadoras de colônia de C. albicans foi contado após o tratamento, e a mucosa foi submetida à análise histológica para determinar o grau de inflamação. Os dados dos grupos foram comparados por meio de ANOVA e teste de Kruskal-Wallis, (&alpha;=0,05). Não foram detectadas diferenças significativas entre os grupos testados quanto à contagem de colônias de C. albicans e o grau de inflamação. O infiltrado inflamatório foi classificado como discreto na maioria dos casos. Os animais com candidose bucal induzida e os saudáveis que foram submetidos aplicação de eritrosina 5% e irradiação pelo LED apresentaram infiltrado inflamatório mais acentuado e lesões mais evidentes na camada epitelial, sugerindo que este protocolo ocasionou danos aos tecidos orais. / Oral candidosis affects many people worldwide and is associated with conditions such as immunosuppression, radiation, smoking, oral hygiene, age, xerostomia and use of removable prostheses. An important therapeutic approach for these infections consists of antifungal drugs, which have side effects and can result in the resistance of pathogens. In this context, photodynamic therapy (PDT) is an interesting alternative able to overcome those limitations. PDT protocols can be more easily assimilated in clinical practice if they employ materials already approved for use in dentistry. Thus, this study evaluate the PDT with the use of erythrosine as a photosensitizer, irradiated by a blue LED light, using an animal model. Forty mice had candidosis induced on the tongue by the immunosuppression and inoculation with Candida albicans. After five days that the lesion is established, the animals received one of four possible treatments: application of 5% erythrosine and irradiation by the LED (E+L+); erythrosine application, only (E+L- ); saline followed by irradiation (E-L+); and only saline (E-L-). In order to distinguish potential side effects, the same treatments were applied in 12 mice without induced candidosis. Colony-forming units (CFU) of C. albicans were counted after treatment, and the mucosa was subjected to histological analysis to determine the degree of inflammation. The data of the groups were compared using ANOVA and Kruskal-Wallis test (&alpha;=0.05). No significant difference was detected among the groups tested for the number of CFU of C. albicans and the degree of inflammation. The inflammatory infiltrate was classified as mild in most cases. Animals with induced oral candidosis and the healthy ones exhibited more pronounced inflammatory infiltrate and lesions in the epithelial layer following PDT by 5% erythrosine and irradiation by the LED light. Such findings suggest that this protocol resulted in damage to oral tissues.

Este estudo visou comparar as leveduras do gênero Candida encontradas em fontes de infecção com as leveduras colonizantes de diversos locais de superfície e ambiente, tendo como critérios os fatores associados à virulência. Houve um predomínio de Candida albicans (32%) seguido de C. parapsilosis (20%), C. lusitaniae (20%), C. krusei (8%) e C. guilliermondii (4%) em fontes de infecção. Em relação às espécies colonizantes, observaram-se C. tropicalis (33,4%), C. lusitaniae (21,2%), C. parapsilosis (18,2%), C. albicans (15%), C. famata (6,1%) e C. guilliermondii (6,1%). Quanto aos fatores associados à virulência observou-se ß hemólise em 19,7% dos isolados, α hemólise em 21,3% e não foi observada atividade hemolítica em 70% dos isolados. Dentre as amostras, houve sensibilidade para Anfotericina B em 100% das mesmas e em 98,57% para fluconazol. Das leveduras de C. albicans provenientes de fontes de infecção 100% demonstraram potencial de formação de biofilme. As espécies não-albicans com maior produção de biofilme foram C. krusei (100%), C. parapsilosis (75%), C. tropicalis (75%). Nas amostras oriundas de colonização, 100% de C. albicans desenvolveram biofilme e dentre as não-albicans destacaram-se C. parapsilosis (80%), C. tropicalis (77,78%). Elevadas capacidade de formação de biofilme e atividade metabólica foram observadas em 35,3% das espécies de Candida spp. Em Candida spp provenientes de fontes de colonização 33,3% apresentaram capacidade intermediária de produção de biofilmes mas com atividade metabólica alta. / This study aims to compare the Candida species recovered from sources of infection with ones that are colonizing various sites and surface at the environment, having as criteria the factors associated with virulence. There was a predominance of C.albicans (32%) followed by C. parapsilosis (20%), C. lusitaniae (20%), C. krusei (8%) and C. guilliermondii (4%) at sources of infection. For the colonizing species we observed C. tropicalis (33.4%), C. lusitaniae (21.2%), C. parapsilosis (18.2%), C. albicans (15%), C. famata (6.1%) and C. guilliermondii (6.1%). Regarding the factors associated with virulence β hemolysis was observed at 19.7% of the isolates and α hemolysis at 21.3% and it wasn’t seen hemolytic activity at 70% of the isolates. Among the isolates it was observed susceptibility for amphotericin B at 100% of the ones and at 98.57% for fluconazole. Among C. albicans from sources of infection 100% demonstrated the potential of biofilm formation. The non-albicans species with increased biofilm production were C. krusei (100%), C. parapsilosis (75%), C. tropicalis (75%). In isolates from colonization, 100% of C. albicans developed biofilm and among non-albicans species, predominated C. parapsilosis (80%), C. tropicalis (77.78%). High capacity for biofilm formation and metabolic activity were observed at 35,3% of the isolates. In Candida spp from sources of colonization 33.3% showed intermediate capacity to produce biofilms but with high metabolic activity.

Os microrganismos associados à cárie são, em sua maioria, microrganismos acidogênicos e acidúricos, anaeróbios estritos e facultativos. A presença de fungos é associada à microbiota de cárie radicular, sendo a espécie fúngica mais relacionada a Candida albicans. Embora estudos de cultivo e de análise de DNA comprovem a presença de fungos na microbiota associada a lesões de cárie radicular, demonstrando um gradiente crescente de colonização com a progressão da doença, pouco se sabe sobre o papel que estes microrganismos desempenham no processo de doença. O objetivo deste trabalho foi estudar o papel de Candida albicans na cárie radicular, através da análise de transcriptoma de biofilmes naturais de superfícies radiculares hígidas (n=10, SRS) e de lesão de cárie radicular ativa (n=9, RC). Foi avaliada a expressão diferencial de genes de Candida albicans, as funções específicas e vias metabólicas associadas a este microrganismo. O RNA total microbiano foi extraído e o mRNA isolado e sequenciado na plataforma Illumina Hi-Seq2500. Foram formados pool (grupamentos) das amostras com valores inferiores a 30ng/RNA para a construção de bibliotecas genômicas. Os dados gerados pelo sequenciamento de RNA-Seq foram compilados em uma tabela de contagem (reads) e mapeados com o genoma de referência (C. albicans SC5314) utilizando o software CLC Genomics Workbench 7.5.1. Para o cálculo do nível de expressão gênica os dados foram normalizados com o algoritmo DESeq. A expressão diferencial foi calculada com binomial negativa e False Discovery Rate (FDR<0,05). Os genes com maior expressão em RC e em SRS foram analisados pela mediana relativa de expressão (RME; Relative Median Expression) e expressão diferencial, assim como as vias metabólicas associadas a genes de virulência e metabolismo de açúcares. Dois genes (CaO19.610, FDR=0.009; CaO19.2506, FDR=0.018) apresentaram expressão diferencial significativa em superfície radicular hígida (SRS) e tem suas funções relacionadas a formação de biofilme. Enquanto que em superfície radicular cariada (RC) sete genes (UTP20, FDR=0.018; ITR1, FDR=0.036; DHN6, FDR=0.046; CaO19.7197, FDR=0.046; CaO19.7838, FDR=0.046; STT4, FDR=0.046; GUT1, FDR=0.046) apresentaram expressão diferencial significativa e tem suas funções relacionadas a atividade metabólica, transporte de açúcares, tolerância ao estresse, invasão e regulação de pH. Candida albicans é um microrganismo importante no desenvolvimento da doença cárie radicular. / The microbiota associated with root caries must be acidogenic and aciduric. S. mutans, Lactobacillus, Actinomyces, Veilonella, Bifidobacterium, and other bacteria play important roles in root caries biofilm. Yeasts are also present on carious and non-carious root biofilms, being the specie Candida albicans the most prevalent yeast found in root biofilms. Although the presence of Candida albicans is stablished in the literature, and there are an increasing gradient of Candida species. colonization with caries progression, the role of this microorganism in root caries has not being totally elucidated. The aim of this study is to analyse the role of Candida albicans in root caries thought a transcriptomic analysis of biofilms of sound root surfaces (n=10, SRS) and root caries lesions (n=9, RC) using a high-throughput sequencing of cDNA (RNA-Seq). The differential expression of genes of Candida albicans SC5314, the specific functions and pathways associated with the gene expression of the present study were investigated. The total bacterial RNA was extracted and the mRNA was isolated (Illumina Hi-Seq2500). Samples with low RNA concentration (less than 30ng/RNA) were pooled, yielding a final sample size of SRS=10 and RC=9. Sequence reads were compiled in a count table and mapped to C. albicans SC5314 genome of reference, using the software CLC Genomics Workbench 7.5.1. Gene expression was calculated in the algorithm DESeq, and the differential expression was calculated with binomial negative (Log2FoldChange) and False Discovery Rate (FDR<0,05). The genes with higher expression in RC and SRS were analysed by the Relative Median Expression (RME), and the virulence factors and pathways and sugar metabolization related with Candida albicans pathogenicity in root caries were analysed. Two genes (CaO19.610, FDR=0.009; CaO19.2506, FDR=0.018) are up-regulated in Sound Root Surface (SRS) have their functions related to biofilm formation and seven (UTP20, FDR=0.018; ITR1, FDR=0.036; DHN6, FDR=0.046; CaO19.7197, FDR=0.046; CaO19.7838, FDR=0.046; STT4, FDR=0.046; GUT1, FDR=0.046) are up-regulated in biofilm of carious dentin (RC) have functions related to metabolic activity, sugar transport, stress tolerance, invasion and pH regulation.

Apesar das evidências sobre o efeito de bactérias probióticas sobre Candida albicans, os mecanismos envolvidos nesta interação não estão totalmente esclarecidos. Visando contribuir com o entendimento sobre os mecanismos pelos quais bactérias probióticas interferem na colonização por C. albicans, o presente estudo testou a hipótese de que Lactobacillus probióticos interferem na resposta de macrófagos humanos induzida por C. albicans e inibem o desenvolvimento do biofilme de C. albicans. Macrófagos humanos THP-1 foram pré-tratados com Lactobacillus rhamnosus LR32, Lactobacillus casei L324m e Lactobacillus acidophilus NCFM, e desafiados com C. albicans e/ou lipopolissacarídeos (LPS) de Escherichia coli, em ensaio de co-cultura. Após incubação, foram determinados o perfil de citocinas por ELISA, a transcrição relativa do gene clec7a por RT-qPCR. Biofilmes de C. albicans ATCC SC5314 e 75 (isolado clínico) em fase de adesão inicial, colonização inicial e maturação foram tratados com suspensão de Lactobacillus probióticos. Além disso, os biofilmes de C. albicans foram tratados com meio condicionado com L. rhamnosus após diferentes períodos experimentais. O efeito dos probióticos foi avaliado por contagem de células de C. albicans viáveis e avaliação da morfologia celular por microscopia confocal e eletrônica de varredura. O pré-tratamento com bactérias probióticas promoveu alteração no perfil de citocinas produzidas por macrófagos desafiados com LPS e C. albicans, induzindo um aumento nos níveis de IL-10 e redução de IL-12 (p<0,05). Além disso, o pré-tratamento com probióticos provocou redução do nível de transcritos de clec7a, que codifica o receptor Dectina-1 (p<0,05), indicando a redução da expressão de Dectina-1 nestas células. A interação entre cepas de Lactobacillus e C. albicans promoveu significativa redução (p<0,05) no número de células de C. albicans no biofilme (25,5-61,8%), na dependência da cepa probiótica e da fase do biofilme de C. albicans. Todos os Lactobacillus testados impactaram negativamente na diferenciação levedura-hifa de C. albicans e na formação do biofilme. Análises microscópicas revelaram que as suspensões de L. rhamnosus reduziram a diferenciação de Candida em hifas, levando a uma predominância de crescimento em levedura. O meio condicionado com L. rhamnosus não exerceu efeito significante sobre biofilme maduro (p>0,05), mas promoveu redução significativa do número de UFC de C. albicans quando utilizado nos estágios iniciais da formação do biofilme (p<0,01). Os resultados sugerem que Lactobacillus probióticos são capazes de interferir na expressão de receptores de macrófagos para o reconhecimento de C. albicans e reduzir a resposta de citocinas pró-inflamatórias. Além disso, os resultados indicam que Lactobacillus probióticos são capazes de inibir a diferenciação de C. albicans de leveduras para hifas, e o desenvolvimento de biofilme de C. albicans, particularmente na fase de colonização inicial da levedura, por interações célula-célula e secreção de exometabólitos. O conjunto de dados deste estudo contribui para elucidar os mecanismos pelos quais Lactobacillus atuam como probióticos, dando suporte para o seu uso como terapia suplementar contra infecções de mucosas por C. albicans. / The infection rates of Candida albicans in human may be reduced by probiotics. However, the mechanisms involved in the interaction between C. albicans and probiotic bacteria are largely unknown. The present study comprised two parts. The first aimed to test the hypothesis that probiotics may impair the signaling induced by C. albicans in human macrophages, thus lowering the inflammatory challenge. The second aimed to evaluate the inhibitory effects of Lactobacillus on different phases of C. albicans biofilm development. In the first part, macrophages were pretreated with a probiotic strain (Lactobacillus rhamnosus LR32, Lactobacillus casei L324m and Lactobacillus acidophilus NCFM) and challenged with C. albicans and/or lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli in a co-culture assay. After incubation, cytokine profile of macrophage\'s supernatant was assessed by ELISA and the expression of clec7a gene was determined by RT-qPCR. Probiotic strains altered the cytokine profile of macrophages stimulated with LPS and C. albicans, leading to increased levels of IL-10 and reduced levels of IL-12 (p<0.05), and reducing the relative expression of clec7a gene encoding Dectin-1 receptor (p < 0.05). In the second part, quantification of biofilm growth and microscopic analyses were performed on C. albicans biofilms treated with Lactobacillus cell suspensions and their supernatants. Lactobacilli induced a significant reduction (p<0,05) in the number of biofilm cells (25.5-61.8%) dependent on the probiotic strain and the biofilm phase. L. rhamnosus supernatants had no significant effect on the mature biofilm (p>0.05), but significantly reduced the early stages of Candida biofilm formation (p<0.01). Microscopic analyses revealed that L. rhamnosus suspensions reduced Candida hyphal differentiation, leading to a predominance of budding growth. All lactobacilli negatively impacted C. albicans yeast-to-hyphae differentiation and biofilm formation. The inhibitory effects of Lactobacillus on C. albicans involved both cell-cell interactions and secretion of exometabolites. To conclude, the probiotic lactobacilli reduce inflammation by impairing the recognition of C. albicans by macrophages and altering the production of proinflammatory cytokines. It was also clarified, for the first time, the mechanics of how the Lactobacillus species antagonize C. albicans colonization, particularly in the critical, early colonization phase of the yeast. Taken all together, our data elucidated the inhibitory mechanisms of lactobacilli that define their probiotic candicidal activity, supporting the use of these probiotics as a supplemental therapy against mucosal infections by C. albicans.

A gomesina é um peptídeo antimicrobiano catiônico, purificado dos hemócitos da aranha caranguejeira Acanthoscurria gomesiana. Possui amplo espectro de atividade contra bactérias, fungos, protozoários e células tumorais. Candida albicans é uma levedura comensal que faz parte da microbiota humana. O tratamento desta micose geralmente é feito com fluconazol, contudo casos de resistência vêm sendo reportados, com isso vários peptídeos antimicrobianos vêm sendo estudados a fim de se tornarem tratamentos alternativos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia do tratamento com a gomesina em um modelo de candidíase disseminada e vaginal. O tratamento de gomesina foi eficaz no controle do fungo. Verificou-se um efeito imunomodulatório, pois seu tratamento aumentou as concentrações de IL-6, TNF-<font face=\"symbol\">a e INF-<font face=\"symbol\">g dos rins dos animais com candidíase disseminada. A gomesina não apresentou nenhum efeito tóxico para os animais. Os dados apresentados neste estudo reforçam o potencial da gomesina para ser um agente. / The gomesin is a cationic antimicrobial peptide, purified from hemocytes of the spider Acanthoscurria gomesiana. It has a broad spectrum of activity against bacteria, fungi, protozoa and tumor cells. Candida albicans is commensal yeast that is part of the human microbiota. The treatment of this mycosis is usually done with fluconazole although cases of resistance have been reported. With the emergence of microorganisms resistance, several antimicrobial peptides have been studied in order to become alternative treatments. This study aimed to evaluate the effectiveness of treatment with gomesin in a model of disseminated and vaginal candidiasis. The treatment with gomesin showed to be effective in controlling the fungus. There was also found an immunomodulatory effect as its treatment increased concentrations of IL-6, TNF-<font face=\"symbol\">a and INF-<font face=\"symbol\">g in the kidneys of animals with disseminated candidiasis. The gomesin did not show any toxic effect to animals. The data presented in this study reinforce the potential of gomesin to be an antifungal agent.

O objetivo deste trabalho foi quantificar a formação de biofilme de Candida albicans e avaliar a integridade da superfície de uma resina acrílica termopolimerizável tratada com os sistemas de polimento líquido Biscover LV (Bisco, Schaumburg, USA) e Surface Coat (Kuraray, Tokyo, Japan), após 30 e 90 ciclos de desinfecção química. Um total de 280 corpos de prova (10 X 10 X 2 mm) foram confeccionados, esterilizados e aleatoriamente divididos em 20 grupos (n=14), de acordo com o tipo de polimento (mecânico de 0,3 ou 3 m, Surface Coat e Biscover LV), número de ciclos testados (0, 30 e 90) e solução utilizada: Nenhuma (controle negativo), Hipoclorito de sódio 1% (experimental) e água destilada (controle positivo). Após exposição às respectivas soluções de acordo com o protocolo adotado, as amostras foram imersas em saliva artificial por 2 h para a formação da película adquirida salivar e então inoculadas com 2 mL de suspensão de C. albicans (1.107 cel/mL) para fase de adesão durante 90 min. Após esta fase, as amostras foram lavadas e imersas em TSB estéril por 24 h para crescimento do biofilme em estufa a 37ºC sob agitação. Para quantificação do biofilme, foi utilizado o método de coloração por Cristal Violeta, em 240 espécimes divididos em 20 grupos de 12 amostras cada. Esta análise foi realizada por espectrofotômetro com comprimento de onda de 595 nm para mensuração do nível de absorbância do sobrenadante obtido após a descoloração do biofilme. Para análise qualitativa da integridade da camada de polimento liquido, 2 amostras de cada grupo (uma contaminada e outra não) tiveram suas superfícies fotografadas em seis campos distintos através do microscópio eletrônico de varredura (MEV). Os resultados foram submetidos o teste paramétrico ANOVA, seguido de teste de Tukey (p<0,05). Comparando os tipos de tratamentos de superfície avaliados dentro do mesmo tempo e soluções testadas não pode-se notar diferença estatisticamente significante entre os grupos de 0,3 m e Biscover LV ou 3 m e Surface Coat quando comparados entre si. Porém quando comparados os grupos de 0,3 m e Biscover LV aos grupos de 3 m e Surface Coat, estes apresentaram diferença estatisticamente significante. A análise em MEV dos corpos de prova colonizados demostrou a presença de C. albicans na superfície do corpo de prova sob a forma de leveduras e hifas em todos os grupos, enquanto que nos não colonizados foi observada uma degradação progressiva em todos os tipos de tratamento de superfície a medida que os números de ciclos e os desafios químicos eram aumentados. Apesar disso, o grupo Biscover LV apresentou uma quantidade de biofilme formada compatível com uma superfície lisa (0,3 m), enquanto que Surface Coat apresentou quantidade de biofilme formada compatível com a superfície rugosa (3,0 m). / The aim of this study was to quantify Candida albicans biofilm formation and evaluate the surface integrity of an denture base resin treated with liquid-polish Biscover LV (Bisco, Schaumburg, USA) and Surface Coat (Kuraray, Tokyo, Japan), after 30 and 90 cycles of chemical disinfection. A total of 280 specimens (10 x 10 x 2 mm) were prepared, sterilized and randomly divided into 20 groups (n = 14), according to the type of polishing (mechanical 0.3 or 3 m, Surface Coat and Biscover LV), number of cycles tested (0, 30, 90) and the solution used: none (negative-control), 1% sodium hypochlorite (experimental) and distilled water (positive-control). After exposure to the respective solutions according to the protocol adopted, the samples were immersed in artificial saliva for 2 h to form the acquired salivary pellicle and then inoculated with 2 mL of C. albicans (1.107 cel / mL) for 90 min to adhesion. After this, samples were washed and immersed in TSB for 24 h to biofilm growth at 37°C. For biofilm quantification, the method of crystal violet staining was used in 240 specimens, divided into 20 groups of 12 samples each. This analysis was performed by a spectrophotometer at a wavelength of 595 nm by measuring the level of supernatants absorbance obtained after the biofilms stain release. For qualitative analysis of the integrity of the liquid-polish layer, two samples from each group (one colonized and one not) had their surfaces photographed in six different fields through the scanning electron microscope (SEM). The results were submitted to ANOVA followed by Tukey\'s test (p<0.05). Comparing the types of surface treatments evaluated, within the same time and tested solutions, can not be noted statistically significant difference between groups of 0.3 m and Biscover LV or 3 m and Surface Coat. But when comparing the groups of 0.3 m and Biscover LV to groups of 3 mm and Surface Coat, there was a statistically significant difference. SEM analysis of the colonized specimens demonstrated the presence of C. albicans in the form of yeast and hyphae in all groups. In not colonized surfaces a progressive degradation was observed that was bigger when the number of cycles and chemical challenges were increased. Nevertheless, the group Biscover LV showed a amount of biofilm similar to a smooth surface (0.3 m), while Surface Coat presented an amount compatible with the roughened surface (3.0 m).

Orientador: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Fernanda Lourenção Brighenti / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Banca: Karin Hermaa Neppelonbroek / Banca: Cláudia Helena Lovato da Silva / Resumo: O objetivo do presente estudo "in vitro" foi avaliar a interação entre os microorganismos C. albicans, S. aureus sensível (MSSA) e resistente (MRSA) à meticilina com relação a alguns dos seus principais fatores de virulência. Estes fatores foram analisados considerando os micro-organismos isoladamente e em culturas mistas. Foi verificada a interação entre esses micro-organismos através da contagem do número de colônias viáveis (UFC/mL), análise da atividade metabólica por meio do ensaio XTT e quantificação da biomassa total por meio do corante cristal violeta nos tempos de 90 minutos, 12, 24 e 48 horas. Para análise da produção de proteinase (SAP) e fosfolipase (PL-C), kits fluorimétricos foram utilizados. A estrutura dos biofilmes foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Culturas simples e mistas dos micro-organismos também foram utilizadas para infectar um epitélio oral humano reconstituído (EOHR). A capacidade de colonização e invasão foi avaliada após 24 horas utilizando a técnica de hibridização "in situ" (PNA-FISH). A avaliação do dano causado pelos micro-organismos ao tecido foi realizada por quantificação da liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH). Técnicas moleculares (RT-qPCR) foram empregadas para quantificação do número de micro-organismos colonizando o epitélio e também para avaliação da expressão de genes de virulência. A expressão gênica foi avaliada em superfície biótica (EOHR) e abiótica (placa de poliestireno de 24 poços) para culturas simples e mistas dos micro-organismos. Os resultados dos ensaios de quantificação foram analisados utilizando ANOVA a dois critérios com teste "post-hoc" de Tukey (α = 0,05), enquanto os dados de atividade enzimática foram analisados por ANOVA a um critério com correção de Welch seguido pelo teste de Games-Howell. Os resultados da expressão gênica foram... (Resumo completo clicar acesso eletrônico) / Abstract: The aim of this study was to evaluate, "in vitro", the interaction between C. albicans and methicillinsusceptible (MSSA) and resistant (MRSA) S. aureus in relation to some of their major virulence factors. These factors were analyzed considering the three microorganisms in single and dual cultures. The interaction between these microorganisms was evaluated by counting colony-forming units (CFU/mL), analysis of metabolic activity by the XTT assay and quantification of the total biomass by crystal violet dye at 90 minutes, 12, 24, and 48 hours. To analyze the production of proteinase (SAP) and phospholipase (PL-C), fluorometric kits were used. The structure of the biofilms was acessed by scanning electron microscopy (SEM). Further, single and dual cultures of microorganisms were used to infect a reconstituted human oral epithelium (RHOE). The pattern of colonization and invasion of the RHOE was evaluated after 24 hours using the in situ hybridization technique (PNA-FISH). The damage caused by microorganisms in the tissue was evaluated by quantification of the lactate dehydrogenase enzyme (LDH) released. Molecular techniques (RT-qPCR) were also used to quantify the number of microorganisms colonizing the epithelium and to evaluate the expression of virulence genes. Gene expression was evaluated in biotic (RHOE) and abiotic (24-well polystyrene microplate) surfaces for single and dual cultures. The results from quantification assays were compared using two-way ANOVA with Tukey post-hoc test, while data from enzymatic activities were analyzed by one-way Welch-ANOVA followed by Games-Howell post hoc test. The results of gene expression were analyzed by one-way ANOVA with Tukey for data satisfying the assumptions of normality and homoscedasticity or one-way Welch-ANOVA followed by Games-Howell for heteroscedastic data. LDH results were also...(Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) em biofilmes formados por C. albicans (GI), S. aureus (GII) e S. mutans (GIII), isolados e em associações (GIV-VII). Os biofilmes foram formados em discos de resina acrílica esterilizados imersos em caldo de infusão cérebro coração com 5% de sacarose, inoculados com a suspensão microbiana e incubados por 5 dias. Após o período de incubação, os discos foram lavados com solução fisiológica esterilizada para remover as células não-aderidas. Foram avaliados os efeitos do fotossensibilizador azul de metileno (AM) na concentração de 0,1 mg/mL por 5 min e laser AsGaAl (660 nm) por 98 s, isolados e em conjunto. Os biofilmes foram desprendidos em solução fisiológica em agitador ultrasônico. Foram realizadas diluições e alíquotas semeadas em ágar seletivos e incubadas por 48 h. Os números de UFC/mL em Log10 foram analisados estatisticamente (ANOVA, teste de Tukey, p< 0.05). Também foi realizada a microscopia eletrônica de varredura (MEV) nos discos com biofilmes dos grupos controle e TFD. Foram observadas reduções significativas na viabilidade de todos os biofilmes expostos ao AM e laser. As reduções (log10) foram maiores em biofilmes isolados, com: 40.22% para C. albicans (GI), 55.91% para S. aureus (GII) e 47.35% para S. mutans (GIII). Nos biofilmes mistos as reduções (log10) foram: 35.08% para C. albicans e 43.9% para S. aureus (GIV); 31.54% para C. albicans e 38.7% para S. mutans (GV); 40.12% para S. aureus e 37.14% para S. mutans (GVI); 19.56% para C. albicans, 28.41% para S. aureus e 24.94% para S. mutans (GVII). As imagens de MEV demonstraram uma fotossensibilização letal predominantemente nas camadas superiores dos biofilmes. Conclui-se que a TFD pode ser uma abordagem útil no controle de biofilmes bucais. / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the antimicrobial effect of photodynamic therapy (PDT) in biofilms formed by C. albicans (GI), S. aureus (GII) and S. mutans (GIII), alone and in associations (GIVGVII). The biofilms were grown in acrylic resin discs immersed in sterile brain heart infusion broth (BHI) containing 5% sucrose, inoculated with microbial suspension and incubated for 5 days. On the fifth day, the discs were washed in sterile saline solution in order to remove loosely bound material. The effects of the methylene blue (MB) photosensitizers at a concentration of 0,1 mg/mL for 5 min and AsGaAl laser (660 nm) for 98 s, alone and conjugated were evaluated. The dics were placed into tubes with sterile saline solution and sonicated for 30 s in order to disperse the biofilms. Ten-fold serial dilutions were carried out and aliquots plated in selective agar which were then incubated for 48 h. Then the numbers CFU/mL (log10) were counted and analyzed statistically (ANOVA, Tukey's test, p< 0,05) Scanning electron microscopy (SEM) on discs with PDT and control biofilms groups were performed. Significant decreases in the viability of all microorganisms were observed when biofilms were exposed to both MB and laser. Reductions (log10) in single-species biofilms were greater than associated biofilms with: 40.22% for C. albicans (GI), 55.91% for S. aureus (GII) and 47.35% for S. mutans (GIII). In associated biofilms the reductions (Log10) were: 35.08% for C. albicans and 43.9% for S. aureus (GIV); 31.54% for C. albicans and 38.7% for S. mutans (GV); 40.12% for S. aureus and 37.14% for S. mutans (GVI); 19.56% for C. albicans, 28.41% for S. aureus and 24.94% for S. mutans (GVII). Scanning electron microscopy micrographs suggested that lethal photosensitization occurred predominantly in the outermost layers of the biofilms. It was concluded that PDT using MB photosensitizer and laser may be a useful approach in the control of oral biofilms. / Mestre

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Martha Simões Ribeiro / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre a patogenicidade de C. albicans e C. dubliniensis na candidose bucal em ratos. Foram utilizados 96 ratos (Rattus norvegicus, Albinus, Wistar), sendo que 80 animais foram submetidos à indução de candidose experimental no dorso da língua por C. albicans ou C. dubliniensis e 16 ratos não foram infectados por Candida. Após 5 dias da indução da candidose, foram realizados diferentes tratamentos: laser e azul de metileno como fotossensibilizador (Grupo L+F+), apenas laser (Grupo L+F-), apenas fotossensibilizador (Grupo L-F+) e grupo sem laser e fotossensibilizador (Grupo L-F-). Após 1 dia, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar Sabouraud para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Os animais foram submetidos à eutanásia para análise microscópica do dorso da língua. Foi avaliada também a capacidade de produção de fosfolipase e proteinase por C. albicans e C. dubliniensis. Os resultados demonstraram que a quantidade de C. albicans recuperadas da cavidade bucal dos ratos foram semelhantes entre os quatro grupos estudados. C. dubliniensis não foi recuperarada da cavidade bucal dos ratos estudados. Na análise microscópica do dorso da língua, observou-se a presença de várias lesões teciduais induzidas por C. albicans, sendo que no grupo L+F+ essas lesões foram menores em relação aos demais grupos estudados. C. dubliniensis exibiu lesões teciduais discretas sem diferença estatística entre os grupos. Em relação aos fatores de patogenicidade de C. albicans, o grupo L+F+ produziu menor quantidade de fosfolipase e proteinase em relação aos demais grupos. C. dubliniensis produziu menor quantidade de fosfolipase em relação à C. albicans, sem diferença entre os 4 grupos estudados. Entretanto, C. dubliniensis não foi capaz de produzir proteinase... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective was to evaluate the effects of photodynamic therapy on the pathogenicity of C. albicans and C. dubliniensis in oral rats candidosis. Were evaluated 96 rats, while 80 were subjected to candidosis experimental induction on the tongue dorsum by C. albicans or C. dubliniensis and 16 rats were not infected. After 5 days of induction candidosis, different treatments were performed: laser and methylene blue as photosensitizers (Group L+F+), laser only (Group L+F-), only photosensitizers (Group L-F+) and without laser neither photosensitizers group (Group L-F). After 1 day, samples of the tongue dorsum were collected and sown on Sabouraud agar for counts of UFC/mL recovered from the oral cavity. The animals were submitted to euthanasia for microscopic analysis. It also evaluated the production capacity of a proteinase and phospholipase C. albicans and C. dubliniensis. The results showed that the amount of C. albicans recovered from rats oral cavity were similar among the four groups. To recover C. dubliniensis of the oral cavity from studied rats was not possible. In microscopic examination of tongue dorsum, was seen the presence of multiple tissue lesions induced by C. albicans, whereas in group L+ F+ these lesions were smaller than in other groups. C. dubliniensis showed slight tissue lesions with no statistic difference between groups. Regarding the factors of pathogenicity of C. albicans, the group L+F+ produced smaller amounts of phospholipase and proteinase compared to other groups. C. dubliniensis produced fewer quantitiy of phospholipase related to C. albicans, without difference between the 4 (four) groups studied. However, C. dubliniensis was not able to produce proteinase. It was concluded that the development of experimental candidosis by C. dubliniensis was less than that induced by C. albicans. Photodynamic therapy was effective on treatment... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre